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【摘要】角膜移植術后免疫排斥反應是角膜移植失敗的主要原因。免疫耐受是指抗原特異性的免疫無應答。誘導受體產生針對移植物的免疫耐受是徹底克服移植排斥反應的根本方法。角膜移植排斥反應是一個復雜且有多因素參與的過程。多種免疫細胞在抑制角膜移植術后排斥反應、誘導免疫耐受中，發揮著關鍵作用。因此，我們就近幾年通過細胞誘導角膜移植免疫耐受的機制作一綜述。

【關鍵詞】角膜移植;免疫耐受;排斥反應;細胞

角膜移植術后免疫排斥反應是一個多種免疫細胞和免疫分子參與的復雜的免疫應答。雖然存在免疫赦免和前房相關性免疫偏離，但排斥反應仍是角膜移植失敗的主要限制因素[1]。誘導角膜移植免疫耐受是克服角膜移植排斥反應的關鍵。而參與角膜移植排斥反應的多種免疫細胞，在阻斷免疫應答、誘導免疫耐受中，發揮著重要作用職稱論文。

1樹突狀細胞

樹突狀細胞(dendriticcell,DC)是由美國Rockfeller大學Steinman等[2]于1973年在分離小鼠脾細胞分離中被發現，因其表面具有許多樹枝狀的突起而得名。DC是目前所知的機體內功能最強的、專職的、唯一誘導初始T細胞活化的抗原遞呈細胞(antigenprocessingcell，APC)，是適應性T細胞免疫應答的始動者。DC是一組異質的細胞群體，其異質性主要表現在不同的細胞起源、不同的成熟狀態和不同的功能等方面。未成熟DC低表達MHCⅠ/Ⅱ類分子，缺乏免疫應答所必需的CD40，B7(CD80，CD86)等共刺激分子和黏附分子，缺少激活T細胞免疫應答所必需的第二信號[3]，從源頭抑制免疫應答。過去認為DC主要分布在角膜周邊上皮及淺基質層，少量分布于偏中央區，中央區缺乏，Hamrah等[4]發現成人角膜的中央上皮及其淺基質層存在未成熟DC和前體DC，骨髓源的未成熟的存在是DC形成前房相關性免疫偏離(anteriorchamberassociatedimmunedeviation,ACAID)的一個重要原因。Raimondi等[5]和NouriShirazi等[6]認為，未成熟的自體DC或供體DC作為誘導移植免疫耐受的啟動子，通過致敏受體的T細胞誘導免疫耐受,從而延長移植物的存活時間。未成熟DC誘導免疫耐受的機制表現為：(1)誘導T細胞無能：未成熟DC表面表達低水平的MHC分子，幾乎不表達CD40，CD80，CD86等激活T細胞所必須的輔助分子，因此不能活化T細胞導致T細胞無能或低反應;(2)促進Th1/Th2偏離：Khanna等[7]將肝臟DC皮下注射到同種異體鼠內，可誘導Th2細胞增生，促進Th2細胞因子分泌，誘導免疫耐受;(3)誘導調節性T細胞的產生:Min等[8]發現未成熟DC能夠刺激初始T細胞轉化成調節性T細胞，反過來，調節性T細胞也能抑制DC的成熟。未成熟DC與調節性T細胞如此反復相互激發形成反饋環路，阻礙移植物排斥;(4)促進T細胞凋亡：最近研究發現未成熟DC細胞具有一種DEC205受體，可以和許多抗原結合，其結合效率比其他同源受體高30～100倍。在穩態時，將antiDEC配體選擇性靶向結合到DC細胞上，T細胞首先大量增殖，然后大部分激活T細胞在1wk內凋亡，實驗小鼠獲得免疫耐受[9];(5)高表達IDO誘導免疫耐受：吲哚胺2，3二氧化酶(indoleamine2,3dioxygenase，IDO)是將色氨酸轉化為犬尿氨酸的限素酶，色氨酸是T細胞、尤其是抗原活化的T細胞增殖所必需的氨基酸，IDO的活性表達導致T細胞微環境中色氨酸的耗竭使細胞處于一種“色氨酸饑渴”狀態引起T細胞的增殖抑制。研究證實，正常角膜有低水平IDOmRNA和蛋白表達，IDO在角膜的表達明顯提高角膜植片的存活時間[10];(6)細胞因子模式：IL10，TGFβ等細胞因子通過上調免疫抑制性受體ILT3，ILT4是DC耐受的分子機制[11]。研究證實，未成熟樹突狀細胞分泌IL10在免疫耐受中起重要作用[12];(7)NFκB(nuclearfactorκB，NFκB)是一種細胞內普遍存在的轉錄因子,具有啟動基因轉錄的功能。實驗證實，自身免疫性疾病、變態反應、心肌再灌注損傷、機體對移植物的排異反應以及某些神經性疾病中均可發現NFκB呈過度激活狀態[13]。趙巍等[14]證實,NFκB參與了異體角膜移植排斥反應的調控,在免疫排斥反應的發生過程中發揮重要作用。Yoshimura等[15]研究證明對于阻斷樹突狀細胞的抗原遞呈以及抑制T細胞依賴的免疫應答,NFκB是一個有效的靶基因。

2調節性T細胞

調節性T細胞(regulatoryTcells,Treg)是一類表面高表達IL2受體α鏈(CD25)、胞質中表達Foxp3轉錄因子的CD4+T細胞，在免疫應答的負調節及自身免疫耐受中發揮重要作用。眼源性抗原信號通過眼局部的抗原遞呈細胞經血到達脾臟后,選擇性地激活Treg,抑制抗原特異性的遲發型超敏反應(delayedtypehypersensitivity,DTH)和補體結合性抗體的產生發展,保留抗原特異致敏的細胞毒性T細胞(cytotoxicTlymphocyte,CTL)反應,這種現象叫前房相關性免疫偏離(anteriorchamberassociatedimmunedeviation,ACAID)[16]。ACAID是全身免疫系統對前房內抗原產生的一種特殊的免疫偏離現象,造成全身性的免疫炎癥反應DTH被抑制,保護眼球免遭炎癥破壞[17]。誘導ACAID必須具備以下條件:調節性T淋巴細胞，抗原注射后保持眼球完整性不少于3d、脾臟和正常的眼部微環境。無論是可溶性抗原卵蛋白(OVA)還是同種異基因抗原(脾細胞懸液)，都必須通過調節性T淋巴細胞的免疫調節作用才能誘導產生ACAID[18]。最近研究證實在鼠角膜移植模型中，Treg在區域引流淋巴結中而不是在外周免疫反應中發揮抑制功能[19]。

3自然殺傷T細胞

自然殺傷T細胞(naturalkillerT,NKT)是一種新型淋巴細胞,與T細胞和NK細胞不同,被稱為第4類淋巴細胞，其同時表達T細胞表面受體和NK細胞表面標志,發育受CD1分子限制。CD1d反應性NKT表達Vα14Jα281TCR，而敲除Jα281的小鼠,不能產生抗原特異性Treg和ACAID。NKT來源的IL10對抗原特異性Treg細胞的產生和ACAID的誘導是非常重要的[20]。Sonoda等[21]將正常小鼠和去除NKT細胞的小鼠分別作為受體進行同種異體移植，在移植12wk后,正常小鼠和NKT細胞敲除鼠的植片存活率分別為50%和0,NKT細胞對于植片的存活是必要的。劉穎等[22]在大鼠角膜移植手術結束時結膜下僅注射一次細胞,就能使植片存活時間延長,直到術后第26d植片才發生排斥,存活時間遠較對照組長。Ly49C/I為表達于NK，NKT，γδT等細胞的一種抑制性受體，研究證實，Ly49C/I+CD4+NKT細胞上調IL10的表達，降低IFNγ，在眼的免疫耐受中起重要作用[23]。

4γδT細胞

根據表達TCR的類型，T細胞分為αβT細胞和γδT細胞。執行固有免疫功能的γδT細胞作為黏膜淋巴組織的重要成員，參與構成了機體的第一道防線?；罨摩忙腡分泌IL2，IL4，IFNγ，TNFα，TGFβ，IL10等多種細胞因子，參與免疫調節。研究發現,γδT細胞與ACAID密切相關,在攜帶抗γδ抗體鼠的前房注入可溶性抗原或同種異體抗原(脾細胞)后不能誘導產生ACAID。在基因敲除鼠的實驗中，功能性的γδT細胞的缺少不能形成ACAID。角膜移植前用GL3Ab阻滯γδT細胞的實驗，確定了γδT在ACAID形成中的重要性[24]。預先用抗鼠δ鏈單克隆抗體的C57BL/6小鼠或是γδT細胞受體缺陷的小鼠δ(/)不能誘導ACAID[25]。因此γδT誘導ACAID，誘導角膜移植免疫耐受是必需的。

目前，角膜病在致盲的各種原因中占第2位，而角膜移植是治療頑固性角膜病的最終手段。但角膜移植排斥反應一直都是角膜移植失敗的主要原因。誘導免疫耐受是徹底克服角膜排斥反應的理想方法。多種參與免疫活動的免疫細胞如樹突狀細胞、調節性T細胞、自然殺傷T細胞、γδT細胞等在抑制角膜移植術后排斥反應，誘導免疫耐受中的作用已得到實驗證實。這為我們徹底克服角膜移植排斥反應，最終治療角膜病，提供了新的思路。

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