導(dǎo)語：肝愈膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

【摘要】目的建立控制肝愈膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法對(duì)肝愈膠囊中主要成分丹參、梔子、黃柏、黃芪、五味子進(jìn)行了薄層色譜鑒別；采用高效液相色譜法測定黃芩苷的含量。結(jié)果薄層色譜法可以對(duì)該制劑中的丹參、梔子、黃柏、黃芪、五味子作出準(zhǔn)確鑒別；黃芩苷的線性范圍為0.12～0.58μg，r=0.9997，平均加樣回收率為99.06，RSD為1.40(n=5)。結(jié)論方法靈敏、簡便、重現(xiàn)性好，可作為該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

【關(guān)鍵詞】肝愈膠囊黃芩苷薄層色譜高效液相色譜

Abstract:ObjectiveToestablishthequalitystandardforGanyuCapsule.MethodsRadixSalviaeMiltiorrhiae,FructusGardeniae,CortexPhellodendri,RadixAstragaliandFructusSchisandraewereidentifiedbyTLC.BaicalinwasdeterminedbyHPLC.ResultsTLCspotsdevelopedwerefairlyclear,andtheblanktestshowednointerference.Baicalinshowedagoodlinearrelationshipintheconcentrationrangeof0.1168～0.5840μg，andtheaveragerecoverywasupto99.06%,RSDwas1.4%.ConclusionThemethodisaccurate,reproducibleandsimple.Itcanbeusedasthequalitycontrolofthispreparation.

Keywords:GanyuCapsule;Baicalin;TLC;HPLC

肝愈膠囊由黃芩、丹參、梔子、黃柏、黃芪、五味子等中藥組成，具有清熱解毒、益氣活血的功效。主治氣陰兩虛型肝炎。為控制本品的內(nèi)在質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)采用TLC，HPLC等方法對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

1儀器與試藥

Waters600E2487型高效液相色譜儀﹙美國﹚；Millennium色譜工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)﹙美國﹚；BP211D電子天平﹙德國﹚。甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。黃芩苷﹙7159908﹚供含量測定用，純度99.02%﹚、丹參酮ⅡА﹙07669903﹚、梔子苷﹙07499806﹚、鹽酸小檗堿﹙7139813﹚、黃芪甲苷﹙07819806﹚、五味子乙素﹙07659706﹚，對(duì)照品均購自中國藥品生物制品檢定所。肝愈膠囊3批樣品：040105，040108，040111﹙自制﹚。硅膠G﹙青島海洋化工廠﹚。

2方法與結(jié)果

2.1薄層鑒別

2.1.1丹參的鑒別［1］

取本品內(nèi)容物3g，研細(xì)，加乙醚20ml，超聲處理20min，濾過，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹參對(duì)照藥材粗粉1g和按處方量從中除去丹參藥材的陰性對(duì)照品粗粉4g，分別同法制成對(duì)照藥材溶液和陰性對(duì)照液。再取丹參酮ⅡA對(duì)照品，加醋酸乙酯制成每毫升含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)［1］，吸取上述4種溶液各6μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯﹙19∶1﹚為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照色譜在相應(yīng)的位置上無此斑點(diǎn)。見圖1。

2.1.2梔子的鑒別［1］

取本品內(nèi)容物3g，加乙醇20ml，超聲處理20min，濾過，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。另取梔子對(duì)照藥材粗粉1g和按處方量從中除去梔子的陰性對(duì)照品粗粉3g，分別加乙醇10ml和20ml,同法制成對(duì)照藥材溶液和陰性溶液。再取梔子苷對(duì)照品，加乙醇制成每毫升含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水﹙5∶5∶1∶1﹚為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照色譜中無相應(yīng)的斑點(diǎn)。見圖2。

2.1.3黃柏的鑒別

取本品內(nèi)容物2g，加甲醇20ml,超聲處理20min，濾過，濾液濃縮至2ml，作為供試品溶液。另取黃柏對(duì)照藥材粗粉0.2g和按處方量從中除去黃柏的陰性對(duì)照品粗粉2g，分別加甲醇10ml和20ml,加熱回流提取15min，過濾，濾液濃縮至干，各加1ml甲醇使溶解，分別作為對(duì)照藥材溶液和陰性對(duì)照溶液。再取鹽酸小檗堿對(duì)照品，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述溶液各3μl,分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨試液﹙6∶3∶1.5∶1.5∶0.5﹚為展開劑，置氨蒸氣飽和的層析缸內(nèi)，展開，取出，晾干，置紫外光燈﹙365nm﹚下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光斑點(diǎn)。見圖3。

2.1.4黃芪的鑒別［1］

取本品內(nèi)容物4g，加正丁醇30ml，超聲處理1h，濾過，濾液用1%氫氧化鈉溶液洗滌3次，20ml/次，棄去堿液，用正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水液，正丁醇濃縮至干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。。另取黃芪對(duì)照藥材粗粉1g和按處方量從中除去黃芪的陰性對(duì)照品粗粉4g，分別加正丁醇15ml和30ml，同法制成對(duì)照藥材溶液和陰性對(duì)照溶液。再取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液各8μl，對(duì)照藥材溶液6μl，對(duì)照品溶液4μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水﹙10∶20∶11∶5﹚10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，置105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。見圖4。

2.1.5五味子的鑒別［1］

取本品內(nèi)容物5g，置索氏提取器中，加氯仿30ml，回流提取3h，回收氯仿，殘?jiān)勇确?ml使溶解，作為供試品溶液。另取五味子對(duì)照藥材粗粉2g和按處方量從中除去五味子的陰性對(duì)照品粗粉5g,分別置索氏提取器中，各加氯仿15ml和30ml，同法制成對(duì)照藥材溶液和對(duì)照品溶液。再取五味子乙素對(duì)照品，加氯仿制成每毫升含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液和陰性溶液各5μl，對(duì)照品溶液3μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠GF254薄層板上，以石油醚﹙30～60℃﹚-甲酸乙酯-甲酸﹙15∶5∶1﹚的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈﹙254nm﹚下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光斑點(diǎn)。見圖5。

2.2含量測定

2.2.1色譜條件的選擇

色譜柱KromasilC18﹙200mm×4.6mm,5μm﹚,流動(dòng)相：甲醇-水-冰醋酸﹙55∶45∶0.5﹚流速1.0ml/min；檢測波長280nm；柱溫25℃；理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)應(yīng)不低于1500。

2.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱取干燥至恒重的黃芩苷對(duì)照品2.92mg，置50ml量瓶中，加適量甲醇溶解，稀釋至刻度，搖勻，制成每毫升含0.00584mg的對(duì)照品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液2，4，6，8，10μl，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以黃芩苷進(jìn)樣量微克數(shù)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，得一直線，計(jì)算回歸方程為Y=2.43×106X-3.74×104，r=0.9997（n=5﹚.結(jié)果表明黃芩苷在0.1168～0.5840μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.3供試品溶液的制備

取本品10粒，傾出內(nèi)容物，研細(xì)，取3.0g精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50ml,稱定重量，超聲處理﹙功率250W，頻率40kHz﹚30min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2.0ml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻后過0.45μm微孔濾膜，濾液作為供試品溶液。

2.2.4精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取濃度為0.00584mg/ml的黃芩苷對(duì)照品溶液5μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，均值為609299，RSD=0.90%﹙n=5﹚，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.2.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密吸取供試品溶液5μl，注入液相色譜儀，分別于0，1，3，7，12h測定峰面積。結(jié)果表明峰面積的RSD為0.90%，表明供試品溶液在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.6空白實(shí)驗(yàn)

取樣品和按處方比例不含黃芩的諸藥，按制劑工藝分別制成供試品溶液和陰性對(duì)照液，精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各5μl，分別注入液相色譜儀，依法測定，結(jié)果陰性對(duì)照品溶液在與黃芩苷對(duì)照品溶液相同保留時(shí)間處無色譜峰，表明無干擾。見圖6。

2.2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品，按供試品制備方法平行制備5份，依法測定黃芩苷峰面積，分別計(jì)算含量，RSD為1.24%，表明重復(fù)性良好。

2.2.8回收率實(shí)驗(yàn)

采用加樣回收法，精密稱取已知黃芩苷含量的同一批號(hào)樣品(040105)5份，1.6g/份，分別精密加入黃芩苷對(duì)照品8mg，按含量測定方法操作測定，計(jì)算，平均回收率為99.06%，RSD為1.4%。結(jié)果見表1。表1回收率考察數(shù)據(jù)（略）

2.2.9樣品含量測定

取3批樣品依法制備供試品溶液，精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5μl，分別注入液相色譜儀，測定峰面積，計(jì)算樣品中黃芩苷的含量。結(jié)果見表2。表2樣品含量測定數(shù)據(jù)（略）

3討論

在黃柏的薄層色譜鑒別實(shí)驗(yàn)中，黃柏鑒別項(xiàng)下［1］的展開劑，醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水﹙10∶6∶1∶1﹚進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果分離效果不好，Rf值較小，相鄰斑點(diǎn)分不開。后來選用黃連鑒別項(xiàng)下的展開劑，經(jīng)過多次調(diào)整，把展開劑中的水換成濃氨試液，即展開劑為苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨試液(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)效果較好，結(jié)果較穩(wěn)定。

流動(dòng)相的選擇“雙黃連顆?！表?xiàng)下［1］黃芩苷含量測定的流動(dòng)相，試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃芩苷達(dá)不到基線，保留時(shí)間較短，經(jīng)調(diào)整將甲醇比例增大些，醋酸比例縮小，則達(dá)到基線分離、保留時(shí)間合適，故流動(dòng)相選用甲醇-水-冰醋酸﹙55∶45∶0.5﹚。

采用參考文獻(xiàn)［1］方法對(duì)肝愈膠囊進(jìn)行薄層色譜鑒別，重現(xiàn)性好，陰性實(shí)驗(yàn)無干擾，經(jīng)多批樣品鑒別，均能檢出與對(duì)照藥材相同的斑點(diǎn)。采用“雙黃連顆?！表?xiàng)下［1］黃芩苷含量測定的流動(dòng)相經(jīng)調(diào)整后，基線分離及保留時(shí)間合適，各批次含量較穩(wěn)定，為肝愈膠囊質(zhì)量控制提供有效的方法。

【參考文獻(xiàn)】

［1］國家藥典委員會(huì).中國藥典，一部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：52,173，316，44.