導語：如何才能寫好一篇造價師學習計劃，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

【關鍵詞】 皂苷 抗腫瘤 溶血

【Abstract】 Objective To investigate the antineoplastic activity and blood cell haemolysis test on saponin. Methods The OD405 value of cell was detected after saponin treatment by the acid phosphatase assay (APA). The safety of saponin was examined by haemolysis and blood cell agglutination tests.Results The saponin significantly inhibited proliferation of BEL7402 cells. Apparent difference in OD405 value was detected after BEL7402 cells had been exposed to the saponin for 72 hours compared with control group（P＜0.05）. It was proved that 100μg·ml-1 saponin caused no haemolysis and blood cell agglutination in vitro.Conclusion The saponin I1 has concentrationdependent antineoplastic activity on human hepatocarcinoma cells. The safety of saponin was better in vitro.

【Key words】 saponin，antineoplastic， haemolysis

皂苷是廣泛存在于高等植物和某些低等動物中的一類具有廣泛藥理活性的三萜及甾體的糖綴合物，很多中草藥的主要活性成分都是皂苷類化合物。近年來隨著分離提取技術的不斷發展，多種薯蕷皂苷被分離出來，并不斷發現其新的生物活性，特別是在抗腫瘤、免疫調節、干預細胞信號轉導、抗炎、降血脂、抗艾滋病等方面的作用引起了人們的重視［1，2］。紫花茄皂苷是根據從紫花茄中分離出的甾體皂苷化學合成的薯蕷皂苷［3］，具有較強的抗腫瘤活性。我們的研究表明紫花茄皂苷可以誘導肝癌細胞凋亡［4］，在肝病用藥中很有前途。本研究對紫花茄皂苷進行體外抗腫瘤及溶血性實驗，結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及儀器 RPMI1640培養基購自Gibco BRL公司。DHanks 液，PBS緩沖液，0.1%EDTA溶液等均按常規配制［5，6］，新生牛血清（黑龍江省同江市江海生物公司），二氧化碳培養箱（Hereus公司)，96孔細胞培養板（Nunc公司），EL311酶標免疫檢測儀（BioTek公司），相差倒置顯微鏡（Olympus）。

1.2 實驗動物 新西蘭大白兔，雄性，體重2.5 kg，由濱州醫學院實驗動物中心提供。

1.3 藥物及配制 紫花茄皂苷I1由中國科學院生態研究環境中心生物技術室提供。以二甲基亞砜（DMSO）溶解后用生理鹽水稀釋至100 μg/ml，其中DMSO濃度為0.1％。

1.4 2%紅細胞懸液的制備 取10 ml新鮮新西蘭兔血，滴入含2500 IU肝素鈉的離心管中，加入10 ml生理鹽水，搖勻后2 500 r/min離心5 min，傾去上清液，再加生理鹽水混合離心，反復洗4 次，最后一遍用巴比妥鈉緩沖液洗至上清液呈無色透明，然后將所得紅細胞用巴比妥鈉緩沖液稀釋成紅細胞壓積百分比為2%的紅血細胞混懸液。

1.5 酸性磷酸酶法（acid phosphatase assay， APA）［7］檢測細胞存活率 取對數生長期細胞，消化后制成細胞懸液，按1×103/孔的密度接種于96孔板。培養24 h后，實驗組加入先用二甲基亞砜（DMSO）溶解、再經RPMI1640培養液稀釋至終濃度為1～10 μg·ml-1的皂苷；空白對照組加入RPMI1640培養液；溶劑對照組加入經同樣稀釋的溶劑，含0.01%～0.1%DMSO。實驗中每個濃度設8個平行孔，作用72 h后用APA法經EL311酶聯免疫檢測儀在405 nm波長處測定吸光度OD值，空白孔調零，實驗重復三次，取平均值。

1.6 溶血性實驗［8，9］ 在2 %的兔紅血細胞混懸液中，分別加入不同體積的100 μg·ml-1的皂苷Ⅰ1，輕輕搖勻置37℃水浴中保溫1 h后，2000 r/min離心5 min，每管取上清100 μl，經EL311酶聯免疫檢測儀于波長405 nm測量吸光度。第6組不加皂苷， 作為空白陰性對照；第7組不加皂苷并用蒸餾水代替巴比妥鈉緩沖液，作為充分溶血陽性對照（表1）。空白組調零，每組設3個平行孔，計算吸光度平均值。實驗重復三次，取平均值。

根據吸光度平均值按下式計算相對溶血率：

相對溶血率＝OD實驗組/ OD陽性對照×100％。 表1 各實驗組配比量表

1.7 統計學方法 所得數據以均數±標準差表示，采用SPSS 10.0統計分析軟件包分析統計學差異。

2 結果

2.1 紫花茄皂苷的體外抗腫瘤作用 不同濃度的紫花茄皂苷I1作用于BEL7402細胞72 h后，APA法測定結果如表2， 實驗表明，加藥組從2.0 μg·ml-1起，與對照組的OD405比較，即有顯著性差異(P＜0.05)，而且隨著皂苷濃度的增加抗腫瘤作用也增加， 呈劑量依賴性。 表2 紫花茄皂苷I1對BEL7402細胞抗腫瘤作用 注：與空白對照比較， *P＜0.05，P＜0.001

2.2 溶血性試驗評價 實驗結果見表3，不同體積的100 μg·ml-1的皂苷Ⅰ1作用于新鮮兔血后，根據公式計算出1、2、3組的溶血率均小于5%，表明100 μg·ml-1的皂苷Ⅰ1體外溶血實驗，不引起紅細胞的明顯凝集和溶血，安全性較好。

轉貼于

3 討論

惡性腫瘤或癌癥是目前威脅人類生命和健康的嚴重疾病之一，與心血管病、糖尿病并稱為現代社會的三大殺手，給人類的身心健康帶來巨大的損害。尋找有效的抗腫瘤方法具有強烈的社會需求，是多年來世界各國學者面臨的重大課題，并已取得大量成果。但目前一個重要的問題是，大部分治療腫瘤的方法給患者，尤其是晚期患者帶來的創傷過大。表3 皂苷Ⅰ1的溶血實驗無論是手術還是放、化療，其痛苦和代價有時不呰于腫瘤本身。大量研究結果表明，植物來源的抗腫瘤藥具有種類多、毒副作用小、不良反應少的特點。因此，從植物中尋找高效的抗腫瘤藥物已成為一種新的研究思路。

本文利用APA法，以抑制腫瘤細胞增殖為活性指標，對紫花茄皂苷進行活性篩選，確定出一些有較好生物活性和穩定性，具有深入研究價值的結構，對其進行深入研究。本實驗觀察了不同劑量的紫花茄皂苷I1對人肝癌BEL7402細胞的抗腫瘤作用。將BEL7402細胞與不同濃度的紫花茄皂苷共同孵育72h后測定各組吸光度值，結果表明紫花茄皂苷I1能明顯抑制體外培養的BEL7402細胞的生長(P＜0.05)， 并呈濃度依賴性。提示皂苷I1對BEL7402細胞具有明顯的體外抗腫瘤作用。

采用《中國藥典 》2005版中藥安全性檢查法應用指導原則“溶血與凝聚檢查法”，參照國家食品藥品監督管理局制定《化學藥物刺激性、過敏性和溶 血性研究技術指導原則 》相關內容進行皂苷的體外安全性評價。體外溶血實驗顯示皂苷不引起兔紅血細胞的溶血與凝集，安全性較好，有望成為臨床上的抗癌新藥。

【參考文獻】

［1］ Nakamura O，Mimaki Y，Nishino H，et al.Steroidal saponins from thebulbs of Lilium specciosum XL. nobilissimum star gazer and their antitumourpromoter activity［J］.Phytochem ， 1994 ，36 (2) :463467. ［2］ Hu K， Yao X. The cytotoxicity of methyl protodioscin against human cancer cell lines in vitro［J］.Cancer Invest，2003，21(3):389393.

［3］ Gu G， Du Y， Linhardt RJ. Facile synthesis of saponins containing 2，3branched oligosaccharides by using partially protected glycosyl donors［J］. J Org Chem，2004，69(16):54975500.

［4］ 馬朋， 顧國峰， 陳希， 等.合成紫花茄皂苷誘導人肝癌BEL7402細胞凋亡［J］.中國腫瘤臨床， 2005， 32(9): 481485.

［5］ 薛慶善. 體外培養的原理和技術［M］.北京：科學出版社，2001：53.

［6］ 金冬雁，黎孟楓，譯. Sambrook J， Fritch EF， Maniatis T，et al.分子克隆實驗指南［M］.第2版. 北京：科學出版社，1998: 888897.

［7］ 陳學清，楊曉鷗，潘國宗，等.酸性磷酸酶法在體外化療藥物篩選中的應用［J］.癌癥，1998，17(6):477478.

篇2

【關鍵詞】 全反式維甲酸;三氧化二砷;急性早幼粒細胞白血病

Clinical observalion of the combination of all-trans relinoic acid and arsenic trioxide for the treatment of acute promyelocytic leukemia

DONG Hai-lin,YANG Chang-jian,CHEN Xiao-liang.

【Abstract】 Objective To observe the eficacy and side efect of the all-trans retinoic acid(ATRA)and arsenic trioxide(As2O3)combination in acute promyeloeytic leukemia(APL).Methods Thirty-eight APL patients were treated with the ATRA and As2O3 combination.ATRA was given 25 mg/m2 every day and As2O3 was given 0.16 mg/(kg•d).Doses were adjusted according to adverse effects.Results Thirty-four patients achieved complete remission(CR),the CR rate was 89.5%.The time to achieve CR was(24.4士5.2)d.Two patients died due to intracranial hemorrhage.Conclusion The ATRA and As2O3in the treatment of APL can obtain a higher CR rate and a shorter duration for achieving CR.

【Key words】 Retinoic acid; Arsenic trioxide; Leukemia; Promyelocytic; Acute

2004年6月至2009年3月,我們采用全反式維甲酸(ATRA)聯合三氧化二砷(As2O3)治療38例急性早幼粒細胞白血病(API)患者。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本組38例初治API 患者,男20例,女18例;年齡16~64歲,平均40歲。所有患者均經形態學、細胞化學、細胞遺傳學確診。入院時血常規:WBC 0.4×109~48.52×109/L(平均值7.71×109/L),Hb 22~148 g/L(平均值66 g/L),PLT 2×109~208×109/L(平均值26×109/L)。7例合并出凝血指標(Pr、APIT、DDI、FDP)異常。骨髓象檢查:骨髓增生活躍或極度活躍,異常早幼粒細胞占0.346~0.997(平均值0.898),外周白血病細胞占0.02~0.97(平均值0.63)。

1.2 方法 確診者均予ATRA 25 mg/(m2•d)口服,連用30 d。As2O3 0.16 mg/(kg•d)加入5%葡萄糖液500 ml中靜滴,21~28 d為一療程。觀察ATRA相關副反應及完全緩解(CR)時間,CR標準參照張之南主編《血液病診斷及療效標準》[1]。每2~3 d復查血常規,每周復查肝、腎功能,監測凝血指標。治療前或療程中如WBC≥20×109/L,加用小劑量高三尖杉酯堿1 mg/d聯合化療,根據外周WBC變化決定使用時間,一般不超過7 d。治療開始即預防性應用保肝類藥物。ALT和(或)AST在40~120 U/L時As2O3減半,≥120 U/L時停用As2O3,待ALT或AST恢復正常后再用As2O3。若患者出現ATRA綜合征且不能耐受,則減少ATRA劑量或停藥,待癥狀減輕或消失后再逐漸加量應用。

1.3 統計學處理 使用SPSS 13.0 統計軟件分析,采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 聯合治療APL的總體療效 ATRA聯合As2O3治療38例APL患者。共34例獲得CR,CR率89.5%,獲得CR所需時間平均為(24.4±5.2)d,2例在療程中因并發顱內出血而死亡。

2.2 高WBC和低WBC APL患者的療效比較 確診時26(68.4%)WBC0.05)。見表1。

2.3 外周血象變化 33例(86.8%)治療1~2周時白細胞、血小板開始升高,第15~20天達高峰,第23~34天降至最低水平,其后逐步恢復至正常水平。紅細胞數和血紅蛋白治療第14~21天后逐漸升高,第30~35天達正常水平。

2.4 骨髓象變化 治療前骨髓增生程度均為活躍或極度活躍,治療結束后,變為減低或活躍;粒紅細胞比例接近正常,骨髓白血病細胞比例正常;治療前全片巨核細胞計數偏低,治療后恢復正常。

2.5 不良反應 消化系統癥狀(惡心、嘔吐、食欲減退)31例(81.6%)。肝功能損害17例(44.7%),皮膚損害(皮疹、皮膚及口唇干燥)5例(13.2%)。有發熱、頭痛、肌肉或關節疼痛4例(10.5%),均經對癥處理好轉。1例在As2O3應用6 d后出現急性腎功能衰竭,遂停用As2O3,予以對癥處理,1周后腎功能恢復正常。

3 討論

急性早幼粒細胞白血病(Acute Promyelocytic Leukemia,APL)是FAB分型中急性非淋巴細胞白血(Acute nonlymphocytic Leukemia,ANLL)的M3亞型,占所有ANLL的10%~15%,具有獨特的臨床表現,細胞形態學,細胞遺傳學和分子生物學特征。ATRA治療APL的機理為誘導異常早幼粒細胞向成熟階段細胞轉化,而不同于化療直接殺傷腫瘤細胞。因此可降低DIC的發生率[2]。研究表明砷劑作用機制[3]:干擾細胞代謝及氧化過程、細胞調亡及誘導分化作用、誘導線粒體跨膜電位下降及調亡誘導分子活化,使ADCC發生程序死亡,同時延緩細胞周期,并抑制細胞生長。砷劑的使用可使APL的治療更進一步,高濃度的As2O3選擇性地誘導APL細胞凋亡,低濃度則誘導分化,可彌補ATRA只能誘導細胞分化的不足;而兩者對NB4細胞在誘導分化和凋亡方面具有協同作用。另發現,不同濃度As2O3能快速調節和降解PML-RARa[4]。

以往報道,單用ATRA治療、[5,6]ATRA+化療和單用As2O3治療的CR率均為85%~95%,本組CR率與上述療法比較無顯著差異,但獲得CR所需時間少于單用ATRA和單用As2O3者。高白細胞綜合征、肝功能損害、黏膜干燥是ATRA的主要不良反應,As2O3也有類似不良反應,且肝臟受損更明顯,所以二藥聯合使用后其不良反應是否加重,是眾所關心的問題。從本組的治療結果來看,兩藥聯合使用引起的高白細胞綜合征和肝功能異常不良反應并不比單獨使用ATRA或As2O3時明顯。本組兩藥聯合治療中加服小劑量高三尖杉酯堿及保肝藥物,減少了高白細胞綜合征及肝損害的發生,與高松等的研究結果相一致[7]。其他少見的不良反應均不影響正常治療。故兩藥的聯合使用完全可在初發APL患者中進行。但分子水平緩解狀況目前與單用ATRA或As2O3比較并未表現出顯著的優勢。這可能與病例數尚少,隨訪時間短有一定關系。因此ATRA聯合As2O3的長期療效仍需做進一步的臨床研究。

參考文獻

[1] 張之南,沈悌.血液病診斷與療效標準.科學技術出版社,1998:214-218.

[2] Tallman MS.Gurative steategies in acute promyelocytic leukaemia.Washington DC:Hematology 2003 American Society of Hematology Education Program Book,2003:90-101.

[3] 王思力,趙輝,韓忠朝.三氧化二砷治療初發急性早幼粒細胞白血病機制及方法.臨床血液學雜志,2005,18(3):190.

[4] Douer D.New advances in the treatment of acute promyelocytic leukaemia.Int J Hematol,2003,76(2):178.

[5] 劉元肪,沈志祥,陳曉,等.全反式維甲酸聯合三氧化二砷治療初發急性早幼粒細胞白血病的近期療效觀察.中華血液學雜志,2003,24(1):25-27.