導(dǎo)語：探析隱丹參酮對淋巴細(xì)胞藥理作用一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

【摘要】目的了解隱丹參酮對正常SD大鼠和膠原性關(guān)節(jié)炎大鼠細(xì)胞免疫功能的影響。方法采用雞II型膠原誘導(dǎo)大鼠膠原性關(guān)節(jié)炎模型，采用MTT法檢測LPS誘導(dǎo)的脾臟B淋巴細(xì)胞、ConA刺激的胸腺T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)。結(jié)果隱丹參酮體外用藥，低濃度時(shí)對正常SD大鼠的淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)具有促進(jìn)作用，隨著濃度的升高開始出現(xiàn)抑制作用；隱丹參酮低濃度時(shí)對膠原性關(guān)節(jié)炎大鼠ConA誘導(dǎo)的胸腺細(xì)胞低下的免疫功能具有增強(qiáng)作用，高濃度時(shí)對LPS誘導(dǎo)的脾細(xì)胞亢進(jìn)的免疫功能具有抑制作用。結(jié)論隱丹參酮對正常大鼠的免疫功能具有濃度和機(jī)能依賴性的雙向免疫調(diào)節(jié)作用，對膠原性關(guān)節(jié)炎大鼠異常的免疫功能具有一定的改善作用。

【關(guān)鍵詞】隱丹參酮；淋巴細(xì)胞；膠原性關(guān)節(jié)炎；大鼠

隱丹參酮(cryptotanshinone，CT)是從中藥丹參中提取的單體化合物，有明確的化學(xué)結(jié)構(gòu)（C19H20O3，Mw296.35）。

丹參作為一種傳統(tǒng)中藥在我國沿用已久，具有祛瘀止痛、活血通經(jīng)、清經(jīng)除煩的功效，主治冠心病、心絞痛、心煩不眠、月經(jīng)不調(diào)等癥。研究表明，隱丹參酮對角叉菜膠引起的大鼠足跖腫脹、對蛋清引起的大鼠急性關(guān)節(jié)腫等均有明顯的抑制作用。本文主要觀察了CT對正常SD大鼠和膠原性關(guān)節(jié)炎(collageninducedarthritis，CIA)大鼠胸腺T淋巴細(xì)胞、脾臟B淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響。

一、材料與儀器

1.1動(dòng)物雄性SpragueDawley(SD)大鼠，體質(zhì)量（160±20）g，安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號：皖醫(yī)實(shí)動(dòng)準(zhǔn)第01號。

1.2藥物與試劑隱丹參酮(CT)，批號：050428，由中山大學(xué)藥學(xué)院提供；卡介苗，每支50mg，上海生物制品所生產(chǎn)；雞II型膠原(CII)，上海本草生物醫(yī)學(xué)研究所產(chǎn)品；DMEM培養(yǎng)粉，美國Gibco公司產(chǎn)品；刀豆蛋白A(concanavalinA，ConA)、脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)：美國Sigma公司產(chǎn)品；二甲亞砜（DMSO，分析純），天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所產(chǎn)品；溴化3（4，5?捕?甲基噻唑2）2，5?捕?甲苯基四氮唑（四甲基偶氮唑藍(lán)，MTT），美國Sigma公司產(chǎn)品。

1.3儀器Napco6100型CO2培養(yǎng)箱（美國杜邦公司產(chǎn)品）；GL20A全自動(dòng)高速冷凍離心機(jī)（湖南儀器儀表總廠離心機(jī)廠）；EL301stripreader（美國BioTeK公司）。

二、方法

2.1藥物的配制CT先用無水乙醇溶解，再用無血清的DMEM培養(yǎng)液配制所需的5個(gè)濃度。刀豆素A（ConA），脂多糖（LPS）分別用無血清的DMEM培養(yǎng)液配制。

2.2大鼠CIA模型的建立將CⅡ溶于0.1mol?L1醋酸中，在4℃下攪拌使之充分溶解，質(zhì)量濃度為2g?L-1，置4℃冰箱過夜，再將滅活的卡介苗置于液體石蠟中，配成0.5g?L-1的完全弗氏佐劑，將二者等體積混合、乳化，制成CⅡ乳劑。將該乳劑于大鼠的右后足趾皮內(nèi)注射0.1ml致炎，第7天尾根部近1/3處和背部3～5點(diǎn)皮內(nèi)注射該乳劑0.1ml作為激發(fā)注射。

2.3胸腺T淋巴細(xì)胞，脾臟B淋巴細(xì)胞增殖功能測定（MTT法）分別取正常大鼠和致炎后35dCIA大鼠，無菌取胸腺和脾制成淋巴細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞至終濃度為1×107/ml，DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，在96孔培養(yǎng)板上每孔加入100μl細(xì)胞懸液，50μlConA（終濃度5μg/ml）或LPS（終濃度6μg/ml），50μl不同濃度的CT（0.1，1，10，100，1000μg/ml）培養(yǎng)48h，終止培養(yǎng)前4h加入20μlMTT(5mg/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)4h后加入150μlDMSO終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀檢測（490nm）吸光度(absorbance，A)值，結(jié)果以3個(gè)復(fù)孔A值的均值表示。

2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果以±s表示，組間差異性比較采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件計(jì)算。

三、結(jié)果

3.1CT對正常大鼠脾細(xì)胞和胸腺細(xì)胞增殖影響

由表1可知，LPS誘導(dǎo)的脾臟B淋巴細(xì)胞和ConA刺激的胸腺T淋巴細(xì)胞增殖較正常對照顯著增強(qiáng)，差別有顯著意義（P<0.01）；而CT不同濃度對其增殖表現(xiàn)出不同的效應(yīng)，低濃度時(shí)進(jìn)一步促進(jìn)其增殖，1μg/ml時(shí)對B、T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的促進(jìn)作用均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。隨著濃度的增高，出現(xiàn)抑制作用，100，1000μg/ml劑量組對LPS誘導(dǎo)的B淋巴細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用，1000μg/ml劑量組對ConA誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用，分別與刺激劑誘導(dǎo)的正常組比較，差異有顯著意義（P<0.01）。表1CT體外對正常大鼠ConA誘導(dǎo)的胸腺細(xì)胞和LPS誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響（略）

3.2CT對CIA大鼠脾細(xì)胞和胸腺細(xì)胞增殖反應(yīng)的改善作用

由表2中可知，在CIA大鼠中LPS誘導(dǎo)的脾臟B淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)較正常對照顯著增強(qiáng)；ConA誘導(dǎo)的胸腺T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)卻較正常對照組明顯降低，差別均有顯著意義（P<0.01）；而CT不同濃度對其增殖表現(xiàn)出不同的效應(yīng)，0.1μg/ml時(shí)對CIA大鼠低下的胸腺T淋巴細(xì)胞增殖具有明顯的改善作用（P<0.05），而高濃度時(shí)（100，1000μg/ml）對LPS誘導(dǎo)的B淋巴細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用（P<0.01）。表2CT體外對CIA大鼠ConA誘導(dǎo)的胸腺細(xì)胞和LPS誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響（略）

四、討論

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoidarthritis，RA)是一種慢性、系統(tǒng)性自身免疫病。RA以關(guān)節(jié)滑膜炎為主要特征，表現(xiàn)在多種炎性因子的刺激下，關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞類腫瘤樣無限增生，對關(guān)節(jié)軟骨、骨造成進(jìn)行性破壞，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能障礙。wWw.gWyoO

到目前為止，RA的致病原因和發(fā)病機(jī)制尚不清楚。近年的研究發(fā)現(xiàn)RA的免疫應(yīng)答是一個(gè)免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，當(dāng)抗原被提呈后，T細(xì)胞激活發(fā)生增殖和分化，不同的T細(xì)胞亞群及單核細(xì)胞分泌不同的細(xì)胞因子。這些細(xì)胞因子環(huán)境、抗原接觸情況和人類白細(xì)胞抗原基因表型共同調(diào)節(jié)T細(xì)胞的分化、B細(xì)胞的成熟和抗體合成、抗原抗體反應(yīng)以及細(xì)胞免疫的獨(dú)特應(yīng)答。這些細(xì)胞分泌的正性調(diào)節(jié)細(xì)胞因子、炎性介質(zhì)以及自身抗體使自身組織受到攻擊，產(chǎn)生自身免疫。本研究通過體外實(shí)驗(yàn)觀察到CT低濃度時(shí)對正常SD大鼠的淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)具有促進(jìn)作用，隨著濃度的升高開始出現(xiàn)抑制作用，表明CT對正常大鼠的免疫功能具有濃度和機(jī)能依賴性的雙向免疫調(diào)節(jié)作用。本研究表明，CT對CIA大鼠異常的免疫功能具有一定的改善作用，低濃度時(shí)（0.1μg/ml）對CIA大鼠ConA誘導(dǎo)的胸腺細(xì)胞低下的免疫功能具有增強(qiáng)作用，高濃度時(shí)（100，1000μg/ml）對LPS誘導(dǎo)的脾細(xì)胞亢進(jìn)的免疫功能具有抑制作用。提示CT可能通過改善CIA大鼠異常的免疫功能而治療RA，其進(jìn)一步的作用和機(jī)制有待深入研究。

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