男寶片的健脾作用探討論文
時(shí)間:2022-02-09 10:44:00
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1材料與儀器
1.1藥品與試劑男寶片,石河子市中醫(yī)醫(yī)院研制,新疆維吾爾藥廠生產(chǎn),每片相當(dāng)于含生藥0.41g,批號(hào)為990421,使用時(shí)將藥片研磨,加雙蒸水配成每毫升含藥0.025,0.05,0.1g或0.035,0.07,0.14g的混懸液,古漢養(yǎng)生精片,湖南古漢集團(tuán)股份有限公司產(chǎn)品,每片0.4g,(97)衛(wèi)藥準(zhǔn)字Z-125號(hào),具補(bǔ)腎益脾、健腦安神等功能,批號(hào)990425,使用時(shí)將藥片研磨,加雙蒸水配成每毫升含藥0.05或0.07g的混懸液,氫化可的松,湖北制藥廠出品,鄂衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1981)第001709號(hào),每支5ml/25mg,使用時(shí)灌胃0.2ml/只,戊巴比妥鈉,上海行知化工廠出品,批號(hào)951019,使用時(shí)用生理鹽水配成1%的溶液,40mg/kg腹腔注射,乙烯雌酚,上海第九制藥廠產(chǎn)品,批號(hào)980403,使用時(shí)用麻油稀釋配成200ng/ml的溶液,黃體酮注射液,上海第九制藥廠產(chǎn)品,批號(hào)980402,使用時(shí)用麻油稀釋配成500μg/0.1ml的溶液,實(shí)驗(yàn)前4h皮下注射500μg/只。生大黃液,稱取一定重量的大黃浸泡后用溫火煎煮,紗布過濾后,在80℃濃縮成每毫升含生藥1g的藥液;D-木糖臨床診斷試劑,南京建成生物工程研究所提供,批號(hào)990826;D-木糖(D-Xylose)Sigma,進(jìn)口分裝,批號(hào)980812,北京化學(xué)試劑公司提供;地塞米松磷酸鈉注射液,江蘇省溧陽市制藥廠,5mg/ml安瓿,蘇衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1987)218212-10號(hào),批號(hào)951025,;Alsever`s液,葡萄糖2.05g、檸檬酸鈉8.0g、氯化鈉4.2g加雙蒸水至1000ml溶解后,高壓消毒,作為綿羊紅細(xì)胞(SRBC)保存液;都氏液,碳酸氫鈉1.0g,氰化鉀0.05g,高鐵氰化鉀0.2g加雙蒸水1000ml溶解,用于測(cè)定血紅蛋白;綿羊紅細(xì)胞(SRBC)自治區(qū)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供;免疫球蛋白G、M試劑,上海長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司提供;RPMI-1640培養(yǎng)基,美國(guó)GIBCO產(chǎn)品;刀豆蛋白A(ConA),美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品。植物血球凝集素(PHA),美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品;牛血清,北京華美公司提供;四甲基偶氮唑(MTT),北京華美公司提供;Hank`s液,南京建成生物工程研究所提供;酵母多糖,Sigma公司產(chǎn)品,使用時(shí)用PBS溶液配成濃度為10mg/ml的混懸液;魯米諾,Sigma公司產(chǎn)品,使用時(shí)準(zhǔn)確稱取1.77mg加PBS至4.8ml溶解,調(diào)節(jié)pH值為7.2備用;金黃色葡萄球菌,新疆醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室提供,菌號(hào)26003;I125睪酮放射免疫分析測(cè)定盒北京北方生物技術(shù)研究所產(chǎn)品,(94)衛(wèi)藥準(zhǔn)字R-29號(hào),批號(hào)990611。
1.2動(dòng)物昆明種,NIH小鼠,Wistar大鼠,均由新疆維吾爾自治區(qū)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,二級(jí),合格證書:新疆醫(yī)動(dòng)字(94),16-001號(hào)。
2方法與結(jié)果[1~3]
2.1對(duì)小鼠小腸推進(jìn)性運(yùn)動(dòng)的影響(墨汁法)選取小鼠57只,雌雄兼用,體重(18.9+1.0)g。隨機(jī)分成5組,即正常對(duì)照組、古漢養(yǎng)生精片組(0.7g/kg,ig,qd×10d)、男寶片小劑量組(0.5g/kg,ig,qd×10d)、男寶片中劑量組(1.0g/kg,ig,qd×10d)、男寶片大劑量組(2.0g/kg,ig,qd×10d)。給藥第10天動(dòng)物禁食12h,用50%碳素墨汁生理鹽水溶液0.2ml/10g體重灌胃,20min后脫頸椎處死,立即剖腹,將消化管幽門至直腸末端完整地摘出,不加牽引平鋪于玻璃板上,輕輕將小腸拉成直線,測(cè)量腸管長(zhǎng)度作為小腸總長(zhǎng)度。以幽門至墨汁前沿的距離為“墨汁在腸內(nèi)推進(jìn)距離”,用公式計(jì)算墨汁推進(jìn)百分率,并注意觀察各組小鼠小腸是否增大。
墨汁推進(jìn)率(%)=墨汁在腸內(nèi)推進(jìn)距離(cm)腸管全長(zhǎng)(cm)×100%
結(jié)果,3個(gè)不同劑量組的男寶片能降低小腸墨汁推進(jìn)率,提示該藥對(duì)腸蠕動(dòng)有抑制作用。結(jié)果見表1。表1男寶片對(duì)小鼠小腸運(yùn)動(dòng)的影響(墨汁法)(略)
2.2對(duì)生大黃所致脾虛小鼠耐常壓缺氧的影響選取小鼠80只,雌雄兼用,體重(20.4±1.3)g,隨機(jī)分8組,即正常對(duì)照組、長(zhǎng)正常組、脾虛模型組、長(zhǎng)脾虛模型組、古漢養(yǎng)生精片組(0.7g/kg,ig,qd×10d)、男寶片小劑量組(0.7g/kg,ig,qd×10d)、男寶片中劑量組(0.7g/kg,ig,qd×10d)、男寶片大劑量組(0.7g/kg,ig,qd×10d)。正常組和長(zhǎng)正常組不進(jìn)行任何處理,其余組給生大黃液(1g/只,ig×8d),第8天造成脾虛小鼠模型。模型建立后正常組和脾虛模型組小鼠進(jìn)行常壓缺氧實(shí)驗(yàn),其余6組繼續(xù)給生大黃或和給藥治療,治療第9天,末次給藥后1h將小鼠放入盛有15g鈉石灰的廣口瓶?jī)?nèi)(體積200ml),用凡士林涂抹瓶口蓋嚴(yán),使之不漏氣,立即計(jì)時(shí),以呼吸停止為指標(biāo),觀察小鼠因缺氧而死亡的時(shí)間。
結(jié)果,3個(gè)不同劑量的男寶片明顯延長(zhǎng)脾虛小鼠常壓缺氧條件下存活時(shí)間,提示該藥有明顯的增強(qiáng)脾虛小鼠耐缺氧能力。結(jié)果見表2。表2男寶片對(duì)生大黃致脾虛小鼠耐常壓缺氧的影響(略)
2.3對(duì)生大黃致脾虛小鼠抗疲勞能力的影響(游泳實(shí)驗(yàn))選取小鼠60只,雌雄兼用,體重(19.4+1.2)g,隨機(jī)分6組,即正常對(duì)照組、脾虛模型組、古漢養(yǎng)生精片組、男寶片3個(gè)不同劑量組。正常組不進(jìn)行任何處理,其余5組小鼠ig生大黃藥液1g/只(1ml/只),連續(xù)給藥8d,造成脾虛模型。并于第9天起按下述劑量進(jìn)行治療,同時(shí)繼續(xù)ig生大黃藥液,即古漢養(yǎng)生精片組(0.7g/kg,ig,qd×9d);男寶片小劑量組(0.5g/kg,ig,qd×9d);男寶片中劑量組(1.0g/kg,ig,qd×9d);男寶片大劑量組(2.0g/kg,ig,qd×9d),治療9d后小鼠各種癥狀消失。第17天末次給藥1h后,在(15±1)℃冷水中進(jìn)行游泳實(shí)驗(yàn),以下沉水底5s以上,未能再上浮為死亡指標(biāo),記錄小鼠游泳存活時(shí)間。
結(jié)果,3個(gè)不同劑量的男寶片組使脾虛小鼠游泳時(shí)間明顯延長(zhǎng)。結(jié)果見表3。表3男寶片對(duì)生大黃致脾虛小鼠耐常壓缺氧的影響(略)
2.4對(duì)生大黃所致脾虛耐高溫的影響選取小鼠60只,雌雄兼用,體重(20.7±0.9)g。隨機(jī)分6組,即正常對(duì)照組、脾虛模型組、古漢養(yǎng)生精片組、男寶片3個(gè)不同劑量組。正常組不進(jìn)行任何處理,其余5組小鼠ig生大黃藥液1g/只(1ml/只),連續(xù)給藥8d,造成脾虛模型。并于第9天起按下述劑量進(jìn)行治療,同時(shí)繼續(xù)ig生大黃藥液,即古漢養(yǎng)生精片組(0.7g/kg,ig,qd×9d);男寶片小劑量組(0.5g/kg,ig,qd×9d);男寶片中劑量組(1.0g/kg,ig,qd×9d);男寶片大劑量組(2.0g/kg,ig,qd×9d),治療9d后小鼠各種癥狀消失。第17天末次給藥1h后,將小鼠每只分別放入45℃恒溫孵育箱1h,以每組小鼠死亡數(shù)為指標(biāo)進(jìn)行耐高溫試驗(yàn)。結(jié)果進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。
結(jié)果,3個(gè)不同劑量的男寶片組可提高脾虛小鼠45℃環(huán)境中的生存能力,尤其是大劑量組作用明顯。結(jié)果見表4。表4男寶片對(duì)生大黃致脾虛小鼠耐高溫能力的影響(略)
2.5對(duì)生大黃所致脾虛耐寒能力的影響選取小鼠90只,雌雄兼用,體重(20±2)g。隨機(jī)分9組,即正常對(duì)照組、長(zhǎng)正常對(duì)照組、脾虛模型組、長(zhǎng)脾虛模型組、古漢養(yǎng)生精片組(0.7g/kg,ig,qd×9d)、男寶片小劑量組(0.5g/kg,ig,qd×9d)、男寶片中劑量組(1.0g/kg,ig,qd×9d)、男寶片大劑量組(2.0g/kg,ig,qd×9d)、自然恢復(fù)組(生大黃液1g/只,ig×8d)。正常對(duì)照組和長(zhǎng)正常對(duì)照組不進(jìn)行任何處理,其余組給生大黃液(1g/只,ig×8d),第8天造成脾虛小鼠模型。模型建立后,正常組和脾虛模型組小鼠在-5℃進(jìn)行耐寒試驗(yàn);其余除自然恢復(fù)組以外繼續(xù)給生大黃或和給藥治療,治療第9天,給藥后1h將小鼠分別放入-5℃恒溫箱2h,以每組小鼠死亡數(shù)為指標(biāo)進(jìn)行耐寒實(shí)驗(yàn),結(jié)果進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。
結(jié)果,3個(gè)不同劑量的男寶片可提高寒冷環(huán)境中脾虛小鼠的生存百分率,大劑量組作用更明顯。結(jié)果見表5。表5男寶片對(duì)生大黃致脾虛小鼠耐高溫能力的影響(略)
2.6對(duì)生大黃致脾虛大鼠木糖排泄率的影響選取大鼠60只,雌雄兼用,體重(227±14)g。隨機(jī)分6組,即正常對(duì)照組、脾虛模型組、古漢養(yǎng)生精片組(0.5g/kg,ig,qd×9d)、男寶片小劑量組(0.35g/kg,ig,qd×9d)、男寶片中劑量組(0.7g/kg,ig,qd×9d)、男寶片大劑量組(1.4g/kg,ig,qd×9d)。正常對(duì)照組不進(jìn)行任何處理,其余組ig生大黃液(1.25ml/100g,qd×8d)造成脾虛。第9天開始加藥治療9天。末次給藥后禁食5h,ig10%木糖溶液4.5ml/只,收集5h尿液,同時(shí)尾靜脈采血分離血清,按試劑盒操作要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
結(jié)果,模型組大鼠尿木糖排泄率和血清木糖量明顯低于正常組,3個(gè)不同劑量的男寶片組與模型組比較尿木糖排泄率和血清木糖水平明顯提高。結(jié)果見表6。表6男寶片對(duì)生大黃致脾虛大鼠木糖排泄率的影響(略)
2.7對(duì)生大黃致脾虛小鼠免疫器官重量的影響選取小鼠72只,雌雄兼用,體重(19.4±1.1)g。隨機(jī)分6組,即正常對(duì)照組,脾虛模型組、古漢養(yǎng)生精片組、男寶片3個(gè)不同劑量組。正常對(duì)照組不進(jìn)行任何處理,其余5組小鼠ig生大黃藥液1.0g/只(1.0ml/只),連續(xù)給藥8d,造成脾虛模型(癥狀有便溏、體重減輕、低溫偏低、畏寒等)。并于第9天起按下述劑量進(jìn)行治療,同時(shí)繼續(xù)ig生大黃藥液:即古漢養(yǎng)生精片組(0.7g/kg,ig,qd×8d);男寶片小劑量組(0.5g/kg,ig,qd×8d);男寶片中劑量組(1.0g/kg,ig,qd×8d);男寶片大劑量組(2.0g/kg,ig,qd×8d)。末次給藥后1h,摘眼球放血處死,摘出胸腺及脾臟稱重。以胸腺和脾臟重量(mg)與體重10g之比為胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。
結(jié)果,脾虛組與正常對(duì)照組比較,胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)明顯降低,而男寶片3個(gè)不同劑量組與模型組比較,其胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)明顯增加,其中大劑量組基本恢復(fù)正常。結(jié)果見表7。表7男寶片對(duì)生大黃致脾虛小鼠免疫器官重量的影響(略)
2.8對(duì)生大黃致脾虛小鼠體溫變化的影響選取小鼠72只,雌雄兼用,體重(19.4±1.1)g。隨機(jī)分6組,即正常對(duì)照組、脾虛模型組、古漢養(yǎng)生精片組、男寶片3個(gè)不同劑量組,并測(cè)定肛溫作為正常體溫。正常組不進(jìn)行任何處理,其余5組小鼠ig生大黃藥液1.0g/只(1.0ml/只),連續(xù)給藥8d,造成脾虛模型(癥狀有便溏、體重減輕、體溫偏低、畏寒等)后測(cè)定肛溫作為造模后體溫。并于第9天起按下述劑量進(jìn)行治療,同時(shí)繼續(xù)ig生大黃藥液:即古漢養(yǎng)生精片組(0.50g/kg,ig,qd×8d);男寶片小劑量組(0.35g/kg,ig,qd×8d);男寶片中劑量組(0.70g/kg,ig,qd×8d);男寶片大劑量組(1.40g/kg,ig,qd×8d),分別于給藥后第4天和第8天再各測(cè)肛溫1次。
結(jié)果,脾虛模型組與正常對(duì)照組比較小鼠體溫下降,而男寶片3個(gè)劑量與模型組比較,治療第8天其體溫明顯升高。見表8。表8男寶片對(duì)生大黃致脾虛小鼠體溫變化的影響(略)
2.9對(duì)生大黃致脾虛小鼠體重變化的影響選取小鼠72只,雌雄兼用,體重(19.1±1.1)g。隨機(jī)分6組,即正常對(duì)照組、脾虛模型組、古漢養(yǎng)生精片組、男寶片3個(gè)不同劑量組。正常組不進(jìn)行任何處理,其余5組小鼠ig生大黃藥液1.0g/只(1.0ml/只),連續(xù)給8天,造成脾虛模型,并于第9天起按下述劑量進(jìn)行治療,同時(shí)繼續(xù)ig生大黃藥液:即古漢養(yǎng)生精片組(0.7g/kg,ig,qd×8d);男寶片小劑量組(0.5g/kg,ig,qd×8d);男寶片中劑量組(1.0g/kg,ig,qd×8d);男寶片大劑量組(2.0g/kg,ig,qd×8d)。觀察造模后、治療第4天和第8天小鼠體重變化。
結(jié)果,脾虛模型組與正常組比較小鼠體重顯著下降,而男寶片3個(gè)劑量組與模型比較,治療第8天其體重明顯增加。結(jié)果見表9。表9男寶片對(duì)生大黃致脾虛小鼠體重的影響(略)
3討論
男寶片經(jīng)上述4項(xiàng)實(shí)驗(yàn),在以生大黃造成大鼠、小鼠脾虛模型中,本片劑可使其耐常壓缺氧、低溫游泳、耐高溫、耐寒時(shí)間明顯延長(zhǎng);使免疫器官重量(脾臟和胸腺)、體溫和體重均高于模型組;使脾虛大鼠尿木糖排泄率提高等均提示本片劑有健脾、糾正脾虛癥狀的作用。對(duì)正常小鼠腸推進(jìn)性運(yùn)動(dòng)有抑制作用,依據(jù)理氣健脾藥物多有抑制胃腸運(yùn)動(dòng),少部分興奮胃腸運(yùn)動(dòng)的原則,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合健脾理氣藥的作用規(guī)律。本實(shí)驗(yàn)為男寶片健脾作用提供了藥理學(xué)依據(jù)。
【參考文獻(xiàn)】
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【摘要】目的研究男寶片的補(bǔ)腎健脾作用。方法實(shí)驗(yàn)觀察男寶片對(duì)小鼠和大鼠的抗應(yīng)激反應(yīng)以及免疫器官重量的影響,探討男寶片的健脾作用。結(jié)果男寶片能抑制小鼠小腸推進(jìn)性運(yùn)動(dòng),即由(88.4±4.3)%降為(71.1±9.0)%~(75.5±5.0)%。以ig大黃(1.0g/只)qd×8d造成脾虛模型(下同),以使脾虛小鼠耐常壓缺氧時(shí)間、低溫游泳時(shí)間、耐高溫(45℃)時(shí)間、耐寒時(shí)間(-5℃)明顯延長(zhǎng);使脾虛小鼠的脾臟和胸腺等免疫器官重量增加(中劑量?jī)?yōu)佳);治療4~8d后使小鼠體溫和體重高于模型組。以1.25g/100g大黃煎液給大鼠ig.qd×8d造成脾虛模型,可使脾虛大鼠尿木糖排泄率和血清木糖高于單純脾虛模型組。結(jié)論男寶片有健脾功效。
【關(guān)鍵詞】男寶片健脾生大黃小鼠
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