導(dǎo)語：如何才能寫好一篇愛情感言，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

1、你的愛是我一生的盼望，所以你的每一滴淚，都化作了我的哀愁。我思戀的人啊，愿你一生幸福。

2、我們的故事還沒開始已經(jīng)結(jié)束，一種想見不敢見的傷痛，所以，我隱姓埋名。

3、我是一只孤獨的小船，渴望那溫暖的港灣。不管天涯海角多么遙遠，我會駛來輕輕地靠岸，訴說風浪中的思念。

4、我們在輕霧繚繞的清晨分別。露，瑩瑩的，像你純真的眼睛;霧，蒙蒙的，像我濃濃的離愁。

5、一首小情歌，一個小小的我，想你的時候感動太多，忍不住掉下眼淚一顆，化作了云兒一朵，化作了河畔一個，愿你抬頭看到我，心煩想到我，是時時刻刻知道愛你的人是我，是我，還是我，親愛的，冬天快樂。

6、有些時候，我們以為，蒙上了眼睛，就可以看不見這個世界;以為捂住了耳朵，就可以聽不到所有的煩惱;以為腳步停了下來，心就可以不再遠行;以為我需要的愛情，只是一個擁抱。

7、曾經(jīng)有一份真誠的愛情放在我面前，我沒有珍惜，等我失去的時候我才后悔莫及，人世間最痛苦的事莫過于此。你的劍在我的咽喉上割下去吧!

8、你來時，撞開了我的心扉;你走時，卻鎖上了我的心房。從此，我的心像關(guān)不上的窗，風起時一片冰涼。只有你，能走進我的世界，撫慰我淡淡的憂傷。

9、傻是我的特長，癡是我的理想，當傻和癡交織在一起的時候，便是我夢境里最美的天堂!別笑我，我就這么癡心，我會傻傻地愛你癡癡地戀你，一直到老!

10、我站在世界的最高處，看著這個世界，原來我們的緣分那么渺小，其實可能也沒有，但我會把握住我的生活，不會讓它流失。

11、謝謝你在我脆弱的時候給我這冷漠的一刀，不知道是你手軟，還是我堅硬。給我點時間，我把你的這把刀磨的鋒利一點，再還給你。

12、有顆心在痛苦中，有個靈魂在麻木中歌唱。這就是我那顆得不到慰藉的悲傷的心;這就是我那個靈魂，在燃燒著思念你的憂傷。

13、有一句話能點得著感情的火，有一句話說出來就是幸福。這一句話，你為什么不愿說破?我等著、等著你不再緘默……

14、總有一天我會從你身邊默默地走開。不帶任何聲響。我錯過了很多。我總是一個人難過。

15、分手的時候，我們都轉(zhuǎn)身走了，但我依舊等你轉(zhuǎn)身過來抱住我，可是這條路走完后，我轉(zhuǎn)過頭你卻早已不見了，看著昏暗的天空，我在想我怎么會這么傻，我竟然還在期待你是愛我的。

16、你美麗的身影，永遠在我眼前;你婉妙的聲音，時刻在我耳邊;你精靈的眼睛，忽閃忽閃亮在我心里……是的，我們沒有分離，你永遠在我的思念里。

17、深愛一個人會醉;恨一個人會碎;最痛苦的是等待!不知道你會等我多久，可我知道我會等你一生一世!

18、我們只是匆匆告別，列車帶走了短暫的春天。春雨替我留下淅瀝的眷戀，夢境中你我再見……

19、懸崖上花兒依舊堅強的活著，火上上的草依舊 保護著自己，但是坐在這里的我卻沒有他們的堅強，只有懦弱，懦弱著你能愛上我，哪怕是一分鐘也可以。

20、有了你，我的笑容從清晨一直洋溢到深夜;有了你，我的世界終結(jié)了所有的悲傷;有了你，我的幸福從此不再有缺憾。一輩子一段情，因為有了你，足矣

21、有一片天涯叫咫尺，有一畝桑田叫滄海，有一束愛情叫至死不渝，有一股思念叫刻骨銘心。我愿在你的天涯，守護桑田，散播思念，期待愛情玫瑰開花。

22、或許時間會帶走一切，但我會永遠記得，那段和你同在月光下喁喁而語的時光……

23、你已遠遠的走開了，但我的愛依舊在這里，你帶走了所有東西，卻忘記帶走我這一份愛，把我一直遺留在墻角里，沒人發(fā)現(xiàn)。

篇2

2、你愿意再給我一次機會嗎？我們可以重新開始。就當做你不認識我、我沒見過你，由此時此刻開始，我們彼此一見鐘情。

3、我不想看你嫁給別的男人。

4、我壞，因為你，我好也只為你！

5、因為我只要你！我只要你陪著我，只對我笑！我要你喝醉時只吻我一個，只逗我一個，我就是不要分手。我要你躲起來哭的時候，只讓我一個人抱，只對我講心事，我不會阻止你嫁給別人。別叫我放你，我做不到啊！我只要你，難道不行嗎？是不是我愛得不夠，所以你不要我？這是我第一次愛人，你要給我時間學習啊。

6、你可以讓我傷心，但是千萬不要讓我死心！

7、將我烙印在你記憶深處證明我曾活在這個地方 請你永遠別忘記。

8、西方有一句格言，內(nèi)容是：為愛而愛，是神，為被愛而愛，是人。我到今天才發(fā)現(xiàn)，這些年來，他沒有條件的愛我，甚至不求回報。他能做一個神，我最起碼，該為他做一個人吧！

9、曾經(jīng)滄海難為水，除卻巫山不是云。取次花叢懶回顧，半緣修道半緣君。

篇3

邂逅名人，愛得欲罷不能

出生遼寧一個沿海城市的林婭菲，2001年大學畢業(yè)后進學校當了一名中學老師。兩年后，不甘寂寞的林婭菲辭去了學校工作，憑著不凡的氣質(zhì)應(yīng)聘到電視臺當了一句文藝節(jié)目主持人。讓她竟想不到的是，她的生活就此發(fā)生了改變。

2004年初，著名作家狄柯來簽名售書，臺里派林婭菲到售書現(xiàn)場實地采訪。由于時間倉促，林婭菲一個人扛著攝像機跑到現(xiàn)場，因為事先沒和狄柯聯(lián)系，一上午的時間林婭菲只好在旁邊苦苦等待，搭不上話。現(xiàn)場來買書簽字的人絡(luò)繹不絕。

其實．林婭菲的到來，狄柯早看在了眼里。臨近中午，狄柯離開售書現(xiàn)場．主動和林婭菲打起了招呼，邀請林婭菲一起去酒店用餐。對于林婭菲來說，這真是意外的收獲。席間，狄柯出口成章，成了焦點。由于酒桌旁都坐著各界社會名流，一向能說善言的林婭菲也沉默寡言起來。狄柯不說話的時候，總是和林婭菲耳語幾句，為她挾菜，看得出．這是不想讓林婭菲看起來太尷尬。

臨走，狄柯遞給林婭菲一張名片，說明天還要簽名售書。希望她能再來采訪、這讓林婭菲喜出望外。狄柯不但接受了采訪，還配合電視臺錄制了名人專訪節(jié)目。林婭菲算是順利完成了任務(wù)還得到了同事們的贊賞-為了回報狄柯的慷慨大方，林婭菲主動回請狄柯吃飯，以表崇拜和感激之情。

在一個特色的燒烤店里，兩人坐在單間里，遠離了嘈雜的人群。在人們的印象里，狄柯是個放蕩不羈很不合群的人，想不到他對林婭菲卻是有求必應(yīng)。狄柯跟林婭菲談起了他是怎樣走上寫作之路的，溢干言表的興奮，話里話外在傾述著他的浪漫。林婭菲被狄柯的才氣折服了，她前不久從網(wǎng)上得知狄柯剛離婚不久。看著狄柯，林婭菲有一種莫名的欣慰，因為她感覺自己已經(jīng)喜歡上了狄柯儒雅、成熟的一舉一動，雖說狄柯的年齡超出了她10歲。

一個星期后，狄柯回了昆明。狄柯走后，林婭菲陷入了痛苦的思戀中，像是丟了魂魄。夜里，林婭菲在想．像狄柯這樣一個有名望的人，自己只是他生命中的過客而已，那短暫、似乎還有些難舍難分的日子是經(jīng)不起推敲的。

大約半個月后的一個夜晚，狄柯的電話居然來了，狄柯說最近又去了另一千城市宣傳自己的新書，所以沒有及時來電話聯(lián)系她，電話里的狄柯溫文爾雅地道歉。接到電話的林婭菲早已淚流滿面。她不想再錯過這個千載難逢的機會．“我天天都在想你，我們見面好嗎，無論你在哪里。”“我同樣也在想你，你真的能來我這兒嗎?那你的工作怎么辦？”狄柯用無限柔情的話語詢問著林婭菲。林婭菲已經(jīng)決定了，為了愛，她什么也不顧了。

2004年春節(jié)剛過，林婭菲在家人和臺里領(lǐng)導(dǎo)的極力反對下，還是毅然辭去主持人的工作，背著簡單的行李去了昆明。飛機場狄柯捧著一束艷麗的玫瑰，一臉燦爛的笑。林婭菲再也抑制不住自己的感，撲在狄柯的懷里。

林婭菲住到了狄柯的家里。由于水土不服。林婭菲高燒不斷，還不停地拉肚子，臥床不起。狄柯親自照顧林婭菲的飲食起居，每天都做些有營養(yǎng)而不膩的食物給她這讓林婭菲感激涕零。一個鼎鼎有名的大作家竟然為地下櫥做飯，這難道不是愛嗎？

在狄柯的細心照料下，林婭菲很快就恢復(fù)了健康。兩人開始正式同居。在此前，狄柯一直在打造一部20集的電視劇劇本，他每天都要在電腦前寫作到后半夜。林婭菲擔起了買菜做飯的任務(wù)，成了一個十足的家庭主婦卻樂此不疲。當然，狄柯還是抽出時間，陪林婭菲四處走走，欣賞美景如畫的昆明。這是一段甜蜜的時光。

莫名分手，大作家不告而別

如果日子能一直這么平靜浪漫地走下去就好了，可愛往往難以把握2004年5月，狄柯完成了電視劇本，在導(dǎo)演陳翰柏的要求下前往河北拍攝現(xiàn)場，并被聘為編劇。林婭菲也一起去了。誰知電視劇拍了兩個月。第二女主角因為片酬的問題，和導(dǎo)演陳翰柏發(fā)生了爭端，結(jié)果戲拍了一半就不辭而別了，氣得陳翰柏直罵娘。

第二女主角離開的當天晚上，狄柯和林婭菲說：“我看你完全可以代替她，你們長得很像，再說你還在電視臺干過，你可以頂她的缺。”林婭菲笑了笑說 ：“別難為我了，我可不想被導(dǎo)演訓來呼去的，他太兇了。”

陳翰柏是靠拍廣告起家的，后來涉足到影視圈，已有了一定的知名度。由于林婭菲的拒絕出演，陳翰柏找她談話：“救場如救火，憑我和狄柯的關(guān)系，你也該幫幫我，那個空缺的角色有太多的人想嘗試，不過，我還是覺得你的氣質(zhì)最合適，機會不要錯過。”陳翰柏一臉真誠地祈求著林婭菲，完全沒了往日的盛氣凌人。

就這樣，林婭菲投入了后10集的拍攝中。林婭菲落落大方，不怯場，對陳翰柏提出的要求精心琢磨，慢慢地從一個門外漢，有了一個演員應(yīng)有的素質(zhì)。陳翰柏似乎對林婭菲情有獨鐘，拍戲的時候既耐心又細心，言語不像對別的演員那樣刻薄。休息吃飯的時候。陳翰柏總是單獨給林婭菲講戲，這讓別的演員即妒忌又有些無可奈何。

拍戲期間，狄柯倒清閑起來，不再和林婭菲膩在一起，而是跟別的女演員在一起說說笑笑。3個月后，完滿完成拍攝任務(wù)，到了相互灑淚而別的時候。林婭菲和狄柯說：“我們?nèi)ズＤ贤嫱姘桑娴暮美邸！钡铱旅鎺щy色地看了看林婭菲說：“現(xiàn)在還不成，我又接了一部電視劇，時間很緊，想靜下心寫完它。再說，陳翰柏還需要你去北京進行電視劇后期制作。

晚上，陳翰柏將大家召集在一起開慶功宴。席間，陳翰柏對林婭菲贊不絕口，并要她做下部戲的主角。林婭菲低頭不語，喝著酒，她心里想的是剛才狄柯的話，她感到事情有了變化。散席后，林婭菲和狄柯回到賓館，因為狄柯明天就要離開，有些話她不得不問他：“我們相處有半年多了，我真的想和你守一輩子，答應(yīng)我好嗎，”狄柯沉默半晌說：“怎么可能，婚姻對我來說就像牢籠，我好容易沖了出來，還要和你結(jié)婚？愛一個人為什么要他的全部呢？我們早晚也會各奔東西的。”

狄柯的話讓林婭菲心涼如冰，才半年時間，狄柯居然就對她失去了興趣，當初的熱戀已煙消云散林婭菲說：“我絕對不是你想象的那種女人，我付出了全部感情，而你卻像扔掉一個棋子那樣對待我，難道你過去對我的感情都是假的？”狄柯也有些氣急敗壞，向林婭菲咆哮起來，過去的紳士風度蕩然無存。林婭菲被眼前的狄柯氣暈了，摔上房門，跑出了賓館。

已是深夜，林婭菲走進了街旁的一家酒吧，一個人借酒澆愁起來。不一會兒，手機響起來，她原本以為是狄柯打來道歉的，可電話那頭卻是陳翰柏。半小時后，陳翰柏來到酒吧，勸慰起林婭菲來：“狄柯剛才找

到我，說你跑了出來，我們大家都在找你，這里人生地疏的，一個女子不安全，還是和我回去吧。”在林婭菲傷心欲絕的時候，是陳翰柏來到了她身旁，而不是狄柯，林婭菲感覺她和狄柯的關(guān)系算是徹底完結(jié)了。

狄柯都沒來得及和林婭菲說聲道別，兩人的情感就草草收場了。而林婭菲和陳翰柏去了北京，進行電視劇的后期制作。兩個月后，電視劇順利通過了終審，允許在各地方臺播出，林婭菲也小有了名氣。

愛再次碰壁，

心灰意冷逃離愛情現(xiàn)場

陳翰柏確實是個呼風喚雨的人，他不單單是個導(dǎo)演，他還有一個大型飯店和快餐店，貨運公司及廣告公司。

又到了冬天，北京的冬天干冷干冷的，陳翰柏花了5萬元為林婭菲買了件貂皮大衣。穿在身上，林婭菲心里暖暖的，這滿足了她虛榮和寂寞難耐的心緒。陳翰柏隔三差五就給林婭菲買貴重的禮物，目的只有一個，就是想讓林婭菲做他的情人。而林婭菲被陳翰柏的一次次真誠打動，順其自然地成了他的情人。這次林婭菲也以為自己找到了歸宿。

林婭菲住進了陳翰柏的別墅,不再拋頭露面。2005年3月的一天夜里，兩人正在纏綿，陳翰柏的手機鈴聲打斷了他們的溫存。原來陳翰柏的廣告公司有一樁大買賣被別的公司搶走了，陳翰柏馬上吩咐手下的弟兄教訓那個不知趣的公司經(jīng)理一頓，陳翰柏陰狠的一面暴露無遺，這讓林婭菲擔憂起來，原來陳翰柏也是個為了錢而不擇手段的人。雖說陳翰柏是個知名的大導(dǎo)演，人前儒雅氣十足，任誰也想不到他會用暴力手段控制著自己的利益。林婭菲忽然明白，這樣的人怎么能和自己長久呢？至少沒有安全感。

陳翰柏在擁有林婭菲的同時。還同時和幾個女人有著曖昧關(guān)系，而且越來越明張膽，這讓林婭菲又氣又恨。有一天，陳翰柏把一個女孩子領(lǐng)回了家，并大言不慚地和林婭菲說：“這是我朋友的女兒，是下部電視劇的主角，臨時住這里。“林婭菲看著那個滿臉濃妝艷抹所謂朋友女兒的女人，徹底失去了信心，那是一種無奈和對自己再一次錯誤選擇的自嘲。半夜，陳翰柏偷偷下了床去了那個女孩的房間。林婭菲看在眼里，痛在心上，她輾轉(zhuǎn)反側(cè)，根本無法入睡。林婭菲怎么會猜不出陳翰柏的意圖呢， 他無非是想找個借口讓自己走。

林婭菲的容忍讓陳翰柏肆無忌憚。有一天，林婭菲獨自去酒吧喝了許多酒，哭干了眼淚，她夢想中轟轟烈烈的愛是那樣的稍縱即逝，越是想強留的越是背叛她。半夜，林婭菲搖搖晃晃地回到別墅，卻看到陳翰柏和那個女孩百般調(diào)情。忍無可忍的林婭菲開始歇斯底里地摔東西，破口大罵這對狗男女，她發(fā)泄著，其中還包含著對狄柯的憎恨。而陳翰柏顯得心平氣和，他說：“我們是啥不要緊，關(guān)鍵你也強不到哪去；當初我答應(yīng)給狄柯的稿酬應(yīng)該是20萬，可我看中了你．多給了他10萬，讓他把你轉(zhuǎn)讓給我．沒想到他卻同意了。”

篇4

關(guān)鍵詞 膽固醇 肝癌 血液

資料與方法

將研究對象分為四組：①肝癌患者組：2002～2007年經(jīng)病理確診的未經(jīng)治療首次入院的肝癌患者74例。平均年齡56.4歲，測定其血清總膽固醇(糖尿病、冠心病等除外)。②非腫瘤患者對照組：隨機抽取非腫瘤住院患者86例，均已排除冠心病、糖尿病及嚴重肝腎功能障礙，平均年齡52.3歲。③健康對照組：體檢患者88例，平均年齡50.6歲。④低蛋白癌癥患者組：血清白蛋白0.05)。

方法：四組患者均空腹、抽靜脈血，用酶法分別檢測血清總膽固醇含量，其中低白蛋白癌癥患者測定蛋白糾正前后的膽固醇含量。測定儀器為日立7170型全自動生化分析儀，試劑合由邁克公司提供，我院檢驗正常值為2.9～5.5mmol/L。

統(tǒng)計學處理：測定結(jié)果用X±S表示，組間比較采用t檢驗。

結(jié) 果

肝癌患者組總膽固醇均值3.42±0.14mmol/L，非腫瘤患者組總膽固醇均值4.95±0.81mmol/L，健康對照組總膽固醇均值5.01±0.63mmol/L。肝癌組與非腫瘤組比較差異有顯著性(t=2.135，P0.05)。低蛋白

討 論

國外學者報道死于癌癥的人其基線血膽固醇水平顯著低于存活者，并且指出癌癥患者血膽固醇水平每3年以0.13mmol/L速度遞減[1]。有文獻報道宮頸癌、卵巢癌、肝癌、肝癌、胃癌等患者體內(nèi)LDL代謝率明顯增加，使細胞大量從血液中LDL顆粒內(nèi)攝取膽固醇，導(dǎo)致血膽固醇含量降低[2，3]。低膽固醇血癥可能通過影響免疫細胞膜的穩(wěn)定性而干擾機體的防御機能，使機體免疫力下降而致癌的發(fā)生。

本資料顯示，血清總膽固醇水平與肝癌之間呈負相關(guān)。血清總膽固醇降低是癌性病灶存在時過多地消耗膽固醇所致。低白蛋白的癌癥患者在糾正蛋白治療后膽固醇水平明顯提高，提示低血清膽固醇水平可能是疾病進展中代謝變化的結(jié)果；也說明癌癥代謝消耗或營養(yǎng)情況引起血膽固醇水平下降。因此，血清膽固醇水平在臨床上可作為肝癌患者的診斷及預(yù)后的一項輔助指標。

參考文獻

1 Cambein F.Total serum cholesterol and cancer mortility in a middleaged male population.Am J Epidemol，1980，112(4)：388.

篇5

關(guān)鍵詞：硫化氫；肝癌；多藥耐藥；BDNF

中圖分類號：R735 文獻標識碼：A 文章編號：1004-4949（2013）04-0-02

肝癌（Hepatic carcinoma， HC）作為世界上常見的惡性腫瘤，因其惡性程度高、易發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，而成為當今醫(yī)學的難題。在腫瘤化療藥物的應(yīng)用方面，因其產(chǎn)生多藥耐藥，使肝癌細胞增強了對藥物的耐受性，影響了治療效應(yīng)，進一步阻礙了化療藥物的臨床應(yīng)用。HC多藥耐藥的調(diào)控機制極其復(fù)雜，而目前已經(jīng)明確細胞中Bcl-2、P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）的異常表達在產(chǎn)生耐藥性方面處于重要地位[1]。因此，在化療藥物治療肝癌的策略上，如何預(yù)防多藥耐藥的產(chǎn)生成為最重要的靶點。最近幾年，硫化氫（hydrogen sulfide，H2S）作為一種氣體分子，在神經(jīng)細胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)已被廣泛研究認識。有研究表明，H2S能使多種腫瘤細胞異常增殖，且能增強細胞的耐受性和抗凋亡能力[2]。當前，有關(guān)H2S與腫瘤相關(guān)的研究得到廣泛重視，本文就H2S與肝癌的研究進展作一綜述。

1 硫化氫的來源

硫化氫（hydrogen sulfide，H2S）作為三種氣體分子成員中的一員，人們一直只關(guān)注它的毒性機理，直到上世紀九十年代才證實其可能是神經(jīng)遞質(zhì)，擁有重要的生理功能。H2S在機體內(nèi)可內(nèi)源性生成，在內(nèi)環(huán)境條件下，H2S 在許多生物過程中發(fā)揮重要作用，而它的代謝和功能的異常，亦與許多疾病相聯(lián)系[3]。最近有研究發(fā)現(xiàn)H2S能促進多種腫瘤細胞增殖和抗凋亡，如肝癌等[2]。H2S在腫瘤中的異常代謝，可能參與了腫瘤的發(fā)生、進展。

2 硫化氫與多藥耐藥

多藥耐藥（multidrug resistance，MDR）是目前腫瘤耐藥機制最重要的方面，也是腫瘤臨床化療失敗的最主要原因。MDR是指對一種藥物耐藥，而又對其他不同結(jié)構(gòu)、不同作用機理的化療藥物同時產(chǎn)生交叉耐藥。近年來，通過對腫瘤耐藥機制的深入研究，其主要涉及到以下幾種多藥耐藥相關(guān)蛋白。

P-糖蛋白是一種膜轉(zhuǎn)運蛋白，能把細胞內(nèi)的化療藥物排至胞外，使胞內(nèi)藥物的殺傷能力減弱，進而影響化療效果，而在肝癌細胞中P-gp高表達往往預(yù)示著化療的失敗。有研究發(fā)現(xiàn)P-gp可能參與抵抗細胞凋亡的調(diào)控，提示可能參與腫瘤細胞免凋亡[4]。最近針對P-gp的靶向治療同樣取得較新的進展，如L1EPO、ZD6474等能抑制P-gp的表達或功能，而逆轉(zhuǎn)多藥耐藥[5]。

GST是一種具有解毒功能的酶類，在病理狀態(tài)下，其活性的異常升高通過降減化療藥物的細胞毒性而成為惡性腫瘤MDR形成的又一重要因素。GST主要通過兩條途徑發(fā)揮其功能，一是催化谷胱甘肽與抗腫瘤藥物形成復(fù)合物，再被轉(zhuǎn)運出細胞；二是直接結(jié)合親脂性化療藥物，使藥物的水溶性增加、排泄增加，降低藥物的毒性[6]。

Bcl-2是最重要的抗凋亡蛋白，是影響腫瘤進展的重要指標，其高表達可明顯抑制細胞凋亡，同時對化療藥物引起的細胞凋亡亦具有抑制作用。現(xiàn)在更多的研究提示Bcl-2不但增加化療的耐受性，而且對腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、惡變等方面亦有促進。最近幾年，在神經(jīng)系統(tǒng)損傷方面的研究也涉及Bcl-2，特別在H2S抗神經(jīng)毒性方面發(fā)現(xiàn)，最終通過上調(diào)Bcl-2的表達發(fā)揮作用[7]。

p53是目前發(fā)現(xiàn)的最主要的抑癌基因，其野生型p53能夠加速細胞凋亡，而當p53異常表達時抗腫瘤藥物誘導(dǎo)的凋亡被抑制，增加細胞對化療藥物的耐受性[8]。張陽德等[9]報道在肝癌耐藥細胞株中發(fā)現(xiàn)p53 表達水平明顯降低，預(yù)示其可能在肝癌耐藥方面參與調(diào)節(jié)。而p53低表達進一步影響了相關(guān)促凋亡蛋白的作用，使腫瘤細胞免受凋亡蛋白的調(diào)控，導(dǎo)致腫瘤細胞增殖失控。

以上所述，說明腫瘤耐藥機制的復(fù)雜性，各靶分子間存在密切聯(lián)系，相互作用，而H2S作為新的氣體分子可能參與調(diào)控。

3 多藥耐藥與肝癌

肝癌因其發(fā)病隱蔽，高度惡性，易侵襲及轉(zhuǎn)移、死亡率居高不下等特點，被譽為“癌中之王”。近段時間，越來越多的研究證實，化療藥物引起的多藥耐藥已經(jīng)阻礙了其在化療領(lǐng)域的應(yīng)用。多藥耐藥在肝癌中的主要作用是介導(dǎo)一系列的耐藥機制，進而調(diào)控相關(guān)抗凋亡蛋白、膜轉(zhuǎn)運蛋白等，產(chǎn)生藥物抵抗，抑制細胞凋亡[1]。多藥耐藥蛋白已成為肝癌細胞與藥物化療的異類代謝產(chǎn)物，并通過激活多種信號通路，增強細胞對化療藥物毒性的耐受性。近二十年來，對多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑的研究取得重大突破，主要通過靶向抑制P-gp而實現(xiàn)，但因其毒副反應(yīng)大影響臨床推廣[10]。多藥耐藥蛋白的異常表達，是肝癌化療面臨的難點，而抑制耐藥蛋白的表達是最可靠的方法。

4 硫化氫與BDNF

腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）是第二個被發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)營養(yǎng)因子，廣泛存在于神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)，具有營養(yǎng)和保護神經(jīng)的作用，并能修復(fù)受損的神經(jīng)元。H2S在神經(jīng)系統(tǒng)的研究已經(jīng)明確具有保護神經(jīng)作用，我們實驗團隊在大鼠海馬組織中檢測到H2S能促進BDNF的表達，保護海馬生理功能[11]。Zhen F Y等[12]在肝癌患者血清中發(fā)現(xiàn)BDNF水平升高。

5 BDNF與肝癌

BDNF對神經(jīng)元的保護作用毋庸置疑。隨著研究的進展，發(fā)現(xiàn) BDNF與多種腫瘤的發(fā)生有關(guān)，并能促進細胞的增殖，如肝癌細胞株等[13]。Yang T等[14]認為，BDNF通過激活細胞內(nèi)多條信號通路參與對腫瘤增殖、凋亡的調(diào)控，如PI3k-AkT等通路。張克蘭等[15]證實，肝癌細胞內(nèi) BDNF過表達，并通過對Bcl-2蛋白促表達而抑制其失巢調(diào)亡。

6 總結(jié)

綜上所述，腫瘤耐藥機制是一個龐大而復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)，各信號分子及通路緊密聯(lián)系，相互作用。雖然在腫瘤耐藥方面的研究已取得較可觀的成績，但部分調(diào)控機制仍不完善，有待我們進一步去探索證實。氣體信號分子H2S被認識以來，在機體內(nèi)促進細胞增殖，抗氧化應(yīng)激損傷，抗神經(jīng)毒性，并通過調(diào)節(jié)機體信號通路而擁有保護作用。目前針對 H2S與腫瘤耐藥的研究甚少，需要更多的科學研究予以證實，最終將其開發(fā)應(yīng)用到臨床上，為更多的癌癥患者提供新的治療。

參考文獻

[1] Ling X，He Y，Zhang G，et al. Increased P-glycoprotein expression in mitochondria is related to acquired multidrug resistance in human hepatoma cells depleted of mitochondrial DNA[J].Int J Oncol，2012，40（1）：109-18.

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篇6

愛國，是一面飄揚在世界各國上空的永不退色的旗幟。這面旗幟在我國更是絢麗多姿。?亞洲第一飛人?柯受良用自己的的實際行動表達了他對祖國的深愛，也向世界宣告：中國人不是懦夫。錢三強沖破重重阻力，放棄了優(yōu)厚的生活待遇，毅然回國，實現(xiàn)了她的人生價值。在為她的人格魅力深深欽佩之余，我覺得一個人要想獲得人生價值，愛國情操將是他的強有力的后盾，由此可見，愛國需要實干家。

縱觀歷史長廊，多少成名人物都有一顆愛國之心。岳飛的?精忠報國?，范仲淹的?先天下之憂而憂，后天下之樂而樂?，陸游的?但悲不見九州同?，霍去病的?匈奴未滅，何以為家?……她們那個不是由于強烈的愛國情感?那一位不是愛國的實干家，那一個不是為了中國之奮起而鞠躬盡瘁的仁人志士?相反，只圖個人利益，而不顧國家利益的人，非但不會流芳百世，反而落的個千古罪人。就如吧!他滿足了個人私欲，做成了他的皇帝夢，功績不可為不大，然而到頭來，他獲得了什么?不過是人們的唾棄，不過是?竊國大盜?的千古罵名。杰出的音樂家，冼星海曾經(jīng)說過，?我的人格，良心不是金錢所能收買的。?而他也正是這樣做的，他用滿腔的愛國熱情譜寫的歌曲，為我國的革命音樂史添上了光輝得一筆。

俱往矣，數(shù)風流人物還看今朝。不錯，當今我們國家正以令世界矚目的速度前進著，人們看到的是一個站起來的國家。當前就更需要一批批愛國實干家去創(chuàng)造祖國的輝煌

篇7

【關(guān)鍵詞】肝癌手術(shù)治療放射治療化學治療介入治療生物治療熱治療中醫(yī)藥治療

目前多采用放射免疫法(RIA)或AFP單克隆抗體酶免疫(EIA)快速測定法檢測血清AFP含量正常人血清中可沒理微量小于20μg/L水平肝細胞癌增高者占70～90%通常AFP濃度與腫瘤大小有相關(guān)但個體差異較大一般認為病理分化接近正常肝細胞或分化程度極低者AFP常較低或測不出國外公認標準往往偏高易于漏診我國重視中等和低濃度AFP增高的動態(tài)觀察臨床實踐中對AFP低濃度者常須結(jié)合影像診斷技術(shù)進行隨訪有助于及早確立診斷肝癌常發(fā)生在慢性活性肝病基礎(chǔ)上故須加以鑒別慢性肝炎肝炎后硬化有19.9%～44.6%患者AFP增高濃度多在25～200μg/L之間良性肝病活動常先有丙轉(zhuǎn)氨酶明顯升高AFP呈相隨或同步關(guān)系先高后低一般在1～2月內(nèi)隨病情好轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)氨酶下降A(chǔ)FP隨之下降呈“一過性”有時良好肝病活動AFP亦可呈反復(fù)波動持續(xù)低濃度等動態(tài)變化但必須警惕肝病活動的同時可能有早期癌存在

其他肝癌標志物的檢測：近年來現(xiàn)血清AFP陰性的原發(fā)性肝癌有增多趨勢因此開發(fā)更新更特異更敏感的標志物已成為緊迫的課題尋找癌胚特性的同工酶及異質(zhì)體;尋找特異亞組成成份為當前肝癌血清標志物研究的方向近年來國內(nèi)外報道對肝癌診斷具有較高價值的有：

①r-GT同工酶(GGTⅡ)：應(yīng)用聚丙烯酰胺梯度電泳分離法可顯示同工酶12條帶Ⅰ´ⅡⅡ´帶是原發(fā)性肝癌的特異條帶陽性率為79.7¯P陰性者此酶陽性率為72.7%

②甲胎蛋白異質(zhì)體(FucAFP)：目前以扁豆凝集素(LCA)親和交叉免疫自顯影法測定AFP異質(zhì)體診斷價值為高有二種異質(zhì)體即LCA非結(jié)合型(AFP-N-L)和結(jié)合型(AFP-R-L)肝癌含AFP-N-L平均49.13±27.20%(0～100%)<75%為肝癌診斷標準陽性率86.0%隨病情惡化而降低非癌肝病AFP-N-L為93.30±7.66%假陽性率為1.6%

③異常凝血酶原：肝臟合成凝血酶原無活性前體經(jīng)維生素Kr羧化為活性形式肝癌時肝癌細胞的微粒體內(nèi)維生素K依賴性羧化體系功能障礙羥化酶活力下降導(dǎo)致谷氨酸羧化不全從而形成異常凝血酶原最近人們發(fā)現(xiàn)肝癌細胞自由具有合成和釋放異常凝血酶原的功能國內(nèi)用放射免疫自顯影法測定異常凝血酶原≥250μg/L為標準肝癌陽性率為69.4¯P低濃度和AFP陰性肝癌的陽性率分別為68.3%和65.5%小肝癌符合率為62.2%多數(shù)資料表明異常凝血酶原對原發(fā)性肝癌有較高的特異性性各種非癌肝病繼發(fā)性肝癌及良性肝腫瘤的假陽性極低可能成為有價值的肝癌標志物

④血清巖藻糖苷酶(AFu)：AFu屬溶酶體酸性水解酶類主要生理功能是參與巖糖基的糖蛋白糖脂等生物活性大分子的分解代謝AFu超過110Kat/L應(yīng)考慮原發(fā)性肝癌國內(nèi)報道AFu診斷原發(fā)性肝癌的陽性率為81.2%對AFP陰性肝癌和小肝癌陽性率分別為76.1%和70.8%繼發(fā)性肝癌良性肝占位病變均陰性但肝硬化慢性肝炎的假陽性較高

⑤M2型丙酮酸激酶(M2-PyK)：丙酮酸激酶(PyK)是糖酵解中的關(guān)鍵酶有LRM1M2(k)型4種同工酶胎肝及肝癌組織中主要是M2(K)可視為一種癌胚蛋白ELIS夾心法可測到Pg級微量靈敏度高的癌標志正常值為575.8±259.5ng/L肝癌者較正常高5倍在小肝癌階段即明顯增高分化愈差M2-PyK值得高愈明顯陽性率5.2%消化道腫瘤亦可升高而肝炎良性肝腫瘤不高

⑥同工鐵蛋白(AIF)：同工鐵蛋白在肝癌時由于肝癌細胞合成增多釋放速度加快故對肝癌診斷有一定意義正常人為16-210μg/L300μg/L為診斷界值肝癌患者72.1%超過此值假陽性為10.3¯P陰性或低濃度AFP肝癌陽性率66.6%<5cm的小肝癌陽性率62.5%

肝癌手術(shù)治療方法是臨床上比較常用的治療方法之一，早期診斷、早期治療是肝癌的手術(shù)治療成功的關(guān)鍵。肝癌手術(shù)治療主要是針對早期肝癌，是指腫瘤在3公分以下的肝癌患者。肝癌由于起病比較隱匿，治療效果也不明顯，一般患者就診時肝癌已經(jīng)發(fā)展成中晚期，原發(fā)性肝癌俗稱“癌中之王”。對于肝癌的治療研究領(lǐng)域還需要長時間的積極探索。

肝癌的化學治療也就是我們俗稱的肝癌化療，肝癌化療利用特制的抗癌藥物擾亂癌細胞的繁殖，藉此殺死癌細胞。化療藥物有口服的，但通常是靜脈注射劑，甚至直接注射入為癌腫輸送養(yǎng)份的動脈（通常所說的介入治療）。每個療程通常為時數(shù)天。由于有化學治療有副作用，療程后會暫停幾個星期，讓身體復(fù)原，然后才進行下一個療程。療程數(shù)視肝癌的類型而定。化療是轉(zhuǎn)移性肝癌的主要治療方式，所用的藥物都需要考慮原發(fā)性癌腫是從哪里開始的。化學治療一般有副作用，會引起一些不適。但也有些患者幾乎不受影響。所有的副作用都可以用藥物控制。化療藥物對癌細胞作用的時候，會令血液中正常細胞的數(shù)目下降，使你比較容易受感染和疲倦。接受化療時，會為你定期驗血。必要時，會給你輸血、使用抗生素、服用中藥提高免疫力以應(yīng)付感染。有些治療原發(fā)性肝癌用的藥物會引起惡心、嘔吐和腹瀉。醫(yī)生會視需要給你使用止吐藥及中藥對證治療。有些化療藥物會令口腔疼痛甚至潰爛。必須按照指導(dǎo)，經(jīng)常漱口。如果接受治療時沒有胃口，可飲用營養(yǎng)飲品或軟性食物。雖然單獨化療在肝癌治療中的價值有限，但其與手術(shù)、介入等方法聯(lián)合應(yīng)用仍是治療肝癌的主要手段。

由于肝癌的放療是姑息治療性質(zhì),放射野只需包括局部的腫瘤,不必包括肝的淋巴引流區(qū)。對巨塊型肝癌,只能作局部放療或術(shù)中插植后裝治療。若射野面積>200c時,可用移動條照射野技術(shù)。對巨塊型伴有肝內(nèi)播散的,先作局部腫塊照射,若局部腫瘤對放療有反應(yīng)，腫瘤消退,則可再使用全肝照射。對彌漫型的病灶,一開始就可使用全肝照射。用移動條照射技術(shù)較使用兩個相對大照射野為好。對因肝門區(qū)受腫瘤壓迫而引起黃癥和脫水者,先行照射肝門區(qū),以緩解癥狀。關(guān)于照射總劑量,以照到病人肝功能不嚴重損害為限,盡可能給予較高的劑量。放射劑量給予的速度不能太快。如用常規(guī)的每日1次,每周5次的照射方法,局部小野照射(面積小于200厘米)，150-200cGy/次;全肝大野照射100-150cGy/次;全肝移動條照射150-200cGy/次。肝癌如采用局部照射,準確定位至為重要,必須力求使照射野覆蓋整個腫瘤而不使漏網(wǎng),并采用較小劑量,較長療程,累計總劑量足夠大,合并健脾理氣中藥,與化療交替并同時合并適用免疫治療。放療期間要密切隨訪病人的AFP、肝功能、局部腫瘤的消退和病人的一般情況。放射治療的最大缺點為全肝照射導(dǎo)致肝功能損害一一放射性肝炎,并可明顯抑制機體免疫功能,為此宜合并免疫治療。局部放療對肝癌的骨轉(zhuǎn)移有明顯的姑息性止痛作用。目前有用光子刀治療肝癌的報道,但其具體療效尚需考證。

上述方法，無論手術(shù)治療還是非手術(shù)治療都各有優(yōu)缺點，單獨應(yīng)用的效果不甚滿意。目前肝癌治療尚缺乏特異性方法，隨著基礎(chǔ)研究的成果和先進技術(shù)的融合，新的治療方法將不斷出現(xiàn)，然而，針對原發(fā)性肝癌的治療，更應(yīng)重視綜合及序貫治療，即由單一的治療模式，轉(zhuǎn)變?yōu)槁?lián)合治療的多種治療模式，以期提高患者的生存治療，延長患者的生存時間。

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篇8

天降厄運，農(nóng)婦身患絕癥盼救助

1986年10月29日，羅瑋出生于四川廣元市蒼溪鴛溪鎮(zhèn)，盡管家境貧窮，但善良的父母給了她一顆善良的心，打小就樂于助人。

2005年3月12日，在成都打工的羅瑋從電視上看到一則報道：蒲江縣農(nóng)婦廖紅霞因患肝硬化，上呼吸道大出血，住進了成都華西醫(yī)院，生命岌岌可危。廖紅霞的丈夫張元林含淚求助當?shù)孛襟w，表示要“賣腎救妻”。羅瑋不僅被張元林夫婦的患難真情感動，也為掙扎在死亡線上的廖紅霞深深擔憂。她不禁想起幾年前，身患重病的爺爺就是因為無錢醫(yī)治去世的。于是，羅瑋萌生出了一個大膽的想法，她要為廖紅霞捐肝！

第二天一大早，羅瑋匆匆趕到華西醫(yī)院，通過與廖紅霞的親友及醫(yī)護人員的交談，她對廖紅霞有了更多的了解和同情。

今年33歲的廖紅霞家住蒲江縣壽安鎮(zhèn)松華村，1990年與張元林結(jié)為夫婦，一年后生下女兒小雪。廖紅霞勤勞賢惠，體貼丈夫，孝敬公婆，是村里人公認的好媳婦。

誰知，命運多舛。就在小雪1歲多的時候，丈夫因觸犯刑律被法院判處有期徒刑5年。張元林入獄后，廖紅霞一人挑起了家庭重擔，服伺老人，撫養(yǎng)女兒，耕田種地……閑時，她還常常帶著女兒去探望丈夫，鼓勵他好好改造。在妻子的幫助下，張元林因表現(xiàn)較好被提前一年釋放。

可是因為長期的超負荷勞動，廖紅霞積勞成疾。2002年3月，正在地里忙活的她突然大口吐血，昏倒在地。張元林立即抱起妻子，跌跌撞撞地趕到鎮(zhèn)衛(wèi)生院。檢查結(jié)果，竟是肝硬化。

為了救治妻子，張元林四處舉債，先后花去5萬多元，家里早已一貧如洗。然而廖紅霞的病情卻日漸沉重，幾次吐血都險些要了她的命。

2005年3月2日，廖紅霞因連續(xù)吐血被丈夫送進華西醫(yī)院，醫(yī)生神色凝重地告訴張元林，廖紅霞的病情已處于高危期，如不盡快施行肝移植，等待廖紅霞的只有死亡。

面對如此殘酷的現(xiàn)實，張元林驚呆了，親友們驚呆了！盡管進行肝移植，廖紅霞還有活下去的希望，可15萬元的巨額醫(yī)療費用從哪里來？活體肝源從哪里來？

走投無路的張元林向華西醫(yī)院嚴律南教授哭訴了妻子的遭遇，并表示愿意為妻子捐肝。嚴教授被這個農(nóng)家漢子的真情打動，當即決定啟動醫(yī)院的免費活體肝移植機制。他說：“如果你們夫妻的血型及其他指標均能符合，醫(yī)院將盡快安排手術(shù)。”

可是，無情的現(xiàn)實泯滅了張元林的希望――經(jīng)檢查，他的血型與妻子不符。焦急萬分的張元林轉(zhuǎn)只好向親戚求助。張元林的弟弟、弟媳、表妹、表弟甚至年過花甲的父親張國文和母親蒲淑元都表示愿意捐肝。化驗結(jié)果給所有人一絲希望：這么多人中惟有張國文與廖紅霞的血型一致。張元林又喜又憂，喜的是妻子終于有救了，憂的是父親年老體弱，他能承受得了嗎？

張國文是個深明大義的老人，為了救兒媳，他戒掉了煙酒，并做了肝穿等一系列捐肝前的檢查。然而結(jié)果顯示，老人的肝不適合移植。

廖紅霞的不幸遭遇深深刺痛了羅瑋，從那一刻起，她捐肝的決心愈發(fā)堅定。

這時，有人給她忠告：捐肝很危險。國際上肝移植供體死亡病例大約是腎移植的10倍，此外，供體還有并發(fā)癥、生活質(zhì)量、完全康復(fù)時間、經(jīng)濟壓力等嚴重的潛在風險。有人對她表示懷疑：“你為啥要這樣做？捐肝還是賣肝？義舉還是為了出名？”有人則勸阻：“就算你不為自己著想，也該為父母著想，他們養(yǎng)你這么大容易嗎？愛心重要，孝心更重要。”

面對這些，羅瑋平靜地說：“我這么做，主要是不想讓小雪失去媽媽，失去母愛。愛心和孝心都重要，我現(xiàn)在先獻愛心，將來再盡孝心。”

親情碰撞，花季少女挺身而出獻愛心

得知女兒將無償為陌生人捐肝的消息，遠在廣元的羅瑋父母馬上表示反對：“你瘋了，給一個無親無故的人捐肝，你是咋個想的？”見電話里勸不動女兒，父母急忙通知在成都的熟人閻女士，再三叮囑她一定要守住羅瑋，不要讓她去冒險。

出乎意料的是，閻女士非但沒有看住羅瑋，反而被廖紅霞的不幸遭遇打動，被羅瑋的一番真情感動，陪羅瑋一起到醫(yī)院。

一臉憔悴的廖紅霞拉著羅瑋的手，激動而又悲愴地說：“我實在不忍心在妹妹身上尋找第二次生命。”羅瑋卻滿臉笑容，坦然答道：“廖姐，幾天前我從報紙上看到你公公張國文的照片，覺得他很像我爺爺，幫你就像幫我爺爺。”

檢查結(jié)果很快出來了：羅瑋的血型與廖紅霞匹配。羅瑋很高興，她想如果自己的肝臟能夠挽救廖紅霞的生命，那該是一個怎樣的奇跡啊！

為了表示決心，羅瑋主動提出要簽一份協(xié)議，主要條款是：甲方（羅瑋）同意捐肝給乙方（廖紅霞），乙方表示接受；甲方在簽訂協(xié)議書前，已充分考慮到本手術(shù)對甲方有風險，甲方自愿承擔因手術(shù)造成的風險；甲乙雙方無需承擔手術(shù)費用，手術(shù)中的所有費用由華西醫(yī)院承擔；鑒于本手術(shù)的特殊風險，丙方（張元林）自愿與甲方共同承擔因手術(shù)造成甲方的風險，甲方表示接受。

3月14日下午3點，在人們褒貶不一的議論中，羅瑋毫不猶豫地在《協(xié)議書》上簽上了自己的名字。

就在簽下協(xié)議書的當晚，羅瑋的父親胡仲雙和母親羅景連心急火燎地趕到成都，他們此行的目的是說服女兒放棄捐肝，于是，一場特殊的親情碰撞開始了。

胡仲雙不解地問女兒：“瑋瑋，你怎么會做出這樣的決定呢？是我們家里窮，還是生活上虧待了你？”

“爸爸，你千萬莫亂想，我自愿捐肝是因為血型合適，廖姐太慘了，還有一個12歲的女兒，小雪不能沒有媽媽。”羅瑋回答道。

“肝臟是人體的主要器官，草割了要長，人死不能復(fù)生，你想過嗎？”

“我人年輕，身體又好，醫(yī)生說3個月就可以長出來，你放心，我會沒事的。”

羅景連忍不住說：“你有沒有想過爸爸、媽媽，萬一你有個三長兩短讓我們怎么活？”

胡仲雙接過話題：“捐肝以后怎么辦？你以后的生活呢？有什么保障沒有？”

“我是自愿的。”羅瑋頭也不抬地說。

“你還年輕，要捐就捐我們父母的。”胡仲雙提高了聲音。

“我都簽字了。”羅瑋的聲音依然堅定。

時間已到第二天凌晨，經(jīng)過一番激烈的親情對決，胡仲雙夫婦仍然沒有說服女兒，他們只有使出最后一招――強行帶著女兒離開成都。

3月15日一大早，胡仲雙花600元租了輛面包車，將女兒帶回了廣元。胡仲雙無奈地說：“我主要怕新聞媒體追蹤報道，如果有了社會輿論壓力，再加上已經(jīng)簽字的協(xié)議，可能就將女兒逼上手術(shù)臺了。她才19歲，未來的路還很長，我們不敢開玩笑。”

愛女心切的胡仲雙已經(jīng)許多天沒有吃飯了。一方面，他并不反對女兒做善事，另一方面，他卻不愿讓女兒去冒險，這種矛盾的心理煎熬得他食不知味，夜不能眠。也許是害怕傷了女兒的心，特別是看到女兒回家后整天哭哭啼啼，于是，他答應(yīng)讓女兒陪廖紅霞走完人生的最后路程。

3月16日，當人們?yōu)檎也坏搅_瑋而焦急的時候，張元林突然接到羅瑋的電話：“請您和廖姐放心，我一定盡快回來。”

2005年3月19日，胡仲雙攜妻女趕到成都華西醫(yī)院，他試圖當面勸阻廖紅霞。

胡仲雙一席話，讓廖紅霞百感交集，作為母親，她非常理解他此時此刻的心情，她當即表示不接受羅瑋捐肝，更不愿犧牲胡仲雙一家的幸福。廖紅霞還拉著羅瑋的手說：“好妹妹，你的心意我領(lǐng)了，但說什么我也不會同意你捐肝，你一定要答應(yīng)我，一定要聽父母的話，千萬不要傷老人的心，因為他們都很愛你……”羅瑋不情愿地點了點頭，但捐肝的愿望卻沒有改變。

2005年3月25日，羅瑋在律師的陪同下來到省公證處，公證處負責人李安科嚴肅地問羅瑋：“你的父母知道你為廖紅霞捐肝的事嗎？”“知道。”“他們同意嗎？”“他們沒說同意，但是尊重我自己的選擇。”為了表示不改初衷，羅瑋鄭重地寫下了一份聲明：“我在無任何欺詐、脅迫的情況下，自愿捐贈肝臟……”

手術(shù)最終定在3月30日上午進行。

為了預(yù)防不測，羅瑋在手術(shù)前寫下一份遺書：“明天手術(shù)，如果我失敗了，我愿捐掉自己所有的器官，然后我很希望有單位聘用我爸爸，我不能孝順他，覺得對不起他，只有下輩子好好還了……”

義無返顧，斷腸捐肝感天動地震世人

做手術(shù)那天早晨，許多人趕到醫(yī)院。有記者問羅瑋：“后悔嗎？現(xiàn)在還來得及的”。她搖搖頭：“不后悔，決不后悔！”

手術(shù)室門口，羅瑋撥通了父親的電話：“爸爸，你的聲音咋這么嘶啞，你們要保重身體。”當?shù)弥赣H已說服了母親，同意自己捐肝時，羅瑋高興地笑了起來。那神情，好像不是去捐肝，而是即將踏上愉快的旅途。

麻醉前一分鐘，醫(yī)生問羅瑋：“小姑娘，想清楚沒有，現(xiàn)在還可以反悔。”其他醫(yī)護人員也紛紛勸道：“你還年輕，為將來著想，不必這么固執(zhí)地捐肝。”羅瑋堅定地回答：“我要是想反悔，現(xiàn)在也不會躺在這里了。”

上午8時20分，手術(shù)正式開始。4個小時以后，廖紅霞被推進了手術(shù)室。

下午2點30分，愛女心切的羅景連流著眼淚急赴成都，一到華西醫(yī)院就幾乎暈倒，眾人把她扶進病房時，她整個人已經(jīng)崩潰，除了痛哭就是狠命敲打自己的頭，愛女之情，令人動容。

不久，羅瑋的哥哥羅坤也來到醫(yī)院，他原準備到昆明打工，聽說妹妹上了手術(shù)臺，于是心急如焚地趕到成都。

就在親人們?yōu)榱_瑋擔心時，醫(yī)生切下她550克的右半肝，植入了廖紅霞的體內(nèi)。

下午5點20分，羅景連掙扎著從床上爬起來，在眾人的攙扶下，搖搖晃晃地來到手術(shù)室外等女兒。很快，一臺推車從手術(shù)室里推了出來，上面躺著眼睛緊閉、還處于全麻狀態(tài)的羅瑋。羅景連一把抓住推床扶手，眼淚嘩嘩往下掉，口里反復(fù)念著：“我要等瑋瑋醒來，不然她醒來看不見我咋辦？”

當晚10點30分，醫(yī)生為廖紅霞縫上最后一針，歷時14個小時的手術(shù)順利結(jié)束，廖紅霞得救了。

羅瑋的大善之舉感動了成都。很多市民不約而同地來到華西醫(yī)院看望羅瑋，許多人紛紛慷慨解囊：一位老人帶來一個1000元的紅包，一家公司的老總捐助了2萬元，并表示等羅瑋康復(fù)后，將根據(jù)羅瑋及其父親的情況為他們安排工作……

羅瑋的大愛之舉感動了家鄉(xiāng)的父老鄉(xiāng)親。廣元市委宣傳部、市婦聯(lián)、市總工會、團市委、市交通局聯(lián)合發(fā)出倡議書，呼吁社會各界捧出熱忱、奉獻愛心，幫助羅瑋度過難關(guān)。一時間，慰問信和捐款如雪片飄來；“羅瑋救助別人，我們幫助羅瑋”的呼聲似春潮涌動在廣元上空。

羅瑋的大義之舉感動了醫(yī)生。“羅瑋是一個善良得讓人心痛的女孩，我們的心始終是沉甸甸的。”華西醫(yī)院肝移植中心主任嚴律南教授說，“中國目前還沒有器官移植法，由于世界各國禁止器官買賣，因此在實際操作中活體肝移植大都在親人之間開展。羅瑋為素昧平生的陌生人捐肝，這在世界上都是首例，或許將促使中國的器官移植法早日出臺。”

篇9

【摘要】

目的觀察田基黃不同提取物的含藥血清體外抗乙肝和抗肝癌的作用。方法采用酶鏈免疫法，觀察田基黃不同提取物的含藥血清對2215細胞分泌HBeAg和HBsAg的抑制作用。采用MTT技術(shù)，觀察田基黃不同提取物的含藥血清對肝癌細胞BEL-7404增殖的抑制作用。結(jié)果當含藥血清濃度為5％時，田基黃乙醇總提取物和正丁醇提取物對HBeAg和HBsAg呈現(xiàn)較好抑制作用，抑制率分別為34.84％和57.95％，以及76.02％和53.15％（P＜0.05）；當含藥血清濃度為20％時，醋酸乙酯提取物對HBeAg和HBsAg呈現(xiàn)較好的抑制作用，抑制率分別為79.79％和57.22％（P＜0.05）；水提取物3種濃度的含藥血清對HBeAg和HBsAg都有較好的抑制作用，抑制率分別達到了70％和30％以上（P＜0.05）。田基黃各提取物對肝癌BEL-7404細胞都有一定的抑制作用，該抑制作用呈明顯的量效關(guān)系，當含藥血清濃度為20％時，乙醇總提取物、醋酸乙酯提取物、正丁醇提取物和水提取物的抑制率分別為29.74％，53.80％，40.79％和54.24％（P＜0.01）。結(jié)論 田基黃不同提取物含藥血清能抑制2215細胞分泌HBeAg和HBsAg，并且能抑制肝癌細胞BEL-7404的增殖。其抗乙肝的有效成分主要分布在田基黃的水提取物中，而抗肝癌的有效成分則均衡分布于各種極性部位。

【關(guān)鍵詞】 田基黃 2215細胞 BEL-7404細胞 血清藥理學

Abstract：ObjectiveTo observe the anti- hepatitis B and anti-hepatoma effect of different extracts in serums of Hypericum japonicum Thunb. in vitro. MethodsEnzyme linked immune response was used to investigate the effect of the different extracts in serums of Hypericum japonicum Thunb. on HBeAg and HBsAg excreted by 2215 cell in vitro.MTT technique was used to investigate the effect of the different extracts in serums of Hypericum japonicum Thunb. on the growth of hepatoma BEL-7404 cell in vitro. ResultsEtOH and BuOH extracts showed better inhibitory rates on HBeAg and HBsAg as 34.84％，57.95％ and 76.02％，53.15％（P＜0.05）in 5% serum respectively. EtOAc extracts showed better inhibitory rates on HBeAg and HBsAg as 79.79％ and 57.22％（P＜0.05）in 20% serum respectively. H2O extracts had stable inhibitory rates on HBeAg and HBsAg in the three different concentration of serum and the inhibitory rates were all more than 70% and 30% respectively. All extracts showed the inhibitory activity on the growth of hepatoma BEL-7404 cell in vitro and there was obvious dose-effect relationship. The inhibitory rates of EtOH，EtOAc，BuOH and H2O extracts in 20% serum were 29.74％，53.80％，40.79％ and 54.24％，respectively(P＜0.01).ConclusionThe different extracts of Hypericum japonicum Thunb. in serum have the inhibitory effect on HBeAg and HBsAg excreted by 2215 cell and on the growth of hepatoma BEL-7404 cell in vitro. The stable active compounds of anti- Hepatitis B mainly distribute in H2O extracts and the active compounds of anti-hepatoma evenly distribute in each extracts.

Key words：Hypericum japonicum Thumb.; 2215 Cell; BEL-7404 Cell; Seropharmacology

田基黃原名地耳草，始載于《生草藥性備要》《植物名實圖考》，別名雀舌草，系藤黃科金絲桃屬植物地耳草Hypericum japonicum Thumb.的干燥全草。味甘、微苦，性涼，歸肝、膽、大腸經(jīng)。具有清熱利濕、散瘀止痛、消腫解毒的功效［1］。現(xiàn)已研究發(fā)現(xiàn)田基黃中含有內(nèi)酯、香豆素、酚類、蒽醌、黃酮類、維生素類等化學成分［1～4］。現(xiàn)代藥理研究表明，田基黃具有明確的保肝、抑制癌細胞藥理學功效；臨床用于治療急、慢性肝炎，傳染性肝炎，原發(fā)性肝癌，傷寒，副傷寒等。但是直至目前，田基黃的抗乙肝和肝癌有效成分或有效部位仍然不夠清晰。本實驗研究旨在闡明田基黃的抗乙肝和肝癌有效部位，為進一步確定其有效化學成分奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 藥物 田基黃經(jīng)廣西中醫(yī)學院藥用植物教研室韋松基副教授鑒定為藤黃科金絲桃屬植物地耳草Hypericum japonicum Thumb.的干燥全草。

1.2 動物 昆明種小鼠，體重22～26 g，雌雄兼用，由廣西中醫(yī)學院實驗動物中心提供，合格證號：桂醫(yī)動字第11004號。

1.3 試劑 Eagles MEM干粉、RPMI-1640培養(yǎng)基（美國Gibco公司產(chǎn)品，批號：1041001，批號：1243098）；G418、L-谷氨酰胺（北科化學試劑公司進口分裝）；新生牛血清(NBS，杭州四季青公司，批號：060720)；卡那霉素、青霉素、鏈霉素（Sigma分裝）；二甲基亞砜（DMSO，上海生物工程有限公司，批號：54186）；HBsAg，HBeAg檢測試劑盒（上海榮盛生物科技有限公司，批號：20070605，20070711）；MTT (北京拜爾迪生物公司分裝，Amresco0793)。

1.4 細胞系及培養(yǎng)液 HBV-DNA克隆轉(zhuǎn)染人肝癌細胞的2215細胞（購自中國醫(yī)學科學院中國醫(yī)藥生物技術(shù)研究所）： 2215細胞用MEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，培養(yǎng)液含10%胎牛血清，0.03%谷氨酰胺，G418 380μg·ml-1，卡那霉素50 U·ml-1，pH7.2。細胞消化液含0.25%胰蛋白酶，用D-Hangs配制。

肝癌BEL-7404細胞(廣西民族醫(yī)院惠贈)：肝癌BEL-7404細胞用RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，培養(yǎng)液含10%胎牛血清、青霉素100 U·ml-1，鏈霉素100 U·ml-1。細胞消化液含0.25%胰蛋白酶，用D-Hangs配制。

1.5 器材 培養(yǎng)瓶（丹麥Tunclon公司產(chǎn)品）；96孔細胞培養(yǎng)板（美國Corning公司產(chǎn)品）；二氧化碳培養(yǎng)箱(美國Forma公司)；倒置顯微鏡(德國Leica公司)；酶標儀(奧地利Sunrise公司)；吉爾森微量移液器(法國Pipetman公司)；BDX-35BI型座式自動電熱壓力蒸汽滅菌器(上海申安醫(yī)療器械廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1 田基黃不同提取物的制備 取田基黃95％乙醇提取干浸膏37.6 g（每克干浸膏相當于9.1 g生藥），溶于300 ml水中，用醋酸乙酯萃取5次，300 ml/次；水層再用正丁醇萃取5次，300 ml/次。分別合并水層，正丁醇層和醋酸乙酯層，減壓回收溶劑，備用。另取37.6 g田基黃干浸膏，和上述各層提取物，分別溶于適量水中，最后定容成100 ml，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 含藥血清的制備［5］ 取小鼠40只， 體重22～26 g，雌雄兼用。分為5組：空白血清組(灌胃給予生理鹽水)，田基黃乙醇總提取物血清組，田基黃醋酸乙酯提取物血清組，田基黃正丁醇提取物血清組，田基黃水提取物血清組。含藥血清組按每次20 ml·kg -1（68.4 g生藥/kg）劑量灌胃給藥，每天給藥兩次（每天的總給藥量約為田基黃半數(shù)致死量的50%），連續(xù)3 d，末次給藥后1 h，摘眼球取血，離心分離血清，56℃滅活30 min。分別用不含血清的MEM培養(yǎng)液和RPMI-1640培養(yǎng)液稀釋成40%，20％和10％的血清濃度，分別過濾，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 細胞培養(yǎng)

2.3.1 2215細胞培養(yǎng)在長滿2215細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)用0.25%胰酶，37℃消化3～4 min，加培養(yǎng)液吹散，1∶3傳代；10 d長滿。消化后計數(shù)，配制成1×105個/ml的細胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板，每孔100μl，在37℃，5％的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，細胞長成單層后進行實驗。將含各濃度血清的MEM培養(yǎng)液加入到96孔板中，每種血清每濃度平行3孔，每孔100μl，使含藥血清最終濃度分別為20％、10％和5％。同時設(shè)無藥物細胞對照組和培養(yǎng)液空白對照組各3孔。收集第4天細胞培養(yǎng)上清液，在450 nm波長處用酶標儀測OD值。應(yīng)用SPSS14.0統(tǒng)計軟件進行組間t檢驗，并按以下公式計算抑制率。結(jié)果見表1。

抑制百分率(%)＝無血清細胞對照組OD值均數(shù)－田基黃提取物血清組OD值均數(shù)無血清細胞對照組OD值均數(shù)－培養(yǎng)液空白對照組OD值均數(shù)×100％

2.3.2 肝癌BEL-7404細胞的培養(yǎng)將培養(yǎng)瓶中的7404細胞株用0.25%胰蛋白酶、0.2% EDTA消化后，加入RPMI-1640培養(yǎng)液，將細胞配制成5×104個/ml的細胞懸液，加入96孔培養(yǎng)板中，每孔100μl，置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細胞貼壁生長后(約15 h)，每孔分別加入含不同濃度血清的RPMI-1640培養(yǎng)液，每種血清每濃度平行6孔，每孔100μl，使含藥血清最終濃度分別為20％，10％和5％。每個96孔培養(yǎng)板中設(shè)無血清細胞對照組各6孔。繼續(xù)培養(yǎng)48 h，然后加入0.5％MTT溶液，10μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h。2000 r·min-1離心15 min，棄去上清液；每孔加入200μl DMSO，輕振10 min后在490 nm波長處用酶標儀測OD值。應(yīng)用SPSS14.0統(tǒng)計軟件進行組間t檢驗，并按以下公式計算抑制率。結(jié)果見表2。

抑制率（%）＝空白血清組OD值均數(shù)－田基黃提取物血清組OD值均數(shù)空白血清組OD值均數(shù)×100%

對2215細胞分泌HBeAg和HBsAg的影響實驗結(jié)果顯示：當含藥血清濃度為5％時，田基黃乙醇總提取物和正丁醇提取物對HBeAg和HBsAg呈現(xiàn)較好抑制作用，抑制率分別為34.84％和57.95％，以及76.02％和53.15％（P＜0.05）；當含藥血清濃度為20％時，醋酸乙酯提取物對HBeAg和HBsAg呈現(xiàn)較好的抑制作用，抑制率分別為79.79％和57.22％（P＜0.05）；水提取物3種濃度的含藥血清對HBeAg和HBsAg都有較好的抑制作用，抑制率分別達到了70％和30％以上（P＜0.05）。提示田基黃中的水溶性化學成分對HBeAg和HBsAg存在較穩(wěn)定的抑制作用，并且沒有明顯的量效關(guān)系；同時各極性部位單獨用藥對HBeAg的抑制效果明顯優(yōu)于混合用藥的抑制效果。

對肝癌BEL-7404細胞的影響實驗結(jié)果顯示：田基黃不同提取物對肝癌BEL-7404細胞都有較好的抑制作用，該抑制作用呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系，當含藥血清濃度為20％時，乙醇總提取物、醋酸乙酯提取物、正丁醇提取物和水提取物的抑制率分別為29.74％，53.80％，40.79％和54.24％（P＜0.01）。提示田基黃抗肝癌的有效成分均衡分布于各種極性部位中，而且各極性部位單獨用藥的效果要優(yōu)于混合用藥的效果。

表1 田基黃不同提取物的血清在2215細胞培養(yǎng)中對乙肝HBeAg和HBsAg的抑制作用（略）

與細胞對照組比較，①表示P＜0.01，②表示P＜0.05，③表示P＞0.05；n=3

表2 田基黃不同提取物的血清對肝癌BEL-7404細胞的抑制作用（略）

與空白血清組比較，①P＜0.01，②P＜0.05，③P＞0.05；n=6

3 討論

中藥血清藥理學是指在動物經(jīng)口服給藥后一定時間采血分離血清，用此含藥血清進行體外實驗的一種實驗方法［6］。這種新的實驗方法可排除在體外實驗中各種干擾因素的影響，比較接近藥物在體內(nèi)環(huán)境中產(chǎn)生藥理效應(yīng)的真實過程。作者利用血清藥理學方法，研究田基黃不同提取物在體外對2215細胞分泌HBeAg和HBsAg的抑制作用和對肝癌BEL-7404細胞的抑制作用，結(jié)果表明田基黃不同提取物含藥血清有良好的體外抗乙肝和抗肝癌作用。其抗乙肝的有效成分主要分布在的水提取物中，今后可以考慮從水層部位篩選出活性更強的抗乙肝單體化合物。抗肝癌的有效成分均衡分布于各種極性部位，并且各極性部位單獨用藥對肝癌BEL-7404細胞的抑制效果明顯優(yōu)于混合用藥的抑制效果，今后可以考慮從這幾個活性部位中篩選出活性更強的抗肝癌單體化合物。實驗結(jié)果顯示空白血清組的OD值與無血清細胞對照組的OD值無顯著性差別（P＞0.05），說明血清對實驗沒有干擾。至于田基黃是通過何種途徑實現(xiàn)其抑制2215細胞分泌HBeAg和HBsAg，以及抑制肝癌BEL-7404細胞生長的，還有待于進一步研究；而其具有抑制作用的化學單體有哪些，還有待于進一步篩選。

【參考文獻】

［1］ 《中華本草》編委會．中華本草［M］.上海：上海科學技術(shù)出版社，1999：598.

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［3］ 顧明國，馮淑珍，王小燕．地耳草抗瘧有效成分的研究——地耳草素A，B，C，D的分離和結(jié)構(gòu)［J］.化學學報，1988，46(3)：246．

［4］ 郁建平，古練權(quán)，周 欣．田基黃莖、花葉揮發(fā)油化學成分的研究［J］.中國藥學雜志，2001，36（3）：199．

篇10

【摘要】 目的觀察三葉青黃酮對SMMC-7721肝癌細胞誘導(dǎo)凋亡的作用。方法通過四氮噻唑藍(MTT)比色法檢測三葉青黃酮對細胞的抑制增殖作用;光學顯微鏡、熒光顯微鏡下形態(tài)學觀察;DNA瓊脂糖凝膠電泳及流式細胞儀(FCM)研究分析三葉青黃酮對肝癌細胞的誘導(dǎo)凋亡作用。結(jié)果三葉青黃酮能顯著的抑制SMMC-7721肝癌細胞的生長，并具有濃度依賴性。光學顯微鏡、熒光顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)細胞凋亡現(xiàn)象;DNA瓊脂糖凝膠電泳可見DNA梯形條帶;流式細胞儀(FCM)檢測分析出現(xiàn)凋亡亞二倍體峰。結(jié)論三葉青黃酮對肝癌細胞具有誘導(dǎo)凋亡作用，有抗肝癌的藥用價值。

【關(guān)鍵詞】 三葉青黃酮; 肝癌細胞; 凋亡

三葉青具有清熱解毒、祛風化痰、活血止痛等功效[1]，用于治療高熱驚厥、肺炎、哮喘、肝炎、風濕、月經(jīng)不調(diào)及惡性腫瘤，具有很好的療效。大量的研究表明該中藥具有免疫調(diào)節(jié)作用 ， 其不僅直接作用于細胞免疫，而且通過整體作用來控制細胞免疫與細胞因子的活動。近幾年，三葉青黃酮抗腫瘤作用日益受到重視。為進一步探討三葉青抗腫瘤作用的機制，更好地開發(fā)利用三葉青， 本實驗通過(MTT)比色法、光學顯微鏡下形態(tài)學觀察、熒光顯微鏡觀察、DNA瓊脂糖凝膠電泳、流式細胞儀(FCM)測定法研究三葉青黃酮對SMMC-7721肝癌細胞誘導(dǎo)凋亡進行研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器酶聯(lián)免疫檢測儀，國營華東電子管廠研制，型號，DG-3022;流式細胞儀(FCM)，美國B&D公司產(chǎn)品，型號，F(xiàn)ACS.calibur;電泳儀，北京六一儀器廠產(chǎn)品，型號DYY-Ⅲ1;紫外透射分析儀，上海長興機器廠產(chǎn)品，型號: 2F-3。

1.2 藥物與試劑三葉青，寧夏明德飲片廠提供，寧夏藥品檢驗所鑒定。青霉素，寧夏啟元藥業(yè)生產(chǎn)，規(guī)格，160萬單位，批號080912;鏈霉素，安徽淮南國瑞藥業(yè)產(chǎn)品，規(guī)格，0.75 g，批號20090308;RPMI1640，美國Sigma公司產(chǎn)品;四氮噻唑藍(MTT)，美國Sigma公司產(chǎn)品。

1.3 細胞株及培養(yǎng)肝癌細胞株SMMC-7721由第四軍醫(yī)大學口腔醫(yī)學院引進。接種于100 L玻璃培養(yǎng)瓶中，在含10%小牛血清、青霉素100 mg·L-1、鏈霉素100 mg·L-1的RPMI1640培養(yǎng)基中， 37℃、pH7.2置5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，經(jīng)0.25%的胰酶消化后，制成2×105·ml-1細胞懸液。

1.4 三葉青黃酮的提取、分離和制備稱取三葉青塊根1 000 g ，采用堿性稀醇提取法[2] 提取得三葉青黃酮7.2 g 。聚酰胺柱層析[2] 后，分別用10% ，30% ，50% ，70% ，95% 的乙醇洗脫，回收得濃縮物，真空干燥至恒重，分別標記為HT10，HT30，HT50，HT70 和HT95。分別稱取HT10，HT30，HT50，HT70 和HT95各2 mg ，溶解于200 μl 二甲基亞砜中，旋渦振蕩，全部溶解后，加入800 μl RPMI1640培養(yǎng)液旋渦震蕩混勻后放置于4 ℃ 冰箱保存?zhèn)溆茫?終濃度為10 mg ·ml-1 。用時按比例配制成2，4，6，8，10 mg ·ml-1的濃度液。

2 方法

2.1 實驗分組實驗組分加藥組和對照組，加藥組分別加入HT10，HT30，HT50，HT70 和HT95。各自加入100 μl 2，4，6，8，10 mg ·ml-1的藥液，每計量組6個復(fù)空，對照組加等量的培養(yǎng)基，混勻后放入5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2.2 四氮噻唑藍(MTT)比色法取對數(shù)生長期SMMC-7721細胞，接種于96孔板，每孔加入100 μl細胞懸液，培養(yǎng)24 h，待細胞貼壁后，進行換液和藥物處理[3] ，棄上清液，加入100 μl HT10，HT30，HT50，HT70 和HT95各濃度的藥液100 μl。對照組加100 μl的培養(yǎng)液，混勻。37℃、pH7.2置5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)48 h后，棄上清液，在各孔中加入5 g·L-1MTT 30 μl ，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，棄上清液，每孔加二甲亞砜100μl，振搖5 min，用酶聯(lián)免疫檢測儀測定570 nm處吸光度，計算出細胞抑制率。

2.3 光學顯微鏡下形態(tài)學觀察取實驗組細胞，用PBS(pH7.2)洗滌1次，做離心涂片，用甲醇固定3～5 min，滴加Wright染色2 min，入Wright磷酸緩沖稀釋液4～10 min，用蒸餾水沖洗[3] ，在油鏡下觀察細胞形態(tài)。

2.4 熒光顯微鏡觀察取實驗組細胞，吹打均勻，取30 μl懸液加到載玻片上，加10 μl吖啶橙染色，加蓋玻片后置熒光顯微鏡下觀察SMMC-7721細胞形態(tài)并照相，在顯微鏡下數(shù)400個細胞，計算細胞凋亡率[3]。

2.5 DNA瓊脂糖凝膠電泳收集藥物作用組及對照組培養(yǎng)細胞，常規(guī)方法提取細胞DNA ，1.5%瓊脂糖凝膠孔中電泳，在室溫、50 V、恒流60 mA電泳2 h，紫外燈下觀察并照相[3]。

2.6 流式細胞儀(FCM)分析將經(jīng)藥物處理的細胞，1 000 r·min-1離心5 min，棄上清液，PBS洗滌2次，1 000 r·min-1離心5 min，棄上清液，加冷的70%(體積分數(shù))乙醇4℃固定24 h，離心，棄乙醇，PBS洗1次，1 000 r·min-1離心5 min，棄上清液，滴加0.5 ml 100 mg·L-1RNase，放置4 h，離心，棄上清液，PBS洗1次，300目篩網(wǎng)過濾1次， 1 000 r·min-1離心5 min，棄上清液，加0.5 ml PI過夜[3]。上流式細胞儀測定。

2.7 統(tǒng)計學處理采用SPSS11.0 軟件，不同藥物濃度組間的比較采用完全隨機設(shè)計的方差分析，各藥物濃度組與對照組的比較采用Dunnett t 檢驗，以α= 0.05 為檢驗水準。

3 結(jié)果

3.1 三葉青黃酮對SMMC-7721肝癌細胞增殖的抑制作用結(jié)果見圖1。從圖1可以看出，不同濃度乙醇層析分離的三葉青黃酮(HT10、HT30、HT50、HT70和HT95) 均能抑制SMMC-7721 細胞的增殖;隨著藥物濃度的增加，其生長抑制作用增強，呈濃度-效應(yīng)關(guān)系。其中HT50作用最強，隨著加入藥物濃度的增加，其對SMMC-7721細胞生長抑制率分別為38.6%，47.2%，65.1%，70.1 %和71.6%。圖1 三葉青黃酮對SMMC-7721肝癌細胞增殖抑制作用

3.2 光學顯微鏡下形態(tài)學變化取對照組細胞及實驗組細胞，光學顯微鏡下觀察，可見實驗組細胞染色質(zhì)濃集，細胞核固縮、碎裂，細胞膜起泡，有核碎片的凋亡小體形成。

3.3 熒光顯微鏡下形態(tài)學變化取對照組及實驗組細胞，熒光顯微鏡下可見對照組細胞為黃色或桔紅色，給藥組細胞核或細胞質(zhì)內(nèi)可見致密濃集的黃綠色染色，可見黃綠色碎片，細胞核固縮、核碎裂、細胞膜起泡及凋亡小體形成，檢測其凋亡率， 其中HT50組不同濃度的凋亡率分別為29.5%，36.3%，52.5% ，62.8%和70%;隨著濃度的不斷增加，細胞凋亡率呈上升趨勢。

3.4 DNA瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果取對照組及HT50組的8，10 mg ·ml-1兩個濃度的細胞，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后，給藥組均出現(xiàn)凋亡特有DNA Lad-der帶，而對照組則無此帶。3.5 流式細胞儀(FCM)測定結(jié)果取對照組及HT50組的8，10 mg ·ml-1兩個濃度的細胞，流式細胞儀(FCM)測定，對照組未出現(xiàn)亞2倍體峰，給藥組均可見明顯的亞2倍體峰。

4 討論

三葉青具有多方面的生物活性，其中抗腫瘤作用日漸被人們重視。本研究通過定量和定性的細胞凋亡研究方法，對5種不同濃度的乙醇分離的三葉青黃酮作用后的細胞進行凋亡研究，發(fā)現(xiàn)各組均有直接抑制腫瘤細胞增殖作用，且呈濃度-效應(yīng)正相關(guān)。其中HT50的10 mg ·ml-1濃度抑制作用最強。通過光學顯微鏡、熒光顯微鏡對細胞形態(tài)學的觀察，可見細胞核固縮、核碎裂、細胞膜起泡及凋亡小體形成等形態(tài)， 隨著濃度的增加凋亡率也不斷升高。 DNA瓊脂糖凝膠電泳顯示實驗組細胞，DNA電泳圖上呈現(xiàn)“梯狀”條帶，這是細胞凋亡最具特征的生化改變;流式細胞儀分析，三葉青黃酮作用后的細胞均出現(xiàn)明顯的亞2倍體峰。三葉青黃酮對SMMC-7721肝癌細胞具有明顯的誘導(dǎo)凋亡作用，是很有潛力的抗癌藥物。

參考文獻

[1] 中國醫(yī)學科學院藥物研究所，北京醫(yī)學院，南京藥學院，等. 中藥志(第2冊) [M]. 北京:人民出版社，1984:219.