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【摘要】目的探討人乳鐵蛋白(hLF)對體外培養細胞生長特性的影響。方法MTT法評定hLF對人鼻咽癌細胞、中國倉鼠卵巢細胞、人肝臟細胞的生長抑制作用。結果乳鐵蛋白對人鼻咽癌細胞系CNE的增殖有抑制作用并呈現劑量依賴性，對正常細胞無抑制作用。結論hLF可能是一種效果較好的新的抗腫瘤化學劑。

【關鍵詞】人乳鐵蛋白；癌細胞；細胞增殖

人乳鐵蛋白(HumanLactoferrin，hLF)是主要存在于人乳清中的球蛋白，乳汁中特別是初乳中含量最高，具有廣譜抗菌、抗病毒、抗腫瘤等作用。國外有學者將其應用于腫瘤患者的治療，但是對其作用機制的研究較少。目前國內較少有關于hLF作用于細胞的報道，我們選用易早期轉移的鼻咽癌(NPC)細胞作為研究對象，以中國倉鼠卵巢細胞(CHO)、人肝臟細胞(L02)作為正常細胞對照，觀察hLF在體外是否具有抑制癌細胞生長的作用，探討hLF抗腫瘤的作用機制，從而為腫瘤的治療提供研究基礎，為臨床實驗及應用提供新的理論依據。

一、材料與方法

1.1材料人鼻咽癌細胞(CNE)、中國倉鼠卵巢細胞(CHO)、人肝臟細胞(L02)均購自中國科學院上海細胞資源中心。重組hLF(Lot:L0520，溶于PBS中，儲存濃度5mg/ml，-20℃儲存備用)和噻唑藍(MTT，Lot:M2128)均購自Sigma公司。RPMI1640、胎牛血清購自HyClone公司。其他試劑均為分析純。

1.2實驗方法

1.2.1細胞培養各細胞系均應用含10%胎牛血清和1%青鏈霉素的RPMI1640培養基，5%CO2，37℃培養。

1.2.2MTT法檢測細胞增殖設空白對照組和hLF干預組。待細胞生長至對數生長期，接種于96孔細胞培養板，接種數為5×104/孔。每組細胞設5個平行孔，各組細胞分別加入不同濃度的hLF(0，1.25×10-3,2.5×10-3，5×10-3，10×10-3，20×10-3，40×10-3g/L)，每孔均為200μl。作用24h后，加入MTT(5g/L，每孔20μl)，繼續培養4h，測定A570nm吸光度。公務員之家

1.2.3細胞形態觀察細胞經hLF處理后，傾去上層懸浮死細胞并用PBS洗兩遍，加入新鮮培養基。同樣處理對照孔細胞，將細胞置于倒置顯微鏡下，觀察細胞形態的變化。

1.3統計學處理數據用x±s表示，組間比較用方差分析。

二、結果

2.1重組hLF對鼻咽癌細胞CNE、人肝臟細胞L02、中國倉鼠細胞CHO系的增殖能力的影響對CNE呈現劑量依賴性的抑制作用，而對正常細胞無抑制作用。人乳鐵蛋白對各細胞體外增殖的影響與空白對照比較:1)P<0.05

2.2細胞形態學觀察顯微鏡鏡下可見，空白對照組癌細胞密集成片生長，如鋪路卵石狀，細胞膜圓潤，透明，顆粒較少，細胞間界限清楚，并可隱約見到細胞核。hLF處理組癌細胞形態發生明顯的改變，隨hLF濃度增加，細胞從正常的增殖旺盛的貼壁生長，逐漸表現為生長緩慢，黏附力降低，細胞變圓，細胞胞質粗糙，細胞內顆粒逐漸增多，且透明度降低，立體感較差，細胞形態完整性受損，而正常細胞在細胞鏡檢圖hLF作用下無顯著變化。

三、討論

hLF多種生物學功能通過免疫系統的激活與調節得以實現。Bezaul研究發現，乳鐵蛋白能抑制鼠實體瘤的生長和轉移。腫瘤內注射LF，可以明顯的減小實體瘤的體積，且作用效果與LF干預天數相關。研究發現，乳鐵蛋白的抗頭頸部腫瘤作用是通過抑制腫瘤細胞增殖實現的。Wolf等發現，人乳鐵蛋白通過阻斷頭頸部腫瘤細胞由G0到G1期的轉化來抑制腫瘤細胞的增殖。人乳鐵蛋白對鼠的SCC細胞系生長的抑制作用，與劑量成正相關；而且人乳鐵蛋白抑制頭頸部細胞癌的作用是通過直接的細胞毒作用及系統性的免疫調節作用實現的。

Varadhachary等人做了大量的口服臨床試驗，證實乳鐵蛋白無藥物相關的有害作用。鼻咽癌作為頭頸部腫瘤之一，其惡性程度較高，早期即可出現頸部淋巴結轉移，臨床上有轉移至骨盆、肺、肝等多器官的病例。選用鼻咽癌細胞作為研究對象，具有一定的代表意義。

本研究結果顯示，人乳鐵蛋白可以抑制鼻咽癌細胞增殖，且呈劑量依賴性，對正常細胞的增殖無明顯抑制作用。這一結果，為開發乳鐵蛋白的抗癌功效提供了理論依據。

【參考文獻】

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