導語：如何才能寫好一篇老頑童爺爺，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

爺爺是個老頑童，長得又高又大，看上去像個“粗人”，但是做起事來卻是細致入微，有一丁點兒的差錯都不行。在我的心目中爺爺是那么可親、可敬而又可愛。

記得去年國慶長假，我和爺爺、奶奶去旅游。回來的路上，我突然得了感冒，上吐下瀉，當時吐得渾身盡是贓物。爺爺趕忙拿出衛生紙和衣服，小心翼翼的幫我把嘔吐的贓物一點一點地擦掉，然后又給我換上干凈的衣服，拿來水讓我一遍一遍的漱口，嘴里還不停地說：“小乖乖，別著急，一會兒就好！”緊接著讓我躺在他的腿上，輕輕地拍著我讓我靜靜地入睡。一路上，爺爺總是用他的大手握著我熱乎乎的小手。對我真是百般的呵護！回到家中，爺爺的老腿病又犯了，腳上還磨起了大血泡，他渾然不顧，拿起體溫表就給我量體溫，爺爺這樣無微不至的關懷，我不止一次的熱淚盈眶！

爺爺平時很幽默，很滑稽，也很天真，奶奶總管他叫老頑童。我也覺得爺爺這個雅號是再合適不過了。

記得有一次，我和爺爺一起看電視，正好是上演《西游記》。爺爺見屏幕上出現了孫悟空就從沙發上跳起來，抄起拖把桿，一邊揮舞，一邊大喊：“看俺老孫來也……”我和奶奶笑得前仰后合，我仔細一看奶奶的眼淚都笑出來了。

篇2

我的爺爺今年七十多歲，中等個子，白白的頭發，最有特色的是他那又肥又大的鼻子和他那雙細長的眼睛。爺爺待人和善，常和我們說笑，因此，我們幾個孫子和他在一起就像朋友一樣隨便，光這一點我就很喜歡他了。

爺爺吃飯特別慢。餐桌上，我們都吃完半碗了，爺爺的飯還沒動，我催他時，他卻悠閑地喝著酒，故意瞇著眼睛向我做鬼臉，并對一旁的奶奶努努嘴，意思是別讓奶奶知道。一杯酒喝完了，他對奶奶嚷道：“我的杯子里怎么沒酒呀？快給我倒一杯吧！”奶奶不滿意爺爺光喝酒，不吃飯，于是不但沒給他倒酒，反而給他換了一碗熱飯。這時的爺爺像小孩似的嘟著嘴，不說話，嘴上可以掛一個油瓶了！我呢，則在一旁擠眉弄眼，笑話怕奶奶的爺爺。

平日里，如果我和哥哥們有什么好吃的，爺爺見了，總會故意擺出一副可憐兮兮的模樣，張著嘴伸出手討好地說：“給我嘗嘗吧？”有時我們故意逗爺爺，他就會纏著我們，我們走到哪兒，他就跟到哪兒，不分給他一點，他決不“撤兵”。給他了，他卻舍不得吃，總會想辦法加倍補償給我們。

篇3

內容摘要:競業禁止作為保護用人單位商業秘密的重要手段為越來越多的用人單位所采用。但這一制度在保護用人單位利益的同時,也在一定程度上限制了勞動者的擇業自由權乃至生存權。《中華人民共和國勞動合同法》(以下簡稱《勞動合同法》)于2008年1月1日實施,該法首次在法律中規定了競業禁止的內容,但這些條款過于原則,不能滿足實際的需要,由此產生了大量糾紛。基于此,本文探討了競業禁止義務主體的規定,以及經濟補償問題,以期更全面、細致的構建競業禁止制度,從而既保護用人單位的利益,也保護勞動者的合法權益。

關鍵詞:勞動合同法 競業禁止 主體 經濟補償 期限

競業禁止又稱為競業限制和競業避止,最早規定在民法的人制度中,作為一種法律制度,旨在用法律防止人對被人利益的侵害。競業禁止從概念上可分為廣義的競業禁止和狹義的競業禁止。廣義的競業禁止是指對特定的營業具有競爭性之特定行為加以禁止,而狹義的競業禁止,則僅指對于特定營業具有特定關系的特定人之特定行為加以禁止(劉清波,1996)。我國對競業禁止的規定主要散見于《中華人民共和國公司法》(以下簡稱《公司法》)、《中華人民共和國合伙企業法》、《中華人民共和國個人獨資企業法》、《勞動合同法》、部門規章、地方性法規及地方政府規章中。從我國現行立法上看,競業禁止按其效力來源可分為兩類:一是法定競業禁止,其義務的產生是由法律明確規定的,其適用主體主要是董事、高級管理人員以及合伙企業的合伙人,其與公司或合伙企業之間建立的本質仍是一種勞動法律關系。二是約定的競業禁止,是通過勞動者與用人單位之間簽訂的競業禁止協議來實現的。由此可以認為競業禁止制度主要存在于勞動法律關系中,是調整用人單位與勞動者之間利益關系的產物(黎建飛、丁廣宇,2006)。競業禁止一方面可以遏制無序競爭,保護雇主的商業秘密,另一方面也限制了勞動者的自由擇業權,甚至影響其生存權。

《勞動合同法》中競業禁止義務主體的規定

《勞動合同法》和《公司法》分別對競業禁止義務主體作了規定。《勞動合同法》第24條規定;“競業限制人員限于用人單位的高級管理人員、高級技術人員和其他負有保密義務的人員”。《公司法》第149條(五)規定:“董事、高級管理人員未經股東會或者股東大會同意,不得自營或為他人經營與所任職公司同類業務”。這里需要指出,“董事、高級管理人員”根據《公司法》第217條(一)的規定,是指公司的經理、副經理、財務負責人,上市公司董事會秘書和公司章程規定的其他人員。就競業禁止的人員限制來看,《勞動合同法》中規定的競業禁止義務主體較《公司法》中的競業禁止義務主體的范圍廣,加上了“其他負有保密義務的人員”。也就是說,用人單位除了可與本單位的“高級管理人員”“高級技術人員”簽訂競業禁止協議外,還可以與“其他負有保密義務的人員”簽訂競業禁止協議,而《勞動合同法》并未對“其他負有保密義務的人員”作出界定,這樣在實踐中容易導致競業禁止協議的“濫用”。

以競業禁止的方式保護商業秘密應當以了解、掌握商業秘密為前提條件,一些企業不論員工從事何種崗位、也不管員工是何種文化程度以及是否接觸到商業秘密,都一律簽訂競業禁止協議。更有甚者許多企業的競業限制協議都是以“合同范本”形式出現,企業上至老總下至普通員工全都簽訂同一模式的合同。由于競業禁止協議與一般的民事合同存在著實質的不同,普通員工與用人單位在簽訂競業禁止協議時處于弱勢地位,“訂立的合同很少是協商一致的產物,而是由對方一手操縱的”(姚輝,1999)。競業禁止在客觀上限制了勞動者的擇業權,使勞動者不能在自己擅長的行業工作,進而影響了勞動者的生存權。盡管用人單位為此支付了一定的對價,但該對價并不能完全彌補勞動者因競業限制而遭受的損失,因此,《勞動合同法》應明確規定競業限制的義務主體應是高層管理人員、高級技術人員以及可能接觸到商業秘密的人員,從而避免競業禁止協議被“濫用”。保守用人單位的商業秘密是每一個員工基于誠信原則而應承擔的義務,對于雖在用人單位工作,但不掌握商業秘密的勞動者,即使其利用自身的知識為新的用人單位工作,增強了新用人單位在市場上的競爭力,也不應將其列入競業禁止的義務主體。

在國外,承擔競業禁止義務的主體一般限于由于業務關系或者其他關系有機會接觸商業秘密的人員,否則競業禁止協議無效。如瑞士《債務法》第340條規定:競業禁止僅對于勞務關系中知悉雇傭人之客戶圈、技術秘密或交易秘密之受雇人,有拘束力。

《勞動合同法》中競業禁止的經濟補償問題

《勞動合同法》第23條規定“用人單位與勞動者可以在勞動合同中約定保守用人單位的商業秘密和與知識產權相關的保密事項。對負有保密義務的勞動者,用人單位可以在勞動合同或者保密協議中與勞動者約定競業限制條款,并約定在解除或者終止勞動合同后,在競業限制期限內按月給予勞動者經濟補償。勞動者違反競業限制約定的,應當按照約定向用人單位支付違約金。”從該條內容看,這導致實踐中勞動者的權益得不到保護,司法機關面對由此而發生的勞動爭議沒有法律依據,導致不同地區對相同的爭議采取不同的判決,加大了執法的難度。

(一)用人單位未支付競業禁止經濟補償競業限制是否有效

根據《勞動合同法》第23條的規定,用人單位可以與勞動者在勞動合同或者保密協議中約定競業禁止條款,并約定在解除或者終止勞動合同后,在競業禁止期限內按月給予勞動者經濟補償。但是,該條款既沒有對用人單位給予經濟補償金的數額作出規定,也沒規定如只有競業禁止條款而沒有約定給予勞動者經濟補償金或約定了經濟補償但沒有按月支付給勞動者,競業禁止條款是否有效?實踐中有兩種觀點:其一,補償金是競業禁止協議生效的必要條件。該觀點認為支付補償金是單位限制勞動者就業權的對價,也是競業禁止合同生效的要件(徐芳寧,2006)。其二,認為補償金并非是競業禁止條款有效性的必要條件,未按約定支付經濟補償金只能導致用人單位的違約,勞動者可請求原用人單位支付競業限制的補償金(張心全,2007)。由于《勞動合同法》沒有對此明確的規定,導致各地在司法實踐中執法不一,如上海地區在司法實踐中根據本地規章《上海市勞動合同條例》若干問題的通知(二),對于用人單位未支付離職后的競業限制補償金的,只要雇傭雙方的競業限制約定是雙方真實意思表示,且不違反法律、行政法規定的強制規定,符合一般合同的生效條件即認定競業禁止協議生效。至于用人單位不按約定支付經濟補償,則只能將其歸入違約行為,不能構成對競業限制條款效力的否定因素。在用人單位違約的情形下,勞動者可以利用仲裁、訴訟等途徑保護自己的權益,請求用人單位支付經濟補償金。沒有法律層面的統一規定,造成不同地區相同案件不同的判決,導致執法的混亂。因此,《勞動合同法》應對此問題作出明確規定。

筆者認為《勞動合同法》應采用第一種觀點。因為用人單位與勞動者在實力對比上,用人單位是強勢,勞動者是弱勢,如果用人單位與勞動者簽訂了競業禁止協議,又沒按法律規定和協議約定給予勞動者競業限制補償金,如認定競業禁止有效,勞動者的擇業權在競業禁止期限內受到限制,否則要承擔違約責任,用人單位又不給經濟補償,勞動者通過仲裁和訴訟索要經濟補償費時費力,造成生活困難,不利于對弱勢群體的保護,也有悖于《勞動合同法》的社會法屬性。這點可以借鑒德國的《商法》關于競業禁止的規定:雇主與受雇人之間必須有書面協議,雇主須負補償義務,否則該項競業禁止條款無效。

(二)《勞動合同法》應明確競業禁止經濟補償底線

2006年3月20日公布的《勞動合同法》(草案)征求意見稿第16條規定:用人單位在勞動合同終止或者解除時,應向勞動者支付數額不少于勞動者在該用人單位年工資收入的經濟補償。但在2008年1月1日開始實施的《勞動合同法》將此條刪掉,立法者可能出于兩種考慮,其一,強制規定補償金的數額有悖于該法第3條“訂立勞動合同,應當遵循合法、公平、平等自愿、協商一致、誠實信用的原則”。其二,是來自用人單位反對的呼聲過于強烈。但是,去掉了補償金數額的條款,導致現實生活中,用人單位在簽訂勞動合同中處于優勢地位,利用勞動者迫切找到工作的心理,在競業禁止條款上損害勞動者的利益。例如李某是某公司的員工,在與用人單位簽訂勞動合同時被要求簽訂競業禁止協議,其中約定李某在勞動合同終止后2年內不能到與本單位生產或經營同類產品、從事同類業務的有競爭關系的其他用人單位工作,或者自己開業生產或者經營同類產品、從事同類業務。并約定競業限制的經濟補償每月200元,勞動合同終止后的兩年內勞動者需每月在用人單位發工資日去用人單位領取。這樣的條款對勞動者不公平,因為勞動者不能發揮自己的特長,喪失了擇業自由權,影響了其經濟收入,而區區200元根本就不足以補償其因競業禁止而遭受的經濟損失。

為了保護勞動者的利益,《勞動合同法》應當對競業禁止經濟補償金的底線作出規定。因為《勞動合同法》屬于社會法,兼有公法和私法的屬性,對勞動者的傾斜保護,體現了《勞動合同法》的社會法屬性。勞動合同也不同于一般的民商事合同,雖然勞動關系的當事人即用人單位與勞動者之間是平等主體的勞動合同關系,兩者具有平等的法律人格,但這種平等是相對的。從總體上看,勞動者和用人單位在經濟利益上不對等,這種不對等導致勞動者在簽訂勞動合同時不可避免的接受一些損害勞動者利益的條款。因此,《勞動合同法》應該對競業禁止經濟補償作出一個最低限額的規定,以保護在勞動關系中處于弱勢一方勞動者的權益。這點可以借鑒德國商法第74條:離職后競業限制期間,原企業或雇主應支付補償金,競業限制期間每一年之補償金,其數額不得低于勞工離職時與勞動合同所能取得報酬的一半,當事人就每一年競業限制期間所約定數額低于5184馬克者,其離職競業限制協議無效。因此我國《勞動合同法》也應結合我國國情,對離職后競業限制的經濟補償底線作出規定以保護勞動者的利益。同時,這樣的規定在現實中還能起到遏制競業禁止協議使用的作用。不鼓勵企業大量使用競業禁止協議,應成為《勞動合同法》關于競業禁止規定立法的主導思想。

《勞動合同法》對競業禁止期限應分檔規定

《勞動合同法》第24條(二)規定:“在解除或者終止勞動合同后,前款規定的人員到與本單位生產或者經營同類產品、從事同類業務的有競爭關系的其他用人單位,或者自己開業生產或者經營同類產品、從事同類業務的競業限制期限,不得超過二年”。《勞動合同法》對競業禁止期限規定了上限,也就是用人單位與勞動者約定競業禁止的期限自勞動者離職后最長二年的時間。該法對不同行業競業禁止的期限統一規定了上限,這樣的規定難以滿足實際需要。由于各個行業不同,競業限制不應有一刀切的統一標準。有的企業研發一項新技術或新產品需要投入大量的人力和物力,兩年的時間可能還沒完全投入市場,也還沒有獲得可觀的收益,但是當初參與研發的員工離職后兩年就不受競業限制的約束,這無疑加大了原企業投資的風險,對原企業不公平,從而也挫傷了企業研發新技術和新產品的積極性,最終不利于經濟的發展和社會的進步。

意大利《民法典》第2125條規定,經理級人員離職后競業禁止協議的時間限制為5年,其他人員的限制不得超過3年;在約定期限超過上述限制規定的情況下,應當相應的削減。結合我國國情,筆者認為競業限制的期限長短,應依據商業秘密在市場競爭中具有的競爭優勢持續的時間長短來決定,而不應規定統一的上限。《勞動合同法》可以借鑒國外的立法,結合我國國情對競業禁止期限分檔作出規定。對高新技術的商業秘密競業禁止期限的上限規定為1年,對于一般的商業秘密維持現在的上限規定2年,而對于像掌握可口可樂秘方的員工競業禁止的期限應無上限規定。

參考文獻:

1.黎建飛,丁廣宇.競業禁止義務規范研究[J].法學雜志,2006(4)

篇4

通訊作者：胡權

【摘要】 目的 探討麝香保心丸與銀杏葉片治療老年冠心病心絞痛的療效。方法 將120例老年冠心病心絞痛患者隨機分為兩組,麝香保心丸組60例,銀杏葉片組60例。結果 兩藥均可改善冠心病心絞痛癥狀，總有效率分別為91.7%和90.0%，無明顯差異；血脂降低總有效率分別為88.3%和91.7%，兩組亦無顯著差異。結論 兩藥治療老年冠心病心絞痛療效相當。

【關鍵詞】 麝香保心丸； 銀杏葉片； 老年冠心病； 心絞痛

冠心病心絞痛是由于冠狀動脈粥樣硬化引起管腔狹窄或由于冠狀動脈痙攣導致心肌供血不足所致，臨床表現為發作性胸骨后或心前區疼痛，好發于中老年人，易發展為急性心肌梗死或猝死。因此，對老年冠心病心絞痛的防治要予以高度重視。麝香保心丸和銀杏葉片是目前治療冠心病心絞痛常用中成藥物，為比較兩種藥物的確切療效，筆者選擇了120例老年冠心病心絞痛患者，隨機分為兩組，進行臨床療效對比，現將觀察結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 120例冠心病心絞痛老年患者均為筆者所在醫院2007年1月～2009年5月住院或門診患者。所有病例均參照WHO制定的“缺血性心臟病的命名和診斷標準”。麝香保心丸治療組與銀杏葉片治療組各為60例。麝香保心丸治療組中男38例，女22例，年齡60.5～85.7歲，平均64.8歲，病程0.3～13年，平均4.1年；銀杏葉片治療組中男36例，女24例，年齡61～84.6歲，平均71.2歲，病程0.2～16年，平均3.9年。兩組病例資料無明顯差異（P＞0.05），具有可比性。

1.2 治療方法 兩組在治療前均進行心電圖、動態心電圖、血糖、血脂及肝腎功能檢測，排除急性心肌梗死、重度神經官能癥、更年期綜合征、心功能不全及休克等原因所致心電圖缺血性改變。

麝香保心丸治療組予麝香保心丸（上海和黃藥業），每次2片，每日3次，4周為一療程。銀杏葉片治療組予銀杏葉片（江蘇揚子江藥業），每次2片，每日3次，4周為一療程。

1.3 觀察指標 主要觀察心絞痛發作次數、疼痛持續時間、誘發因素、硝酸甘油的用量、藥物起效及持續時間、心電圖變化和血脂變化等。

1.4 療效標準 參照1979年全國中西醫結合治療冠心病心絞痛及心律失常座談會《冠心病心絞痛及心電圖療效評定標準》。顯效:癥狀消失或顯著減輕；有效:疼痛發作次數，程度及持續時間明顯減輕；無效:癥狀基本與治療前相同；加重:癥狀與治療前相比加重。心電圖：顯效:心電圖恢復正常或大致正常；有效:ST段回升≥0.05 mv，但未達正常水平，T波改善，由平坦轉為直立；無效:治療前后的心電圖無明顯改善；加重：治療后ST段加深≥0.05 mv，T波倒置加深，由直立變平坦或倒置。血脂水平的觀察按1988年衛生部調脂藥物標準制定療效。顯效：TC下降≥20%，TG下降≥40%；有效：TC下降≥10%～20%，TG下降≥20%；無效：未達到有效標準；加重：TC、TG較治療前升高。

2 結果

2.1 心絞痛療效 麝香保心丸治療組心絞痛療效總有效率為91.7%，銀杏葉片治療組總有效率為90%，兩組比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

2.2 心電圖療效 麝香保心丸治療組心電圖療效總有效率為73.3%，銀杏葉片治療組總有效率為70%，兩組比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

2.3 血脂療效 麝香保心丸治療組血脂療效總有效率為88.3%，銀杏葉片治療組總有效率為91.7%，兩組比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表3。

表1 兩組心絞痛療效比較（n,%）

表2 兩組心電圖療效比較（n,%）

表3 兩組血脂療效比較（n,%）

3 討論

麝香保心丸由麝香、蘇合香、人參提取物、人工牛黃、肉桂、蟾酥、冰片等七味中藥組成，具有芳香溫通、益氣強心的功效。現代中藥藥理學研究已證實，該藥能夠快速擴張冠狀動脈，保護缺血心肌，預防心室重構［1］。近年來研究發現，麝香保心丸具有促進治療性血管新生的作用，是第一個有治療性血管新生作用的中成藥。研究還發現，麝香保心丸不但有增強心肌收縮力，擴張冠狀動脈，改善心肌供血和心肌代謝作用，還具有降低血液黏稠度和改善異常血液流變學指標等作用［2］。故在臨床上用于治療冠心病，尤其是心絞痛有顯著療效。

銀杏葉片主要成分為銀杏萜類內酯及黃酮醇苷類，藥理研究證明，銀杏葉及有效成分有廣泛的藥理作用，用于治療冠心病時能有效擴張血管，改善微循環，改善心肌缺血，防治心肌缺血和再灌注損傷，能有效降低血脂，減少脂類在血管壁的附著，對抗脂質過氧化物而防治動脈粥樣硬化［3］。近年來銀杏葉片在臨床廣泛用于冠心病心絞痛的防治。

本研究采用隨機雙盲對比法，對120例老年冠心病心絞痛患者分組治療，經統計學分析表明，兩組對心絞痛、心電圖及血脂的療效均無顯著差異（P＞0.05），證明兩藥治療冠心病的療效是相當的。兩藥均為中藥制劑，盡管藥理作用機制有所不同，但對冠心病心絞痛的治療均是有效的。在臨床運用中，兩藥均很少有不良反應發生，且價格適中，服用方便，無耐藥性，患者依從性好，易于接受。因此，筆者認為麝香保心丸和銀杏葉片均為治療老年冠心病心絞痛的理想藥物。但在治療冠心病急癥上，麝香保心丸可予舌下含服，起效快，優于銀杏葉片。

參 考 文 獻

［1］ 王受益，戴瑞鴻，金椿，等.麝香保心丸治療冠心病心絞痛的臨床觀察.中國中西結合雜志,1996,16（12）:717-720.

［2］ 夏玲寧.麝香保心丸治療冠心病心絞痛45例臨床觀察.現代中西醫結合雜志,2000,9:482-483.

篇5

正在這時，老頑童爺爺走了進來，他認真地問小海歸：“聽說你們能聽到千里之外的聲音，那你們能聽到黑煞在說些什么嗎？”

“能！”他們說：“讓我們仔細地聽一聽，黑煞說他們要用垃圾做成垃圾炸彈投向快樂星球，讓我們的星球變成垃圾世界！這樣一來宇宙就成了他的地盤了，他要統治宇宙！’”

“好，太好了，讓我們來啟動一號防御系統，讓他們自己炸自己！自食其果。”老頑童爺爺興奮地說。

正在這時垃圾炸彈飛了過來，就在快要到達快樂星球千鈞一發的時候，老頑童爺爺啟動了一號防御系統，棒棒用隱身儀指了炸彈一下，垃圾炸彈就一下子被隱身并返回了黑暗星球。

那么隱身儀是什么東西呢？

它是棒棒前不久發明的，只要是被它隱身的東西，哪怕用再高級的探測器搜索，也是無濟于事。

黑煞以為快樂星球已經下起了垃圾雨，樂得手舞足蹈，高興得跳起舞來。正在這時垃圾雨下還是下了，可是地點卻是在黑暗星球上。黑煞火冒三丈，恨不得馬上就殺了老頑童，可他哪里知道是小海歸們的耳朵立了大功呢？

篇6

防火墻進來時，電腦病毒越來越強烈，電腦已經處于癱瘓狀態，防火墻也沒辦法，只好去叫老頑童爺爺來幫忙，他打電話給老頑童爺爺：“老頑童爺爺，電腦出現病毒啦！而且病毒很厲害，請您快來幫幫忙！”

“那好，我馬上就來。”說著，老頑童爺爺就來到了防火墻實驗室，一看病毒，是一種從未出現過的新型病毒，在仔細確認后就知道是黑煞傳進來的，說著立刻命令艾克啟動三號防御系統，把網絡進行病毒沖洗，使病毒在被消滅的同時對他的產生地—黑暗星球，進行了病毒的反傳播。

果然不一會兒，在黑暗星球的總控制臺也出現了病毒 ，黑煞又被氣得半死，大叫：“你這個老頑童，竟敢拿我發給你的病毒進行反傳播，好，等我統治了宇宙，我就要把你拋進一號黑洞，哈哈哈哈，哈哈哈哈……”又對著他的手下大吼：“你們這群廢物，還不趕快殺毒。”

這時候，快樂星球上已經恢復了平靜，又是一片歡聲笑語了，真不愧是快樂星球呀。

篇7

“防火墻，你來這里干什么？”五兄弟好奇地問。防火墻說：“老頑童爺爺用能源探測器探測到火星有很多的能源，要你們去一趟火星，找到能源。”

“是，長官！”五弟調皮地說。

“我餓！”大哥說。

防火墻忍不住笑了出來，說：“我們先回快樂星球吧！”說著，駕駛著飛船，帶著大家回到了快樂星球。

老頑童爺爺見到他們平安歸來，高興極了，問他們，“企鵝得救了嗎？”“Yes!Sir！”五弟一本正經地舉起右手行了個禮。“太好了，來來來，爺爺請你們吃快樂星球大餐，怎么樣？”吃吃立刻口水直流三千尺，連聲叫：“太棒了！太棒了！”

老頑童爺爺帶著大家邊說邊笑的來到了快樂星球旋轉餐廳，他們點了滿滿一桌子的菜，有吃吃愛吃的紅燒蹄膀，有玩玩愛吃的油燜大蝦，有洗洗愛吃的炒三鮮，有打打愛吃的清蒸大黃魚，喝喝說：“我要一大瓶可樂。”

看著大家吃得高興，老頑童爺爺也很高興，他說：“大家一定要吃飽喝足。明天休息一天，后天出發去火星。好嗎？”

篇8

節儉樸素，人之美德。

——題記

在一個古樸的小鎮上，人們過著無憂無慮的日子，他們團結合作，互相幫助，更可貴的是他們特別節儉，所以他們越來越富裕，越來越幸福。

這時候，有一個人的受不了了，他開始策劃一次行動。

鎮上小學放學了，放學后，三個小孩子在亭子里嬉戲，當他們玩得正開心的時候，突然“咕—咕”的聲音從他們的鞋子里傳出，喔！原來是那個最大的孩子的肚子在叫，他想：我的肚子一定是餓了吧！后來，他們三人興高采烈地跑到一個小飯店吃了起來，店老板想借比機會害這三個小朋友，于是，他在菜里面下了一種藥，然后給他們吃，這三個小孩子見了這些美食，頓時胃口大開。不一會兒，他們三個人受到了控制，開始浪費糧食，搞得小鎮上渾濁不堪，一片，有幾次，小鎮上還發生了火災呢！經過這些事，有的人忐忑不安，有的人趕緊帶著小孩和老人逃跑，還有的人天天在家里呆著，不敢出門！

店老板看到這些，高興得快笑破了肚皮，好像這里的人痛苦就是他的快樂。那么，這個可惡的店老板是誰呢？為了捍衛人們的勞動果實，為了使人們的生活回到往日的寧靜，鎮上的權威W博士開始四處尋找資料——

W博士在老頑童爺爺那兒得知，店老板叫明樂，今年37歲，他是浪費大王，原來的他熱心助人，天天都面帶微笑，可是，可惡的A博士把他變成了一個可惡的浪費大王，這個壞蛋就是今天在這里的店老板。

W博士聽了這些，立馬向老頑童爺爺說再見。

W博士準備上飛馬時，聽到一種叫聲，這是，W博士把飛馬放在一個車庫里，然后，向那種聲音走了過去。“老頑童—”W博士看了老頑童爺爺大叫，突然，浪費大王把W博士也抓了起來，關進了密室里，W博士小聲地對浪費大王說：“明樂，你如果再這樣下去，世界將會滅亡！”“對的，如果，如果再這樣，你不為別人想，也要為自己想啊！”老頑童爺爺也吆喝起來。“唰——”明樂慢慢地抬起頭來，這句話讓明樂像被電打了一般，讓明樂清醒了，明樂把老頑童爺爺、W博士、三個小孩子給放了，支支吾吾地對他們說：“對——對不起！”他們幾個人聽了，異口同聲地說：“沒關系。”于是，明樂請他們到他家享受美食呢！

六個人手挽手，高興地離開了這人死氣沉沉的城堡，并且，讓大自然恢復了往日的美麗。

……

篇9

1引言

引起過敏的物質稱為過敏原，一般為蛋白質類物質。隨著食物過敏患者的增多，以及可能導致過敏性休克甚至死亡等嚴重后果，已建立了一系列針對過敏原的法規及檢測方法，包括核酸法（PCR）和酶聯免疫法（ELISA）等。新興的質譜法（MS）靈敏度高、假陽性概率低，并具有方法開發快速、運行成本低等優勢。

葡萄酒釀造過程中需要加入澄清劑去除沉淀物質，使酒液獲得長期穩定性。酪蛋白是常用的澄清劑之一。酪蛋白是一種來源于牛乳的過敏原，殘留在葡萄酒中會對過敏人群產生危害。但是葡萄酒，特別是紅葡萄酒含有大量單寧等鞣質，單寧與蛋白質之間存在多點疏水鍵和氫鍵的作用，有很強的蛋白結合能力。單寧常用作酶抑制劑使酶失活。單寧極大地抑制了葡萄酒蛋白的提取與酶解，傳統蛋白提取方法（超濾、透析、有機溶劑沉淀等）用于葡萄酒時回收率只有20%-30%[1，2]。因此，關于葡萄酒過敏原質譜分析的報道很少，研究對象也集中在單寧含量很低的白葡萄酒，對于含有大量單寧的紅葡萄酒的前處理和質譜分析仍無成熟的策略[3，4]。已報道的方法如十二烷基硫酸鉀（KDS）法、聚乙烯基吡咯烷酮（PVP）法等，提取后蛋白仍需要電泳去除單寧和兩性電解質，工作量大，分析通量低，蛋白質的回收率很低[5，6]。

交聯聚乙烯基吡咯烷酮（PVPP）是PVP交聯后形成的顆粒（約110 μm），具有很強的吸附能力[7]。PVPP競爭性地與單寧結合，釋放蛋白，可以有效去除單寧等多酚類物質[8，9]。本研究利用PVPP建立了快速、高效的紅葡萄酒蛋白提取與酶解方法，使前處理時間縮短到2 h之內，回收率達到80%以上。將本方法與三重四極桿液相色譜串聯質譜聯用（LCMS/MS）結合，分析了紅酒中3種亞型的酪蛋白，檢出限達到10 μg/L，比目前報道的方法提高了至少一個數量級[3]。

2實驗部分

2.1儀器與試劑

TSQ Vantage三重四極桿質譜、Ultimate 3000超高效液相色譜（Thermo公司）。α酪蛋白（αCasein）、β酪蛋白（βCasein）、胰蛋白酶（Trypsin）、PVPP、NH4HCO3購自SigmaAldrich公司；乙腈、甲酸購自Fisher公司；紅葡萄酒商品若干。

2.2蛋白提取與酶解

樣品制備：取紅酒200 μL與酪蛋白混合溶液4 μL（α酪蛋白、β酪蛋白各5 μg/L）充分混勻后（添加量為100 μg/L時），加入200 μL PVPP混懸液（100 g/L，溶于0.5 mol/L NH4HCO3溶液），并于30 ℃振蕩反應15 min。反應后，直接加入2 μL Trypsin （200 μg/L），并于37 ℃振蕩酶解1.5 h。

酶解完成后，于20000 g離心5 min，取上清液。沉淀加入100 μL水，振蕩超聲2 min，再于20000 g下離心5 min，將溶液完全取出。兩次溶液合并后，再次20000 g離心，取上清液直接進樣分析。

對照品制備：第一步不加酪蛋白，前處理完成后、進樣前，再加入Trypsin酶解后的酪蛋白混合溶液4 μL（α酪蛋白、β酪蛋白各5 mg/L ，添加量為100 μg/L）， 混勻后直接進樣分析。

2.3LCMS/MS分析

第10期張 偉等： 交聯聚乙烯基吡咯烷酮快速前處理方法結合液相色譜串聯質譜分析紅葡萄酒中酪蛋白過敏原

2.4數據處理

酪蛋白亞型序列來自SwissProt數據庫； 專一性肽段與特征性碎片選擇及碰撞能量優化由PinPoint軟件（Thermo）分析，結合LTQOrbitrap 高分辨質譜（Thermo）全掃描確證獲得； 質譜數據由Xcalibur Qual Browser軟件（Thermo）進行定性分析，由Xcalibur Quan Browser軟件（Thermo）進行定量分析。

3結果與討論

3.1酪蛋白LCMS/MS方法建立

酪蛋白有α和β兩種主要亞型，其中α包含S1和S2兩種亞型。由于αS1， αS2和β三者序列完全不同，并同時具有致敏性，因此同時針對這3種酪蛋白建立LCMS/MS分析方法。根據Pinpoint軟件分析，從3種酪蛋白中分別選擇兩條特征性肽段，每條特征性肽段分別選擇兩個子離子，即每種亞型對應4對離子對，并獲得相應的優化碰撞能量（表1）。為了確定離子對選擇的準確性，進一步通過LTQOrbitrap高分辨質譜對酪蛋白酶解產物進行了數據依賴性掃描分析，驗證了離子對選擇的合理性（圖1）。

Fig.2SRM total ion chromatogram and extracted ion chromatogram of casein unique peptides[HT5][TS）]

比PCR和ELISA檢測，LCMS/MS不僅能直接對目標過敏原進行鑒定，還可以同時分析不同亞型，方法的選擇性、準確度、通量均有很大提高。

3.2紅葡萄酒快速前處理

利用PVPP實現了紅葡萄酒高效、快速前處理，并最大程度地降低了蛋白的損失。向紅酒中加入足量的PVPP競爭性吸附單寧，再加入過量的Trypsin快速酶解蛋白，離心取上清液，并重復一次，合并兩次上清液后直接進行質譜分析（圖3）。與傳統方法相比，PVPP法不僅使回收率明顯提高，也使前處理時間由12 h（過夜酶解）縮短到2 h之內。

值得注意的是，PVPP添加量與處理效果并不完全成正比，當超過最優添加量時，質譜響應反而下降，處理效果變差。這可能與PVPP的比表面積和吸附力有關：達到最優添加量之前，PVPP在紅酒中均勻分散成小顆粒，比表面積大、吸附力強，有利于酚類物質吸附；當添加量超過最優值后，PVPP顆粒之間快速團聚形成沉淀，吸附能力下降，同時蛋白也隨酚類物質摻雜在沉淀中，難以有效釋放。因此，合適的PVPP添加量對前處理非常重要。

考察了PVPP法的基質效應，200 μL紅酒經PVPP處理并添加酪蛋白（1 mg/L ）后質譜分析，并與等量經PVPP處理的空白紅酒基質進行比較。結果表明（圖5），基質對肽段的質譜響應影響不大（峰面積差異小），空白基質未見特征肽段的質譜響應。證明基質效應對檢測無影響，前處理方法可靠、有效。

效解決了這一難題。

在低濃度下，PVPP法同樣能達到較高回收率。如表2所示，在0.1 mg/L 酪蛋白（100 μg/L）添加量下，特征性肽段的回收率均可達到75%以上，肽段ALNEINQFYQK由于響應太低，無法準確計算回收率。

考察了0.1 mg/L 酪蛋白在4種不同品牌紅酒中的回收率。如表3所示，特征性肽段的回收率均保持在64%-150%之間，進一步證明了PVPP用于紅酒酪蛋白快速前處理方法高效、可行。

根據α酪蛋白中αS1和αS2所占比例計算，最終確定6條肽段的定量限在10-100 μg/L之間，對應到αS1， αS2和β酪蛋白的定量限分別為40， 40和10 μg/L（表4），比文獻[3] 報道方法提高約一個數量級。此外，在10 μg/L濃度下，所有肽段均有響應（信噪比>3）， 因此αS1， αS2， β酪蛋白的檢測限均在10 μg/L以下，同樣比文獻[3]報道方法提高約一個數量級。

4結論

通過PVPP快速前處理，使紅酒中酪蛋白回收率提高到80%以上，使整個前處理時間縮短到2 h之內，有效解決了紅酒中大量單寧對蛋白提取與酶解的抑制。將PVPP法與三重四極桿液相色譜質譜結合，分析了紅酒中3種亞型的酪蛋白αS1， αS2， β的過敏原，檢測限均低至10 μg/L，定量限達10-40 μg/L，同時結果具有良好的重現性。PVPP前處理方法簡單有效、重現性好，適用于高通量的紅葡萄酒過敏原檢測。

Reference

1Oh H I， Hoff J E， Armstrong G S， Haff L A. J. Agric. Food Chem.， 1980， 28（2）： 394-398

2Goncalves R， Mateus N， Pianet I， Laguerre M， de Freitas V. Langmuir， 2011， 27（21）： 13122-13129

3Monaci L， Losito I， Palmisano F， Godula M， Visconti A. Food Addit. Contam.， 2011， 28（10）： 1304-1314

4Monaci L， Losito I， Palmisano F， Visconti A. J. AOAC Int.， 2011， 94（4）： 1034-1042

5Vincenzi S， Mosconi S， Zoccatelli G， Dalla Pellegrina C， Veneri G， Chignola R， Peruffo A， Curioni A， Rizzi C. Am. J. Enol. Vitic.， 2005， 56（2）： 182-187

6Wigand P， Tenzer S， Schild H， Decker H. J. Agric. Food Chem.， 2009， 57（10）： 4328-4333

7LI XinMing， CUI YingDe， LIAO LieWen. Food Sci.， 2002， 23（8）： 74-76

黎新明， 崔英德， 廖列文. 食品科學， 2002， 23（8）： 74-76

篇10

一星期后……

返校了，同學們都期待自己的成績好一點，這時，歐陽老師讓楊陽來發試卷，發完試卷后，楊陽對老師說還有兩份卷子，歐陽老師看同學們都來了，沒有沒來的人。這兩份卷子，一份三張，張張都是滿分。這是歐陽老師看一下姓名，上面的名字就是剛轉走的學生：艾克、艾雪。

在快樂星球上，艾克和艾雪也是每天無所事事。根本沒有小孩子的快樂。回來一個星期了，照艾克的性格，他一定會搞發明的。可現在，根本沒摸實驗器材。艾雪拿著一張全班合影，眼淚一滴一滴的流，沒有唱一首歌（在我的文中，艾雪除了是艾克的助手還是快樂星球的一名歌手）。笨笨聰聰看著兩個人失魂落魄的樣子，心中很不好受，于是就問他們為什么這樣。可是兩人誰也說不清。似乎這是一個不能解開的迷，于是，他們去找了老頑童爺爺。