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1合理規劃教學內容，突出教學重點

徐州醫學院藥學院藥學專業生物藥劑學與藥物動力學課程設有70學時(其中理論課48學時，實驗課22學時)，開課時間為大四第一學期，所用教材為印曉星教授、楊帆教授主編的《生物藥劑學與藥物動力學》。教學內容分為生物藥劑學和藥物動力學兩部分:生物藥劑學部分主要闡明生物藥劑學的基本理論，從藥物的體內過程出發，詳細介紹藥物的理化性質、劑型因素以及機體的生物因素對藥物療效的影響，討論生物藥劑學對新藥開發的指導作用;而藥物動力學則詳細闡述藥物動力學的傳統理論，并對其在新藥研發和臨床合理用藥等具體應用進行詳細的闡述。由于教學內容多，課程課時并不充足，這就需要充分理解教材，把握教學重點，在教學過程中結合實際情況對教材內容適當取舍。對于生物藥劑學部分的內容，如影響藥物吸收、轉運的生理因素和劑型因素等，與藥理學課程知識內容具有一定的重復性，我們在講解過程中主要以復習提要為主，簡要概述相關內容即可。而對藥物動力學部分的內容，我們在教學中對冗長的數學公式推導進行了精簡，并對晦澀繁雜的理論構建過程適當壓縮。以藥動學理論經典的四大模型(房室模型、統計矩模型、生理藥動學模型、藥動－藥效結合模型)為基礎重點介紹，并著重闡述指導新藥研發及臨床用藥的主要理論公式的意義及應用。將治療藥物監測、給藥方案設計、特殊人群藥物代謝動力學、藥物相互作用、疾病狀態下的臨床藥物代謝動力學等內容以專題講座的形式進行講解，使學生不斷鞏固藥動學原理在臨床實際工作中的具體應用。這種對教學內容的調整，突出了臨床用藥評價的重要性，培養了學生藥學服務的理念。此外，在教學內容上注重知識的更新，及時將本領域的研究熱點及前沿問題融入教學中。如在講解口服藥物吸收的評價方法時向學生介紹Caco－2細胞模型的應用;在講解藥物的轉運及代謝過程時，向學生介紹藥物代謝酶及轉運體在藥物相互作用及腫瘤耐藥中的重要作用等。

2合理應用多種教學形式

2．1多媒體教學與板書相結合現代教學中，多媒體作為一種現代化教學手段已經被廣泛運用。多媒體能夠極大地提高信息傳輸通量，將教師從“寫寫擦擦”的板書中解放出來，還能夠形象生動地展示教學的重點難點，活躍課堂氛圍，激發學生的學習興趣。因此，在教學過程中，可利用多媒體的特點，多元化地展示知識內容，增加學生學習的積極性。多媒體教學在擴充課程內容、增加信息量方面占絕對的優勢，但也正因為如此，在課堂教學中，教師授課的節奏加快，可能導致學生很難有效吸收、消化教學內容，造成了教學重點、難點不夠明確。因此，我們認為不同教學內容應采用適宜的授課方式。如教材中生物藥劑學部分有關制劑的吸收、分布、代謝和排泄等內容，利用多媒體以動畫的形式對藥物的在體過程進行生動的演示，有利于學生更好地理解和記憶，從而增加學習興趣;而在部分章節仍應堅持使用板書，如藥物動力學某些章節有大量公式，為了使學生牢固掌握有關公式的內涵及相互關系，我們在授課中采用板書進行公式的推導和例題的講授，以強化學生對各種藥動學參數意義的認識，為其今后利用軟件處理數據、解析數據奠定堅實的基礎。

2．2案例教學生物藥劑學與藥物動力學是一門應用性很強的藥學專業課程。然而，在傳統的教學模式下，學生從課堂上學到的只是與藥物體內過程相關的基本理論，對運用這些理論指導新藥設計及個體化給藥卻鮮有涉及。這樣的理論教學不僅會讓學生感到枯燥和乏味，還會導致學生在實習或者走上工作崗位后，對工作環境感到陌生和不適應，不能靈活運用學到的理論知識。因此，在理論教學中適當結合案例討論，更容易激發學生對生物藥劑學與藥物動力學的學習興趣，增強課堂教學效果［8］。在案例分析時，教師應根據教學目的、內容、學生的知識水平和知識規律，合理運用啟發式教學引導學生，培養主動參與意識，激發學習的興趣。例如，在講解生物利用度及生物等效性章節時，設計實例分析:“某藥廠生產抗凝血藥雙香豆素片17年，療效一直受到肯定。后因藥師反映，某些輕癥病人常要服用半片，用時不便，該廠就將藥片做大，中間刻上線條，以便分服。但應用后很快發現此藥無效。該廠遂將新舊兩種片劑進行試驗，結果發現新片劑的溶出速度比原制劑慢，試分析其中的原因。”在學生閱讀實例后，我們引導學生思考:即使是同一廠家生產的同一藥物，由于制劑生產條件的變更，往往給藥效帶來舉足輕重的影響，因此在進行藥典規定的評價項目之外，需要考慮制劑因素和生理因素，進行更加直接的有效性和安全性評價。那么，有沒有方法可以對生物體攝取利用制劑中藥物的效率進行評價呢?由此引出我們這一章節重點介紹的內容，即生物利用度及生物等效性研究。這樣的教學方法可在很大程度上激發學生的學習興趣，有利于學生將理論聯系實踐，在我們的教學過程中取得了較好的效果。

2．3PBL教學與LBL教學相結合目前，國內生物藥劑學與藥物動力學教學的普遍缺點是課程教學體系以教師授課為主，即通常所說的“lecture-basedlearing，LBL”(以授課為基礎的學習)。這種模式多采取灌輸式教學，學生始終處于消極被動地位。加之整個課程內容較多，講授時都集中于教學大綱重點知識的講解，大部分學生在上課時普遍反映課程內容抽象枯燥，不感興趣，記憶困難［9］。而采用“以問題為基礎的學習”(problem-basedlearning，PBL)的教學方法是目前國外比較流行的一種教學模式［10］，即以問題為基礎、學生為中心、教師為指導的小組討論及自學的教學模式，通過在教學過程中啟發學生回答一系列問題，提高學生自主學習的能力，培養創新性思維。該種教學模式強調把學習引入復雜的、有意義的問題情境中，通過讓學生合作解決問題，來學習隱含于問題背后的科學知識，形成解決問題的技能［11］。但如果在生物藥劑學與藥物動力學教學中，單純使用PBL模式，則受制于學生學習深度不夠、學生數量多教師數量少以及課程授課學時相對短的矛盾。針對現狀，在生物藥劑學與藥物動力學課程教學中，我們采用了PBL和LBL相結合的模式。對于國內教材較為明確的概念、理論學習，我們采用LBL教學法。對于和實際銜接較為緊密的部分或者學科前沿內容使用PBL教學模式。例如，我們在藥動學基本理論學習完成后進行了一次PBL法教學，題目是:應用藥物動力學原理如何指導腎衰病人進行地高辛用藥劑量的調整?通過指導學生查閱地高辛藥動學參數、治療窗、藥品說明書等資料，組織學生進行小組討論，采用小組匯報的方式進行給藥方案的調整與設計。這種教學方式有力促進了學生動手查閱資料、相互協作、語言表達與溝通能力及創新能力和自學能力的培養，最終使得學生從根本上掌握了相關教學內容，促進了教學質量的提高。通過LBL和PBL法相結合的教學模式，既可以使學生牢固掌握相應的知識，還可以激發學生對生物藥劑學與藥物動力學課程的學習興趣，培養學生的創新能力、自學能力和自我解決問題的能力，受到了歷屆學生的好評。

3總結與思考

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[關鍵詞] 多媒體技術；生物藥劑學

[中圖分類號]R94 [文獻標識碼]B [文章編號]1673-7210（2008）05（c）-109-02

生物藥劑學與藥物動力學是藥學類專業本科生的主要專業課程之一。生物藥劑學(Biopharmaceutics)是研究藥物及其劑型在體內的吸收、分布、代謝與排泄過程，闡明藥物的劑型因素、機體生物因素和藥物治療之間相互關系的科學。而藥物動力學(Pharmacokinetics)是應用動力學原理和數學處理方法，定量地描述藥物通過各種途徑進入體內的吸收、分布、代謝、排泄(即ADME)過程的“量時”變化或“血藥濃度經時”變化及動態規律的科學[1]。

生物藥劑學與藥物動力學是一門實驗操作性很強的課程，而實驗課是鞏固學生學習的理論知識，培養學生掌握操作技能，提高學生分析解決問題能力的有效教學手段。然而，在傳統實驗教學過程中我們發現，僅用傳統的板書教學手段難以在學生的大腦中留下深刻印象，尤其是對于生物藥劑學和藥物動力學的動物實驗部分（如大鼠在體小腸灌流實驗和撲熱息痛家兔血藥濃度測定實驗），更難以準確操作。而使用多媒體教學手段，可以將抽象的理論做成生動、形象的課件，引發學生的興趣，充分調動學生學習的積極性[2~4]。近年來，我教研室錄制了相關實驗操作的視頻，在實驗時以播放視頻作為主要的教學手段，并輔助以板書、圖片進行講解，取得了較好效果。

1 教學改革內容

1.1 簡化實驗教材文字

之前使用的生物藥劑學實驗教材具有理論性、邏輯性強的特點，但其內容抽象、復雜，知識量有限，重點不突出，教學目的不明確，教材內容不符合學生的認知規律。有的太簡單，只有文字和簡單的插圖，缺乏動態效果。在新版的生物藥劑學實驗教材中，我們在簡化文字內容的基礎上，使新教材內容更豐富，信息量更充足，聯系問題更廣泛。如大鼠在體小腸灌流實驗中關于大鼠的腹腔麻醉、腸管的剝離、小腸位置的確定等實驗內容著重突出；減少文字敘述，代以圖表形式勾畫實驗操作步驟；強調操作中的細節和提出的注意事項，以求文字教材簡單、易懂、重點突出。

1.2 加入圖片多媒體課件和相關影音文件素材

我們收集了主流教學資料包括雜志、教科書、相關書籍上的圖片，并摘錄了相關解剖學圖譜，還從互聯網上下載高清圖片。圖片素材盡量做到內容簡明、重點突出，同時，盡可能減少圖片間的頻繁切換，以免分散學生的注意力。視頻方面，我們攝錄了《大鼠在體小腸吸收實驗》、《家兔口服撲熱息痛血藥濃度的測定》等總片長100分鐘的資料，內容包括從儀器準備、動物處理、動物給藥到動物在體操作的全過程，特別突出在體操作技術中相關步驟等，以上教學片基本涵蓋了操作中的重點、難點及應急處理等知識。

1.3 加入實驗flas

在教學中，使用flash軟件，設計制作了生物藥劑學實驗內容的動畫，可從4個不同方位（正視圖、仰視圖、俯視圖和側視圖）觀察實驗操作，加深了學生對實驗內容的理解。

2 多媒體技術在實驗中的應用體會

2.1 簡化文字教材，突出重點，易于學生理解和記憶

生物藥劑學實驗內容具有理論性強、抽象、復雜的特點，如果單純通過板書的形式來說明實驗原理、操作過程、注意事項等，學生不易理解，如能采用相關軟件制作關于實驗原理的流程圖，并以錄像視頻作為內容，那么學生更易理解該實驗的目的和原理。如大鼠在體小腸灌流實驗中，關于大鼠的腹腔麻醉、腸管的剝離、小腸位置的確定、插管方向、循環控制等都是該實驗的重點內容，學生在第一次做實驗時，由于沒有直觀的接觸，常常會出現錯誤操作導致實驗的失敗，而對學生播放實驗視頻錄像可以對需要注意的地方重點講解，加深學生理解，提高生物藥劑實驗的成功率。

2.2 豐富實驗教學模式

以往的實驗教學程序是由學生課前預習實驗內容，教師在課堂上講解本次實驗相關內容并提出該實驗的要求和操作注意事項，學生按講義或要求進行操作，然后進行數據處理、撰寫實驗報告。這種教學模式單調、呆板，難以激發學生的學習興趣，達不到真正學習知識、運用知識、解決實際問題的目的。由于被動接受式學習沒有充分調動學生的積極性和主動性，學生普遍存在重理論輕實驗的現象。而采用多媒體技術可以激發學生自主學習的興趣，使認知過程由被動傳授轉變為主動學習[5]。

2.3 加強理論課教學與實驗課教學的結合

生物藥劑學與藥物動力學理論課的教學中有一節內容為應用藥物動力學軟件處理數據，在講解的過程中，讓學生應用3P97動力學數據處理軟件及自行編寫的非隔室模型法計算藥動學數的Excel 程序處理自己的實驗數據，并與手動計算的實驗結果進行比較，這樣不僅可以提高理論課學習的效果，還能提高學生對實驗課的興趣，引起學生的重視，真正做到理論學習與實驗的有機結合。

3 多媒體技術應用的教學效果

2006學年(未采用多媒體教學)與2007學年(采用多媒體教學)相比，考題難度基本持平，其中理論和實際操作各占50%，難度也基本相當。采用多媒體教學的2007學年學生成績有明顯提高：學生平均成績為84.8分，較2006學年提高13.5個百分點，優秀率達到15.7%；良好率提高11.5個百分點，達到73.3%；不及格率下降了4.2個百分點。我們在對2007學年學生(總人數366人)的問卷調查中發現，87.5%的學生認為利用多媒體進行教學，效果明顯好于傳統的教學方法，主要表現在同學上課注意力集中，具有比較高的學習積極性，動物實驗操作形象直觀，通俗易懂。因此，我們認為，正確處理好多媒體教學和傳統教學的關系，能明顯提高教學效能，起到事半功倍的作用。

[參考文獻]

[1]梁文權.生物藥劑學與藥物動力學[M].北京：人民衛生出版社，2007.

[2]王定勇，程力慧， 廖華衛，等. 天然藥物化學開放性實驗的實踐與思考[J].廣東藥學院學報， 2004，20(4): 450.

[3]蔣心惠. 對藥學試驗傳統教學模式的改革與思考[J].山西醫科大學學報(基礎醫學教育版)， 2006，8(2): 197- 199.

[4]張永紅，李泳.多媒體教學的應用于思考[J].中國醫藥導報，2006，3（29）：77.

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【關鍵詞】藥物代謝物 藥代動力學 生物等效性

新藥的臨床藥代動力學研究旨在闡明藥物在人體內的吸收、分布、代謝和排泄的動態變化規律。對藥物上述處置過程的研究，是全面認識人體與藥物間相互作用不可或缺的重要組成部分，也是臨床制定合理用藥方案的依據。生物等效性是指藥學等效制劑或可替換藥物在相同試驗條件下，服用相同劑量，其活性成分吸收程度和速度的差異無統計學意義。通常意義的生物等效性研究是指用生物利用度研究方法，以藥代動力學參數為終點指標，根據預先確定的等效標準和限度進行的比較研究。藥物的代謝物是指藥物進入機體后，部分藥物經過體內的生物轉化，經過I相（氧化、還原、水解）和II相（結合）代謝途徑，產生的化合物。本文對藥物代謝物在藥代動力學及生物等效性評價中需要考慮的一些問題進行綜述。

1 藥物的代謝產物在藥代動力學評價中的一般考慮

SFDA指出[1]，根據非臨床藥代動力學研究結果，如果藥物主要以代謝方式消除，其代謝物可能具有明顯的藥理活性或毒性作用，或作為酶抑制劑而使藥物的作用時間延長或作用增強，或通過競爭血漿和組織的結合部位而影響藥物的處置過程，則代謝物的藥代動力學特征可能影響藥物的療效和毒性。對于具有上述特性的藥物，在進行母體藥物單次給藥、多次給藥的藥代動力學研究時，應考慮同時進行代謝物的藥代動力學研究。

FDA指出[2]，一般情況下，對于僅在人體中出現的代謝產物，或人體中代謝物水平遠高于任何經過測試的動物種屬時，應考慮進行安全性評估。在人體中的代謝產物，如果其水平高于穩態時母體藥物系統暴露量的10%，則可引起安全性擔憂。

因此，在藥代動力學研究中：⑴如果代謝物影響藥物的安全性和有效性，則需要檢測母體藥物和代謝物。⑵如果代謝物的活性不清楚，則如果代謝物水平高于穩態時母體藥物系統暴露量的10%時，則需要檢測母體藥物和代謝物；如果代謝物水平低于于穩態時母體藥物系統暴露量的10%時，一般只測定母體藥物。⑶母體藥物體液濃度很低，代謝物為體內的主要存在形式時，如果母體藥物可測到，應測定母體藥物和代謝物。⑷ 對于前體藥物，如果能測到母體藥物濃度，則應測定母體藥物和代謝物濃度；如果母體藥物濃度非常低，檢測非常困難，則測定代謝物。

2 藥物的代謝產物在生物等效性評價中的一般考慮

SFDA指出[3]，某些藥物在體內迅速代謝無法測定生物樣品中原形藥物，也可采用測定生物樣品中主要代謝物濃度的方法，進行生物利用度和生物等效性試驗。

FDA指出[4]，對于生物等效性研究，一般建議只測量從該制劑中釋放的原型藥物，而不測量代謝產物。

這一建議的依據是原型藥物的濃度時間曲線對制劑表現的變化比代謝產物更加敏感，代謝產物更多地是反映了代謝產物的形成、分布和消除。下列情況屬于例外，⑴原型藥物濃度太低，不能在足夠長的時間內對血液、血漿或血清中的原型藥物進行可靠測定時，最好是測定代謝產物。⑵代謝產物可能在腸壁或經進入體循環之前的其他代謝形成。如果代謝產物對安全性和/或療效有一定的貢獻，建議代謝產物和原型藥物都要測定。如果代謝產物的相對活性低，對安全性和/或療效沒有什么意義，那么不一定需要測定代謝產物。 轉貼于

EMEA指出[5]，可用代謝物數據來評價生物等效的情況僅限于以下情況：⑴ 生物基質中活性物質濃度太低以至于無法準確檢測，并導致顯著變異時。此時，申辦者應提供令人信服的證據說明母體化合物的檢測不可靠，才能使用代謝物數據。⑵ 當代謝物活性是體內活性物質總活性的主要部分并且其藥代動力學特征是非線性時。此時，先要評價代謝物的作用，如果代謝物活性是體內活性物質總活性的主要部分并且其藥代動力學特征是非線性的，就有必要同時檢測母體化合物和活性代謝物的血藥濃度并且對他們單獨評價。

前體藥物生物等效性試驗的問題[6]，⑴ 測定前藥是首選：生物等效性是評價試驗制劑和參比制劑在藥物吸收速度和程度上的異同，而測定母體藥物是評價生物等效性的首選方法。因此對于前體藥物，雖然具有藥理活性的是代謝產物，但假如前體藥物從制劑中釋放并被完整吸收，同時其在體循環中的測定方法是可靠的，那么，最好的方法仍應當是以原型藥（即前藥）來評價兩藥的生物等效性。⑵ 同時測定前藥和代謝物：一般很少考慮同時測定原型藥和代謝物的水平用于評價生物等效性，但在有些情況下，如藥物本身是無活性的前體藥物，它在體內能快速轉化成有活性的代謝物，而療效和毒性主要與此代謝物有關。那么，代謝物的測定在生物等效性決策中也有重要參考價值，增加代謝物的生物等效性特征參數可以降低消費者替換使用藥物的風險。⑶測定代謝產物的考慮：有些情況下，一些藥物本身是無活性的前體藥物，由于某種原因，如前藥在生物基質中不穩定、快速代謝或分析方法學上有困難，無法測定生物樣品中原形藥物時；或者藥物活性代謝物與藥物療效和安全性密切相關時，一般認為可采用測定生物樣品中相應活性代謝物濃度的方法，進行生物等效性試驗。例如：頭孢呋辛酯是頭孢呋辛的口服前體藥物，服用后，迅速被胃腸道粘膜細胞中非特異性酯酶水解為活性成分頭孢呋辛而發揮藥理作用。服用后被快速代謝，體內很難測到前藥原型，所以等效性試驗中，只能測定血液中的代謝物頭孢呋辛作為替代檢測指標。類似的情況還有頭孢泊肟酯、頭孢妥侖匹酯、頭孢特侖新戊酯、鹽酸頭孢他美酯等。

因此，在生物等效性研究中：⑴ 如果代謝物影響藥物的安全性和有效性，則需要檢測母體藥物和代謝物，但生物等效性評價時以母體藥物濃度作為主要判斷指標。 ⑵如果代謝物的活性不清楚，一般只測定母體藥物 ⑶ 母體藥物體液濃度很低，代謝物為體內的主要存在形式時，一般測定代謝物 ⑷ 對于前體藥物，如果母體藥物可以測定時，一般測定母體藥物；如果母體藥物濃度非常低，檢測非常困難，則測定代謝物。

總之，藥物代謝物在藥代動力學及生物等效性評價中發揮著重要作用，因此，本文會促進和完善對新藥藥代動力學和生物等效性的評價。

參 考 文 獻

[1] 化學藥物臨床藥代動力學研究技術指導原則，2005年3月，藥品審評中心.

[2] 藥物代謝產物安全性試驗技術指導原則，2008年2月，美國FDA，藥審中心最后審核.

[3] 化學藥物制劑人體生物利用度和生物等效性研究技術指導原則，2005年3月，藥品審評中心.

[4] FDA《口服制劑的生物利用度和生物等效性研究:一般性考慮》，FDA.

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1提高學習動機的意義分析

研究顯示，學習動機對于提高學生的學習興趣，驅動學生進行主動的學習具有極大的作用，對于初中物理教學而言具有以下作用：

1.1促發作用

學習動機對于促發學生積極主動地去學習物理知識具有極大的促發作用，例如當學生對于物理教材中某一知識點、物理現象、或是實驗產生了強烈的興趣時，就會促發學生主動地去了解和學習這一知識點，運用原有認知經驗去分析物理現象，自己嘗試著探究，引起學生的學習行為.

例如，《大氣壓強》這節內容的教學，演示覆杯實驗，這個實驗學生自己課后也可以完成，所以當教師演示物理實驗，學生通過現象的觀察和分析感知大氣壓強的存在，當然也有同學會存有疑問，這進一步觸發了學生自己課后嘗試的欲望，課后自己嘗試覆杯實驗，實現對現象、規律的再思考.

1.2定向作用

學習動機可以為學生的初中物理學習提供一個明確的方向，使得學生在學習動機的驅使下去完成一定的目標，為了達到這一目標學生就會積極主動地去解決問題、分析問題，從而幫助學生更好地掌握物理知識點.

例如，學生學習“液體內部壓強”這一知識點，那么學生可能會產生疑問，液體內部壓強是怎么產生的？液體內部壓強與哪些因素有關？生活中有哪些應用？這些疑問恰是驅動學生主動地查找資料，尋求問題的答案，深化對這一知識點的理解與掌握.

1.3保持作用

不少學生尤其是初二的學生會感覺物理難學，概念學習枯燥，導致其物理學習興趣不高，學習物理往往開始好奇，接著就半途而廢不能持之以恒.那些學習動機高的學生往往能在一個較長的時間里一直保持著一種認真、刻苦的精神面貌；而那些學習動機水平較低的學生往往對物理課程沒有興趣，即使突然因為新奇的物理實驗，對物理學習有了一定的興趣，也往往因為其他原因不能持之以恒，因此學習動機對于學生的物理學習具有很好的保持作用，可以不斷地保持學生對于物理學習的興趣.

1.4調節的作用

學習動機不僅能夠幫助學生定向學習的目標，而且還可以不斷在這一過程中去調節學生的具體的每一個步驟和小的目標，不斷地去調節學生在進行這一目標的過程中堅持下去，直到完成具體的學習目標.

2創設情境提升學生的學習動機水平

2.1結合學生的實際生活創設情境

學生在學習物理知識時，如果對物理知識的認知出現偏差，他們會不愿意積極學習物理知識.教師要讓學生真正理解學習物理知識的意義，就要結合學生的生活實際為學生創設情境，讓學生理解到物理知識來源于生活，學好物理知識才能夠改善自己的生活.

比如教師在引導學生學習《物態變化》時，引導學生觀察自己吃冰棒時剛撕開冰棒紙，冰棒有時會出現冒煙的現象；冰棒靜置一段時間后四周會出現細小的水滴，待到靜置得更久，小水滴逐漸變大，當冰棒水滴在地上后，過一會就會干掉消失.通過以上的物理現象，教師引導學生理解物體在怎樣的外界因素下，它們會改變自己的物態，如果我們要物體保持特別的物態，可以從哪些外部條件著手控制？當學生發現自己學習的物理知識能改變實際的生活時，他們會有濃厚的探索物理知識的興趣.

2.2結合物理的實驗現象創設情境

教師在引導學生學習物理時，一味地對學生說物理概念和定律，學生也不一定能明白這些概念的意義是什么.教師可以給學生觀察物理現象，讓學生了解到物理現象的規律，當學生發現物理現象能有規律的變化時，他們會愿意自發地學習物理知識.比如教師引導學生觀察《透鏡及應用》時，教師要引導學生不斷地觀察透鏡的變化.學生如果能透徹地掌握透鏡的變化就能理解到凸透鏡變化的規律為：

表1

物距(u)像距(v)正倒大小虛實應用特點

u>2ff

U=2fV=2f倒立等大實像測焦距大小分界點

f

幻燈機―

U=f不成像―――平行光源

測焦距實虛分界點

Uu

與物同側正立放大虛像放大鏡虛像在物體同

側，物像同側，

虛像在物體之后

2.3結合學生的團體合作創設情境

不同的學生有不同的性格、不同的特長、不同的潛力，學生在一起學習，教師如果能夠讓學生在進入情境時互相提示、互相取長補短，情境創設的效果也能因此而事倍功半.所以教師在引導學生進入情境時，可以根據教學的實際情況引導學生用團隊的方法一起進入情境.

比如教師在引導學生學習《浮力的應用》時，教師可以將數個學生組成學習小組，給每個學習小組100克薄鐵皮、一盆水、一枚一元的硬幣.如果直接將一元硬幣投入水中，硬幣會沉下去，教師要讓學生合理改變薄鐵皮的結構，讓薄鐵皮承載起一元硬幣，讓硬幣能浮在水面上.學生共同學習時，要克服薄鐵皮可能會進水的問題、薄鐵皮的結構不足以承載硬幣的問題、薄鐵皮能承載多少硬幣的問題.通過共同合作，學生們提出種種承載硬幣的方案，一起動手、一起改進，通過這種進入情境的方法，學生會非常愿意積極地探索物理知識.

3提升學生學習動機水平應關注的幾個方面

3.1讓學生關注物理現象

教師在引導學生進入情境時，無論是用講故事的方法也好、讓學生觀看多媒體也好、用實驗的方法也好，教師需要用種種方法讓學生觀察物理的現象和物理的變化.如果學生不能細心觀察物理現象，他們就不能了解這節課到底需要了解哪些知識，不會明白自己學習的范圍.

3.2讓學生關注物理變化

教師在引導學生進入學習情境后，如果學生僅僅只了解現在眼前發生的物理現象，學生依然不能從物理現象中提煉到物理知識.因此教師引導學生進入情境后，就要鼓勵他們自己去動手嘗試、動手探索，學生如果能夠了解到外部條件的變化能使物理現象產生變化，他們就能提出猜想，嘗試理解這些物理現象背后的本質.

3.3讓學生總結物理現象

學生在學習物理時，要真正的掌握物理知識，就需要把感性的認知轉化為理性的認知.因此教師在引導學生進入情境時，要引導學生總結自己觀察到的物理現象，讓他們把具體的知識經過提煉，重新通過抽象的方式理解.

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【摘要】 目的 建立人血漿中羅紅霉素濃度的高效液相分析方法，用于研究羅紅霉素膠囊在人體的藥代動力學和生物等效性。方法 血漿樣品采用己烷異戊醇(98∶2)液液萃取，反相高效液相法測定。結果 羅紅霉素的線性范圍為0.25-32.06mg/L(r為0.9992)，最低檢出質量濃度為0.25mg/L，最低檢出量為12.5ng，提取回收率為68.0%-72.8%，方法回收率為90.7%-99.4%。單次服用300mg羅紅霉素膠囊受試制劑或參比制劑后的藥動學參數AUC0-48h、Cmax、tmax、t1/2分別為(101.84±27.69)(mg·h)/L和(103.5±30.83)(mg·h)/L，(8.54±1.95)mg/L和(8.07±1.81)mg/L，(1.6±0.6)h和(1.8±0.6)h，(10.4±2.9)h和(10.5±2.6)h。受試制劑相對生物利用度為(100.5±19.1)%。結論 該方法專一性較好，血漿內源性雜質無干擾，結果準確。羅紅霉素的兩種制劑間主要藥動學參數無明顯差異，具有生物等效性。

【關鍵詞】 羅紅霉素；HPLC；生物等效性；藥代動力學

Pharmacokinetics and bioequivalence of roxithromycin capsules in human

ABSTRACT: Objective To establish the method of assaying roxithromycin in human plasma by high performance liquid chromatography (HPLC)， and to study its pharmacokinetics and bioequivalence. Methods The plasma samples were extracted by hexane isoamylalcohol (98∶2) and reversed phase chromatography to determine the concentration of roxithromycin. Results The calibration curve was linear from 0.25mg/L to 32.06mg/L， the minimum concentration was 0.25mg/L(r=0.9992) and the minimum quantitation was 12.5ng. The extraction recovery rate was 68.0%-72.8% and the method recovery rate was 90.7%-99.4%. After a single oral dose of 300mg roxithromycin test or reference capsules， the main pharmacokinetic parameters were as follows: AUC0-48h(101.84±27.69)(mg·h)/L and (103.5±30.83)(mg·h)/L， Cmax(8.54±1.95)mg/L and (8.07±1.81)mg/L， tmax(1.6±0.6)h and (1.8±0.6)h， t1/2(10.4±2.9)h and (10.5±2.6)h， respectively. Relative bioavailability of the test fomulation was (100.5±19.1)%. Conclusion This method can be used in the analysis of roxithromycin in the plasma without endogenic substance interference. The method is specific and accurate. No significance difference exists among the main pharmacokinetic parameters for the test capsules and the reference capsules. The two formulations are bioequivalent.

KEY WORDS: roxithromycin; high performance liquid chromatography (HPLC); bioequivalence; pharmacokinetics

羅紅霉素是半合成的十四元大環內酯類抗生素，具有口服吸收好、半衰期長等特點。在較低波長處，羅紅霉素具有較高的吸收，可采取分光光度方法檢測。本實驗采用高效液相色譜法(high performance liquid chromatography， HPLC)測定血漿中羅紅霉素的含量，最低檢測濃度為0.25mg/L，可滿足羅紅霉素藥動學的研究。此方法簡便迅速，結果準確。

1 材料與方法

1.1 藥品、試劑與儀器 受試制劑：羅紅霉素膠囊(T)，規格：150mg/粒，批號：030701，山東天順藥業股份有限公司生產。參比制劑：羅紅霉素膠囊(R)，規格：150mg/粒，批號：03121202，江蘇揚子江藥業集團有限公司。羅紅霉素對照品含量946u/mg，批號：30351-200303，由中國藥品生物制品檢定所提供。試劑：甲醇由美國Fishers公司生產，色譜純；正己烷由德國Merck公司生產，色譜純；異戊醇以及其余試劑均為分析純，異戊醇用前經重蒸餾；水為超純水。儀器： 美國Waters公司高效液相色譜儀，包括486可變紫外檢測器，510型高壓泵，7725I型進樣閥，AS938色譜工作站；TDL40B臺式高速離心機。

1.2 受試對象 20名男性健康志愿者，年齡(24±2.8)歲，身高(173±4.9)cm，體重(64±5.8)kg。肝、腎功(GPT、GOT、BUN、CR)、心電圖、血糖、血壓、血常規試驗前檢測均正常。受試者試驗前兩周至試驗結束未服用其他藥物，受試期間忌煙、酒和含咖啡因的飲料。試驗期間統一食譜，試驗前簽署知情同意書。試驗方案獲院倫理委員會批準。

1.3 色譜條件 色譜柱：Hypersil柱(250mm×4.6mm，5μm)，美國熱電公司提供；流動相：甲醇15mmol/L磷酸二氫鉀=70∶30(氨水調pH=6)；流速：0.7mL/min；檢測波長：220nm；進樣量：50μL；柱溫：60℃。

1.4 給藥方案及血漿樣品的采集與處理 實驗采用單劑量雙周期交叉實驗設計，受試者隨機分為兩組，分別單劑量口服受試制劑和參比制劑，劑量均為每人300mg，受試者用藥前12h及用藥后4h內禁食，實驗期間統一進餐。間隔一周清洗期后再交叉。受試者于給藥前及給藥后0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12、24、36、48h取靜脈血4mL置肝素化試管中，3000r/min離心10min，分離血漿，-20℃冰箱凍存待測。

吸取血漿樣品1mL于10mL帶塞試管中，加入0.1mL 1mol/L NaOH溶液，渦旋混勻后放置5min，加入4mL正己烷與異戊醇的混合液(正己烷∶異戊醇=98∶2)，渦旋混勻2min，2500r/min離心5min，移去上層有機溶液，45℃水浴下氮氣流吹干，殘渣加100μL流動相溶解，取50μL進入HPLC分析。

1.5 數據處理 所得血藥濃度時間數據用3P97藥動學軟件計算藥動學參數，經統計矩計算得AUC0-t，AUC0-∞，MRT及t1/2。按公式t1/2=0.693/ke計算ke，Cmax和tmax為實測值，用3P97藥動學軟件進行生物等效性分析。兩制劑的AUC，Cmax 經對數轉換后進行方差分析、雙單側t檢驗，并計算90%的可信區間。tmax進行Wilcoxon檢驗。

相對生物利用度(F)=AUC試驗藥/AUC參比藥×100%

2 結果

2.1 方法的專屬性 在已建立的色譜條件下，測得空白血漿、標準血漿、受試者血漿的色譜圖。由圖1可見血漿中的內源性雜質不干擾羅紅霉素的測定。羅紅霉素的保留時間為9.5min。

2.2 標準曲線的制備及定量下限 取正常人空白血漿1mL，精密加入不同量的羅紅霉素的標準品溶液，配制質量濃度為32.06、16.03、8.02、4.01、2.01、1.00、0.50、0.25mg/L的系列標準血漿樣品，按“血漿樣品”的處理與測定方法操作。以羅紅霉素峰面積(y)對濃度(x)回歸，得標準曲線方程為：y=295.6+42874.1x，r=0.9992(n=6)，在(0.25-32.06)mg/L范圍內線性良好，羅紅霉素在血漿中的定量下限(S/N=3)為0.25mg/L，最低檢出量為12.5ng。

圖1 血漿中羅紅霉素的HPLC圖（略）

Fig.1 HPLC chromatograms of roxithromycin in human plasma

A: blank plasma; B: blank plasma with roxithromycin (4.408mg/L); C: subject plasma sample 2.0h after oral administration

2.3 回收率的考察結果 取空白血漿加入羅紅霉素對照液配成的16.548、4.408、0.547mg/L樣品各5份，按“血漿樣品”的處理與測定方法操作，測定其含量，再與加入量相比即為相對回收率。以3個濃度對應相同的進樣量的對照品進行分析，計算血漿樣品的絕對回收率，結果見表1。

表1 人血漿中羅紅霉素的回收率的測定結果（略）

Table 1 The recovery of roxithromycin in human plasma

2.4 精密度的考察結果 取空白血漿加入羅紅霉素標準液配成的16.548、4.408、0.547mg/L三個樣品各5份，按血漿樣品的處理與測定方法操作，于同日不同時間測定和不同日內重復測定，計算日內、日間精密度，結果見表2。

轉貼于

表2 人血漿中羅紅霉素的精密度的測定結果（略）

Table 2 The precision of roxithromycin in human plasma

2.5 血漿穩定性的考察結果 取1mL空白血漿若干份，加入羅紅霉素標準液配成的濃度為15.960、4.409、0.547mg/L的標準血漿樣品。分別對室溫放置穩定性(12h)、凍融穩定性(反復凍融2次)、長期冷凍穩定性(-20℃保存3周)以及血漿樣品處理后流動相復溶穩定性(室溫放置12h)進行考察，結果表明羅紅霉素標準血漿樣品室溫放置12h、反復凍融2次、冷凍保存3周后顯示穩定，血漿樣品處理后流動相復溶室溫放置12h顯示穩定。

2.6 羅紅霉素藥動學和生物等效性的研究 20名受試者單劑量口服羅紅霉素受試制劑或參比制劑300mg后，藥時曲線見圖2。主要藥動學參數見表3。單劑量口服羅紅霉素受試藥和參比藥的lgAUC0-∞、lgAUC0-t進行三因素方差分析，結果表明二者試驗制劑間、周期間、個體間差異均無顯著性(P>0.05)；進一步進行雙單側t檢驗及(1-2α)置信區間分析，以80%-125%為等效標準，結果判定均具有生物等效性(表4)。受試制劑的相對生物利用度F0-t為(100.3±19.1)%；F0-∞為(100.5±19.6)%。

圖2 20例志愿者服用羅紅霉素后的平均血藥質量濃度的經時曲線（略）

Fig.2 Mean plasma concentrationtime curves of roxithromycin after a single oral dose of 300mg in 20 healthy volunteers

表3 20名健康受試者口服羅紅霉素300mg后的藥動學參數（略）

Table 3 Pharmacokinetic parameters of roxithromycin after a single oral dose of 300mg in 20 healthy volunteers

表4 羅紅霉素的生物等效性分析（略）

Table 4 The bioequivalant statistical analysis of roxithromycin

3 討論

羅紅霉素的測定方法有抗生素微生物檢定法[13]、HPLCCED法[45]、HPLCMS法[67]和HPLCUV法[810]。HPLCUV法具有定量快速、精確的特點，方法明顯優于微生物效價測定法。本試驗采用了反相高效液相法測定血漿中的羅紅霉素的濃度，具有較高的選擇性。此方法專屬性強，精密度、靈敏度較好，能夠滿足該藥的藥動學研究的要求。用二氯甲烷或乙醚作為萃取溶媒回收率低，乙醚提取雜質成分較多。在測定血漿羅紅霉素濃度的文獻[9]中，樣品預處理用特殊的固相提取柱提取，其方法操作極其復雜。根據Macek[10]的方法，本文用己烷異戊醇(98∶2)的液液萃取方法提高了回收率，改進了樣品提取純化效果。在220nm波長處檢測羅紅霉素無雜質干擾峰。

20名健康受試者的自身對照試驗表明，受試藥羅紅霉素膠囊和參比藥羅紅霉素膠囊在健康人體內的過程基本一致，其主要藥動學參數相近，具有生物等效性。受試者在試驗過程中未發現嚴重的不良反應。

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【關鍵詞】 中藥;藥代動力學;方法學

藥物動力學是應用動力學的原理與數學處理方法,定量地描述藥物通過各種給藥途徑進入機體后的吸收、分布、代謝和排泄等過程的動態變化規律,即研究給藥后藥物在體內的位置、數量、療效與時間之間的關系。藥物動力學又被稱為“藥物代謝動力學”、“藥代動力學”等,其中“代謝”含義包括了藥物在體內的吸收、分布、代謝和排泄。藥物動力學是一門新興的介于藥學與數學之間的邊緣學科,已成為生物藥劑學、臨床藥劑學、藥理學、臨床藥理學、分子藥理學、生物化學、藥劑學、毒理學等學科的基礎推動著這些學科的蓬勃發展。近幾十年藥物動力學的研究成果對指導新藥研究、制定臨床最佳給藥方案、評價制劑質量、改進藥物劑型等方面發揮了重要作用。中藥藥代動力學,其研究對象是中藥及其復方,是指在中醫藥理論指導下,利用動力學的原理與數學處理方法,定量地描述中藥有效成分、有效部位、單味中藥和中藥復方通過各種給藥途徑進入機體后的吸收、分布、代謝和排泄等過程的動態變化規律。中藥藥物動力學對中藥現代化和中藥走向世界具有極為重要的意義。其研究方法大體可分為:血藥濃度法和生物效應法兩大類。同時隨著中藥藥代動力學研究的越來越受重視,先進檢測技術的不斷增加,出現了一些新技術新方法,如臨界流體萃取、在體微透析、核磁共振、生物電阻抗、細胞培養研究體外吸收模型、證治藥動學[1]、中藥血清藥理學[2]、中藥胃腸藥動學等。下面就對常用的藥代動力學研究方法進行簡要介紹。

1 血藥濃度法

適用于有效成分比較明確的中藥及其復方制劑,通過中藥復方給藥后,用現代分析儀器如氣相色譜法、氣-質聯用法、高效液相色譜法或液-質聯用等,分析生物樣品中有效成分原型或代謝物,進行中藥復方的體內成分分析、體內過程和動力學研究。目前用藥物濃度法進行藥代動力學研究已成為中藥復方藥代動力學研究的熱點,近年這方面的研究報道很多。如報道大鼠口服黃芩湯后用HPLC法測定血漿中的多種成分:黃芩苷、漢黃芩苷、千層紙素A苷、黃芩素、漢黃芩素、千層紙素A、芍藥苷、甘草苷、甘草素、甘草酸、烏拉爾甘草次酸、paeonimetabolin-I(PM-I),再分別計算各自的藥動學參數[3];用HPLC法測定大鼠口服甘草附子湯后血漿中烏拉爾甘草次酸的藥動學參數[4];用SPE和HPLC法研究大鼠口服四物湯后血漿中白花素、芍藥苷的藥動學特征[5];用LC-ESI-MS法研究大鼠口服黃連解毒湯后血漿中小檗堿、巴馬丁的藥動學特征[6]。然而,在采用藥物濃度法進行中藥復方藥代動力學研究中,盡管有些報道檢測了復方給藥后體內多種成分,再對每一種成分逐一進行動力學分析,從而避免了單一成分的藥動學脫離了中醫藥整體觀思想,但這些研究仍沒有闡明多種成分與復方藥效的關系,因此,這種多種成分的藥動學研究也難以合理地闡明中藥復方的藥代動力學特征。中藥復方藥代動力學研究中,上述常用的藥物濃度法也存在缺陷[7]。由于中藥復方化學成分的復雜性、中藥藥效的多效性和中醫臨床應用的辨證施治及復方配伍的中醫特色等特點,使得中藥復方藥代動力學研究有別于化學藥品的藥代動力學研究,而有其特殊性和復雜性[8]。

2 生物效應法

適用于有效成分尚不明確的中藥及其復方制劑。采用單一組分為指標,用體液藥物分析方法求得的藥動學參數代表中藥整體的藥動學有很大的局限性。20世紀80年代初期產生了以藥效為指標進行藥動學研究的理論和方法,主要包括毒理效應法、藥理效應法和微生物指標法。這些方法體現了整體觀,從而使中藥藥動學研究邁向了一個新階段。

2.1 毒理效應法 該法分為急性累計致死率法及LD50補量法。急性累計致死率法基本原理是將藥物動力學中的血藥濃度多點測定原理與用動物急性致死率測定藥物蓄積性的方法結合起來,即給多組動物不同時間間隔給藥,求出不同時間體存百分率的動態變化,由此推算藥動學參數。LD50補量法在急性累計致死率法基礎上進行了改進,將第2次腹腔注射同量藥物改為求測LD50(t)。其優點是結果更精確,誤差小;但動物用量成倍增加,操作更加復雜。用此法進行藥代動力學研究的有含劇毒藥馬錢子的九分散和疏風定痛丸,結果表明:兔體內,兩者均符合一房室模型;馬錢子在體內吸收迅速,而疏風定痛丸吸收較九分散慢,從而降低毒性和不良反應[9],為臨床合理用此類中藥提供了依據。劉延福等[10]研究附子理中丸在小鼠體內的藥動學參數,結果表明:按一級動力學消除,呈二室開放模型。此法觀察指標明確,實驗操作簡便,但只適用于藥理效應和毒理效應是同一組分的中藥。同時它以藥物毒性為主要指標來反映藥代動力學規律,不能代表有效量的藥代動力學規律。

2.2 藥理效應法 基本原理和方法是假定藥物在體內呈線性配置,藥物在作用部位的藥量Q(t)與藥物效應強度(E)存在函數關系Q(t)=f[E(t)],而Q(t)又與給藥劑量(D)成正比。所以給藥后某時刻生物相藥量Q(t)與該時刻的效應強度E之間的函數關系便可以用給藥劑量D與效應強度E的函數關系D=f[E(t)]來表示,建立“時間-效應曲線”,然后再變換為“血藥濃度-時間曲線”,求出動力學參數。該法以越來越廣泛地用于中藥及其復方制劑地藥動學研究中。如富杭育等[11-14]分別以解熱、發汗、抗炎、抑制腸蠕動等藥理效應為指標,研究了麻黃湯、桂枝湯、銀翹散、桑菊飲等的藥物動力學。盧賀起等[15]以血小板聚集抑制率為藥效指標,研究了四物湯的藥動學,結果表明:家兔經口服給藥后體內過程符合一室模型,t1/2α=0.37 h,t1/2β=0.4 h。藥理效應法研究中藥復方藥動學,更能體現中醫藥的整體思想,符合中醫藥的基本理論,是一極具發展前景的方法。但由于生物差異性,以及測定方法的準確度、精密度等限制,所得參數具有表觀性;難于找到靈敏又準確地定量療效的藥理指標;而且由于所選藥效指標的不同,測得的藥動學參數差異較大。

2.3 微生物指標法 其原理主要是含試驗菌株的瓊脂平板中抗菌藥擴散產生的抑菌圈直徑與其濃度的對數呈線性關系。選擇適宜的標準試驗細菌菌株,可以測定體液生物樣品濃度,計算藥動學參數。王西發等[16]選用金葡菌為試驗菌株,用此法測定了鹿蹄草素在兔體內的藥動學參數。潘嘉等[17]以抑菌效應為指標,測定川芎揮發油藥動學參數,符合一室開放模型。此法適用于具有或以抗菌活性為主要藥效的中藥制劑,有簡便易行,體液用量少等優點。但特異性不高,測定結果包括具有抗菌活性的代謝物;機體內外抗菌效應作用機制的差異、細菌選擇的得當與否、可在一定程度上影響藥代參數的準確性。

3 PK-PD模型、PB-PK模型的建立及應用

3.1 PK-PD模型應用 藥物PK-PD模型[18]反應了藥物濃度-時間-效應的三維關系,體現了特定時間內藥物濃度與藥效之間的關系,故能描述和預測一定劑量下藥物的時間-效應過程。藥物動力學(PK)解釋的是“機體對藥物的處置”問題;藥效動力學解釋的是“藥物對機體的作用”問題,將二者分開研究所得到的信息并不全面和充分。與藥效或不良反應密切相關的被測藥物濃度隨時間的變化過程是我們迫切需要掌握的信息,這樣的PK研究才有意義;PD研究只涉及時間-效應關系,未涉及到效應室中藥物濃度隨時間變化的藥效變化過程,實際情況中藥效峰值出現時間常滯后于血藥濃度峰值(藥效與血藥濃度之間存在逆時針滯后環),孤立的進行PK或PD研究不能闡明藥物的體內過程,故有必要建立PK-PD結合模型,對藥物的濃度-時間-效應關系進行估算,通過對靶部位藥物濃度及藥效的關聯度分析,評估藥物的體內過程。

3.2 PB-PK模型應用 血藥濃度法和生物效應法目前占據了復方藥動學研究的主導地位。PB-PK模型結構與生物體解剖結構大致對應[19],參數來自生理解剖資料和藥物理化性質,PB-PK模型以生理解剖資料和藥物理化性質為基礎來分析藥時數據,且有強大的種屬間外推(Interspecies Extrapolation)能力[20],所得參數更具有實際的生理意義,相比房室模型更有優越性和實用價值,可提供其他模型不能提供的參數(如藥物在人體器官內的代謝速率常數、進入器官的彌散系數等等),故有必要加強中藥復方的PB-PK模型研究以PB-PK模型參數提供更多有實際意義的參數為復方配伍規律進行參考。

4 小結

目前中藥藥代動力學研究尚處于探索階段。對中藥藥動學研究,雖然已經取得了很大進展,但仍然在許多方面存在著問題需要我們去解決。首先對中藥的整體觀難以把握,目前對于中藥復方的研究多數以其中一種或幾種成分為代表以此成分的代謝過程來表示整個復方的代謝過程。很明顯中藥方劑中依靠單一成分作用于單一靶點而發揮全部藥效功能的情況很少見,無論復方還是單方都是個復雜的系統,多個成分相互拮抗和協同產生的綜合作用。所以在研究中不應背離中醫藥整體觀的理論基礎,過分依賴西藥化模式和西藥植物藥的研究思路。其次中藥化學成分是復雜和多樣的,中藥處方的變異性和狀態的不可預測性,給藥物治療的物質基礎研究帶來許多問題,上述對純化學來源的藥物可以分析的方法,還是難以全面認識中藥作用的物質基礎。還有眾多的中藥復方雖然臨床療效確切,但長期臨床應用是按中醫理論和經驗用藥的,對其作用機制的內涵以及與物質基礎的關系,尤其是從藥代動力學角度進行研究與國際水平還有相當差距。但是我相信隨著藥代動力學的不斷發展,不斷涌現出來的新方法和理論許多新技術如:超臨界流體萃取、在體微透析、核磁共振、生物電阻抗、細胞培養研究體外吸收模型等,將會將為單味和復方中藥的藥代動力學研究開辟了新思路。

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中藥藥劑學是以中醫藥理論為指導，運用現代科學技術，研究中藥藥劑的配制理論、生產技術、質量控制和合理應用等內容的一門綜合性應用技術科學。

《中藥藥劑學》是中藥學專業的主干專業課，它不僅與本專業的各門基礎課、專業基礎課和其他專業課有著密切的聯系，而且與中藥工業化生產和臨床醫療密切相關，也是連接中醫與中藥的紐帶，是實現中藥現代化的重要組成部分。

根據中藥學專業（專升本）入學需要，中藥藥劑學知識考試內容的總體要求分為掌握、熟悉、了解三個層次：

掌握中藥常用劑型的概念、特點、制備工藝和質量控制等的基礎理論、基本知識和技能，掌握現代藥劑學的有關理論與技術；熟悉藥劑常用輔料，專用設備的基本構造、性能及使用保養方法等內容；了解國內外藥劑學研究新進展。

二、考試內容

第一章 緒 論

1．掌握中藥藥劑學的含義、理論體系的特點與任務；中藥劑型選擇的基本原則；《中華人民共和國藥典》（簡稱《中國藥典》）、《中華人民共和國衛生部藥品標準》（簡稱《部頒藥品標準》）及有關藥品管理法規的性質、特點與使用方法。

2．熟悉《中藥藥劑學》常用術語的概念；中藥藥劑學在中醫藥事業中的地位與作用；《藥品生產質量管理規范》（簡稱CMP）、《藥品非臨床研究質量管理規范》（簡稱CLP）、《藥品臨床試驗管理規范》（簡稱GCP）及《甲藥材生產質量管理規范》（簡稱CAP）等。

3．了解《中藥藥劑學》的發展簡史、研究進展與方向；中藥劑型的分類方法；現代藥劑學的分支學科。

第二章 中藥調劑

1．掌握處方的調配程序與注意事項。

2．熟悉中藥“斗譜”排列的一般原則，處方藥、非處方藥的基本概念；中藥毒性藥品種及用量；處方禁忌藥。

3．了解處方種類與格式；非處方藥的遴選原則；中藥學的配伍變化與現代研究簡況。

第三章 制藥衛生

1．掌握常用的滅菌方法和主要防腐劑的正確用法。

2．熟悉制藥衛生的意義和基本要求，預防藥劑污染的主要環節。

3．了解制藥環境衛生的要求與管理、無菌操作法和無菌檢查法。

第四章 粉碎、篩析、混合與制粒

1．掌握藥料粉碎、篩析、混合與制粒的目的與基本原理。

2．掌握常用的粉碎、混合、制粒方法。

3．熟悉粉碎、篩析、混合、制粒常用機械的構造、性能及使用保養方法。

4．了解粉粒學在藥劑中的應用。

第五章 散 劑

1．掌握散劑的一般制備方法，以及含毒性藥物散劑、低共熔物散劑、含液體藥物散劑、眼用散劑等的制備原則和方法。

2．熟悉散劑的含義、特點、分類、質量要求及檢查方法。

第六章 中藥的浸提、分離與精制

1．掌握中藥浸提的過程及其影響因素；常用的浸提方法與選用；各種分離方法的特點與選用；常用精制方法的原理與選用。

2．熟悉中藥浸提、分離、精制的目的；浸提常用設備的構造、性能與使用保養。

3．了解中藥浸提常用溶劑和漫提輔助劑；藥材成分與療效的關系。

第七章 提取液的濃縮與干燥

1．掌握影響藥液濃縮的因素，常用的濃縮方法、原理及其選用；影響藥物干燥的因素，常用的干燥方法、原理及其選用。

2．熟悉中藥常用濃縮、干燥設備的性能及使用保養。

第八章 浸出藥劑

1．掌握湯劑、中藥合劑、口服液、糖漿劑、煎膏劑、藥酒、酊劑、流浸膏劑、浸膏劑、茶劑的制備方法與注意事項。

2．熟悉浸出藥劑的含義、特點及劑型種類；各種劑型的含義、特點、質量要求及控制方法。

3．了解湯劑研究及劑改的進展；煎膏“返砂”原因及解決途徑；液體類浸出藥劑的生霉發酵、渾濁、沉淀的原因及解決途徑等。

第九章 液體制劑

1．掌握液體藥劑的含義、分類、應用特點；分散度與療效的關系；表面活性劑的基本性質與選用；藥劑中增加藥物溶解度的方法；真溶液型藥劑、膠體溶液型藥劑、乳濁液型藥劑、混懸液型藥劑的特點與制法。

2．熟悉溶解、增溶、助溶、乳化、混懸的概念；增溶機制；膠體溶液的穩定性及其影響因素；乳劑形成理論及其穩定性，乳化劑的選用；混懸劑的穩定性；真溶液、膠體溶液、乳濁液、混懸液的質量評定。

3．了解按給藥途徑和應用方法分類的各種液體劑型的概念及特點；液體藥劑的色、香、味及包裝貯藏與產品質量的關系。

4．了解灌腸劑等其他液體藥劑的概念與制法。

第十章 注射劑（附眼用溶液劑）

1．掌握中藥注射劑、輸液劑的含義、特點、分類和質量要求；中藥注射用原液的制備；中藥注射劑制備的工藝過程與技術關鍵；熱原的性質、污染途徑及除去方法，熱原的檢查方法。

2．熟悉注射劑常用溶劑的種類；注射用水的質量要求及蒸餾法制備注射用水；注射用油的質量要求及精制法；注射劑常用附加劑的種類、性質、選用和質量要求及處理；中藥注射劑的質量控制與存在的問題及解決途徑；中藥注射劑指紋圖譜。

3．了解中藥注射劑的發展概況：注射劑容器的種類；血漿代用液、粉針劑、注射用混懸液及乳濁液的質量要求和制備要點；容器處理及分裝等。

第十一章 外用膏劑

1．掌握軟膏劑、黑膏藥、橡膠膏劑的含義、特點與制法。

2．熟悉外用膏劑的透皮吸收機理及影響藥物釋放、穿透、吸收的因素；凝膠劑、巴布劑、糊劑、涂膜劑及透皮貼劑的含義、特點與制法；軟膏劑與黑膏藥基質種類和性質。

3．了解外用膏劑的質量要求，了解凝膠劑、巴布劑、糊劑、涂膜劑及透皮貼劑基質的種類。

第十二章 栓 劑

1．掌握栓劑的含義和特點；藥物吸收的途徑與影響吸收的因素；熱熔法制備栓劑的工藝要求；置換價的含義及其計算方法。

2．熟悉栓劑常用基質的種類、特點以及栓劑的質量要求。

3．了解栓劑的發展概況以及包裝貯藏要求。

第十三章 膠 劑

1．掌握膠劑的含義、特點與制備。

2．熟悉膠劑原輔料的選擇與處理。

第十四章 膠囊劑

1．掌握硬膠囊劑、軟膠囊劑的含義、特點與制法。

2．熟悉硬膠囊劑、軟膠囊劑的質量評定；腸溶膠囊劑的特點與制法。

第十五章 丸 劑

1．掌握泛制法、塑制法制備丸劑的方法、基本理論和技能；水丸、蜜丸、濃縮丸、滴丸的含義與應用。

2．熟悉滴制法制備丸劑的基本原理與過程；糊丸、蠟丸的含義、特點與制法；丸劑的包衣與質量檢查方法。

3．了解丸劑包衣種類與方法；丸劑的染菌與防腐；丸劑的包裝與貯藏。

第十六章 顆粒劑

1．掌握顆粒劑的含義、特點、質量要求和制備方法。

2．熟悉顆粒劑的類型。

第十七章 片 劑

1．掌握片劑的含義、特點、種類與應用；片劑常用輔料的種類、性質和應用；中藥片劑的一般制法。

2．熟悉壓片機的構造、性能及其使用保養；壓片過程中可能發生的問題和解決方法；片劑包衣的目的、種類，素片的要求與包衣工藝；片劑的質量檢查。

3．了解片劑形成的理論；腸溶衣崩解或溶解機理與質量控制；中藥片劑新產品設計中應注意的主要問題。

第十八章 氣霧劑與氣壓劑

1．掌握氣霧劑和氣壓劑的含義、種類與特點；氣霧劑的制備方法和質量要求。

2．熟悉氣霧劑的組成；藥物經肺吸收的機理。

3．了解氣壓劑的含義、分類和制備方法。

第十九章 其它劑型

1．掌握膜劑的處方組成及制備方法。

2．熟悉膜劑成膜材料的性質與選用；熟悉海綿劑的特點與質量要求

3．了解煙劑、煙熏劑、香囊（袋）劑、離子透入劑與沐浴劑的特點及應用；了解丹藥的特點、制備和防護措施；了解錠劑、糕劑、釘劑、線劑、條劑、灸劑、熨劑與棒劑的含義與用法。

第二十章 藥物制劑新技術

1．掌握β－環糊精包合技術、單凝聚法、復凝聚法微型包囊技術；固體分散體成型技術；脂質體制備技術。

2．熟悉緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑的含義、作用特點、制備方法。

3．了解其他新技術（如磁性微球制備技術、前體藥物制劑的制備技術等）在中藥藥劑中的應用。

第十一章 中藥制劑的穩定性

1．掌握中藥制劑穩定性的考察方法及有效期的求解。

2．熟悉影響中藥制劑穩定性的主要因素及常用的穩定化措施。

3．了解研究藥劑穩定性的意義；包裝材料與藥劑穩定性的關系。

第二十二章 生物藥劑學與藥物動力學

1．掌握生物藥劑學的概念、研究的基本內容，藥物的體內過程，藥物動力學的慨念和研究的基本內容，生物利用度的含義及測定方法，溶出度測定的意義及方法。

2．熟悉影響制劑療效的劑型因素，藥物動力學參數的意義和求算，藥物動力學和生物藥劑學的研究方法。

3．了解影響制劑療效的生物因素，中藥制劑生物利用度和藥物動力學的研究進展。

第二十三章 藥物制劑的配伍變化

1．掌握藥物制劑配伍變化的含義；藥劑學配伍變化的內容；溶液中配伍變化的實驗方法；發生配伍變化后的處理方法。

2．熟悉藥理學和注射液配伍變化的分類及其發生原因。

第二十四章 中藥新藥的研制

1．掌握新藥的含義與中藥、天然藥物的注冊管理規定。

篇8

【摘要】

目的探討多烯紫杉醇脂質體大鼠體內代謝過程。方法優化色譜條件，以萃取濃集法處理生物樣品，內標法測定樣品中藥物含量；SD大鼠尾靜脈給藥后測定設定時間點體內藥物濃度，用2.0版DAS軟件分析藥物體內動力學參數。結果經優化色譜條件，在0.05～25 μg/ml濃度范圍內，多烯紫杉醇線性關系良好。藥物體內過程符合雙室模型，主要藥物代謝動力學參數均值為：分布半衰期(T1/2α)為2.374 min；消除半衰期(T1/2β)為299.038 min；清除率(CL)為0.026 L/(min·mg)；表觀分布容積(V1)為0.219 L/kg。結論該研究為開發多烯紫杉醇脂質體提供體內動力學參考。

【關鍵詞】 多烯紫杉醇； 脂質體； 藥物代謝動力學； 大鼠

Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for in vivio docetaxel determination and do some research on pharmacokinetics of docetaxel liposomes in rats. MethodsHPLC method was optimized and samples were concentrated via ether extraction and determined with inner-standard method. Docetaxel liposome was given intravenously at 10 mg/kg to SD rats and blood sample was taken at chosen time interval and docetaxel conentration was determined， according to which pharmacokinetic parameters were gained via DAS 2.0.ResultsThe chosen mobile phase was methonol: water(45∶55) and wavelength was 233nm. Within the range of 0.05～25 μg/ml there was an excellent linear correlation and the regression equation of peak area ratio to concentration was Y =0.396 8 X +0.680 8 ( r = 0.999 4). The pharmacokinetic result revealed it a double-department model and the kinetic parameters were T1/2α=2.374min， T1/2β=299.038 min， CL=0.026 L/(min·mg)and Vl=0.219 L/kg.ConclusionThe study focused on kinetic properties of docetaxel liposome in order to provide theoratical support for clinical researches.

Key words：Docetael; Liposome; Pharmacokineties; Rats

紫杉醇和多烯紫杉醇在腫瘤預防、治療方面的作用，國內外許多研究已經證實［1］，但受其理化性質的制約，現上市的一些制劑不能有效發揮其臨床療效［2］。而脂質體靶向給藥技術研究日益成熟，使開發多烯紫杉醇新制劑成為可能。目前，紫杉醇脂質體制劑已上市，并取得了良好的療效，而國內多烯紫杉醇脂質體制劑研究未見報道。為此，本研究探討該藥物制劑大鼠體內代謝過程，以期為開發多烯紫杉醇脂質體提供體內動力學參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀（LC-20AT泵，SPD-20AC檢測器，AT-330柱溫箱，CBM-102）； TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)。

1.2 藥品與試劑 紫杉醇及多烯紫杉醇對照品（中國藥品與生物制品檢定所），多烯紫杉醇脂質體（四川大學華西藥學院提供），乙腈（色譜純）；甲醇（色譜純）；純凈水，其余試劑均為分析純。

1.3 動物 健康雄性SD大鼠5只，體重180～220g，四川大學華西動物中心提供。

2 方法與結果

2.1 色譜條件［3，4］色譜柱為Hypersil ODS C18（4.0mm×200 mm，5 μm）；流動相為乙腈∶水(45∶55，加磷酸調pH至4.5)，流速1 ml/min；柱溫35℃；檢測波長233 nm，內標為1 μg/ml紫杉醇甲醇溶液。

2.2

實驗方案 健康雄性SD大鼠5只，實驗前禁食12 h，自由飲水，給藥前編號并稱重，按10 mg/kg分別尾靜脈注射多烯紫杉醇脂質體制劑（1 mg/ml），給藥后5，10，15，30，60，120，240，480 min，斷尾取血0.5 ml，分離血漿，-20℃保存待測。

2.3

溶液配制

2.3.1 標準溶液精密稱取多烯紫杉醇標準品10.00 mg，置100 ml容量瓶中，甲醇溶解并定容，搖勻得 100 μg /ml的標準貯備液，4℃避光保存。精密吸取適量，用甲醇稀釋配成濃度分別為0.1，0.3，0.5，1.0，10.0，50.0 μg/ml的標準溶液。

轉貼于

2.3.2

內標溶液精密稱取紫杉醇對照品適量，甲醇溶解并稀釋，制成濃度為1 μg/ml的內標溶液。

2.4

血漿樣品處理 取大鼠血漿100 μl，加入醋酸緩沖液10 μl，充分混勻，加入內標液100 μl、甲醇100 μl、乙醚1 ml，旋渦混合5min，離心（5 000 r/min）10 min。精密吸取上清液0.8 ml，置于1 ml尖底離心管中，氮氣流揮干，殘渣用60 μl甲醇溶解，離心（10 000 r/min）10 min，待測。

2.5 色譜專屬性考察以“2.1”項下色譜條件測定標準溶液、內標溶液、空白血漿及血漿樣品，記錄色譜圖，結果見圖1。圖中基線平穩，峰形銳利，說明血漿中內源性成分對測定成分無干擾。

圖1 標準溶液、內標溶液、空白血漿及血漿樣品色譜圖（略）

2.6 標準曲線及線性關系 取大鼠空白血漿100 μl，共6份，分別加入標準溶液100 μl，制成含標準溶液分別為0.05，0.15，0.25，0.5，5，25 μg/ml的質控樣品，按“2.4” 項下操作，10 μl進樣測定，記錄色譜圖，以標準溶液濃度（μg/ml）為橫坐標，樣品峰面積（As）與內標峰面積（Ai）的比值（As/Ai）為縱坐標，進行線性回歸，回歸方程為：Y=0.396 8X+0.680 8（r=0.999 4），表明多烯紫杉醇在0.05～25 μg/ml濃度范圍內線性關系良好。

2.7

精密度考察取大鼠空白血漿100 μl，按“2.6”項，配制低、中、高3種濃度（0.3，1.0，10 μg/ml）的質控樣品，每一濃度5個樣品，連續測定3 d，并做隨行標準曲線，計算日內精密度（n=5）RSD分別為4.36%，3.78%，4.21%，日間精密度（n=15）RSD分別為5.48%，5.21%，4.72%，表明該方法符合生物樣品分析要求。

2.8

萃取回收率測定 取大鼠空白血漿100 μl，按“2.6”項，配制低、中、高3種濃度（0.3，1.0，10μg/ml）質控樣品，每一濃度5個樣品，按“2.4”項下，10 μl進樣測定，以萃取后多烯紫杉醇的峰面積與相應濃度標準溶液的峰面積之比（As/Ai），考察萃取回收率，3種濃度樣品萃取回收率分別為87.23%，91.46%，88.27%，表明采用乙醚做萃取溶劑，藥物回收率良好。

2.9 藥物動力學研究 取單劑量尾靜脈注射多烯紫杉醇脂質體制劑的血漿樣品，按“2.4”項下，10μl進樣測定，每天做隨行標準曲線，5只大鼠單劑量尾靜脈注射多烯紫杉醇脂質體制劑后，平均藥-時曲線（見圖2、表1），采用2.0版DAS軟件處理表1數據，進行模型擬合。結果見表2。

圖2 單劑量尾靜脈注射多烯紫杉醇脂質體后血藥濃度平均藥-時曲線（略）

表1 單劑量尾靜脈注射多烯紫杉醇脂質體后血藥濃度-時間數據（略）

表2 黃芩苷對SMMC7721細胞生長周期的影響（略）

3

討論

本研究首次以多烯紫杉醇脂質體為對象，探討其在大鼠體內的代謝過程。研究表明該方法線性關系良好，萃取回收率、方法回收率、日內精密度、日間精密度均較高，符合生物樣品分析要求［5］。

大鼠單劑量尾靜脈注射多烯紫杉醇脂質體后，采用2.0版DAS軟件分析不同時間點血藥濃度，表明血漿藥-時曲線符合雙指數線性動力學模型。

目前國內有關紫杉醇脂質體新制劑研究較多，而多烯紫杉醇脂質體研究尚未見報道，因此本研究探討大鼠體內行為，為促進多烯紫杉醇在臨床中的應用研究，提供一定的理論基礎及科學依據。

參考文獻

［1］ 張先林.抗腫瘤藥多烯紫杉醇制劑的應用研究近況［J］.藥學進展，2006，11:516.

［2］ 梁曉麗，夏路風，劉鳳琴.多烯紫杉醇的藥理與臨床應用［J］．首都醫藥，1999，6(5):28.

［3］ 吳 瓊，鄧意輝，王紹寧，等.RP-HPLC法測定多烯紫杉醇脂質體藥物含量［J］.中國藥劑雜志，2003，1(3):113.

篇9

同一種藥物,同一劑量,在一天中的不同時間服用,其療效和毒性可能相差幾倍甚至幾十倍。所以人們用藥必須考慮合理的給藥時間,這在醫學上又稱“時間藥理學”。時間藥理學是研究藥物和生物周期相互關系的一門學科。時間藥理學研究表明,機體內藥物濃度的動態變化和機體的反應性往往受到機體節律性的影響,只有在認識晝夜節律性的前提下來設計給藥方案,才能最大限度地提高療效,并使不良反應減少到最小。時間藥理學包括時間藥物動力學和時間藥效學,在臨床用藥中應用這些原理制定最佳給藥方案,以及進行藥理學研究具有重要意義。

1時間藥物動力學

藥物在體內的吸收、分布、代謝、排泄過程中也具有時辰節律性。通過時間藥物動力學研究,結果表明:有一些代謝酶的活性具有時間節律性,如嚙齒動物肝藥酶峰相大約在午夜2:00,而午后14:00活性最低。同時時間對藥物的排泄(尿、糞、汗和唾液等)也有顯著的晝夜節律,如酒在下午至晚上(14:00～20:00)在體內的代謝和血清廓清率、腎小球濾過率、尿排出量最高[1]。近年來對中藥的有效成分也進行了一些時間藥物動力學的研究工作,并取得了較好的成績。應用現代酶學實驗方法觀察了鼠肝微粒體藥物代謝酶的三項指標隨時間變化的情況,結果表明:細胞色素P450總量、NADPH細胞色素C還原酶和二甲基亞硝胺脫甲基酶三項指標均具有晝夜節律性變化。這一結果對探討中醫學擇時用藥原則有一定意義。擇時用藥即選擇藥物最佳作用時間,從而達到臨床效果的時間治療學方法[2]。在自然光照條件下研究青藤有效成分對大鼠的藥動學,于卯時(7:00)和酉時(19:00)給予相同劑量青藤堿,結果表明:卯時給藥血漿及腦中青藤堿濃度明顯高于酉時(P

2時間藥效學

藥物的作用及不良反應不僅取決于藥物的性質、給藥劑量和時間,也取決于靶器官、靶組織的敏感性及狀態。現已證明,許多靶組織、器官對藥物的敏感性具有晝夜節律依賴性[4],造成時間藥效學呈時間依賴性。在研究大承氣湯對小鼠瀉下作用的時間差異時,應用糞便色點測定法觀察正常小鼠排便的晝夜變化及擇時應用大承氣湯對小鼠瀉下作用的影響。結果表明:正常小鼠排便存在著明顯的晝夜節律,且在酉(18:00)、子(24:00)、卯(6:00)、午(12:00)四個時辰分別用大承氣湯(22 g/kg)給小鼠灌胃,引起小鼠瀉下的作用以卯時最強,與其他各時辰給藥組比較差異有統計學意義[5]。用大柴胡湯對膽囊的利膽作用進行了時間藥效學的研究,對20例胸脅苦滿患者于午、酉、卯、亥、巳時口服小柴胡湯后,膽囊的收縮率、擴張率表明:利膽作用在子時與午時,酉時與卯時,亥時與巳時的差異有統計學意義(P

根據時間藥理學原則用藥可進一步減少用藥的盲目性,使藥物投藥時間與人體生理、病理節律相適應,提高臨床治療效果。因此掌握藥物時間節律對指導安全合理用藥有重要意義。而且它的發展必將推動我們重新審識藥物的應用,真正把藥物的經驗應用轉變成科學應用。

參考文獻:

[1]宋建國.中藥時辰藥理學的發展[J].藥學學報,1991,26(6):401.

[2]黃林清.藥物的時辰藥理效應與合理用藥[J].中國藥學雜志,1995,30(增刊):131.

[3]劉啟德,梁美蓉,歐衛平,等.青藤堿時辰藥代動力學研究[J].中藥新藥與臨床藥理,1995,6(1):23-26.

[4]何紹雄.時間藥理學與時間治療學[M].天津:天津科學技術出版社,1994:8.

[5]羅衛芳.大承氣湯的時間藥理學[J].中藥藥理與臨床,1995,11(3):7.

篇10

[關鍵詞] 燈盞細辛注射液；綠原酸；咖啡酸；大鼠；藥代動力學；LC-MS/MS

[稿件編號] 2013-03-13

[基金項目] 國家“重大新藥創制”科技重大專項（2012ZX09303009-002）；江蘇省中醫藥領軍人才項目（LJ200906）；江蘇高校優勢學科建設工程項目（2010）

[通信作者] *居文政，Tel：（025）86617141-60310，E-mail：wzhju333@163、com 燈盞細辛注射液為燈盞細辛的干燥全草經提取制成的中藥注射液，收載于2010年版《中國藥典》一部[1]，具有活血化瘀，通絡止痛的功效，是目前臨床上使用較為廣泛的治療心腦血管疾病的傳統中藥之一。以往研究表明燈盞細辛的有效成分主要為黃酮類成分――燈盞乙素。通過深入研究，發現酚酸類成分也具有擴張血管和抑制血栓形成的藥理活性[2]。中藥酚酸類成分包括咖啡酸、綠原酸等，因其顯著的抗炎、抗氧化、抗凝血等多種生物活性而被國內外廣泛研究[3-5]。

在燈盞細辛注射液中，已證實黃酮類與酚酸類協同發揮藥效作用[6-7]，而燈盞乙素在體內代謝過程已有較多文獻報道[8-10]，對酚酸類成分的體內代謝過程研究卻比較少。因此深入研究酚酸類成分對明確燈盞細辛注射液的藥動藥效至關重要。本文旨在建立高效、靈敏的LC-MS/MS用于測定大鼠尾靜脈注射燈盞細辛注射液后綠原酸和咖啡酸的血藥濃度，并用于燈盞細辛注射液在大鼠體內的藥代動力學研究。

1 材料

1、1 試藥 燈盞細辛注射液（云南生物谷燈盞花藥業有限公司，批號20120551，規格10 mL/支）；對照品咖啡酸（批號110885-200102）、綠原酸（批號110753-200413）和替硝唑（批號100336-200402）均購于中國食品藥品檢定研究院。水為超純水，甲酸、甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

1、2 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀；API 4000 LC-MS/MS三重四級桿質譜儀，配有電噴霧化離子源（ESI），色譜工作站：Analyst 1、4、2；AE240電子天平（上海梅特勒-托利多有限公司）；MICRO-17R冷凍離心機（美國Thermo公司）；WH-2微型旋渦混合儀（上海滬西分析儀器廠）；Drict-Q5超純水機（法國Millipore公司）。

1、3 動物 SD大鼠，雌雄各半，6只，體重250～270 g，由南京中醫藥大學實驗動物中心提供，合格證號SCXK（浙）2008-0033。

2 方法

2、1 色譜及質譜檢測條件 Agilent ZOBAX SB C18色譜柱（4、6 mm×150 mm， 5 μm）；流動相為甲醇-2 mmol?L-1醋酸銨水溶液（60∶40）；流速為500 μL?min-1；柱溫30 ℃。離子源ESI；離子化模式負離子；定量模式為多反應檢測模式（MRM）；離子源電壓4 000 V；離子源溫度400 ℃；綠原酸的DP，EP，CE，CXP-56 ，-11，-30，-4 V；咖啡酸的DP，EP，CE及CXP分別為-50，-10，-25，-5 V；替硝唑的DP，EP，CE，CXP分別為-25，-10，-15，-8 V；檢測對象綠原酸m/z 353、1/191、0；咖啡酸m/z 178、9/134、9；替硝唑m/z 246、0/125、8。

2、2 對照品溶液的配制 精密稱取適量綠原酸對照品，用甲醇配制成3、84 mg?L-1的儲備液；精密吸取適量，用甲醇分別稀釋成3 840，1 920，960，480，240，120，30 μg?L-1的系列標準溶液。精密稱取適量咖啡酸對照品，用甲醇配制成1、28 mg?L-1的儲備液；精密吸取適量，用甲醇分別稀釋成1 280，640，320，160，80，40，20 μg?L-1的系列標準溶液。以上溶液于4 ℃保存，備用。

2、3 內標物溶液的配制 精密稱取適量替硝唑對照品，用甲醇溶解并稀釋成1、2 mg?L-1，于4 ℃保存，備用。

2、4 血漿樣品處理 取血漿樣品100 μL，加入1、2 mg?L-1替硝唑溶液（內標）20 μL，1 mol?L-1鹽酸溶液50 μL，渦旋30 s，再加入乙酸乙酯800 μL，渦旋振搖3 min，12 000 r?min-1離心5 min。取上清液750 μL，40 ℃氮氣流吹干，加100 μL 50%甲醇復溶，12 000 r?min-1離心5 min，取上清液5 μL進樣分析。

2、5 給藥劑量的確定 燈盞細辛注射液靜脈注射臨床給藥劑量為20～40 mL?d-1，每日1～2次，人的平均體重按60 kg計算，則其臨床給藥劑量為0、33～1、33 mL?kg-1。按大鼠每千克體重的臨床等效量是人的6倍計算，則燈盞細辛注射液大鼠尾靜脈注射給藥劑量為1、98～7、98 mL?kg-1，經預實驗，確定大鼠給藥劑量為4 mL?kg-1。經測定，該注射液中綠原酸質量濃度為170、3 mg?L-1，咖啡酸質量濃度為135、1 mg?L-1

2、6 藥代動力學研究 SD大鼠6只，給藥前12 h禁食不禁水，分別尾靜脈注射燈盞細辛注射液4 mL?kg-1。于給藥前及給藥后5，10，20，30，45 min，1，1、5，2，3，4，6，8，10，12 h經眼眶后靜脈叢取血約0、3 mL，置于肝素化試管中，以4 000 r?min-1離心10 min，取上層血漿于-40 ℃保存待測。

2、7 數據處理 大鼠靜脈給藥后測得的血藥濃度（C）-時間（t）數據應用DAS 1、0軟件進行處理。選擇適宜的數學模型擬合，計算藥代動力學參數。

3 結果

3、1 專屬性實驗 在本實驗所采用的LC-MS/MS條件下，咖啡酸、綠原酸和替硝唑的保留時間分別為2、6，2、5，3、4 min。咖啡酸、綠原酸和內標互不干擾，峰形良好，無雜峰干擾，基線平穩，見圖1。

3、2 標準曲線制備 取空白血漿100 μL，分別加入綠原酸、咖啡酸對照品系列標準溶液各10 μL，配制成相當于綠原酸及咖啡酸血漿質量濃度分別為3，12，24，48，96，192，384 μg?L-1和2，4，8，16，32，64，128 μg?L-1的血漿樣品。按2、4項下操作，取5 μL進樣分析。以各成分峰面積與內標峰面積的比值Y對血漿質量濃度X進行線性回歸運算，求得的回歸方程即為標準曲線。綠原酸回歸方程：Y=0、435 7X-0、010 7（r = 0、998 7），定量下限為3 μg?L-1。咖啡酸回歸方程Y=1、109 8X-0、058 7（r = 0、998 1），定量下限為2 μg?L-1。

3、3 準確度和精密度 取空白血漿100 μL，按上述2、4項下制備綠原酸和咖啡酸低、中、高3個質量濃度（綠原酸血漿質量濃度為3，48，192 μg?L-1；咖啡酸血漿質量濃度為2，16，64 μg?L-1）的質量控制（QC）樣品，每個濃度平行做5份，連續測定3 d。根據隨行標準曲線求得實測濃度。實測濃度的RSD即為精密度，實測濃度和加入濃度的比值即為準確度。結果表明，綠原酸日內、日間準確度分別為97、7%～101、3%（RSD≤8、5%，n=5）和96、1%～103、8%（RSD≤9、4%，n=15）；咖啡酸日內、日間準確度分別為92、3%～106、7%（RSD≤8、8%，n=5）和98、2%～108、1%（RSD≤9、8%，n=15），實驗結果符合生物樣品分析方法的要求。

3、4 提取回收率 取空白血漿100 μL，配制3、3項下低、中、高3個不同濃度含藥血漿質控樣品，按上述2、4項下操作后進樣分析，以血漿中綠原酸、咖啡酸的峰面積與相應質量濃度對照品溶液中綠原酸、咖啡酸峰面積的比值計算出上述3種質量濃度的提取回收率，每個濃度平行做5份。經LC-MS/MS測定后，低、中、稿3種濃度下的提取回收率分別為綠原酸（84、3±5、5）%，（89、1±3、3）%，（92、4±6、3）%；咖啡酸（82、1±1、9）%，（85、2±6、0）%，（88、2±4、6）%。采用同樣的方法考察了內標的提取回收率為（90、1±2、4）%。

A、 空白血漿樣品；B、 混合對照品；C、 血漿樣品；1、 咖啡酸；2、綠原酸；3、替硝唑。

圖1 樣品的液-質聯用離子流圖

Fig、1 Combined LC-MS/MS ion chromatograms of samples

3、5 穩定性考察 取空白血漿100 μL，配制3、3項下低、中、高3個不同濃度含藥血漿質控樣品，按上述2、4項下操作方法處理樣品。考察含藥血漿樣品處理好后溶液中分析物在室溫放置24 h、含藥血漿樣品-20 ℃反復凍融3次、含藥血漿樣品-40 ℃長期冷凍28 d的穩定性，每個濃度平行3份。結果表明，經處理后的血漿樣品室溫放置24 h后綠原酸及咖啡酸血藥濃度的RSD均小于9、82%，-40 ℃保存28 d血藥濃度的RSD 均小于8、65%，經過3個凍融周期后2個分析物的血藥濃度RSD均小于9、57%。

3、6 介質效應考察 取離心管數只，分別精密加入低、中、高的3個濃度綠原酸對照品溶液（30，480，1 920 μg?L-1）及咖啡酸對照品溶液（20，160，640 μg?L-1）各10 μL，再分別加入內標替硝唑溶液20 μL，水60 μL，旋渦1 min，于12 000 r?min-1離心5 min，進行LC-MS/MS分析，進樣量5 μL，記錄峰面積A1。除不加內標外，另按“血漿樣品處理”項下操作提取空白血漿數管，揮干后同上操作，記錄峰面積A2。A1和A2的比值（A2/A1×100%）即為介質效應ME（%）。綠原酸及咖啡酸血漿樣品低、中、高3種濃度LC-MS/MS介質效應（n=3）分別為83、14%，86、32%，83、90%和86、79%，92、15%，88、24%，內標替硝唑介質效應（n=9）為82、53%。

3、7 大鼠體內藥代動力學 大鼠單劑量（4 mL?kg-1）尾靜脈注射燈盞細辛注射液后綠原酸和咖啡酸的血藥濃度-時間曲線見圖 2。所測數據使用DAS 1、0軟件進行處理，主要藥動學參數見表 1。由分析結果可知，綠原酸和咖啡酸在大鼠體內的藥動學符合二室開放模型。

圖2 大鼠體內綠原酸和咖啡酸的平均血藥濃度-時間曲線（n=6）

Fig、2 Mean plasma concentration-time curves for chlorogenic acid and caffeic acid in rat plasma（n=6）

4 討論

目前文獻報道的中藥復方制劑中綠原酸和咖啡酸的血藥濃度測定方法大多為HPLC[11-13]，且目前燈盞細辛注射液在大鼠體內的藥代動力學研究主要測定燈盞乙素和總咖啡酸酯[14-15]，對于注射液中單

個酚酸化合物的藥代動力學研究較少。

本實驗采用LC-MS/MS測定血漿中綠原酸和咖啡酸的濃度，提高了靈敏度。另外，本文對血樣中酚酸類成分的提取方法進行了考察：甲醇沉淀、乙腈沉淀、乙酸乙酯提取、乙酸乙酯/乙醚（3∶1）提取，每個提取或沉淀條件考察了不同的酸化條件（加10，20，30，50，100 μL不同量的1 mol?L-1鹽酸），結果發現50 μL 1mol?L-1鹽酸酸化后乙酸乙酯的提取回收率高，無內源性物質干擾，重現性好。

蘇美英等[16]靜脈給予大鼠咖啡酸單體50 mg?kg-1后，咖啡酸單體在大鼠體內的半衰期（t1/2）為（0、45±0、05） h，體內駐留時間（MRT）為（0、24±0、06） h。本實驗中大鼠給予燈盞細辛注射液的劑量為4 mL?kg-1，若以咖啡酸含量計，咖啡酸的靜脈給藥劑量為540、4 μg?kg-1，而此時咖啡酸在大鼠體內的t1/2為（130、91±38、77） min，MRT為（198、74±18、45） min。本實驗中咖啡酸的給藥劑量遠低于50 mg?kg-1，但是注射液中咖啡酸在大鼠體內的t1/2和MRT卻明顯高于單獨給予咖啡酸單體。由此推測，燈盞細辛注射液中的某些成分與咖啡酸發生相互作用，延長了咖啡酸在大鼠體內的時間，但發生該現象的原因還不清楚，有待進一步研究。

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Study on determination of caffeic acid， chlorogenic acid in rat plasma and

their pharmacokinetics with LC-MS/MS

DAI Guo-liang1， MA Shi-tang1 ， LIU Shi-jia2 ， CHENG Xiao-gui1 ， ZANG Yu-xin1 ， JU Wen-zheng2* ， TAN Heng-shan3

（1、 College of Pharmacy of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine， Nanjing 210029， China；

2、 Department of Clinical Pharmacology， Affiliated Hospital of Nanjing University of

Traditional Chinese Medicine， Nanjing 210029， China；

3、 Department of Clinical Pharmacology， General Hospital of Nanjing Military Area Command， Nanjing 210002， China）

[Abstract] To establish a LC-MS/MS method to determine caffeic acid， chlorogenic acid in rat plasma and study their pharmacokinetics in rats、 Six Sprague-Dawley rats were intravenously injected with 4 mL?kg-1 of Dengzhanxixin injection， respectively、 Their drug plasma concentration was determined by LC-MS/MS， with tinidazole as an internal standard、 The pharmacokinetic parameters were calculated by DAS 1、0、 The linear concentration ranges of caffeic acid， and chlorogenic acid were 2-128 μg?L-1 （r=0、998 1） and 3-384 μg?L-1 （r=0、998 7）， respectively、 The methodological test showed conformance to the requirements、 The intraday and inter-day variable coefficients were both less than 10、0%， indicating that both of legitimate precise and accuracy were in conformity with the requirements of biological sample analysis、For caffeic acid， the pharmacokinetic parameter t1/2β， AUC0-t， and CL were （130、91±38、77） min， （4、89±0、96） mg?min?L-1 and （0、12±0、02） L?min-1?kg-1， respectively、 For chlorogenic acid， the pharmacokinetic parameter t1/2β， AUC0-t and CL were （49、38±8、85） min， （9、54±0、95） mg?min?L-1 and （0、09±0、003） L?min-1?kg-1， respectively、 The LC-MS/MS analysis method established in this study was proved to be so accurate and sensitive that it can be applied to the pharmacokinetic study of caffeic acid and chlorogenic acid、