導語：如何才能寫好一篇液相色譜，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

關鍵詞：高效液相色譜儀 緩沖液 流動相 調制

液相色譜法的流動相主要用水性溶劑、有機溶劑,或它們的混合液。另外,水性溶劑也常用于緩沖液。有的資料[1]介紹了用于高效液相色譜法的代表性緩沖液的具體調制方法,但通常對緩沖液的解釋往往含糊不清。因此,常因資料上表示的內容與實際的配置方法的不同,而產生流動相的差異,影響色譜圖和分析結果。而且,不僅緩沖液,有時還要考慮到溶劑的混合方法等流動相調制方法方面的漏洞等因素[2]。本文以具體的事例,研究流動相調制方法對分析結果的影響。

1)緩沖液的調制

例如,寫的是“20mM磷酸緩沖液(PH2.5)”在實際中該怎樣調制?不妨舉幾個能想到的情況。首先,可以確定是使用磷酸的緩沖液,但是,是什么離子不明確。即使就以鈉離子而言,“20mM”的濃度弄不清是指磷酸,還是指磷酸鈉的濃度。若認為是“20mM”磷酸(鈉)緩沖液,“20mM”可看作是磷酸的濃度。另一方面,若把“20mM”看作是鈉的濃度,也可以認為是“20mM磷酸二氫鈉水溶液調整PH后的緩沖液(而且, 20mM磷酸鈉水溶液的PH在5.0附近,只要稍用一點酸就可以調到PH2.5)”,這時,由于調整PH用的酸,產生離子對的效果,或者也許會對分析結果有影響。從上述考慮,會產生對緩沖液有多種解釋的可能性。

上述例,具體有3種解釋。對分析結果會產生多大影響,見圖1所示。上段是“20mM”作為磷酸濃度的解釋,將作為“20mM磷酸(鈉)緩沖液(PH2.5)”調制的溶液用于流動相的結果。中段和下段“20mM”作為磷酸二氫鈉的濃度解釋,分別加磷酸和高氯酸調整PH為2.5時的結果。像此例中的二氫可待因那樣對保留時間有明顯的影響時,給分析方法造成困難。對緩沖液應盡量明確溶液的特性和調制方法,以免產生不同的解釋。(如圖1）

2)有機溶劑和水性溶劑的混合方法

有機溶劑和水性溶劑的混合液作為流動相是經常的,但是由于混合方法的不同,有時分析結果相關很大。作為一例,20mM磷酸(鈉)緩沖液(PH2.5)90%與乙腈10%的混合時,混合比為9:1的話,20mM磷酸(鈉)緩沖液(PH2.5)與乙腈的體積比為9:1,也就是可以解釋為各自按體積比率的相當量稱取后進行混合。另外,按10%乙腈解釋的話,解釋為用20mM磷酸(鈉)緩沖液(PH2.5),將乙腈稀釋調制也可以成立。在后者的情況下,產生混合體積減少部分,余下的添加20mM磷酸鈉緩沖液。兩者雖然沒有太大的差別,但,如圖2所示,由于混合的方式不同,分析結果(特別是保留時間)也會有顯著 差別,這點必須注意。（如圖2）

在一般情況下,調制高效液相色譜法用流動相時,用A液:B液=3:2(V:V)的表示方法,即A液體積比相當于3,B液體積相當于2,分別稱取混合(實際上本溶液混合后的溶液體積比合計體積比5要少)。

不僅是流動相的調制方法,試樣溶液和其他溶液的調制也經常有上述問題。另外,在不同部門(醫藥部門或化工部門)各自都有自己的常識習慣,這也是困惑的原因,在這種情況下,例如,日本藥典、衛生試驗法、日本工業規格等法定書都有各自作為通則和定義涉及溶液的調制,因此可參考這些書,避免混亂,在日常更好地記住這些表示。

參考文獻

篇2

[關鍵詞]高效液相色譜；應用；發展現狀；發展趨勢

中圖分類號：O652.63 文獻標識碼：A 文章編號：1009-914X（2015）27-0349-01

在我國科技和經濟都在高速發展的時代，很多技術都有了非常明顯的改進和提升，同時在這一過程中其所發揮的作用也非常的明顯，所以在這樣的情況下，其應用的質量和水平也有了非常大的提升，而其經過了長期的發展，得到了人們的高度重視，同時也在更多的領域發揮其積極的作用，所以對色譜儀進行研究是十分必要的。

1、液相色譜在當今時代的發展

1.1 新型高效液相色譜

當前在物質檢測的過程中，高效色譜法得到了非常廣泛的應用，同時在其發展的過程中也出現了很多新型的色譜，在分配機制層面，親和色譜通常是按照另外一類分配機制而操作的一種新型的色譜，這種色譜在對物質進行檢驗的時候能夠更好的體現分離的效果，因為它是利用大分子之間的一些特有的共性去識別和分離物質，在操作方面也非常的溫和，此外其流動性也非常強，通常其是以超臨界流體色譜作為介質，混合物在臨街流體色譜上的分離原理和氣象色譜和液相色譜都是一致的，但是在應用的范圍上，這種液相色譜法要應用得更加廣泛。

1.2 液相色譜與其他分析儀器聯合使用

1.2.1高效液相色譜（HPLC）與其他分析儀器聯合使用

當前，高效液相色譜儀在檢測的過程中能夠使用的型號十分的有限，但是它在運行中可以選擇很多種檢測器，在應用的時候能夠體現出非常好的靈敏度，這樣的情況下也就使得物質在這一過程中可以更好的得到分離，此外儀器自身應用的廣泛性也得到了十分顯著的提升。比如在環境污染分析當中，對水中烴類物質的測定就是非常重要的，海水當中有很多烴類的物質，其不具備揮發的性質，這樣就可以對環境污染分析工作的進行提供更多有價值的參考。從固定相的角度來說高分子固定相也得到了發展和應用。此外高效色譜儀也逐漸增加了紫外線檢測器，這種檢測器能夠同時測定食品當中對位紅和蘇丹紅等若干可溶性的物質，從而也提高了液相色譜儀的應用價值。

1.2.2超高效液相色譜（UPLC）與其他分析儀器聯合使用

當前超高效液相色譜串聯質譜法是一種比較新的液相色譜法，它在使用的過程中具備非常好的性能，同時在這一過程中其也更加的簡單，速度和效率都有了顯著的提升，在靈敏度上也更好，在實際的應用中可以有效的減少來自于雜質的干擾，定量方面的限制明顯放寬，在定性上更加的準確。

固相萃取和超高液相色譜法是對組織中的氯羥吡啶含量進行分析的一種非常有效的方法，所以這種方法也經常使用在治療禽球蟲病的藥物當中。相關的研究人員使用這種方法建立了一個靈敏度非常好，同時檢測速度也非常快的檢測8種試劑農藥殘留量的方法，在實際的應用中收到了良好的效果。

同時這種檢測方法在實際的應用中能夠體現出非常好的分離效果，它能夠幫助目標化合物和與其形成競爭關系的化合物雜質分離，這樣也就使得質譜檢測器的靈敏度得到十分有效的提升，所以，UPLC是當前質譜入口的首選。

2、液相色譜儀的應用

2.1 液相色譜儀在食品安全領域的應用

2.1.1食品添加劑的檢測

在食品添加劑當中，人們最常使用的有三種，一種是防腐劑，一種是甜味劑，一種是色素。添加劑的檢測方法有很多，在以往的發展中經常使用的有氣象法和比色法。但是液相色譜法和其他的方法相比有著非常明顯的優勢，所以在當今的檢測工作中這種方法得到了廣泛的應用。

在防腐劑檢測方面，研究人員用HypersilODS色譜柱，流動相為0.02mol/LpH5.0乙酸銨甲醇溶液，柱溫35℃，在不同波長下同時測定苯甲酸和山梨酸。

在合成色素的檢測方面，吳敏等采用Zorbax80AExtend―C8色譜柱，高效液相色譜儀配備紫外檢測器，同時測定食品中對位紅和蘇丹紅等8種脂溶性燃料。

近幾年隨著色譜柱填充制備技術的高速發展，已經可以一次性分離糖精鈉、安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、檸檬黃、莧菜紅、亮藍這十種食品常用添加劑。其效率之高非其他儀器分析方法可比。

2.1.2食品中危害物質的檢測

食品中有害物質主要可分為：農藥、獸藥殘留；霉菌毒素；重金屬；加工過程中高溫或其它特殊條件下形成的致癌物質等。

黃曲霉毒素普遍存在于多種谷物類食品當中，具有極強的致畸致癌作用，研究人員用HyPersilODS―C18色譜柱，測定食品中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2含量，該方法方便快捷，定性準確，較傳統的點板法，酶聯免疫吸附法更為科學準確。

高效液相色譜法在應對2008年奶粉摻入三聚氰胺風波的檢測中發揮了重要作用，面對全國眾多乳制品企業的樣品進行檢測，盡快出具檢測結果給老百姓一個公正準確的結果，檢測方法必須既要快，又要準，檢出量還非常微小，能做到完美完成這一任務的，僅有高效液相色譜法能夠做到。

2.2 液相色譜儀在工業上的應用

以往，在石油化工、農藥、環保等方面，經常采用薄層色譜法（TLC）和氣相色譜法（OC）進行含量測定，而液相色譜法（LC）只是用于對組分標樣的測定和分離的可能性的研究。

從上個世紀70年代開始，我國的很多科研部門和該行業當中的工廠就開始對液相色譜儀的生產和改進進行了研究，在這一階段，LC開始出現在我國眾多的科研領域當中，其也體現出了非常高的實用性，特別是對于那些熱穩定性不是非常好或者是蒸汽氣壓不是很高的樣品具有非常好的檢測和分析效果，這樣也充分的顯示出了LC方法自身的優勢。

2.3 液相色譜儀在生命科學領域的應用

生命科學研究工作中，最大的難題就是基因的解密工作，從基因組DNA序列尚不能回答某基因的表達時間、表達量、蛋白質翻譯后加工和修飾的情況、以及它們的亞細胞分布等等。這些在基因組中不能解決的問題可望在蛋白質組學（Proteome）研究中找到答案。在所研究的細胞中會有3～5萬種功能各異的蛋白質，目前蛋白質組研究所使用的雙向電泳法一般只能分辨到2000～3000個蛋白質點。現代蛋白質組的分析可嘗試使用第一向是體積排阻色譜的雙向HPLC高效液相色譜作預分離。高效液相色譜和雙向電泳將會成為蛋白質組學的重要分離工具。因此，高效液相色譜儀將為深入地揭示生命奧秘作出更大的貢獻。

3、結語

高效液相色譜法在物質檢測方面有了非常廣泛的應用，同時在這一過程中其也在不斷的完善，這是因為我國的科學技術在不斷的發展，在這樣的情況下，其應用的范圍也在不斷的拓寬，在更多的領域都能看到高效液相色譜法的身影，這對我國藥品行業和食品行業的發展都有著非常重要的意義，因此我們必須要加大對這種技術的投入，使其更好的體現出自身的優勢和價值，從而更好的推動我國相關行業的發展。

參考文獻

[1]鄭和輝，王萍，李潔.超高效液相色譜法檢測化妝品中的12種磺胺抗生素[J].色譜.2007（02）

[2]李熠，趙靜，薛曉鋒，周金慧.超高效液相色譜法同時測定蜂膠中的12種活性成分[J].色譜.2007（06）

篇3

關鍵詞　檢測器　判別液　純度

高效液相色譜法定量的前提是色譜峰由單一組分構成，因此色譜峰的純度即一個色譜究竟是有一種組分構成，還是包含兩種以上的成分，這就是我們大家所要關心的問題。二極管檢測器(DAD簡稱)的開發，是過去20年內高效液相色譜峰的定DAD檢測器可以得到各個波長的吸光度值即可以得到樣品在各時刻的吸收光譜圖。

使用這些方法判別峰純度時都要求待測組分色譜峰中洗脫雜質的紫外光譜，明顯不同于主組分的紫外光譜。光譜間的差異越大對于其洗脫雜質的檢測就越低，然而有機物的紫外光譜一般均顯示曲線變化不明顯的寬帶。缺乏能夠說明細微差別的精神結構，尤其是對于那些生色團相同而結構上的差異部分，由于生色團不同的化合物間的結構差異不能夠予以足夠的描述實際上許多情況下，例如同分異構體的雜質和主組分的降解或代謝產物與主組分結構上是非常相似的。這是利用組分的紫外光譜信息判別色譜峰純度時就會遇到不能檢測到分析物的共洗脫雜質的情況，甚至有時候會給出完全錯誤的峰純度結果從而給下一步的定性定量分析很大誤差。

使用DAD可以獲得三維譜圖，進而得到等吸收圖提取所要檢測波長下的色譜圖。本文通過選擇頭孢拉定作為分析對象對DAD用于判別液相色譜峰純度時的局限性研究。

1　試驗部分

儀器和試劑AgilenFechnologiesl200SeriesDAD檢測器、甲醇(色譜純)其它試劑均為分析純。頭孢拉定、頭孢氨芐對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。

色譜柱：EXSILCl8柱5μm150*406mid，流動相：水、甲醇、3.86％醋酸鈉溶液、4％醋酸溶液(1654：400：30：6)流速為0.7ml／min-0.9ml／min進樣量10μl柱溫為室溫。

對照品溶液制備：①取頭孢拉定對照品約35mg精密稱定置50ml量瓶中加流動相溶解并稀釋至刻度搖勻。②取頭孢氨芐對照品約20mg精密稱定置50ml量瓶中加流動相溶解并稀釋至刻度搖勻。供試品溶液的制備實驗用的混合溶液根據要求按不同的配比使用標準對照溶液和流動相來配制。

2　結果與討論

2.1DAD用于色譜峰純度判別

頭孢拉定和頭孢氨芐其二者在合適的條件下可以被分離。通常頭孢拉定中含有一定量的頭孢氨芐從二者的紫外光譜，可以發現他們的紫外光譜形狀幾乎完全一致。事實上二者結構上的相似在實際工作中由于柱效下降或者分離條件偶爾變化有時仍然會遇到二者嚴重重疊或者其洗脫的情況通過一根使用過一段時間的色譜柱對供試品的洗脫得到的頭孢氨芐和頭孢拉定的洗脫的色譜峰利用歸一化光譜對照和吸收比值圖法對該假單峰的純度進行鑒定。結果頭孢拉定和頭孢氨芐的共洗脫色譜峰前沿峰頂和峰尾提取的紫外光譜柱歸一化后重疊，頭孢拉定中含有微量的頭孢氨芐由于二者結構和性質上的相似使得他們保留的時間也很相近對流動相的配比略作改變后可使頭孢氨芐峰被掩蓋表現上呈單一峰。使用DAD抽取該色譜圖歸一化后重疊和利用吸收比值圖對該色譜的純度進行判別的結果，認為該色譜圖峰是純的。幸運的是它們在適當的條件下可以被分離開，從上面選擇的有代表性的分析物或者光譜相似雜質組成的體系中可以明顯的看出使用DAD判別液相色譜峰純度有時可能會得出錯誤的峰純度信息。文獻中也認為任何情況下相同的吸收比或者整個色譜峰歸一化光譜的一致只應該被當作是峰純度的一個相對指示而不是一個絕對的證據，對于可能存在于主組分結構相似的雜質的樣品體系的液相色譜分析方法，峰純度的可靠評價最好是通過收集色譜峰出液，然后更換不同的色譜體系或者是由于對微小結構差異靈敏的質譜等手段來驗證。

篇4

[關鍵詞]液相色譜技術；食品；安全；檢驗；應用；

中圖分類號：O657.7+2 文獻標識碼：A 文章編號：1009-914X（2016）03-0379-01

高效液相色譜技術因其具有分離效率高、檢測速度快、檢測靈敏度高等特點，已在食品安全檢驗領域發揮著重要作用，同時隨著高效液相色譜-質譜聯用技術的不斷改進與發展，必將發揮越來越重要的作用。

1 高效液相色譜法

1.1 高效液相色譜法簡介

液相色譜技術（HPLC技術）是一種起源于西方國家的先進的檢驗技術，在物理分離、化學分析中都得到了廣泛的應用，以高效液相色譜儀為主要代表。液相色譜技術具有悠久的發展歷史，經過不斷的發展與更新而形成，具有時代性和歷史性。色譜法就是利用色譜技術來利用物理性質來使其分離成固定相和流動相，進而展現出不同的分布特點，達到分離的目的。色譜法以凝膠色譜、氣象色譜和液相色譜為主，其中液相色譜技術的應用價值最高。隨著食品安全問題的愈演愈烈，食品安全檢測工作被提上了日程，將液相色譜技術應用于食品安全檢驗中，對食品樣品的在液體與固體或不互溶的情況下進行分離與分析，并對其中的成分進行鑒定的過程，能充分了解食品中所含有的成分并對其進行分析，可明確了解到食品是否具有安全性。

1.2 高效液相色譜法特點

與氣相色譜法、經典液相色譜法相比，高效液相色譜法具有如下優點：①在小口徑短不銹鋼柱內填充顆粒極細的固定相，降低了傳質阻力，有效提高柱效，分離效能高。②采用高壓輸液系統提高流動相的流速，縮短分析時間，分析一個樣品僅需幾分鐘到幾十分鐘，分析速度高。③采用高靈敏度檢測器，檢測靈敏度高，紫外檢測器可達0.01ng。④通過流動相可以控制和改善分離過程，同時色譜柱

2 液相色譜技術進行食品安全檢驗的幾點思考

2.1 實現對食品營養成分的檢驗

高效液相色譜法可對食品中的營養成分進行定性、定量分析，即確定營養成分的種類及含量，如糖類、脂肪酸類、維生素等人體所必須的營養成分。裘立群[1]等用反相高效液相色譜法同時測定水果中脂溶性維生素。該方法準確度高，靈敏度好，回收率在88.5%～93.6%之間，適合于水果等低含量脂溶性維生素的測定。

2.2 實現對食品添加劑的檢驗

食品添加劑是指為改善食品色、香、味等品質，以及為防腐和加工工藝的需要而加入食品中的化合物質或者天然物質。我國規定了食品添加劑的最大使用量或殘留量，但是目前超量使用添加劑的現象非常多，過量的添加劑對人體產生潛在的毒害。林海丹等建立了利用高效液相色譜法同時測定食品中18種添加劑的分析方法。該方法采用乙腈-6%乙酸溶液作為流動相，梯度洗脫程序，檢測波長為280nm。結果顯示在1.0～25mg/L的濃度范圍內18中添加劑的線性良好，相關系數均在0.99以上，相對標準偏差在2.43%～11.7%之間，回收率在88.9%～99.9%之間，操作簡便，結果準確度高。阿不都外力.吐尼亞孜[3]等利用反高效液相色譜法同時測定食品中14中食品添加劑，包括苯甲酸、山梨酸、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丁酯、尼泊金丙酯、糖精鈉、安賽蜜等添加劑。樣品經簡單處理后，經HypersilODS（4.6×200mm，5m，DEAIC）色譜柱分離，采用20mmol/L乙酸銨（pH=6.8）-甲醇為流動相進行梯度洗脫，流速設置為1mL/min，柱溫控制在30℃，在波長234nm、254nm處利用紫外檢測器對食品中的14種添加劑進行檢測，并在18min內完成分析流程。該方法平均加標回收率在94%～99%之間，相對標準偏差小于4.5%。

2.3 實現對殘留農藥的檢驗

農藥殘留是農藥使用后一個時期內沒有被分解而殘留于生物體、收獲物、土壤、水體、大氣中的微量農藥原體、有毒代謝物、降解物和雜質的總稱。據統計目前世界上化學農藥年產量達200萬t，其中有近1000種人工合成化合物被用作殺蟲劑、殺菌劑、殺藻劑、除蟲劑、落葉劑等類農藥。農藥尤其是有機農藥的大量施用，造成嚴重的農藥污染問題，成為對人體健康的嚴重威脅。食用含有大量劇毒殘留農藥的食物會導致人、畜急性中毒事故。長期食用農藥殘留超標的農副產品，可能引起人和動物的慢性中毒，誘發疾病，甚至影響到下一代。由于農藥殘留對健康的危害極大，各國對農藥的施用都進行嚴格的管理，并制定了每種農藥在食品中的最大殘留限量。目前廣泛使用的農藥中以有機化合物為主，該類化合物的特點是分子量大、揮發性低、受熱易分解或失去活性，高效液相色譜技術在此類化合物的定量分析中發揮著不可替代的作用。楊濤[4]等建立了高效液相色譜法測定果蔬中防腐殺菌劑的方法，可同時測定噻苯咪唑、鄰苯基苯酚、聯苯、對苯基苯酚、聯苯醚、聯苯胺、多菌靈、乙萘酚、乙氧基喹、抑霉唑10種防腐殺菌劑。該方法固定相采用ZORBAXExtend-C18柱，流動相采用不同比例的甲醇和pH8.0的磷酸鹽緩沖溶液，檢測器為紫外檢測器進行檢測，相對標準偏差（n=6）在0.83%～4.71%之間。

2.4 分析霉菌毒素

食品在加工、存儲過程中，容易存在多種霉菌毒素，如黃曲霉素、玉米烯酮霉素等，有致癌性，嚴重危害人體健康。應用高效液相色譜技術和免疫親和柱萃取，檢測限為10ng/kg，可檢測酸奶等食品中是否含有黃曲霉素；應用高效液相色譜與大氣壓化學電離質譜聯用，檢測限下降為0.12pg/kg，可檢測粗提物食品中的玉米烯酮霉素。隨著環境的日益惡化，像汞、鋅、鉛及其化合物等重金屬也稱為環境中廣泛存在的一類污染物，對農作物和水產品的生長造成了危害，常采用化學法、原子熒光法等測定其含量，近年來隨著HPLC技術的不斷完善和發展，也出現了以HPLC技術測定無機離子的的報道，且效果良好。

3 高效液相色譜-質譜聯用技術

高效液相色譜-質譜聯用技術是一項新的分離技術，它利用質譜法提供未知物豐富的結構信息，從而克服了高效液相色譜法無法準確定性的缺點，該技術的特點集中表現在具有高分離能力、高靈敏度、應用范圍廣和極強的專屬性方面。因其在對高沸點、難揮發、熱不穩定性化合物的定性定量分析方面有其獨特優勢，已被廣泛應用于食品安全檢驗領域，同時在藥物分析特別是中草藥分析領域也有極為廣闊的應用前景。

4 結束語

綜上所述，HPLC技術作為目前市場上進行食品安全檢測的一種行之有效的分析分離手段，得到了廣泛的應用，但是任何一種檢測方法不可能做到面面俱到，因此合理綜合使用多種色譜技術，實現檢測結果的精確可靠且方便快捷，才能更好的服務于社會。另外政府也需加強市場監管，建立規范的市場經濟秩序，杜絕食品安全問題，相關技術人員和部門需不斷突破創新，開發更多、更好、更實用的食品檢測方法，造福人類，促進社會和諧發展。

篇5

關鍵詞：色譜柱 維護與保養 高壓液相色譜 應用 

        0 引言

        色譜作為一種分離技術與方法，自本世紀初起已經有100多年的歷史了，現在已經成為分析化學學科中的一個重要的分支。在人類進入新時代之際，人們面臨著在信息科學、生命科學、材料科學、環境科學等領域的快速發展的挑戰，在這些領域人才的需求成為國家高度發展的至關重要的因素。而色譜技術是生命科學、材料科學、環境科學必不可少的手段和工具。根據最近的統計在全世界各類分析儀器中氣象色譜儀和液相色譜儀的營銷總額占25%-30%。

        科學技術的發展，使得色譜技術也得到進一步的發展，不斷有新的聯用的技術得到應用。生物醫學的發展，也不斷要求高靈敏和高選擇性的方法對研究的對象進行定性和定量的研究。

        1 色譜柱的相關性質

        1.1 色譜柱的定義：裝填有固定相用以分離混合組分的柱管。多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤管形、U形管等形狀。

        1.2 分類：色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。液相色譜通常均采用填充柱。色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相，以及色譜柱的制備和操作條件。簡單而言：常見的分配住填料：碳十八柱（ODS/C18)、碳八柱（Octy了/C8）、碳六柱（Hexyl/C6）、碳四柱（Butyl/C4）、碳一注（Methyl/C1）、陰離子交換柱（SAX)、陽離子交換柱（SCX）、苯基柱（Phenyl）、氨基柱（Amino/NH2）、氰基柱（Cyano/CN/Nitrile）。常見的吸附柱填料：硅膠柱

        色譜柱的選擇會直接影響混合物中組分的分離。舉例來講：對于填充柱而言，可選擇的固定相較多，柱容量較大，但是受柱長的限制，分離能力有限，主要應用于簡單化合物的分離。

        2 色譜柱的維護與保養

        2.1 色譜柱的維護。我們在使用新的色譜柱應該在我們自己的液相色譜儀上進行性能測試，即使用色譜柱附帶的檢驗報告上測試條件和樣品來測定該色譜柱的柱效。并且，在以后的使用中，應時常對色譜柱進行測試。而且在使用的過程中常常有堵塞的現象，造成這種現象的主要原因是①溶劑中的不溶物②樣品中的不溶物③泵進樣器等中的不溶物④柱內不溶物的形成等。如果當色譜柱堵塞以后我們可以對色譜柱進行修復，首先，使用含鹽緩沖液后（如離子對試劑）應用溶解性強的溶劑（如水）進行沖洗。其次，先斷開檢測器，然后用對來自樣品中的物質有強溶解性的溶劑進行沖洗，對于反相色譜柱，可使用甲醇、乙睛、四氫呋喃、氯仿、庚烷等，在此條件下，應避免溶劑的pH低于2或高于8。最后如果經過上述還是沒有修復，色譜柱壓力還是沒有下降，則要斷開檢測器，將色譜柱反方向放置，然后檢查柱壓，若壓力穩定下降，則保持色譜柱反方向連接，用低于0.5 ml/min 流速沖洗一小時。如果壓力不下降，則要看內置過濾器是否被堵塞，如果被堵塞應沖洗或更換，若進口端的填料發生堵塞，柱子將不可能被徹底恢復，只能通過去掉進口端的部分填料，重新填充進行有限的柱效恢復。而且修復的厚度是2-5mm。

        2.2 色譜柱的保養。色譜柱在使用前，最好進行柱的性能測試，并將結果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是最佳條件)，只有這樣，測得的結果才有可比性。我們在對色譜柱使用前進行測試以后，我們要根據不同的情況對色譜柱進行保養：①反相色譜柱每天實驗后的保養：使用緩沖液或含鹽的流動相，實驗完成后應用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。②長期保存色譜柱：如色譜柱要長時間保存，必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲存于水（含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞）中，并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度最好是室溫。

  概括起來就是：①柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強烈震動；②當柱子和色譜儀聯結時，閥件或管路一定要清洗干凈；③要注意流動相的脫氣；④避免使用高粘度的溶劑作為流動相；⑤進樣樣品要提純；⑥嚴格控制進樣量；⑦每天分析工作結束后，要清洗進樣閥中殘留的樣品；⑧每天分析測定結束后，都要用適當的溶劑來清洗柱；⑨若分析柱長期不使用，應用適當有機溶劑保存并封閉。

        3 色譜柱的維護與保養在高壓液相色譜中的應用

        高效液相色譜(HPLC)是20世紀60年代后期發展起來的分離分析技術，是現代分離測定的重要手段。問世以來，因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析高沸點但不能氣化的熱不穩定生理活性物質的特點而被廣泛應用于生物化學、藥物及臨床分析。高效液相色譜柱是消耗品，會隨使用時間或進樣的次數增加，出現色譜峰高降低，峰寬加大或出現肩峰，柱效下降。需要定期進行徹底清洗和再生，不同的色譜柱清洗方法各不相同比如：

篇6

關鍵詞：魚藤酮；殘留；液相色譜-質譜

中圖分類號：O657.7+2；O657.63 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2012）21-4868-02

Determination of Rotenone Residue in Cabbage by LC-MS

LIU Jun1，LI Xian-bo1，2，SHEN Jing1

（1.Agricultural Quality Standards and Inspection Technology Research Institute， Hubei Academy of Agricultural Science， Wuhan 430064，China； 2.College of Science， Huazhong Agricultural University， Wuhan 430070，China）

Abstract： A method for determination of rotenone residue in cabbage was established by LC-MS. Rotenone residue was extracted from sample with acetonitrile， cleaned up by ProElut Carbon/NH2 SPE to achieve sample preparation， and separated on the MGШ-C18 column using a mixture of acetonitrile and 0.1% formic acid solution （60∶40） as mobile phase. Determination was performed by using ESI+ and under the mode of SIM. Quantitative detection of ions at m/z 395， the retention time of rotenone was about 4.8 min. Linearities were held in the ranges of 0.001～1.000 mg/L with the correlation coefficient for 0.999 98. The average recoveries of rotenone in cabbage at the spiked amounts of 0.01、0.10、0.50 mg/kg were 70.5%～112.6%， and the relative standard deviation was lower than 20.9%（n=5）. The limit of detectable amount （S/N=10） was 2.5×10-11 g. The accuracy and precision of this method could meet the detection requirements.

Key words： rotenone； residue； LC-MS

魚藤酮是豆科藤本植物魚藤根部的一種天然殺蟲劑，具有高效、低毒、廣譜、殺蟲快、對農作物不產生藥害和不易產生耐藥性等優點，對防治果樹、蔬菜、茶葉、花卉和糧食作物上的數百種害蟲及蚊、蠅等衛生害蟲有良好效果。但過量使用會造成環境污染，對人類健康帶來危害，特別是其對中樞神經的毒性作用日益引起社會各界的關注[1]。因此，魚藤酮在得到廣泛應用的同時，開展魚藤酮的殘留檢測方法研究就顯得非常重要。目前，有報道采用液相色譜、液相色譜-質譜、液相色譜-串聯質譜以及氣相色譜-質譜檢測魚藤酮在蜂蜜[2，3]、魚肉[4]、河水[5]、果蔬[6]、食品[7]、血漿[8]、魚藤[9]以及水產品[10]中的殘留。但甘藍中魚藤酮的殘留檢測方法未見報道，本研究建立了高效液相色譜-質譜法檢測甘藍中魚藤酮的殘留量，該方法快速、準確，準確度和靈敏度均能滿足殘留檢測要求。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

LC 210ADvp高效液相色譜儀（日本島津公司），配有LC-MS 2010 EV質譜檢測器和電噴霧離子源，自動進樣器，LC-MS工作站。

魚藤酮標樣（99.0%，德國Dr. Ehrenstorfer公司），甲醇和乙腈均為色譜純（J. T. Baker公司），甲酸（99.0%，Acros Organics公司），氯化鈉（分析純，國藥集團化學試劑有限公司），超純水用 Barnstead超純水機制備，其他試劑均為分析純。

1.2 樣品前處理

稱取經搗碎處理的甘藍樣品10.00 g于100 mL離心管中，加入20 mL乙腈，以21 000 r/min勻質2 min，加入3.0 g氯化鈉，再勻質1 min。以3 500 r/min離心5 min，吸取上清液5 mL（相當于2.5 g樣品）于100 mL燒杯中，于80 ℃水浴蒸發近干，加入2 mL乙腈∶甲苯（3∶1，V/V）待凈化。

1.3 樣品凈化

用5 mL乙腈∶甲苯（3∶1，V/V）預淋洗Carbon/NH2柱（6 mL，500 mg），待淋洗液接近固體層面時迅速倒入上述待凈化液，同時收集淋洗液，再用6 mL乙腈∶甲苯（3∶1，V/V）分兩次淋洗，合并上述淋洗液，于45 ℃水浴中旋轉蒸發近干，2.5 mL甲醇定容，待質譜檢測。

1.4 液相色譜-質譜條件

色譜柱：MGШ-C18（100 mm×2.0 mm，5 μm）；流動相采用乙腈∶0.1%甲酸溶液（60∶40，V/V）；流速：0.2 mL/min；進樣體積：5 μL；柱溫：35 ℃；離子源 ESI （+），SIM 掃描模式（m/z 395）；CDL溫度：250 ℃； 加熱模塊溫度：200 ℃；霧化氣流速（N2）：1.5 L/min；干燥氣（N2）壓力：40 kPa；檢測電壓：1.65 V。

2 結果與分析

2.1 定量離子的選擇

在上述色譜條件下選擇SCAN （+）模式，直接進100 mg/L的魚藤酮標樣溶液，掃描范圍m/z 50～450得到全掃描質譜圖。由圖1可見m/z 395 （M+H）的強度最大，所以選擇 m/z 395 為定量離子。以m/z 395為定量離子采用SIM（+） 模式，魚藤酮的添加和標樣圖譜以及甘藍空白譜圖見圖2。

2.2 線性范圍和檢出限

配制魚藤酮標準溶液濃度分別為0.001、0.005、0.010、0.050、0.100、1.000 mg/kg進行檢測，以m/z 395質量色譜圖峰面積為縱坐標，對應的魚藤酮質量濃度（mg/kg）為橫坐標，繪制標準曲線如圖3，其線性回歸方程為：y =672 954 0x+112 02，相關系數為0.999 98。按S/N=10計算魚藤酮最低檢出量為2.5×10-11 g。

2.3 方法的回收率、精確度和最小檢出濃度

在未施用魚藤酮的菜地采集空白甘藍樣品，分別添加0.01、0.10、0.50 mg/kg 3個水平魚藤酮標準溶液，每個水平5次重復，檢測結果見表1，添加樣品中魚藤酮加標回收率為70.5%～112.6%，相對標準偏差（RSD）在4.1%～20.9%。魚藤酮在甘藍中的最小檢測濃度為0.01 mg/kg。回收率、相對標準偏差和最小檢測濃度能滿足農藥登記殘留試驗的要求。

3 小結與討論

采用乙腈提取，Carbon/NH2柱凈化，液相色譜-質譜檢測農藥魚藤酮在甘藍中的殘留，該方法操作方便，其添加回收率、精確度和最小檢出濃度均能達到農藥登記殘留試驗的要求。

參考文獻：

[1] 黃超培，趙 鵬. 魚藤酮原藥的基礎毒性研究[J]. 毒理學雜志，2006，20（3）：205-206.

[2] MARTEL A C， ZAGGANE S. Determination of acaricides in honey by high-performance liquid chromatography with photodiode array detection[J]. Journal of Chromatography A， 2002， 954（1-2）：173-180.

[3] JIMENEZ J J， BERNAL J L， DEL NOZAL M J， et al. Determination of rotenone residues in raw honey by solid-phase extraction and high-performance liquid chromatography[J]. Journal of Chromatography A，2000，871（1-2）：67-73.

[4] YANG F， LIU Z C， ZHEN D P，et al. Determination of botanical insecticides residues in fish by liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry[J]. Food Anal Methods，2011，4（4）：601-607.

[5] HOLM A， MOLANDE P， LUNDANES E， et al. Determination of rotenone in river water utilizing packed capillary column switching liquid chromatography with UV and time-of-flight mass spectrometric detection[J]. Journal of Chromatography A，2003，983（1-2）：43-50.

[6] CABONI P， SARAIS G， ANGIONI A， et al. Fast and Versatile Multi-residue method for the analysis of botanical insecticides on fruits and vegetables by HPLC/DAD/MS[J]. J Agric Food Chem，2005，53（22）：8644-8649.

[7] XU D M，ZHOU Y，LIN L Y，et al. Determination of rotenone residues in foodstuffs by solid-phase-extraction（SPE） and liquid chromatography/tandem mass spectrometry （LC-MS/MS）[J]. Agricultural Sciences in China，2010，9（9）：1299-1308.

[8] CABONI P， SARAIS G， VARGIU S， et al. LC-MS-MS Determination of rotenone， deguelin， and rotenolone in human serum[J]. Chromatographia，2008，68（9-10）：739-745.

[9] 韓鳳鳴，李曉東，賴仕均，等.氣質聯用法檢測魚藤中魚藤酮[J].刑事技術，2011（3）：35-36.

[10] 楊 方，鄭丹萍，劉正才，等. 液相色譜-串聯質譜法同時檢測水產品中苦參堿和魚藤酮殘留[J].分析化學研究報告，2011， 39（4）：556-559.

收稿日期：2012-06-01

基金項目：農業部農藥檢定所農藥登記試驗項目（2011P325）

篇7

【關鍵詞】 戰骨；，，黃毛豆腐柴；，，指紋圖譜；，，高效液相色譜法；，，壯藥

摘要：目的采用高效液相色譜法對壯藥戰骨藥材進行指紋圖譜的研究，為戰骨藥材質量標準的提升提供實驗依據。方法實驗采用Phenomenex Gemini C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-0.05 mol/L 醋酸水溶液為流動相進行二元梯度洗脫，流速1.0 ml / min，柱溫25℃，檢測波長274 nm。結果以23個共有峰為評價指標，精密度和重復性實驗中各共有峰相對保留時間和相對峰面積的RSD均小于3%，符合有關規定要求。結論此方法操作簡單，精密度、穩定性和重復性良好，有助于戰骨藥材的質量控制。

關鍵詞：戰骨； 黃毛豆腐柴； 指紋圖譜； 高效液相色譜法； 壯藥

Abstract：ObjectiveThe fingerprint chromatograms were established for quality evaluation of traditional Zhuang nationality medicine Zhangu ( the root of Premna fulva craib) by high performance liquid chromatography. MethodsThe analysis was performed on a Phenomenex Gemini C18 column（4.6 mm×250 mm，5 μm） with acetonitrile0.05 mol/L ethanoic acid as mobile phase in a gradient mode at a flow rate of 1.0 ml/min， and at a column temperature of 25℃. The detection wavelength was 274nm. ResultsTwenty three peaks were selected as the common fingerprint peaks. The relative standard deviations for relative retention values and relative peak areas were less than 3% in the precision and repeated test. ConclusionThe method is reliable and can be helpful in the quality control of Zhangu.

Key words：Zhangu； Premna fulva Craib.； Fingerprint； High performance liquid chromatography； Traditional Zhuang Nationality medicine

壯藥戰骨是馬鞭草科植物黃毛豆腐柴 Premna fulva Craib.的干燥莖，別名土霸王、穿云箭［1］。多分布于廣西百色、南寧地區等地，藥源豐富，價廉易采收，屬可持續利用的天然藥物資源。戰骨具有活血散淤、強筋健骨、驅風止痛的功效，廣西民間常用于治療腰腿痛、跌打損傷、風濕性和類風濕關節炎及感冒身痛、淋巴結炎、肝區疼痛等［2～4］。戰骨中含有多種化學成分，其主要有效成分為柚皮素等黃酮類化合物［5～7］。由于受產地、氣候、生態環境等因素的影響，不同藥材所含有效成分差異較大。針對中藥材的某個有效成分對藥材進行定性、定量并不能有效控制中藥材的質量。指紋圖譜能夠從綜觀和整體上表征中藥材的特征，目前已成為國際上公認的控制天然藥物質量的有效手段［8，9］。本文以提高戰骨藥材質量標準，促進民族醫藥發展為目的，對廣西不同產地戰骨藥材進行了指紋圖譜的研究。

1 材料與方法

1.1 儀器與藥品儀器：美國PerKinElmer公司Series 200高效液相色譜儀（包括Series 200紫外檢測器、Series 200二元泵、600 Series 接口及色譜工作站）。 Phenomenex Gemini C18 色譜柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm）。藥材：戰骨（產地：廣西，經廣西南寧食品藥品檢驗所中藥室鑒定，均為馬鞭草科植物黃毛豆腐柴的干燥莖。來源見表1）。試劑 ：乙腈、甲醇為色譜純，乙醇、醋酸為分析純，水為高純水，柚皮素對照品（中國藥品生物制品檢定所）。

表1 戰骨藥材樣品來源及批號（略）

1.2 色譜條件以乙腈-0.05 mol /L 醋酸水溶液為流動相進行二元梯度洗脫，流速1.0 ml/min，柱溫25℃，檢測波長274 nm，進樣量20 μl。梯度洗脫程序結果見表2。

表2 流動相梯度洗脫程序（略）

1.3 方法

1.3.1 參照物溶液的制備取柚皮素對照品適量，用甲醇溶解，定容，作為參照物溶液（含柚皮素104 μg/ml）。

1.3.2 供試品溶液的制備取各批戰骨藥材粉未（過2號篩）約2.5 g，精密稱定，置于錐形瓶中，精密加入30%乙醇溶液50 ml，超聲處理1.5 h ，放冷，再稱定重量，用30%乙醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。不立即分析的樣品可暫存于4℃的冰箱保存。

1.3.3 測定方法分別精密量取參照物溶液和各供試品溶液20 μl，注入液相色譜儀，記錄90 min色譜圖即得。以柚皮素的色譜峰（S）的保留時間和峰面積為1，計算其它各峰的相對保留時間和相對峰面積比值。

2 結果

2.1 方法學考察

2.1.1 精密度以1# 藥材制備供試品溶液，在“1.2”項下色譜條件下，連續進樣5次，檢測指紋圖譜。結果表明，色譜圖中各色譜峰的相對保留時間的RSD小于0.98%；相對峰面積的RSD小于2.31%，符合指紋圖譜要求，表明儀器精密度良好。

2.1.2 重復性以1# 藥材5份，制備供試品溶液，分別檢測指紋圖譜，結果表明各色譜峰的相對保留時間的RSD小于1.91%；單峰面積大于等于5%總峰面積的色譜峰其相對峰面積的RSD小于2.28%，表明方法的重復性良好。

2.1.3 穩定性取1# 藥材制備供試品溶液，分別在0，12，17，37，48h 檢測指紋圖譜，結果表明，各主要色譜峰的相對保留時間的RSD小于2.51%，相對峰面積比值的RSD小于2.89%，表明供試品溶液在48 h內穩定。

2.2 指紋圖譜的建立及分析

2.2.1 指紋圖譜及共有峰的標定對10個戰骨藥材樣品進行了測定，其色譜圖有23 個主要的共有特征峰（占總峰面積的90%以上）。其典型的HPLC-UV指紋圖譜見圖2。其中17 號峰為柚皮素（與參照物對照確認，色譜圖見圖1）。10批樣品中，單峰面積與總峰面積的比值大于20%的共有峰只有17號峰，大于10%的共有峰有21 號峰，大于5%的共有峰有1號和4號峰。結果表明1，2，3………23號峰在10批樣品的色譜圖中均出現。以柚皮素對照品保留時間為參照，計算各共有特征指紋峰的相對保留時間，相對保留時間的RSD小于2.10%（n=10，結果見表3）。因此標定此 23個峰為共有指紋峰，并據此建立戰骨藥材的HPLC指紋圖譜。

表3 10批戰骨藥材共有指紋峰的相對保留時間（略）

2.2.2 共有指紋峰面積與參照物峰面積的比值以柚皮素峰面積為參照，計算各批藥材供試品共有指紋峰的峰面積比值，結果見表4。由表4和圖3可見，各批供試品指紋圖譜的重現性較好，但各批樣品間共有指紋峰的相對峰面積有一定差異。

2.2.3 非共有峰面積供試的10批樣品共有指紋峰面積之和占總峰面積比值平均為93.69 %，則非共有峰面積占總峰面積的比值平均為6.31 %，符合《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術要求》［10］。

2.3 指紋圖譜的檢驗取10批戰骨藥材，按供試品溶液的制備方法操作，分別取各批藥材制成的供試品溶液，按供試品檢測法進行檢測，并與典型的指紋圖譜相比較，結果表明各批樣品指紋圖譜相似度較好，共有23個共有峰，而且各共有峰的相對保留時間的RSD均小于3%。結果見圖3及表3。

3 討論

3.1 實驗過程中選擇了多種流動相系統：①甲醇-水，②甲醇-醋酸水溶液，③乙腈-水，④乙腈-醋酸水溶液等度和梯度洗脫幾種方式，并對梯度洗脫程序進行優化，結果表明以“1.2”項下系統為最佳。各色譜峰分離度較好，峰型尖銳，保留時間適中。

3.2 實驗中對戰骨藥材供試品溶液進行紫外掃描，在274 nm和280 nm有最大吸收。分別在254，274，280 nm和288 nm［11］波長下測定指紋圖譜，從色譜圖中的基線、峰型和分離度等因素綜合考慮，選擇274 nm為指紋圖譜的檢測波長。

表4 10批戰骨藥材共有指紋峰的相對峰面積（略）

3.3 不同產地的戰骨藥材指紋圖譜相似度較高，23 個共有峰相對保留時間符合程度較好，但相對峰面積有一定差異。提示藥材應在固定產地的前提下才能保證藥品的一致性，同時說明以簡單測定一個或幾個成分含量為主的傳統質量控制方法已不能真正反映中藥材質量，而利用指紋圖譜對藥材進行綜合、宏觀地評價是當今對天然藥物質量控制的有效手段。

3.4 本實驗所建立的方法，精密度、穩定性和重復性符合指紋圖譜研究的技術要求［10］，為壯藥戰骨及制劑的質量控制提供了一定的科學依據，對壯藥戰骨藥材質量標準的提升進行了有益的探索。

圖1 柚皮素HPLC圖譜（略）

圖2 戰骨藥材HPLC指紋圖譜（樣品1#）（略）

圖3 10批戰骨藥材HPLC指紋圖譜（略）

參考文獻

［1］ 廣西壯族自治區衛生廳. 廣西中藥材標準，1990年版［S］.南寧：廣西科學技術出版社， 1992：72，247.

［2］ 潘洪平.黃毛豆腐柴化學成分，藥理研究及臨床應用進展［J］.廣西醫學， 2002，24（3）：365.

［3］ 林 軍，楊 斌 ，陳家歡，等.黃毛豆腐柴莖提取物改善微循環，保

護坐骨神經和軟組織損傷的實驗研究［J］.廣西醫科大學學報， 2001，18（2）：207.

［4］ 蔣才武，曾春輝，劉壽養.壯族藥戰骨的性狀與顯微鑒別［J］.中藥材， 2004，27(11)：811.

［5］ 韋 松，思秀玲，曾 詮，等.黃毛豆腐柴化學成分的研究［J］.華西藥學雜志，1988，3（1）：41.

［6］ 曾 詮，劉成其，劉利根.黃毛豆腐柴莖皮酯溶性化學成分研究［J］.中國藥科大學學報，1989，20（2）：94.

［7］ 曾 詮，劉成基，孟寶華. 黃毛豆腐柴莖皮醋乙酸乙酯部分的化學成分研究［J］.中草藥， 1990，21（5）：8.

［8］ 謝培山.中藥色譜指紋圖譜［M］.北京:人民衛生出版社，2005:13.

［9］ 周玉新.中藥指紋圖譜研究技術［M］.北京：化學工業出版社，2002：5.

篇8

關鍵詞：超高效液相色譜 氯丙嗪 殘留量 豬肉

中圖分類號：R155.5 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）10（c）-0187-03

Determination of chlorpromazine residues in meat products by ultra high performance liquid chromatography

LIU Chun

（Dongcheng district Center for Diseases Prevention and Control，Beijing，100009，China）

Abstract：Objective： Ultra High Performance Liquid Chromatography（UPLC） method was determination of chlorpromazine residue in pork. Method： The target analyte was extracted form sample with acetonitrile and determined by UPLA. Chromatographic column： BEH C18 1.7 μm× 50 mm×2.1 mm， flow rate： 0.4 mL/min， mobile phase： acetonitrile∶ammonium acetate=60∶40， column temperature： 40℃， detection wavelength： 254 nm， injection volume：10μL.Result：The detection limit was 15.0μg/kg.The linearity ranged form 0 to 1.00 mg/L with the correlation coefficient of 0.9998. The recovery was 87.7% to 101.0%， RSD was 1.2% to 2.6%. Conclusion： The method was suitable for determination of chlorpromazine residue in pork.

Key word：UPLC;chlorpromazine;residues;pork

氯丙嗪（Chlorpromazine，CHL）又稱冬眠靈，屬于吩噻嗪類藥物，是抗精神病類藥的一種，涉及中樞神經、植物神經、心血管和內分泌系統等方面，其中主要被用作鎮靜藥。一些養殖戶因經濟利益的驅使，在飼料中違規添加氯丙嗪抑制動物的運動，從而間接起到催肥作用。氯丙嗪在家畜飼養中的濫用，不僅會引起動物的中毒，還會通過在動物性食品的殘留直接危害到人類。歐盟早已將氯丙嗪列入禁用清單中，我國也規定氯丙嗪禁止用于食品性動物。建立豬肉中氯丙嗪的檢測方法，對于研究其在豬、禽體內的代謝及組織殘留，實施豬、獸藥殘留監控具有重要的實際意義。

目前主要采用高效液相色譜法，液質聯用法，氣質聯用法，化學發光法和免疫分析法檢測氯丙嗪，采用超高效液相色譜測定豬肉中氯丙嗪含量鮮有報道。本文采用乙腈進行樣品前處理，超聲波提取，建立了超高效液相色譜測定豬肉在氯丙嗪的方法。

1 試驗部分

1.1 主要儀器與試劑

Waters Acquity UPLC H-Class超高效液相色譜儀（美國，Waters公司）;3-30K冷凍高速離心機（美國，Sigma公司）。

氯丙嗪標準品（純度≥99.0%，CAS：50-53-3，Dr.Ehrenstrfer公司）;乙腈（色譜純，Fisher公司）;試驗用水為電導率在18 MΩ?cm以上的超純水。

1.2 分析方法

1.2.1 色譜條件

ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）;流動相乙腈∶乙酸銨=60∶40;檢測波長254 nm;流速0.4 mL?min-1;柱溫40 ℃;進樣量5 μL。

1.2.2 標準曲線

精確稱取氯丙嗪標準品0.0100 g，用少量乙腈溶解，并轉移到10mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，此氯丙嗪標準儲備液濃度1.00 mg/mL。取氯丙嗪標準儲備液1.00 mL，轉移到100 mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，此氯丙嗪標準使用液濃度10.00 μg/mL。4 ℃避光保存，保存期1個月。

精確吸取氯丙嗪標準使用液0.01 mL、0.50 mL、0.10 mL、0.50 mL、1.00 mL于10 mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，過0.22 μm尼龍微孔濾膜，即為0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL的氯丙嗪標準溶液。此溶液注意避光，現用現配。

1.2.3 樣品制備

取適量粉碎混勻的樣品于50 mL離心管中，加25.00 mL乙腈，漩渦混勻30 s，超聲避光提取15 min，12000 r/min離心10 min，避光靜置20 min，取上清液過0.22 μm尼龍微孔濾膜，上機測定。

1.2.4 樣品測定

在色譜條件下，測定標準系列及樣品。以目標化合物保留時間及特征光譜圖定性;以峰面積為響應值，外標法定量。

1.2.5 定量計算

式中：X-試樣中氯丙嗪的含量，單位為微克每千克（mg/kg）。

C-試液中氯丙嗪的含量，單位為微克每毫升（μg/mL）。

V-試樣稀釋總體積，單位為毫升（mL）。

m-試樣質量，單位為克（g）。

計算結果保留兩位有效數字。

2 結果與討論

2.1 色譜條件的優化

采用不同體積比的乙腈∶水、乙腈∶乙酸銨作為流動相，將1.00 μg/mL的標準溶液進樣檢測，比較出峰情況。綜合考慮峰形、峰寬、出峰時間，選擇乙腈∶乙酸銨=40∶60作為流動相。圖1為氯丙嗪標準品的色譜圖。圖2為氯丙嗪標準物質掃描光譜圖。

按色譜條件進行分析，圖3為空白豬肉樣品的色譜圖。圖4為添加1.00 μg/kg氯丙嗪標準品樣品色譜圖。

2.2 方法的線性范圍和檢出限

精確吸取氯丙嗪標準使用液，用乙腈溶液依次稀釋，配制成0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL的氯丙嗪標準溶液，以氯丙嗪的濃度和峰面積進行回歸，得回歸方程y=69121.94x-396.59，相關系數=0.9999。

按照取樣10.0 g，定容25.00 mL，以基線噪聲3倍相當的標準物質為檢出限，計算最低檢出限為7.5μg/kg，最低檢出質量濃度為0.01 μg/mL。

2.3 方法的準確度和精密度

以空白豬肉為測試對象，分別添加低（0.25 mg/kg）、中（2.50 mg/kg）、高（5.00 mg/kg）3個水平的氯丙嗪標準品做加標回收實驗，以考察方法的準確度（結果見表1）。

實驗結果表明，本方法均回收率為87.7%～101.0%，RSD為1.2%～2.6%，符合方法學要求。

要獲得氯丙嗪理想的回收率和較低的檢出限，需要注意以下方面：氯丙嗪見光易分解，樣品前處理全程需進行避光操作，標準使用液要貯存在棕色容量瓶中;樣品離心后，須避光靜置20 min，使樣品進一步沉降分層;微孔過濾膜須采用尼龍材質（Nylon），避免目標物吸附在微孔過濾膜;配制標準溶液時，需采用100%乙腈，避免產生溶劑效應。

3 結語

本方法采用乙腈溶液超聲提取，建立了超高效液相色譜測定豬肉中氯丙嗪的方法。方法重現性好，靈敏度高，操作簡便，精密度及準確度滿意，適用于豬肉中氯丙嗪的日常監測工作。

參考文獻

[1] 劉建靜，楊曙明.氯丙嗪殘留技術研究進展[J].中國獸牧獸醫，2008，35（10）：141-144

[2] 袁圣柳，李曉鋒，姜曉滿，等.自動固相萃取-高效液相色譜串聯質譜法測定生活污水中13種抗精神病藥物[J].分析化學;2013（1）.

[3] 渠巖，路勇，馮楠，等.基質固相分散-超高效液相色譜-串聯質譜法同時測定畜禽肉中殘留的13種鎮靜藥物[J].食品科學;2012（8）.

篇9

【關鍵詞】液相色譜；純度分析；油田化學品原料

Analysis of the Purity of AMPS by HPLC

CHEN Fan-bin FU Jun-fang ZHANG Hao

（Oilfield Chemicals Department， COSL， Yanjiao Hebei， 065201， China）

【Abstract】A method was developed for analyzing of AMPS， a main material of Oilfield Chemicals by HPLC detection. The separation was performed on an agilent ZORBAX SB-AQ（5 μm，4.6×150 mm， Agilent）with Solution 0.01 mol/L KH2PO4（pH=2.3） Methanol （volume ratio 95：5） at a flow rate of 1.0ml/min， the column temperature at 20 ℃， the detection wavelength at 210 nm for VWD，. The Sample from different regions were successfully analyzed by using this method. These results demonstrated that the proposed method is simple， sensitive and reliable for analysis material of Oilfield Chemicals

【Key words】HPLC； Purity analysis； Material of Oilfield chemicals

AMPS（2-丙烯酰胺-2-甲基-丙磺酸）與甲基丙烯酸、丙烯酰胺制成三元共聚物，用于固井水泥外加劑，可起到高溫緩凝作用，可以在高溫高鹽環境下使用；與N，N-二甲基丙烯酰胺的共聚物可用于油井水泥漿失水劑；與木質素磺酸鈣、丙烯酰胺的接枝共聚物，是非常優異的水泥分散劑、早強劑、增強劑；AMPS與丙烯酸、四氫苯甲酸、木質素磺酸等接枝共聚，可以制備鉆井液分散劑和抗鈣性能好的穩定劑、降粘劑、降濾失劑等；AMPS與N-乙烯基吡咯烷酮類的嵌段共聚物，作為三次采油的增粘劑，在高溫、高壓、高剪切條件下使用不發生降解，穩定性良好。

目前AMPS作為有效的改性單體已經滲入油田化學品各個領域的聚合物改性，很好解決了采油聚合物中抗鹽性、抗高溫性、抗剪切三大棘手問題。中國AMPS最大市場是油田三次采油，作為鉆井液、完井液和壓裂液等。目前中原油田等已經將AMPS聚合物作為油田三次采油的化學品立項，預計僅此一項2005年國內將至少消耗1萬噸。

目前全球約1/3的AMPS單體用于水處理工業。AMPS的均聚物或與丙烯酰胺、丙烯酸等單體的共聚物，可作為污水凈化過程中的淤泥脫水劑；在封閉水循環系統中用作鐵、鋅、鋁、銅以及合金的防腐劑；還可用于加熱器、冷卻塔、空氣凈化劑和氣體凈化劑的除垢劑、阻垢劑等。國外大量使用表明，以AMPS作為處理劑用量少，效果優于現有聚丙烯酰胺類水處理劑。目前國內一些大中城市污水處理已經開始使用AMPS，其中華東年消耗約300噸，華南年消耗約150噸，京津唐年消耗200噸，年總消耗量約650噸，預計2005年將達到1000噸。

目前AMPS已成為國內引人矚目的熱點有機化工原料，部分科研機構的合成技術也較成熟，尤其是中國許多油田處于三次采油期，國內水處理領域用量巨大，都對AMPS質量和數量提出了更高更多要求。因此，國內在加快建設AMPS裝置的同時，應加大應用研究力度，以促進AMPS工業健康快速發展。

AMPS單體的純度對其后續的加工有著很大的影響，本文建立了一種快速分析AMPS單體純度的方法。

1 實驗部分

1.1 儀器、試劑與藥品

HP1100高效液相色譜儀（美國Agilent），包括G1311A四元梯度泵、G1315A二極管陣列檢測器和G1329A自動進樣器；Milli-Q超純水儀（美國Milli-Pore公司）；磷酸、磷酸二氫鉀均購自北京分析試劑廠，均為分析純；甲醇為Fisher試劑公司色譜純；水為超純水。

1.2 溶液配制

流動相的配制：以甲醇體積含量為5%的超純水溶液為溶劑，配制0.01mol/L KH2PO4磷酸鹽緩沖液，并以5%磷酸調節溶液pH為2.3，經0.45μm水系濾膜過濾后備用。

1.3 色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-AQ柱（5μm，4.6×150mm， Agilent）；流動相：0.01mol/L KH2PO4溶液（用5%H3PO4調節pH為2.3）-甲醇（體積比為95∶5）；檢測波長：210nm；流速：1.0mLmin-1；柱溫：20℃；進樣量：5μL。

1.4 標準曲線的制備

因實驗室沒有AMPS的標品，所以使用日本的7號樣品作為標準來測定其他樣品的相對純度。

表1 標準溶液配制

根據前述實驗步驟和條件，按表一將混合標準溶液（M溶液）逐級稀釋，得不同濃度的標準溶液，經0.45μm水系濾膜過濾后，以進樣5 μL進行色譜分析，以對照品濃度（X）對峰面積（Y）進行線性回歸，得工作曲線：

Y=3178.52682X-2.2716745 （r2=0.9999）

1.5 樣品的測定

將樣品按照1.4的方法配制，以5ul進樣量進入色譜分析，結果見表2。

表2 樣品AMPS純度（%）

1.6 討論

以上分析六種AMPS單體的純度，從測定結果（圖1）可以看出，樣品在色譜柱中的保留時間完全吻合，具有很高的精確度。在實際的AMPS聚合工作中，同等條件下2號樣合成效果最好，3號樣聚合效果最差，與色譜分析的純度結果一致，說明這種方法是可行的。所建立的分析方法不僅用于單體純度的測定，而且還可應用于聚合物開發、生產過程中單體轉化率的測定。

由于實驗室缺少AMPS的標品采用了日本產7號樣作為相對標準，在以后的檢測工作中應使用AMPS的標品作為標準物，以取得準確的數據。

圖1 AMPS各樣品色譜圖

2 結論

本文建立了高效液相色譜法測定AMPS單體的方法，該方法準確、簡便、快速，不僅適用于單體純度的測定，而且還可應用于聚合物開發、生產過程中單體轉化率的測定。該方法可用于目前市場上一些油田化學原料的檢測分析，便于區分不同批次樣品純度，方法簡便易操作。

【參考文獻】

[1]劉約權.現代儀器分析.2版[M].高等教育出版社，2006，5.

[2]于世林.高效液相色譜方法及應用.2版[M].北京：化學工業出版社，2005，6.

[3]張玉奎，張維冰，鄒漢法.液相色譜分析.2版[M].北京：化學工業出版社，2000.12.

[4]楊根元.實用儀器分析.3版[M].北京大學出版社，2006，2.

[5]謝音，屈小英，主編.食品分析[M].科學技術文獻出版社.

[6]楊松成.第十屆全國有機質譜學學術會議[Z].1999.

[7]S Strohschein， M Putsch， K Albert. J Pharm Biomed Anal，1999， 21：669[Z].

[8]劉珍.化驗員讀本《儀器分析》（下冊）.4 版[M].北京：化學工業出版社，2004：411 2 426.

[9]李海生，白海嬌.高效液相色譜應用中的若干問題與方法[J].天津藥學，2006（4）：6.

篇10

關鍵詞：高效液相色譜法 蘭索拉唑 含量測定

中圖分類號：O657 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2015）02（b）-0000-00

蘭索拉唑為苯并咪唑衍生物，為繼奧美拉唑之后的新一代的質子泵抑制劑，能有效地抑制胃酸分泌，治療胃酸相關性疾病。國外大量臨床應用證明，蘭索拉唑對消化性潰瘍有很好的療效，由血液吸收入壁細胞后作用于壁細胞質子泵即抑制H+/K+-ATP酶的活性，從而持續抑制胃酸分泌。

蘭索拉唑不耐酸，目前比較普遍給藥方式為口服的蘭索拉唑腸溶片和腸溶膠囊，起效較慢，而改變給藥途徑為靜脈給藥的注射用蘭索拉唑提高了蘭索拉唑的生物利用度，縮短了起效時間。為保證產品質量，我們擬用高效液相色譜法對其含量測定方法進行研究。

1 儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀；AlltimaTM C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；MS105型精密電子天平（梅特勒）；蘭索拉唑對照品（批號：100709-201304，含量為99.8%，中國食品藥品檢定研究院）；注射用蘭索拉唑（30mg，以C16H14F3N3O2S計，自制）；甲醇、三乙胺、磷酸均為色譜純，水為注射用水。

2 含量測定方法

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，AlltimaTM C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：甲醇-水-三乙胺-磷酸（600：400：5：1.5）[用磷酸溶液（110）調節PH值至7.3]，檢測波長為284nm；流速為1.0ml/min；柱溫30℃；進樣量20μl。調節流動相比例使蘭索拉唑峰的保留時間約為16分鐘。

2.2 測定法

精密稱定樣品，約含蘭索拉唑15mg，置100ml容量瓶中，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液5ml與甲醇-水（60：40）溶液適量，超聲使溶解，用甲醇-水（60：40）溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取蘭索拉唑對照品，同法測定，按外標法以峰面積計算，即得。

3 方法學試驗

3.1 準確度試驗

按照制劑處方，分別稱取18mg、15mg、12mg的蘭索拉唑對照品各3份，分別加入處方量的輔料于同一100ml容量瓶中，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液5ml與甲醇-水（60：40）溶液適量，超聲使溶解，用甲醇-水（60：40）溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，續濾液分別作為測定濃度120%、100%、80%的供試品溶液，按外標法以峰面積計算測得量和回收率，試驗結果見表1。

表1 準確度試驗結果

加入量（mg）

測得量（mg）

加樣回收率（%）

平均回收率（%）

RSD（%）

18.01

18.07

100.33

100.08

0.42

18.03

17.99

99.78

18.10

18.08

99.89

15.02

15.01

99.93

15.04

15.06

100.13

15.08

15.16

100.53

12.02

12.12

100.83

12.01

11.95

99.50

12.05

12.03

99.83

結果表明：含量測定平均回收率為100.08%，RSD為0.42%，準確度試驗符合測定要求。

3.2 線性范圍試驗

儲備液的制備：稱取蘭索拉唑對照品15mg，置50ml容量瓶中，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液5ml與甲醇-水（60：40）溶液適量，超聲使溶解，用甲醇-水（60：40）溶液稀釋至刻度，作為儲備液。

精密量取上述溶液3ml、4ml、5ml、6ml、7ml，分別置10ml容量瓶中，加甲醇水（60：40）溶液稀釋至刻度，作為線性試驗溶液。分別精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以蘭索拉唑濃度與相應峰面積計算線性回歸方程，y=13263x-368.8，相關系數r=0.9994。結果表明，蘭索拉唑濃度在0.09mg/ml～0.21mg/ml范圍內，具有良好的線性關系。

3.3 重復性試驗

取供試品，照含量測定項下方法試驗，重復測定6次，計算其平均值。

結果表明：6次測定的平均含量為標示量的101.98%，RSD為0.21%，平行性好，重復性試驗符合測定要求。

3.4 溶液穩定性試驗

取供試品，照含量測定項下方法試驗，每隔1小時測定一次，共測定5次，計算其平均值。

結果表明：蘭索拉唑平均含量為標示量的101.44%，RSD為0.36%，供試品溶液在室溫條件下5小時內穩定。

3.5 進樣精密度試驗

取供試品溶液，精密量取20μl，注入液相色譜儀，連續進樣6次。

結果表明：蘭索拉唑平均峰面積為11891.5，RSD為0.56%，該方法進樣精密度良好。

3.6 中間精密度試驗

取供試品，照含量測定項下方法試驗，變動因素為不同日期，不同人員。計算其平均值。

結果表明：蘭索拉唑平均含量為標示量的101.48%，RSD為0.41%，該測定方法中間精密度良好。

4 樣品含量測定

取三批供試品，照含量測定方法分別進行測定。結果表明：三批供試品含量均為98.0%～102.0%之間。

5 討論

建立的高效液相色譜法通過準確度試驗、線性范圍試驗、重復性試驗、溶液穩定性試驗、進樣精密度試驗及中間精密度試驗等方法學試驗，表明該含量測定方法具有準確、可靠、靈敏度高等特點，可有效控制注射用蘭索拉唑的含量。

參考文獻

[1]蘭索拉唑質量標準 中國藥典2010年版第一增補本 281.