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1材料與儀器

海帶采自青島沙子口，經鑒定為Laminariajaponica；95％乙醇、濃硫酸、六水合氯化鎂、氫氧化鈉、三氟乙酸、鹽酸羥胺等均為國產分析純；5%苯酚（現配）；L－褐藻糖（Sigma公司）；D-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-木糖、D-甘露糖、L-鼠李糖、D-果糖、葡萄糖、蔗糖等均購自于上海試劑二廠；肌醇（無錫默克爾精細化學品有限公司）。高壓鍋（山東新華醫療器械股份有限公司）；FA1004電子天平（上海天平儀器廠）；722型分光光度計（上海菁華科技儀器有限公司）；瑞士BüCHIR－114型旋轉蒸發儀；東京理化EYELAFD－5N型真空冷凍干燥機；電熱恒溫水浴鍋（天津泰斯特儀器有限公司）；TDL－40B離心機（上海飛鴿系列離心機廠）；HP5890Ⅱ氣相色譜儀（美國惠普公司），氫火焰離子化檢測器（FID）。

【摘要】目的探索正確測定海帶多糖含量的方法。方法采用苯酚-硫酸法，按照不同糖溶液配制標準液在485nm處測定多糖含量。結果按照多糖中褐藻糖與半乳糖比例為標準測得多糖含量為60.42%，介于兩種組成單糖測定結果之間。結論按照多糖中單糖組成比例為標準測定多糖含量具有可比性，可用于海帶多糖含量測定。

【關鍵詞】海帶多糖苯酚硫酸法

Abstract：ObjectiveTodeterminethecontentofpolysaccharidesinLaminariajaponica.MethodsWeusedthemethodofvitriliccolorimetry,anddetectionwavelengthwas485nm.ResultsThecontentofpolysaccharideswiththemethodwhichwasaccordingtothecomposingsugarswas60.42%.ConclusionThismethodcanbeusedtodeterminethecontentofpolysaccharidesinLaminariajaponica.

Keywords：Laminariajaponica;Polysaccharides;Phenol-vitrioliccolorimetry

海帶Laminariajaponica，又名綸布、昆布、江白菜，是多年生大型食用藻類。藻體為長條扁平葉狀體，褐綠色，有兩條縱溝貫穿于葉片中部，形成中部帶，一般長1.5～3m，寬15～25cm，最長者可達6m，寬可達50cm。海帶生于海邊低潮線下2m深度的巖石上，人工養殖生長在繩索或竹材上，是我國、日本、朝鮮等東方人喜歡食用的經濟藻類。我國海帶養殖已發展成大規模產業，從遼寧一直到廣東沿海，產量約占世界海藻的50％，居世界第1位。海帶成本低廉，功能眾多，在有益物質提取和食品加工中作用明顯，市場潛力很大［1］。

海帶富含多種功能性成分，如碘、甘露醇、維生素A、維生素B、維生素C、牛磺酸、海帶多糖等，其食用和藥用價值很早即為世人所關注［2］。研究表明，海帶對外界惡劣環境所表現出來的抗逆耐受能力與它們所含的海帶多糖有直接關系，海帶多糖還具有穩定細胞膜和蛋白質結構的功能。海帶多糖在醫藥、食品、化妝品、農業等方面也具有廣闊的應用前景［3］。我國在對海帶多糖的研究中所用的實驗材料多是粗制品，缺乏純化和組成鑒定過程，對海帶的利用也局限于提取褐藻酸、甘露醇等。許多文獻中，測定海帶多糖時用葡萄糖或其組成的主要單褐藻糖作標準溶液，造成結果與真實值相差太大。本文采用水提醇沉的方法對海帶多糖的進行提取、純化，并采用按照組成樣品的單糖比例配制標準液的測定方法對其多糖含量進行測定，對幾種測定方法進行比較和準確性評價。

1材料與儀器

海帶采自青島沙子口，經鑒定為Laminariajaponica；95％乙醇、濃硫酸、六水合氯化鎂、氫氧化鈉、三氟乙酸、鹽酸羥胺等均為國產分析純；5%苯酚（現配）；L－褐藻糖（Sigma公司）；D-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-木糖、D-甘露糖、L-鼠李糖、D-果糖、葡萄糖、蔗糖等均購自于上海試劑二廠；肌醇（無錫默克爾精細化學品有限公司）。高壓鍋（山東新華醫療器械股份有限公司）；FA1004電子天平（上海天平儀器廠）；722型分光光度計（上海菁華科技儀器有限公司）；瑞士BüCHIR－114型旋轉蒸發儀；東京理化EYELAFD－5N型真空冷凍干燥機；電熱恒溫水浴鍋（天津泰斯特儀器有限公司）；TDL－40B離心機（上海飛鴿系列離心機廠）；HP5890Ⅱ氣相色譜儀（美國惠普公司），氫火焰離子化檢測器（FID）。

2方法與結果

2.1海帶多糖樣品的制備

采用水提醇沉法提取純化海帶多糖樣品（自制）。

2.2樣品組成單糖的確定

2.2.1氣相色譜條件

SGEAC2252.5mm×30m彈性石英毛細管柱；柱溫215℃；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流比100∶1；高純氮氣為載氣，流速1ml/min。

2.2.2標準糖樣衍生物的制備

分別稱取4～6mg的L-褐藻糖、D-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-木糖、D-甘露糖、葡萄糖、L-鼠李糖以及1mg的肌醇置1ml的離心管中，加入10mg鹽酸羥胺和0.5ml的吡啶，在90℃水浴中加熱反應30min，并不時振蕩。取出后冷卻至室溫，加入0.8ml的乙酸酐，于90℃水浴中繼續進行乙酰化反應30min，并不時振蕩，冷卻后即得適于氣相色譜分析的標準單糖衍生物［4］。

2.2.3樣品水解

稱取多糖樣品各1份，分別置于10ml水解管中，加10ml2mol/L的三氟乙酸(TFA)溶液溶解，封管，100℃水浴中水解4h,減壓濃縮至干。

2.2.4組成樣品單糖的確定

根據色譜圖，確定組成樣品的單糖為:鼠李糖、褐藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖，但褐藻糖和半乳糖含量遠多于其它幾種單糖，兩者含量比例為1.83∶1。結果見圖1～2。

2.3多糖含量測定

2.3.1標準曲線的繪制

準確稱取葡萄糖、L-褐藻糖和D-半乳糖各50mg，分別溶于容量瓶中配成100ml溶液。按褐藻糖與半乳糖比例1.83:1，從兩個標準溶液中各取64.66ml和35.34ml形成混合溶液為標準液。

分別精密吸取葡萄糖標準溶液、褐藻糖標準溶液、半乳糖標準液和混合標準溶液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6ml置于具塞試管中，加水使每管總體積為2.0ml，然后分別加入5％苯酚液1.0ml，混合均勻后快速加入95％濃硫酸5ml,室溫放置30min，在485nm下測定吸光度。以蒸餾水試管為空白對照，繪制吸光度與濃度標準曲線。其相應標準曲線見圖3。

2.3.2樣品含量測定

準確稱取干燥至恒重的樣品100mg，置于100ml容量瓶中，加水至刻度。吸取樣品溶液0.15ml置于具塞試管中，然后按照標準曲線制作的步驟，測得樣品吸光度，根據上述4種標準曲線計算糖含量。經計算，樣品含量分別為30.17％，72.95％，43.51％，60.42％。

2.3.3方法正確性驗證

已知蔗糖組成的單糖比例為葡萄糖:果糖＝1∶1,從已經配好的葡萄糖和果糖兩個標準液中各取相同適量配成混合標準液。按照上述比色條件分別以葡萄糖、果糖和混合標準液做標準曲線測定多糖含量，得到其含量分別為114.37％，83.64％和100.65％。由此證明按照組成多糖的單糖比例作標準液測定含量具有一定的準確性。

3討論

由圖3可知，同一樣品用不同的標準溶液所作的標準曲線是不重合的，由此測得含量值是不同的。從圖中標準曲線看出，混合液的標準曲線的斜率位于組成兩種單糖的斜率之間。對雜多糖而言，測定值總是與真實值有差別，但對于未知確切組成比例的樣品，可用主要組成單糖為標準；若知道其確切比例，就可以用混合液作標準。實際測定時，根據所選取的標準溶液做的標準曲線的斜率偏差，選取適當的方法作為測定方法可得到近似結果。

海帶多糖為雜多糖，由7種以上的單糖組成，結構復雜。本文通過采用氣相色譜測定其組成單糖的確切比例。按照其主要單糖的比例作標準溶液測定其多糖含量，可得到較準確的結果。

海帶多糖初步藥理研究表明，其具有免疫調節、降血脂、抗凝血等活性。樣品中的多糖含量較高，可能是此活性較優的原因之一。海帶多糖的結構組成和生理活性的關系有待于進一步研究。

【參考文獻】

［1］劉樹立，王春艷.我國海帶的加工利用和開發［J］.食品與藥品，2007，9(5)：34.

［2］李德遠．海帶的保健功效及海帶生理活性多糖研究現狀［J］.食品科學，2002,7：151.

［3］周裔彬，汪東風.酸化法提取海帶多糖及其純化的研究［J］.南京農業大學學報，2006，29(3)：103.

［4］張惟杰．糖復合物生化研究技術［J］.杭州：浙江大學出版社，1997：38.

【摘要】目的探索正確測定海帶多糖含量的方法。方法采用苯酚-硫酸法，按照不同糖溶液配制標準液在485nm處測定多糖含量。結果按照多糖中褐藻糖與半乳糖比例為標準測得多糖含量為60.42%，介于兩種組成單糖測定結果之間。結論按照多糖中單糖組成比例為標準測定多糖含量具有可比性，可用于海帶多糖含量測定。

【關鍵詞】海帶多糖苯酚硫酸法