導(dǎo)語(yǔ)：柿葉總黃酮提取工藝探究論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

1儀器與試藥

1．1儀器UV－2201紫外可見分光光度計(jì)（Shimadzu）；傾斜式高速萬(wàn)能粉碎機(jī)（天津市泰斯特儀器有限公司）；PB203－N電子精密天平（MettlerToledo儀器上海有限公司）；AJ150L電子精密天平（MettlerinSwitzerland）。

1．2試藥實(shí)驗(yàn)用藥材采自北京市昌平區(qū)，落葉晾干，經(jīng)鑒定為柿樹科柿屬柿DiospyrosKakiL．f．；蘆丁對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：080－9303）；AlCl3·6H2O等均為分析純。

2方法與結(jié)果

2．1因素水平表乙醇作為提取溶劑，對(duì)乙醇濃度、溶劑量及提取次數(shù)和時(shí)間3種因素進(jìn)行考察，每種因素分為3個(gè)水平，結(jié)果見表1。

2.2供試品溶液的制備精密稱取柿葉最粗粉（10～22目之間）1g共9份，按照表2L9（34）正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案，用對(duì)應(yīng)濃度和體積的乙醇回流提取相應(yīng)次數(shù)和時(shí)間。回流結(jié)束后合并提取液，放冷，抽濾，濾液轉(zhuǎn)移至100ml或200ml量瓶中，分別以其相應(yīng)的提取溶劑定容，過微孔濾膜（0．45μm），作為供試品溶液。

表1正交設(shè)計(jì)因素水平（略）

表2L9（34）正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果分析（略）

2.3對(duì)照品溶液的制備精密稱取120℃干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品0．0825g于100ml量瓶中，70％乙醇超聲溶解，定容至刻度，得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液0．825mg·ml－1。

2.4顯色試劑及測(cè)定波長(zhǎng)的選擇Al（NO3）3－NaNO2－NaOH顯色法［4］：精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液0．5ml和供試液1＃、4＃、7＃各適量至25ml量瓶中，分別加入5％NaNO21．0ml，放置6min，然后加入10％Al（NO3）31．0ml，混勻，放置6min，再加入4．3％NaOH10ml，用70％乙醇定容至刻度，放置15min。在190～700nm范圍內(nèi)掃描測(cè)定吸收光譜。

AlCl3顯色法［5］：精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液0．1ml和供試液1＃、4＃、7＃各適量至10ml量瓶中，分別加入0．1mol／LAlCl3·6H2O1．0ml，用50％乙醇定容至刻度，搖勻，放置15min。在190～700nm范圍內(nèi)掃描測(cè)定吸收光譜。

比較上述兩種顯色法，用Al（NO3）3－NaNO2－NaOH顯色后，明顯生成紅色絮狀沉淀，此法不宜采用；而AlCl3顯色后，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液的λmax＝410nm，3個(gè)樣品溶液的λmax＝400～410nm，故選擇AlCl3顯色后410nm測(cè)定吸光度。

2.5顯色穩(wěn)定性考察精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液0．3ml和供試液4＃1．0ml，依法顯色后放置不同時(shí)間，測(cè)定吸光度，結(jié)果見表3，吸光度RSD分別為0．2％和0．3％，可見蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液和供試液4＃顯色后4h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6線性關(guān)系考察取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液1．0ml置25ml容量瓶中，用50％乙醇定容至刻度，搖勻，分別取1．0，2．0，2．5，3．0，3．5，4．0ml置10ml量瓶中，加入0．1mol／LAlCl3·6H2O1．0ml，用50％乙醇定容至刻度搖勻，40min后于410nm處測(cè)定吸光度A值，結(jié)果見表4。線性回歸得標(biāo)準(zhǔn)曲線：A＝5．6×10－3C＋5．7×10－3，R＝0．9999，線性范圍為33．0～132．0μg／ml。

2.7樣品測(cè)定分別取9份供試品溶液適量至10ml量瓶中，加0．1mol／LAlCl3·6H2O1．0ml，用50％乙醇定容至刻度，搖勻，40min后于410nm處測(cè)定吸光度A值，換算為總黃酮含量（mg·g－1），如表2所示，極差分析得最佳提取工藝為A2B2C3，即80％乙醇，25倍量，提取4次（2，1．5，1．5，1h）。

表3顯色穩(wěn)定性考察（略）

表4蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作（略）

2.8驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)精密稱取柿葉最粗粉（10～22目之間）1g5份，置于100ml錐形瓶中，按照A2B2C3條件提取，合并提取液，放冷，抽濾，濾液轉(zhuǎn)移至200ml量瓶中，80％乙醇定容至刻度，過微孔濾膜，測(cè)定樣品中總黃酮的含量，結(jié)果見表5，其平均值為101．821mg·g－1，RSD＝2．1％，表明此條件重復(fù)性良好。

表5驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）

3結(jié)論與討論

3.1結(jié)論柿葉乙醇提取最佳工藝為A2B2C3，即80％乙醇，25倍量，提取4次（2，1．5，1．5，1h）。經(jīng)驗(yàn)證樣品中總黃酮平均含量為101．821mg·g－1（RSD＝2．1％），表明正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。

3.2討論

3.2.1預(yù)實(shí)驗(yàn)采用同一方法測(cè)定柿葉水提物和乙醇提取物中總黃酮含量，結(jié)果前者顯著低于后者，根據(jù)參考文獻(xiàn)及上述預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，采用乙醇作為提取溶劑。

3.2.2AlCl3顯色方法與參考文獻(xiàn)比較未采用70℃水浴，因?yàn)閷?shí)際測(cè)定兩者差異不大，不采用水浴可以減少測(cè)定步驟，減小誤差。

3.2.3預(yù)實(shí)驗(yàn)采用22～48目柿葉粉回流提取，發(fā)現(xiàn)有爆沸現(xiàn)象，改為最粗粉10～22目。

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【摘要】目的對(duì)柿葉中總黃酮的提取工藝進(jìn)行優(yōu)選。方法采用正交實(shí)驗(yàn)法，以總黃酮含量（mg·g－1）為指標(biāo)，對(duì)乙醇濃度、溶劑量及提取次數(shù)和時(shí)間3種因素進(jìn)行了研究。結(jié)果將柿葉最粗粉用25倍80％乙醇提取4次，可以獲得較高的提取率。結(jié)論此工藝有效成分提取率較高，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定可行。

【關(guān)鍵詞】柿葉總黃酮正交實(shí)驗(yàn)提取工藝