導語：周氏回生丸的質(zhì)量標準分析論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

1儀器與試藥

Dionex高效液相色譜儀，UVD170U，Chromeleon色譜工作站；電子天平（METTLERTOLEDO）；超聲儀（AutoscienceAS3120，功率120W，頻率40kHz）。硅膠G板、GF254板(青島海洋化工廠)；甲醇為色譜純；甲醇、三氯甲烷、乙醚、醋酸乙酯等試劑均為分析純。

麝香酮對照品(批號110719-200409)、甘草苷對照品(批號111610-200604)、沒食子酸對照品(批號110831-200302)均由中國藥品生物制品檢定所提供；周氏回生丸，購自天津安舜大藥房（批號為070201，070202，070203）；丁香、木香、檀香、麝香、甘草、山慈姑等藥材購自天津安舜大藥房，經(jīng)天津藥物研究院張鐵軍研究員鑒定為正品。

2方法與結(jié)果

2.1薄層鑒別研究

2.1.1丁香的薄層鑒別取本品細粉5g，加乙醚30ml，水浴回流提取1h，過濾，濾液蒸干，加1ml甲醇使溶解，作為供試品溶液；取丁香對照藥材0.1g，按供試品溶液的制備方法制得對照藥材溶液；取缺丁香的其它藥材制成的陰性樣品5g，同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法實驗，吸取上述供試品溶液、對照藥材溶液液、陰性對照溶液各5μl，點于同一塊硅膠GF254板上，以甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(9∶4∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，于紫外254nm下檢視。供試品色譜中在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。見圖1。

2.1.2木香的鑒別取本品細粉3g，加乙醚30ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，加乙醚1ml使溶解，作為供試品溶液；取木香藥材細粉0.5g，按供試品溶液的制備方法進行制備，作為對照藥材溶液；取缺木香的其它藥材制成的陰性樣品3g，按照供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法實驗，吸取上述供試品溶液、陰性樣品溶液、木香對照藥材溶液各5μl，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-環(huán)己烷(5∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液顯色，吹干，吹至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。見圖1。

2.1.3檀香的鑒別取本品細粉40g，加200ml蒸餾水，置揮發(fā)油提取器中，回流提取3h，收集揮發(fā)油，揮發(fā)油加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；取檀香細粉1g，按供試品溶液的制備方法制成對照藥材溶液；取缺檀香的其它藥材制成的陰性樣品10g，按照供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法實驗，吸取上述供試品溶液、陰性樣品溶液、對照藥材溶液各10μl，點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚-二氯甲烷-醋酸乙酯(6∶1∶0.25)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以對二甲氨基苯甲醛溶液，熱風吹至斑點清晰。在供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。見圖1。

圖1周氏回生丸中丁香、木香、檀香的TLC圖譜（略）

2.1.4麝香的鑒別取本品細粉10g，加乙醚50ml，水浴回流提取1h，過濾，濾液蒸干，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；取麝香酮對照品適量，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；取麝香藥材細粉0.1g，按供試品溶液的制備方法制成對照藥材溶液；取麝香陰性樣品20g，按供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。照薄層色譜法實驗，吸取上述對照品溶液、對照藥材溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各5μl，點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-環(huán)己烷(3∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼試液，熱風吹至斑點清晰。在供試品色譜中，在與對照品和對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性無干擾。見圖2。

2.1.5甘草的鑒別取本品細粉5g，加甲醇50ml，超聲處理20min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加乙醚萃取3次，20ml/次，棄去乙醚層，水層用水飽和正丁醇萃取3次，20ml/次，合并正丁醇層，水浴蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；取甘草苷對照品適量，加甲醇制成每毫升含0.6mg的溶液，作為甘草苷對照品溶液；取甘草對照藥材0.5g，按供試品溶液的制備方法制成對照藥材溶液；取缺甘草的其它藥材制成的陰性樣品5g，按照供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法實驗，吸取上述供試品溶液、陰性樣品溶液、對照品溶液、對照藥材溶液各5μl，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風吹至顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品和對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。見圖2。

2.1.6山慈姑的鑒別取本品細粉（過50目篩）20g，加pH=2的鹽酸30ml，超聲30min，過濾，濾液用10%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)到pH=10，再用醋酸乙酯進行萃取3次，30ml/次，將醋酸乙酯層蒸干，加1ml甲醇使溶解，作為供試品溶液；取山慈姑對照藥材0.5g，按照供試品溶液的制備方法制得對照藥材溶液；取缺山慈姑的其它藥材制成的陰性樣品10g，按照供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法實驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液、陰性對照溶液各10μl，點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸（20∶5∶8∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液顯色，熱風吹至斑點清晰。供試品色譜中，在與山慈姑對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。見圖2。

圖2周氏回生丸中麝香、甘草、山慈姑的TLC圖譜（略）

2.2含量測定研究

2.2.1色譜條件色譜柱為DiomandTMC18(200mm×4.6mm，10μm)，流動相為甲醇-0.1％磷酸(5∶95)，流速1.0ml/min，檢測波長273nm，柱溫30℃，理論塔板數(shù)按沒食子酸峰不低于3000。色譜圖見圖3。

2.2.2對照品溶液的制備精密稱取沒食子酸對照品適量，用甲醇溶解制成91.6μg/ml的對照品溶液，0.45μm濾過，即得。

2.2.3供試品溶液的制備取本品粉末0.15g，精密稱定，加入4mol/L的鹽酸50ml，加熱回流提取3.5h，冷卻，過濾，精密移取1ml置5ml容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4線性關(guān)系考察實驗將上述對照品溶液稀釋成不同的濃度，依次進樣10μl，以色譜峰面積對沒食子酸溶液的濃度作圖，并進行回歸統(tǒng)計，得到?jīng)]食子酸的回歸方程為Y=25.853X-4.5553,r=0.9999，線性范圍為9.16～91.6μg/ml。

2.2.5精密度實驗精密量取上述對照品溶液10μl，連續(xù)進樣6次，測得沒食子酸的峰面積RSD為0.16％，表明進樣精密度良好。

2.2.6重復性實驗取070201批樣品，按供試品溶液的制備方法制得6份供試品溶液，精密量取10μl，進樣，測得沒食子酸的峰面積RSD為0.81%，表明該方法的重復性良好。

2.2.7穩(wěn)定性實驗取070201批樣品，按供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，室溫放置，在0，2，4，8，12，24h進樣測定，測得沒食子酸的峰面積RSD為0.84%，表明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

圖3沒食子酸HPLC色譜圖（略）

2.2.8回收率實驗取已知含量的周氏回生丸（每克含76.02mg的沒食子酸）6份，每份0.075g，分別置于具塞錐形瓶中，準確加入2.81mg·ml-1的沒食子酸對照品溶液各1ml，按“2.2.3”項下方法制得各供試品溶液。在上述色譜條件下測定，測得沒食子酸的平均回收率(n=6)為99.3%，RSD值為1.81%。

2.2.9樣品含量測定取周氏回生丸樣品，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定，按外標法計算含量，測得3批（批號070201，070202，070203）中沒食子酸的含量分別為7.57％，7.52％和7.51％（n＝3）。

3討論

本制劑由14味中藥組成，成分比較復雜。為了更好地控制成品的質(zhì)量，我們采用薄層色譜鑒別法對其中的6味主要藥材進行了鑒別。通過對色譜條件進行優(yōu)化，并經(jīng)3批樣品實驗證明，該方法簡便易行，斑點分離清晰，重現(xiàn)性好，陰性對照無干擾可作為該制劑的質(zhì)量控制的方法。

本品為中藥復方制劑，五倍子為本品的君藥，沒食子酸為其主要活性成分，故選擇沒食子酸作為評價本品質(zhì)量的指標成分。《中國藥典》2005版給出了五倍子中的沒食子酸含量測定方法，用于本制劑中，色譜分離度不好，且取樣量太大，不利于樣品回收率的測定。本研究優(yōu)化了流動相比例、柱溫等色譜條件，并確定了合適的供試品溶液制備方法。該色譜條件下，色譜峰分離度良好，陰性無干擾，且方法簡單易行，結(jié)果可靠，重復性好。

【參考文獻】

［1］李澤友，潘揚，丁崗.木香藥材中木香羥內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的定性和定量研究［J］.時珍國醫(yī)醫(yī)藥，2004，15(11)：745.

［2］聞紹春，徐華，高鋼.冠心七味滴丸中檀香與降香的薄層色譜鑒別研究［J］.內(nèi)蒙古醫(yī)學雜志，2005，37(12):1152.

［3］馮國慶，黨曉菊，鄒恩濟，等.薄層掃描法測定蒙藥扎沖注射液中麝香酮含量［J］.中國民族醫(yī)藥雜志，1999，5(4):39.

［4］蔣艷玲，袁衛(wèi)梅，李宇翠.薄層掃描法測定麝香保心丸中麝香酮的含量［J］.河南中醫(yī)藥學刊，2002，17(4)：21.

【摘要】目的建立周氏回生丸的質(zhì)量標準，包括定性鑒別和定量含測兩部分。方法采用TLC法對丁香、木香、檀香、麝香、甘草、山慈姑進行定性鑒別；采用高效液相色譜法對制劑中沒食子酸的含量進行定量測定。結(jié)果在TLC色譜中能檢測出丁香、木香、檀香、麝香、甘草、山慈姑6味藥材；建立的含量測定方法中，沒食子酸的線性范圍為9.16～91.6μg/ml，平均回收率分別為99.3％。結(jié)論所建立的定性、定量方法準確可行，重復性好，可作為周氏回生丸的質(zhì)量標準。

【關(guān)鍵詞】周氏回生丸質(zhì)量標準薄層色譜高效液相色譜沒食子酸