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關(guān)鍵詞：在線凝膠滲透色譜-氣相色譜/質(zhì)譜 食品 農(nóng)藥殘留

中圖分類號(hào)：TS207 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1007-3973（2013）007-131-02

農(nóng)藥，以造福人類，提高農(nóng)產(chǎn)品的產(chǎn)量走進(jìn)了我們的世界，但是隨著農(nóng)藥的廣泛使用，大量食用含有農(nóng)藥殘留的食品會(huì)導(dǎo)致機(jī)體正常生理功能失調(diào)，引起病理改變和毒性危害，它對(duì)人類健康，生態(tài)環(huán)境構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅。食品安全問題已經(jīng)受到各國政府的密切關(guān)注，目前，農(nóng)藥殘留分析技術(shù)已經(jīng)不能滿足當(dāng)前社會(huì)的需求，GPC-GC/MS在線聯(lián)用技術(shù)具備樣品處理簡單，分析時(shí)間快、溶劑使用量少，定性準(zhǔn)確等優(yōu)勢，近幾年，逐漸受到食品檢測工作者的青睞。在線GPC-GC/MS已經(jīng)用于糧食、蔬菜、水果、堅(jiān)果等中的多農(nóng)藥殘留分析。

1 在線GPC-GC/MS簡介

GPC-GC/MS主要包括兩部分：凝膠滲透色譜和氣相色譜/質(zhì)譜。GPC主要目的是去除樣品基質(zhì)中可能干擾目標(biāo)化物檢測的大分子油脂、色素等組分。系統(tǒng)流路圖如圖1，GPC根據(jù)尺寸排阻原理先將分子量較大的脂肪和色素等先從色譜柱中洗脫，通過六通閥位置的切換將這些基質(zhì)干擾物排出系統(tǒng)，之后將所需檢測物質(zhì)導(dǎo)入試樣捕集環(huán)中，最后導(dǎo)入GC/MS進(jìn)行分離檢測。

圖1 系統(tǒng)流路圖

2 在線GPC-GC/MS在農(nóng)藥殘留分析中的應(yīng)用概況

2.1 蔬菜、水果中的農(nóng)藥殘留測定

苯氧羧酸類農(nóng)藥憑借其高效、內(nèi)吸、高選擇性的特征廣泛用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，目前在土壤、水體等環(huán)境樣品及糧谷類農(nóng)作物中已經(jīng)測出苯氧羧酸類農(nóng)藥。張帆等建立了水果中的11種苯氧羧酸類農(nóng)藥在線GPC-GC/MS分析方法。該方法在0.02～0.10mg/kg加標(biāo)范圍內(nèi)，回收率為66%～112%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.4%～11.5%，定量下限為7～10 g/kg。在柑橘樣品中11種苯氧羧酸類農(nóng)藥均有檢出；香蕉中檢測出2，4-D，含量為0.058mg/kg，其他農(nóng)藥成分未檢出。歐陽運(yùn)富等將蔬菜、水果樣品經(jīng)二氯甲烷-丙酮（1：1，v/v）加速溶劑提取，活性炭柱-氨基柱串聯(lián)凈化結(jié)合在線GPC-GC/MS分析了22種農(nóng)藥殘留，在0.02， 0.05， 0.4mg/kg 3個(gè)添加水平下的回收率為70.5%～107.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.1%～8.7%。在線GPC-GC/MS把GPC凈化和GC-MS分析檢測合二為一，自動(dòng)化除去為除盡的干擾物質(zhì)，保證了方法的可靠性和有效性，大大的提高了分析的準(zhǔn)確度和有效性。薛麗等利用固相萃取-在線GPC-GC/MS測定了梅菜干中18種有機(jī)磷和擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留，該方法的農(nóng)藥回收率均在80%～120%之間，精密度均小于15%。

2.2 堅(jiān)果中農(nóng)藥殘留測定

吳巖，康慶賀等線GPC-GC/MS測定板栗、松子仁中多農(nóng)藥殘留分析。板栗經(jīng)乙腈-水（4：1，v/v）為提取劑，ENVI-18固相萃取柱凈化，除去樣品中的大量脂肪和甾醇等干擾基質(zhì)，在經(jīng)過在線GPC進(jìn)一步凈化，最后經(jīng)過GC/MS分析。44種有機(jī)磷農(nóng)藥中大部分農(nóng)藥的回收率為65%～120%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15%，檢出限為0.002～0.05mg/kg。松子仁也用同樣的方法進(jìn)行了處理，與板栗不同的是提取液經(jīng)Aluminum-N固相萃取柱凈化。28種有機(jī)氯農(nóng)藥和擬除蟲菊酯農(nóng)藥的回收率為70%～120%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15%，檢測限為0.002～0.05mg/kg。固相萃取結(jié)合在線GPC-GC/MS有效的解決了低水分高脂質(zhì)樣品前處理復(fù)雜、基質(zhì)干擾嚴(yán)重的難題。

2.3 茶葉中農(nóng)藥殘留測定

茶葉作為我國對(duì)外出口的傳統(tǒng)商品，近年來，歐盟等國對(duì)進(jìn)口茶葉的農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)日趨嚴(yán)格。因此，茶葉的農(nóng)藥殘留檢測成為我們面臨的共同問題。李軍明等利用乙腈萃取、ENVI-carb固相萃取柱凈化結(jié)合在線GPC-GC/MS測定了普洱茶、綠茶、紅茶、烏龍茶中的153種農(nóng)藥殘留量。該方法檢出限能夠滿足歐盟等國的限量要求，為茶葉中的多農(nóng)藥殘留提供了檢測方法。

2.4 糧食作物中農(nóng)藥殘留測定

糧食作物作為人們生活的基本食品，糧食安全與人的生活息息相關(guān)，各個(gè)國家對(duì)糧食中的農(nóng)藥殘留都設(shè)有嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)。糧食中含有高的脂肪和淀粉，使得糧食中農(nóng)藥殘留的測定樣品前處理方法較為復(fù)雜。近年利用在線GPC-GC/MS測定糧食中的農(nóng)藥殘留減少了樣品前處理的繁復(fù)過程，縮短了分析時(shí)間，挺高了工作效率，減少了溶劑的使用。

3 總結(jié)

在線GPC-GC/MS在能夠有效的去除復(fù)雜基質(zhì)中的干擾物質(zhì)，降低背景、改善峰形、減小基質(zhì)效應(yīng)。簡化了樣品前處理、提高了檢測的重現(xiàn)性、縮短了分析時(shí)間、提高了工作效率、減小了有害溶劑的使用，將成為食品檢測中的一顆璀璨明星。

參考文獻(xiàn)：

[1] 張帆，付善良，施雅梅，等.在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定水果中11種苯氧羧酸類農(nóng)藥[J].分析測試學(xué)報(bào)，2013，32（1）：79-83.

[2] 歐陽運(yùn)富，唐宏兵，吳英，等.加速溶劑萃取-在線凝膠滲透色譜-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法快速測定蔬菜和水果中多農(nóng)藥殘留[J].色譜，2012，30（7）：654-659.

[3] 薛麗，鐘艷梅.固相萃取-在線凝膠滲透色譜-氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用測定蔬菜干制品中的 18 種有機(jī)磷和擬除蟲菊酯殘留[J].現(xiàn)代食品科技，2012，28（8）：1088-1090.

[4] 吳巖，康慶賀，高凱揚(yáng)，等.固相萃取-在線凝膠滲透色譜-氣相色譜/質(zhì)譜法測定板栗中44種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留[J].分析化學(xué)，2009，37（5）：753-757.

[5] 康慶賀，吳巖，高凱揚(yáng)，等.固相萃取-在線凝膠滲透色譜-氣相色譜/質(zhì)譜法測定松子仁中的28種有機(jī)氯農(nóng)藥和擬除蟲菊酯農(nóng)藥[J].色譜，2009，27（2）：181-185.

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關(guān)鍵詞：凝膠滲透色譜（GPC）；食品安全；應(yīng)用

中圖分類號(hào)： TS213.4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A DOI編號(hào)： 10.14025/ki.jlny.2017.15.053

隨著我國經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和生活水平不斷提高，人們對(duì)于食品安全問題也日益重視。國家對(duì)食品安全檢測工作也極為重視。食品安全檢測工作最重要的就是樣品前處理，樣品前處理的好壞直接影響到檢測結(jié)果的正確性。因此，在食品檢測中使用正確的前處理方法，可以提高工作效率和檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

凝膠滲透色譜是最近十幾年迅速發(fā)展起來的一種樣品前處理方法，因其對(duì)分子量大的雜質(zhì)凈化效率高，可重復(fù)使用，適用范圍廣，自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，在食品檢測中應(yīng)用廣泛。

凝膠滲透色譜基于體積排阻的分離機(jī)理，通過具有分子篩性質(zhì)的固定相，來分離分子質(zhì)量不同的物質(zhì)。凝膠滲透色譜還可以用于分析化學(xué)性質(zhì)相同而體積不同的高分子同系物[1]。

1 凝膠滲透色譜（GPC）在食品檢測中的應(yīng)用研究新進(jìn)展

1.1 GPC技術(shù)在食品檢測中的應(yīng)用研究新進(jìn)展

GPC技術(shù)常用在食品檢測中的樣品凈化，宋鑫等在檢測螃蟹中19種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留時(shí)應(yīng)用全自動(dòng)GPC-SPE聯(lián)合凈化，樣品用乙腈提取，凝膠滲透色譜和氨基固相萃取柱聯(lián)合凈化。用Bio-Beads S-X3凝膠為填料的凈化柱，以環(huán)己烷―乙酸乙酯（1∶1）為流動(dòng)相，泵流速為4.7 毫升/分鐘，檢測波長為254納米。收集9.0分鐘和15.5分鐘的流出液，并轉(zhuǎn)至SPE凈化。在實(shí)驗(yàn)中，對(duì)經(jīng)GPC凈化的有機(jī)氯農(nóng)藥的收集時(shí)間進(jìn)行了優(yōu)化，在單獨(dú)使用GPC時(shí)樣品凈化不完全，與SPE聯(lián)合使用后凈化效果和回收率較好[2]。馬杰等建立在線凝膠滲透色譜――氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測定蔬菜、水果中有機(jī)磷、氨基甲酸酯、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥，GPC 彌補(bǔ)了QuEChERS 方法凈化干擾物質(zhì)不徹底的問題， 從而降低分析背景， 改善峰形， 提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性 [3]。黃武等在檢測大豆中異丙甲草胺殘留量時(shí)用在線凝膠滲透色譜法，進(jìn)行前處理，簡化了樣品前處理過程，且對(duì)環(huán)境污染較少，具有高效、經(jīng)濟(jì)、快速及簡便等優(yōu)點(diǎn)，顯著提高前處理效率，減少分析時(shí)間，提高農(nóng)藥殘留分析的速度和靈敏度[4]。

1.2 GPC技術(shù)在食品檢測研究中存在的問題

GPC技術(shù)在國外已經(jīng)普遍應(yīng)用于樣品的前處理，但在我國應(yīng)用領(lǐng)域較少。GPC作為食品檢測中的一種全新的樣品前處理技術(shù)，能分離大分子類干擾雜質(zhì)，有效地將大分子類物質(zhì)從復(fù)雜的基質(zhì)中提取出來。GPC技術(shù)優(yōu)勢是可大大降低大分子基質(zhì)干擾，自動(dòng)化和標(biāo)準(zhǔn)化程度高，且可以自動(dòng)濃縮和定容，減少了人工帶來的誤差，顯著提高方法的精密度和重現(xiàn)性。

但GPC技術(shù)作為一種新興技術(shù)，在實(shí)際應(yīng)用中還存在一些問題，需要在今后的工作中解決。由于GPC柱子內(nèi)徑比較大，連續(xù)處理樣品的能力較慢，所需要的溶劑量較大。又因?yàn)樗占臉悠敷w積大，對(duì)于實(shí)驗(yàn)室的濃縮裝置要求較高，這大大減慢了實(shí)驗(yàn)分析的速度。此外，由于不同物質(zhì)分子大小、形狀以及凝膠阻滯作用的差異，可能會(huì)導(dǎo)致樣品分離不完全，較大分子量的物質(zhì)會(huì)提前流出不被收集而影響回收率，一些小分子干擾物會(huì)夾雜在樣品中而影響凈化效果。

2 凝膠滲透色譜（GPC）條件的選擇

利用GPC技術(shù)進(jìn)行樣品前處理時(shí)，所需選擇及優(yōu)化的條件主要是色譜柱的選擇，流速的選取以及收集時(shí)間的選擇，溶劑的選取等。孫磊麗等在測定甘草中16種農(nóng)藥殘留時(shí)選用填料為中性、多孔的聚苯乙烯二乙烯基苯微球體的S-X3玻璃柱作為GPC凈化柱，體積比為1∶1的乙酸乙酯―環(huán)己烷溶液作為流動(dòng)相，流速為5毫升/分鐘，前7 分鐘收集1份樣品，之后每1分鐘收集1份樣品，共收集28份樣品溶液，分別進(jìn)行質(zhì)譜檢測[5]。呂飛等在檢測動(dòng)物源性食品中17種農(nóng)藥殘留時(shí)，在線凝膠滲透色譜：色譜柱為Shodex CL NpakEV-200 柱；流動(dòng)相：丙酮―環(huán)己烷（ 3∶7，V/V） ，流速0. 1毫升/分鐘，柱溫40 ℃，進(jìn)樣量10微升，檢測波長210納米，農(nóng)藥殘留組分在線收集時(shí)間段：4.35 ～ 6.35分鐘[6]。

3 展望

凝膠滲透色譜技術(shù)作為一種前處理技術(shù)已經(jīng)普遍應(yīng)用于樣品的凈化，S著GPC技術(shù)的不斷優(yōu)化應(yīng)用范圍越來越大，國外已經(jīng)研究出很多種成熟的GPC前處理方法。隨著國際形勢發(fā)展，我國也應(yīng)該對(duì)GPC技術(shù)進(jìn)行研究開發(fā)。目前有很多研究都將GPC技術(shù)與QuEchERS 前處理等聯(lián)合使用，使得現(xiàn)在的前處理可以聯(lián)合處理較為復(fù)雜的樣品，提高了工作效率和準(zhǔn)確度。現(xiàn)在的檢測儀器的精密度較高，對(duì)樣品處理較嚴(yán)格，GPC技術(shù)與其他前處理技術(shù)聯(lián)合使用可以去除雜質(zhì)的干擾，對(duì)于精密儀器是一種保護(hù)。如在線GPC與QuEchERS聯(lián)合串聯(lián)質(zhì)譜檢測可以去除樣品里的干擾和基質(zhì)效應(yīng)，對(duì)樣品分析更準(zhǔn)確。因此，發(fā)展和研究凝膠滲透色譜技術(shù)在食品檢測方面有廣闊的發(fā)展前景。

參考文獻(xiàn)

[1]欒玉靜.凝膠滲透色譜在不同樣本檢驗(yàn)中的應(yīng)用和進(jìn)展[J].刑事技術(shù)，2014（04）：41-44.

[2]宋鑫，杭學(xué)宇，等.檢測螃蟹中有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留的全自動(dòng)GPC-SPE聯(lián)合凈化氣相色譜法[J].職業(yè)與健康，2016，32（04）：483-486.

[3]馬杰.QuEChERS前處理技術(shù)與在線凝膠滲透色譜――氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測定蔬菜水果中20種農(nóng)藥殘留[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào)，2016，7（01）：21-26.

[4]黃武. 在線凝膠滲透色譜――氣相色譜――質(zhì)譜聯(lián)用法檢測大豆中異丙甲草胺殘留量[J].食品安全導(dǎo)刊，2016，64（03）：126-128.

[5]孫磊麗.凝膠滲透色譜―― 氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測定甘草中16 種農(nóng)藥殘留[J].分析測試學(xué)報(bào)，2012，31（12）：136-143.

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中圖分類號(hào)：R780.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1009-914X（2016）02-0339-02

[Abstract]Lactoperoxidase has a natural antibacterial activity， which could be widely applied to food and had good antimicrobial antiseptic effect， such as Dairy and meat products， etc. The paper mainly reviewed the separation and pufication technology of lactoperoxidase including ？salting-out method， ultrafiltration method， coupling aqueous two-phase technology and chromatography technology.

乳過氧化物酶（lactoperoxidase，簡稱LP）是過氧化物酶的一種，是存在于動(dòng)物乳中的一種天然抗菌物質(zhì)，常見于哺乳動(dòng)物的乳腺、唾液腺、淚腺及其分泌物中[1]。乳過氧化物酶在食品行業(yè)中應(yīng)用最廣泛的是乳制品，還可將其應(yīng)用到醫(yī)藥和肉制品行業(yè)中，具有較好的抑菌防腐效果。本文主要綜述了分離乳過氧化物酶的鹽析法、雙水相萃取技術(shù)、膜分離技術(shù)以及色譜技術(shù)等。

1.鹽析法

鹽析沉淀法是酶分離純化過程中最常用的方法，其原理是在高濃度的鹽溶液條件下，大量鹽離子使水分子濃度相對(duì)降低，蛋白質(zhì)水合作用減弱，分子間相互凝聚沉淀析出，由于蛋白質(zhì)水合作用與蛋白質(zhì)本身的分子量、等電點(diǎn)等物理化學(xué)常數(shù)有關(guān)，所以在不同鹽析條件下，不同種類的蛋白質(zhì)發(fā)生聚集沉淀析出程度也不同，因而達(dá)到分離目的。鹽析法具有操作方法簡便、無需大型昂貴設(shè)備和成本低安全性高等特點(diǎn)，適用范圍十分廣泛。通常把硫酸鈉、硫酸鎂、檸檬酸鈉、硫酸銨等用作鹽析劑，國內(nèi)有報(bào)道用硫酸銨鹽析法分離大豆酸沉蛋白、羔羊皺胃酶和多管藻R-藻紅蛋白和R-藻藍(lán)蛋白。鹽析法分離乳過氧化物酶還是較新的技術(shù)。

2.雙水相萃取技術(shù)

雙水相萃取體系是由兩種聚合物或是一種聚合物和一種鹽組成的，其原理是依據(jù)物質(zhì)在兩相間的具有選擇性分配系數(shù)，當(dāng)物質(zhì)進(jìn)入雙水相體系后，由于生物分子量大小、電荷作用和各種力（如疏水鍵、氫鍵和離子鍵等）的存在和環(huán)境之間的相互影響作用，使物質(zhì)在上相和下相中的分布狀態(tài)不同（即分布濃度不同），形成雙水相體系。提取某一物質(zhì)，只需選擇適宜的雙水相體系，控制合適的條件（pH、雙水相體系物質(zhì)含量等），就可以得到適宜的分配系數(shù)，從而達(dá)到分離提取的目的[1]。與傳統(tǒng)的提取方法比較來看，雙水相萃取技術(shù)所使用的設(shè)備便捷、快速、經(jīng)濟(jì)，被分離物質(zhì)在溫和條件下進(jìn)行快速分離，其獲得產(chǎn)品的回收率和純度較高。目前，雙水相萃取技術(shù)已廣泛地應(yīng)用于蛋白質(zhì)和核酸等生物活性產(chǎn)品的分離提取，并逐步走向工業(yè)化生產(chǎn)進(jìn)程[2]。它為生物分子提供生物兼容的環(huán)境，具有連續(xù)操作空間，易于擴(kuò)大生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)。國內(nèi)有研究報(bào)道雙水相法提取脂肪酶、糖化酶、淀粉酶等，但是沒有應(yīng)用雙水相法提取乳過氧化物酶。利用雙水相技術(shù)，優(yōu)化提取牛乳中過氧化物酶提取的工藝條件，為雙水相技術(shù)在乳過氧化物酶提取分離方面應(yīng)用，提供基本的技術(shù)支撐，有很重要意義。

3.膜分離技術(shù)

膜分離技術(shù)是一項(xiàng)新興的高新技術(shù)，具有能耗低、分離過程中物質(zhì)不發(fā)生相變、操作簡便、無二次污染、分離產(chǎn)物便于回收且分離效果佳等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于工業(yè)中的產(chǎn)品分離、純化等。常見的膜分離技術(shù)有微濾膜、超濾膜、納濾膜、反滲透膜及離子交換膜[13]。膜分離技術(shù)已廣泛的應(yīng)用的乳品工業(yè)中，主要應(yīng)用于乳清蛋白分離回收、乳清脫鹽、除菌、酪蛋白濃縮、乳蛋白質(zhì)分級(jí)分離等。膜技術(shù)主要是陶瓷膜技術(shù)分離酪蛋白和乳清蛋白以及超濾膜技術(shù)純化乳過氧化物酶。

4.色譜分離

色譜分離技術(shù)又稱層析技術(shù)分離，是一種用于分離成分復(fù)雜混合物中各個(gè)組分的有效方法。原理是利用不同物質(zhì)在由固定相和流動(dòng)相構(gòu)成的體系中具備不同的分配系數(shù)，物質(zhì)在兩相體系作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，會(huì)隨流動(dòng)相一起運(yùn)動(dòng)，并在固相和流動(dòng)相間進(jìn)行多次反復(fù)的分配，從而使各物質(zhì)達(dá)到分離純化的目的。應(yīng)用于乳過氧化物酶分離的色譜技術(shù)可分為離子交換層析、親和層析、凝膠層析、吸附色譜和分配色譜等技術(shù)，此技術(shù)比較成熟，詳細(xì)介紹一下。

4.1 離子交換層析分離技術(shù)

離子交換層析中，基質(zhì)由帶有電荷的樹脂或纖維素構(gòu)成，帶有負(fù)電荷的為陽離子交換劑，反之為陰離子交換劑。離子交換色譜法分離蛋白質(zhì)組分原理是依據(jù)不同蛋白質(zhì)組分在一定條件的溶液中帶有相應(yīng)的電荷，根據(jù)蛋白質(zhì)帶電荷狀態(tài)不同會(huì)與帶相反電荷的離子交換劑的結(jié)合，按結(jié)合力的大小，在洗脫時(shí)從弱到強(qiáng)依次被洗脫下來而得以分離。

4.2 離子交換膜色譜提取乳過氧化物酶

Clovis K. Chiu等（1997）使用固定化磺酸根陽離子交換膜從乳清中分離乳過氧化物酶，此法優(yōu)點(diǎn)是速度更快，相對(duì)于離子交換色譜柱，膜分離使用更小的尺寸；缺點(diǎn)是生產(chǎn)越多的目標(biāo)物就需要越多的膜，增加生產(chǎn)成本，難以大量生產(chǎn)。Kerstin Plate等2006年提出了用帶有陽離子的選擇性吸附膜Sartobind S從生產(chǎn)酪蛋白所剩下的的乳清中來提取乳過氧化物酶，此法具有生產(chǎn)快的優(yōu)點(diǎn)，適用于工業(yè)上大規(guī)模的生產(chǎn)。Linda Voswinkela等2011年提出使用陰陽離子交換膜色譜法（Sartobind Q and S nano），分兩個(gè)步驟（先過陰離子交換膜未吸附物質(zhì)再過陽離子交換膜）通過改變不同的緩沖液及pH值和洗脫液濃度從牛乳清中快速分離BSA，β-lactogloulin，ImmunoglobulinG，lactoperoxidase，lactoferrin多種蛋白，此法生產(chǎn)周期短，適用于工業(yè)生產(chǎn)。

4.3 免疫親和層析（affinity chromatography）

將具有高度特異親和性的二種物質(zhì)之一以共價(jià)鍵形式結(jié)合到固定相，通過利用與固定相鍵合的物質(zhì)具有不同程度的親和性，將具有特異親和性的物質(zhì)成分與其他雜質(zhì)分離的色譜法。1989年Bodil Langbakk等人使用一種免疫親和色譜（配基結(jié)合免疫球蛋白G）從人乳中分離LP，其過程中LP和配基發(fā)生結(jié)合，利用含有2% SDS、pH 6.8和0.1 mol/L磷酸鈉緩沖溶液，將乳過氧化物酶洗脫下來，從而分離純化出純度較高的乳過氧化物酶[3]。

4.4 凝膠層析

凝膠層析又稱分子篩，按照分離純化的物質(zhì)是水溶性的化合物還是有機(jī)溶劑可溶物，凝膠色譜又可分為凝膠過濾色譜（GFC）和凝膠滲透色譜（GPC）。GFC主要是根據(jù)被分離樣品中各組分分子質(zhì)量大小的不同而進(jìn)行分離洗脫的一項(xiàng)高效的色譜技術(shù)。1963年P(guān)eter Z首先使用離子交換色譜從牛乳中分離出LP，之后使用凝膠色譜進(jìn)一步純化分離得到純度較高的LP[4]。2011年，Y. Morita等人以牛奶堿性蛋白為原料，將堿性蛋白溶解于磷酸鈉緩沖溶液，先使用SP-Sepharose填料平衡分離，并用0-1.5M NaCl進(jìn)行洗脫，將所得分離物質(zhì)收集再使用HiLoad 16/60 Superdex 75 pg進(jìn)一步純化得到高回收率的乳過氧化物酶。

參考文獻(xiàn)：

[1] 徐長波，王巍杰.雙水相萃取技術(shù)研究進(jìn)展[J].化學(xué)技術(shù)與開發(fā)，2009，38（5）：40-44.

[2] 范芳.雙水相萃取技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展[J].化學(xué)與生物工程，2011，28（7）：16-20.

篇4

【關(guān)鍵詞】食品； 農(nóng)藥殘留； 分析；前處理

農(nóng)藥殘留，是農(nóng)藥使用后一個(gè)時(shí)期內(nèi)沒有被分解而殘留于生物體、收獲物、土壤、水體、大氣中的微量農(nóng)藥原體、有毒代謝物、降解物和雜質(zhì)的總稱。食品中農(nóng)藥殘留對(duì)于人類健康以及環(huán)境的危害，已經(jīng)引起了世界各國的廣泛關(guān)注，世界各國對(duì)農(nóng)藥殘留分析方法提出了準(zhǔn)確性、靈敏性、便捷性等方面更高的要求，下面是本人對(duì)食品中農(nóng)藥殘留分析前處理方法的淺談。

現(xiàn)代農(nóng)藥殘留分析方法通常包括樣品前處理和測定兩部分，樣品前處理是核心。樣品測定前的凈化、濃縮預(yù)處理是農(nóng)藥殘留分析的關(guān)鍵，目前常用的預(yù)處理方法以傳統(tǒng)技術(shù)居多，這些技術(shù)存在許多不足。近年來，新的樣品預(yù)處理技術(shù)不斷出現(xiàn)。這些新技術(shù)的共同特點(diǎn)是：高效、快速、預(yù)處理簡單、節(jié)省甚至不用溶劑、樣品用量少、易于推廣等。

1固相萃取（SPE）

固相萃取是一種基于液相色譜分離機(jī)制的樣品前處理方法。該法利用固體吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)物吸附，與樣品中的基體和干擾化合物分離，然后用洗脫液洗脫，從而達(dá)到分離與凈化目標(biāo)化合物的目的。

在國內(nèi)外，SPE技術(shù)已被廣泛用于農(nóng)藥對(duì)水污染的檢測[2]。Shepherd等[3]用化學(xué)鍵合C18柱萃取水中莠去津，1.5h可處理12個(gè)樣品，取水樣10mL，檢測靈敏度可達(dá)0.05ng/mL。Holland等用C18柱分離葡萄酒中74種農(nóng)藥，方法快速，重復(fù)性好。任晉等成功地應(yīng)用在線SPE-LC-MS技術(shù)分析飲用水中痕量除草劑。[4]固相萃取也是常用的凈化手段。劉長武等采用固相萃取代替?zhèn)鹘y(tǒng)的液）液萃取技術(shù)和柱層析前處理技術(shù)，使蔬菜、水果中25種有機(jī)氯農(nóng)藥迅速得到分離、凈化和濃縮。最后采用雙柱ECD氣相色譜同時(shí)定性、定量[5]。

2固相微萃取（SPME）

固相微萃取是80年代末由加拿大Waterloo大學(xué)Pawliszyn和Arhturhe教授提出的一種簡便、快捷、無溶劑的樣品制備與前處理技術(shù)。SPME的原理是利用待測物在基體和萃取相間的非均相平衡，使待測組分?jǐn)U散吸附到石英纖維表面的固定相涂層，待吸附平衡后，再與氣相色譜（GC）或高效液相色譜（HPLC）聯(lián)用以分離和測定待測組分。SPME與GC聯(lián)用適于分析揮發(fā)性有機(jī)物，通過熱解析使待測組分與萃取纖維分離。而對(duì)于難揮發(fā)的有機(jī)物可利用SPME與HPLC的聯(lián)用技術(shù)，通過溶劑解析的作用達(dá)到分離效果。

SPME的萃取模式可分為三種：直接法，即將石英纖維暴露在樣品中，主要用于半揮發(fā)性的氣體、液體樣品萃取；頂空法，將石英纖維放置在樣品頂空中，主要用于揮發(fā)性固體或廢水水樣萃取[6]膜方法，將石英纖維放在經(jīng)過微波萃取及膜處理過的樣品中，主要用于難揮發(fā)性復(fù)雜樣品萃取。

3超臨界流體萃取（SFE）

SFE技術(shù)利用超臨界流體（SF）密度大、粘度小、擴(kuò)散系數(shù)大、兼有氣體的滲透性和液體的分配作用的性質(zhì)，將樣品中待測物溶解并從基體中分離出來，同時(shí)完成萃取和分離兩步操作，分離效率高，操作周期短，無環(huán)境污染。超臨界流體萃取速度快，幾乎不用或少量使用有機(jī)溶劑。王建華等報(bào)道了一種用超臨界流體萃取西紅柿、草莓、金橘和檸檬等水果中多種殘留有機(jī)磷的方法【7】。

4凝膠滲透色譜（GPC）

凝膠滲透色譜基于體積排阻的分離機(jī)理，不僅可用來分離和測定小分子物質(zhì)，而且還可以分析具有相同化學(xué)性質(zhì)但分子體積不同的高分子同系物。

GPC是多農(nóng)藥殘留分析中一種常用有效的提純方法，由于具有自動(dòng)化程度高，較好的凈化效率，以及較好的回收率，被廣泛用于含類酯的復(fù)雜基體組分。欒揚(yáng)等介紹了一種簡便、快速的用于魚蝦及蔬菜中9種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的提取方法，配合凝膠滲透色譜法進(jìn)行凈化處理，提取效率高，可避免傳統(tǒng)方法中易出現(xiàn)的乳化及多重轉(zhuǎn)移【8】。王兆基采用一種較快速、簡單的方法測定蔬菜中菊酯類農(nóng)藥殘留物。樣本中農(nóng)殘經(jīng)乙酸酯萃取，凝膠滲透色譜及固相提取凈化后，用氣相色譜一電子捕獲檢測器測定，對(duì)同一批曾施用菊酯類農(nóng)藥的白菜樣本進(jìn)行化驗(yàn)，本法跟美國食物及藥品管理局農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)測定方法所得結(jié)果非常吻合。

5微波輔助萃取（MAE）

微波輔助萃取（MAE）是1986年匈牙利學(xué)者Ganzler等人通過利用微波能萃取土壤、食品、飼料等固體物中的有機(jī)物，提出了一種新的少溶劑樣品前處理方法。微波萃取技術(shù)是一種萃取速度快、試劑用量少、回收率高、靈敏以及易于自動(dòng)控制的前處理技術(shù)。它利用微波加熱的特性對(duì)物料中目標(biāo)成分進(jìn)行選擇性萃取。微波萃取是將樣品放在聚四氟乙烯材料制成的樣品杯中，加入萃取溶劑后將樣品杯放入密封好、耐高壓又不吸收微波能量的萃取罐中。萃取罐是密封的，當(dāng)萃取溶劑加熱時(shí)，由于萃取溶劑的揮發(fā)使罐內(nèi)壓力增加，使得萃取溶劑的沸點(diǎn)大大增加，這樣就提高了萃取溫度。同時(shí)，密封條件下萃取溶劑不會(huì)損失，也就減少了萃取溶劑的用量。微波加熱過程中萃取溫度的提高大大提高了萃取效率。

今后農(nóng)殘檢測對(duì)象和檢測目的物都將發(fā)生變化，檢測方法將向簡便、快捷、靈敏度高的方向發(fā)展，同時(shí)將加大對(duì)農(nóng)藥殘留降解技術(shù)的研究。同時(shí)，加快農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)體系建設(shè)，已成為我國當(dāng)前和今后一段時(shí)間農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)工作的重點(diǎn)，對(duì)保障農(nóng)產(chǎn)品和食品安全意義重大。

參考文獻(xiàn)：

[1]陳燕清，顏流水.食品中農(nóng)藥殘留前處理技術(shù)進(jìn)展[J].江西化工.2004（3）

[2]AnnaB.Strategiesforchromatographicanalysisofpesticideresiduesinwater[J].J. ChromatographyA，1996（754）：125-1351

[3]ShepherdTR，CareJD.C18Extractionofatrazinefromsmallwatersamplevolumes[J].J.AOACInt1992（75）：581-5831

[4]任晉，黃翠玲，趙國棟.固相萃取-高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)機(jī)在線分析水中痕量除草劑[J].分析化學(xué)，2001（08）

[5]劉長武，劉鳳枝，翟廣書.蔬菜水果中25種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留快速檢測方法[J].環(huán)境科學(xué)學(xué) 報(bào)，2003（04）

[6]賈金平（JiaJP），何翊（HeY），黃駿雄（HuangJX）.化學(xué)進(jìn)展（ProgressinChemistry），1998，10（1）：74―84

篇5

關(guān)鍵詞：食品；農(nóng)藥殘留；前處理技術(shù)

社會(huì)上存在的食品大多數(shù)是農(nóng)作物制作而成的，因此農(nóng)作物自身質(zhì)量和安全性對(duì)食品的安全性起到很重要的決定作用。但是目前我國在進(jìn)行農(nóng)作物種植的過程中，為了提升農(nóng)作物的產(chǎn)量經(jīng)常使用一些農(nóng)藥，這些農(nóng)藥的使用，勢必會(huì)造成食品中有部分農(nóng)藥殘留，影響食品安全。針對(duì)于這一點(diǎn)就需要采取有效的技術(shù)手段對(duì)食品中農(nóng)藥含量進(jìn)行有效檢測，并根據(jù)檢測結(jié)果提出針對(duì)性解決措施。目前社會(huì)上采取的食品中農(nóng)藥殘留量檢測方法主要是樣品前處理技術(shù)，針對(duì)于此就需要對(duì)這項(xiàng)技術(shù)手段進(jìn)行全面研究，保證這項(xiàng)技術(shù)得到更好的實(shí)施。

1 樣品前處理技術(shù)

1.1 固相萃取

在對(duì)食品中農(nóng)藥殘留進(jìn)行有效檢測的時(shí)候，要想保證檢測順利進(jìn)行，還需要對(duì)其進(jìn)行固相萃取，保證在這個(gè)過程中相應(yīng)檢測試劑能夠與目標(biāo)化合物進(jìn)行有效結(jié)合，借以保證化合物達(dá)到分離和富集的目的。在實(shí)施固相萃取過程中，涉及的類型主要三種，在這里筆者就對(duì)這三種固相萃取類型進(jìn)行全面分析。第一，正相固相萃取。在選取正相萃取的方法時(shí)，對(duì)光譜柱中選取的填料物質(zhì)大多數(shù)是極性物質(zhì)，這種極性物質(zhì)的使用能夠保證食品內(nèi)部極性物質(zhì)不會(huì)發(fā)生流失的現(xiàn)象。第二，反相固相萃取。與正相萃取方法相反，在這個(gè)過程中選取的試劑主要是非極性或者弱極性物質(zhì)，因此在這個(gè)過程中萃取出來的化合物大多數(shù)是中等極性或者非極性的化合物。第三，離子交換型固相萃取。與前兩種方法相比較，這種萃取方法實(shí)施的過程中對(duì)萃取柱內(nèi)物質(zhì)選取往往介于極性和非極性之間，而且相應(yīng)物質(zhì)還攜帶一部分電荷，在進(jìn)行萃取的過程中可以通過離子交換樹脂進(jìn)行。但是這種方法在實(shí)施的過程中還經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)抗體和受體制備困難的現(xiàn)象，這就導(dǎo)致其在實(shí)際應(yīng)用的時(shí)候經(jīng)常會(huì)受到限制。

1.2 固相微萃取

這項(xiàng)技術(shù)手段和固相萃取之間存在的差異，主要在于這項(xiàng)技術(shù)本身就是對(duì)化合物進(jìn)行分離的一個(gè)過程，其在實(shí)施的過程中能夠有效解決固相萃取中出現(xiàn)的孔道堵塞問題，對(duì)于這項(xiàng)技術(shù)來說，其在實(shí)施過程中選取的裝置類似于普通樣品注射器，在整個(gè)過程中選取的萃取試劑大多數(shù)是石英纖維，這種石英纖維不僅僅能夠保證化合物萃取的順利進(jìn)行，對(duì)保證其自身萃取質(zhì)量減少萃取時(shí)出現(xiàn)的問題都起到不可忽視的作用。對(duì)于固相微萃取來說，其在實(shí)施的過程中萃取模式主要分為兩種，即直接法和頂空法。在對(duì)這兩種模式進(jìn)行選取的時(shí)候需要對(duì)化合物的狀態(tài)有一個(gè)全面的掌握。一般來說如果化合物的狀態(tài)為半揮發(fā)性氣體，選取的模式主要是直接法。但是在對(duì)化合物進(jìn)行萃取的過程中相應(yīng)的化合物除了半揮發(fā)性氣體之外，還有揮發(fā)性固體和水樣等，在這個(gè)過程中采取的萃取模式主要是頂空法，并且在進(jìn)行萃取的時(shí)候?qū)ζ渥陨砩婕暗拇郎y物和涂層樣品等進(jìn)行有效控制，保證兩者之間能夠遵循相溶原則，并且能夠達(dá)到平衡分配的原則。對(duì)于固相微萃取方法來說，其與其他萃取方法相比較，在實(shí)施萃取時(shí)間上還有很大的提升，這種固相微萃取的方式大多數(shù)應(yīng)用在環(huán)境、醫(yī)學(xué)和動(dòng)植物樣品分析中，能夠有效檢測其中農(nóng)藥殘留量。

1.3 微波輔助萃取

微波輔助萃取是1986年匈牙利學(xué)者通過利用微波能萃取土壤、食品、飼料等固體物中的有機(jī)物，提出了一種新的少溶劑樣品前處理方法。微波輔助萃取技術(shù)是對(duì)樣品進(jìn)行微波加熱，利用極性分子可迅速吸收微波能量的特性來加熱一些具有極性的溶劑達(dá)到萃取樣品中目標(biāo)化合物，分離雜質(zhì)的目的。與傳統(tǒng)的振蕩提取法相比，微波輔助萃取具有高效、安全快速、試劑用量小和易于自動(dòng)控制等優(yōu)點(diǎn)，適用于易揮發(fā)物質(zhì)如農(nóng)藥等的提取，并可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)樣品的提取。微波輔助萃取中溶劑的選擇非常重要，直接影響到萃取結(jié)果。由于非極性溶劑介電常數(shù)小，對(duì)微波透明或部分透明無法進(jìn)行萃取分離。因此在微波萃取時(shí)，要求溶劑必須具有一定的極性，對(duì)待測組分有較強(qiáng)的溶解能力，對(duì)后續(xù)測定的干擾較少。此外也應(yīng)考慮溶劑沸點(diǎn)因素。常用的萃取劑有：甲醇、乙醇、丙酮、乙酸甲苯、二氯乙烷和乙腈等有機(jī)溶劑。用苯、正己烷等非極性溶劑萃取時(shí)必須加入一定比例的極性有機(jī)溶劑。微波輔助萃取的最佳參數(shù)除了萃取溶劑外，還包括了萃取設(shè)備、萃取溫度及時(shí)間的選擇。

1.4 凝膠滲透色譜技術(shù)

凝膠滲透色譜技術(shù)是根據(jù)溶質(zhì)（被分離物質(zhì)）分子量的不同，通過具有分子篩性質(zhì)的固定相（凝膠），使物質(zhì)達(dá)到分離。要求載體具有良好的化學(xué)惰性、熱穩(wěn)定性、一定的機(jī)械強(qiáng)度、不易變形、流動(dòng)阻力小、不吸附待測物質(zhì)、分離范圍廣（取決于載體的孔徑分布）等性質(zhì)。同時(shí)分離效果還與載體的粒度大小和填充密度有關(guān)。為了擴(kuò)大分離范圍和分離容量，一般選擇幾種不同孔徑的載體混合裝柱，或串聯(lián)裝有不同載體的色譜柱，其中載體的粒度越小、越均勻、填充得越緊密越好。良好的溶劑有利于提高待測物質(zhì)的溶解度，避免操作時(shí)因分析對(duì)象的改變而更換溶劑。由于凝膠滲透色譜為液體色譜，則要求溶劑的熔點(diǎn)在室以下，而沸點(diǎn)應(yīng)高于實(shí)驗(yàn)溫度，且溶劑的粘度小，以減小流動(dòng)阻力。另外溶劑還必須具備毒性低、易于純化、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定及不腐蝕色譜設(shè)備的特點(diǎn)。此外，分離效率除了載體、溶劑的選擇以外，還包括合適的溫度和溶質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)的影響。與吸附柱色譜等凈化技術(shù)相比，凝膠滲透色譜技術(shù)具有凈化容量大、可重復(fù)使用、適用范圍廣、使用自動(dòng)化裝置后凈化時(shí)間縮短、簡便、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。

2 食品中農(nóng)藥殘留前處理技術(shù)的發(fā)展前景

樣品的前處理是農(nóng)藥殘留量檢測過程中重要的步驟之一，它對(duì)保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，減少對(duì)色譜柱和檢測儀器的污染，提高檢測效率都具有重要的影響。食品中農(nóng)藥的殘留量一般在10-6～10-9（W/W）或更低的水平，除了要求檢測方法具有相當(dāng)高的靈敏度和選擇性外，也對(duì)樣品的前處理技術(shù)提出了更高的要求。不同的前處理技術(shù)有其各自的優(yōu)缺點(diǎn)和適用范圍，在實(shí)際工作中，應(yīng)根據(jù)待測樣品種類和基質(zhì)、測定結(jié)果要求和檢測儀器的不同，并結(jié)合實(shí)際條件選用合適的樣品前處理方法。

3 結(jié)束語

綜上所述可以了解到在我國對(duì)食品進(jìn)行農(nóng)藥檢測過程中，選取的方法有很多，這些方法的相同點(diǎn)都屬于樣品前處理技術(shù)，對(duì)于這些技術(shù)手段來說，在實(shí)施的過程中還需要對(duì)相應(yīng)食品內(nèi)部化合物成分有一個(gè)全面的了解，并根據(jù)相應(yīng)了解選取有效的技術(shù)方法進(jìn)行農(nóng)藥檢測，這樣不僅僅能夠促使檢測更加順利的進(jìn)行，對(duì)于提升檢測結(jié)果的質(zhì)量和其他方面都起到不可忽視的作用。另外在對(duì)食品中農(nóng)藥殘留進(jìn)行處理的過程中還能夠按照這里涉及的檢測方法選取有效的解決措施，保證食品的安全性得到全面提升。

參考文獻(xiàn)

[1]呂秀娟.淺談樣品的前處理技術(shù)[J].新疆畜牧業(yè).2013（12）.

篇6

【摘要】  

目的研究麻瘋樹酚凝膠劑的制備工藝、質(zhì)量評(píng)價(jià)及其體外釋藥性。方法用卡波姆940做基質(zhì)、氫氧化鈉為中和劑制成凝膠劑；使用改良的franz擴(kuò)散池，進(jìn)行體外釋藥實(shí)驗(yàn)。結(jié)果制備的麻瘋樹酚，細(xì)膩、光潔透明、穩(wěn)定性好、釋放藥物快。結(jié)論該凝膠劑配方合理，符合《

【關(guān)鍵詞】   麻瘋樹酚 凝膠劑 擴(kuò)散池 釋放速率

abstract：objectiveto study the preparation and quality assessment ,and the drug-releasing properties of gel containing jatropha curcas phenolic.methodscarbopd-940  was used as base,and sodium hydroxide as neutralizer.the drug-releasing experiments in vitro were carried out in improved franz diffuser.resultsthe geiata was homogenous,transparent and stable.the drugs released quickly.conclusionthe formulation of the gelata is reasonable and coincident with the requirement of chinese pharmacopoeia 2005.this gelata is suitable for remedy of  herpes simplex virus type 1.

key words：jatropha curcas phenolic;  gel;  franz diffuser;   drug releasing rate

    作為提供生物柴油的熱點(diǎn)植物——麻瘋樹，其綜合利用已成為研究的一個(gè)重點(diǎn)。我們從麻瘋樹葉中提取了一種酚類物質(zhì)，經(jīng)藥效學(xué)試驗(yàn)證實(shí)，對(duì)單純性皰疹病毒有明顯的抑制作用，將其制成中藥凝膠劑用于陰道皰疹治療，有一定的新穎性和實(shí)用性。

    本研究用水溶性高分子材料-卡波姆制備不同濃度麻瘋樹酚凝膠劑，并通過對(duì)外觀、ph值、黏度、穩(wěn)定性、耐熱耐寒實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了質(zhì)量評(píng)價(jià)及體外釋藥性研究，確定了最佳處方，以期為麻瘋樹酚陰道給藥新劑型的開發(fā)提供依據(jù)［1，2］。

1     儀器和藥品

1.1  儀器bs1105型 電子 天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；kq、50b型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；w-g71型電熱鼓風(fēng)干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）；hps、3c型酸度計(jì)  （上海偉業(yè)儀器廠）；ndj-1旋轉(zhuǎn)粘度計(jì)（上海天平儀器廠）；立式擴(kuò)散池（自制）；79hw-1型恒溫磁力攪拌器（浙江樂成電器廠）；uv、1900紫外可見分光光度計(jì)（北京普析）；美國waters高效液相色譜儀。waters 515泵，waters 2487雙波長紫外可見光檢測器，rheodyne 7725進(jìn)樣閥及20 μl進(jìn)樣環(huán)。大連物化所wdl-95色譜工作站。waters spherisorb ods（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，c18保護(hù)柱，流速1 ml/min，柱溫室溫。上海亞東0.45 μm微孔濾膜，天津津騰0.45um針筒式微孔濾膜濾過器。

1.2     藥品  

麻瘋樹酚對(duì)照品（本實(shí)驗(yàn)室提供）；卡波姆940（美國bfgoodrieh公司）；無水甲醇( 天津市首世化工有限公司)；1，2-丙二醇(沈陽市化學(xué)試劑廠)；氫氧化鈉(沈陽市化學(xué)試劑廠)；分子量為8 000～14 000的透析膜（millipore） 。

2   方法與結(jié)果

2.1  處方及制備方法

2.1.1  原料 

本實(shí)驗(yàn)室提供。

2.1.2  處方 

主藥100 g，卡波姆940  18g，氫氧化鈉適量，配成1 000 g。

2.1.3  凝膠劑的制備  

取處方量的卡波姆940溶于重蒸水中溶脹，并放置過夜，加入處方量的主藥混合均勻，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph至5.5～6.0，最后加入重蒸水至1 000 g，罐裝，滅菌［3，4］。

2.1.4  空白基質(zhì)的配制 

分別取卡波姆1.8 g于100 ml蒸餾水中溶脹12 h，制成基質(zhì)濃度為1.8%的不含麻瘋樹酚的卡波姆凝膠［5，6］。

2.1.5  制備工藝條件的研究采用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選制備，因素水平見表1，正交實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及 計(jì)算 結(jié)果見表2。表1  因素水平（略）　表2  收得率l9（34）正交實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及計(jì)算結(jié)果（略）

    根據(jù)以上正交實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)處理，b1>a3>c1，可知當(dāng)處方配比為丙二醇（0.0%），卡波姆940（1.8%），無水乙醇（0.0%）時(shí)，有較好的收得率，并且該處方有滿意的外觀性狀和黏度，所以選擇該處方做進(jìn)一步研究。

2.2  質(zhì)量評(píng)價(jià)［7，8］

2.2.1  麻瘋樹酚凝膠劑的外觀評(píng)價(jià)  

篩選出的處方均為黃褐色半固體，質(zhì)地均勻細(xì)膩，稠度適宜，涂展性好，吸收快，符合《中國藥典》2005版有關(guān)凝膠劑項(xiàng)下的規(guī)定。

2.2.2  ph值取處方約10 g加入25 ml蒸餾水，用hps-3c型酸度計(jì)精密測定，ph值在5.5～6.0，適合陰道特殊環(huán)境使用。

2.2.3  穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)  

取本品10 g置于離心管中，以4 000 r/min離心40 min。無分層現(xiàn)象，有較好的穩(wěn)定性。

2.2.4  耐熱耐寒實(shí)驗(yàn)取本品適量，裝于密閉小瓶中，放于55℃濕箱中恒濕24h，置冰箱0℃中放置24 h。無分層和霉變現(xiàn)象，該處方耐熱耐寒。

2.3  體外釋藥性研究［3］

采用自制的擴(kuò)散池進(jìn)行凝膠釋藥性測定，擴(kuò)散池置于恒溫磁力攪拌器上的恒溫水浴中。供應(yīng)室與接受室間置透析膜，該膜微孔可通過分子量（m）8 000～14 000的分子，麻瘋樹酚的分子量<1 000，因此該膜僅作為凝膠劑的支撐膜，不影響藥物分子通過膜孔的擴(kuò)散。在膜與供應(yīng)室之間放置一環(huán)形塑料圈，高0.50 cm，直徑2.8 cm，內(nèi)圓面積s=6.154 4 cm2。內(nèi)圓中緊密地填放凝膠劑。供體池中加入準(zhǔn)確稱量的制劑2.5 g，接受池中加入40ml蒸餾水，恒溫水浴溫度為37℃，在持續(xù)攪拌下，分別與1，2，3，4，6h取出接受池中溶液0.6 ml（立即補(bǔ)充等體積37℃蒸餾水），并用30%的甲醇液稀釋至2 ml，微孔濾膜濾過，作為待測液。

2.3.1  檢測波長的選擇  

取麻瘋樹酚適量，加30%甲醇振搖溶解，在uv-1900紫外分光光度計(jì)上，200～600 nm波長處進(jìn)行掃描，最大吸收波長為270 nm及274 nm，經(jīng)預(yù)試并結(jié)合 文獻(xiàn) 報(bào)道，選擇274nm為檢測波長。

2.3.2  測定方法  

取已稀釋的待測液10 μm進(jìn)入高效液相色譜柱，根據(jù)結(jié)果 計(jì)算 累計(jì)藥物釋放百分?jǐn)?shù)和單位面積累計(jì)藥物釋放量。其中hplc條件為：流動(dòng)相30%甲醇；流速1 ml/min；柱溫30℃；檢測波長274 nm；保留時(shí)間30 min。

2.3.3  數(shù)據(jù)處理 

采用隨行標(biāo)準(zhǔn)單點(diǎn)比較法計(jì)算供試品中麻瘋樹酚的含量，再按照下式計(jì)算出單位面積累積滲透量：

    q=vcn+ni=1vicia

    式中q為第n次取樣時(shí)的單位面積累積滲透量，v為接受池的體積，vi為第i次取樣的體積（0.6 ml），ci為第n個(gè)取樣點(diǎn)濃度（μg/ml）。a為擴(kuò)散滲透面積（cm2）。以q值為縱坐標(biāo)，時(shí)間t為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸所得方程為higuchi方程，其斜率即為透皮速率常數(shù)j［μg/（cm2·h）］。

2.3.4  體外藥物釋放度

供體池中加入準(zhǔn)確稱量的制劑2.5 g，接受池中加入40 ml蒸餾水，恒溫水浴溫度37℃，在持續(xù)攪拌下，分別于1，2，3，4，6 h取出接受池中溶液0.6 ml（立即補(bǔ)充等體積37℃蒸餾水），并用30%的甲醇液稀釋至2 ml，用0.45 μm微孔濾膜過濾后，作為待測液。另準(zhǔn)確稱取麻瘋樹酚對(duì)照品0.1 g，用100 ml 30%的甲醇溶液溶解定容，作為對(duì)照品溶液。分別取已稀釋的待測溶液和對(duì)照品溶液10 μl進(jìn)入高效液相色譜柱，根據(jù)結(jié)果計(jì)算單位面積累計(jì)藥物釋放量。結(jié)果見表3及圖1。

2.4  麻瘋樹酚凝膠劑體外經(jīng)皮滲透的影響  

由表3和圖1可見，麻瘋樹酚凝膠劑的釋藥曲線呈線性關(guān)系。表3  不同處方單位面積累計(jì)藥物釋放量測定結(jié)果（略）

3  討論

    不同濃度的卡波姆940和主藥混合時(shí)，均有不同的黏度和外觀，通過比較發(fā)現(xiàn)當(dāng)基質(zhì)為卡波姆940，且濃度為1.8%時(shí)，有滿意的性狀，且基質(zhì)具有無毒、無刺激性、更易涂敷分散，與皮膚有良好的耦合性等特點(diǎn)，釋藥快，又可延長藥物的滯留時(shí)間，使藥效持久，為較理想基質(zhì)［6］。

耐熱耐寒和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明制劑在高溫低溫下均穩(wěn)定，因此儲(chǔ)藏要求可相對(duì)寬松。

    通過釋藥行為的考察，可知累計(jì)藥物釋放百分率與時(shí)間的曲線呈線性關(guān)系，說明制劑有良好的釋放能力。

    通過正交實(shí)驗(yàn)及其數(shù)據(jù)分析，確定了最佳處方，該處方的不僅有良好的釋藥行為，而且就 經(jīng)濟(jì) 而言，也是最合理的，為該制劑的開發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    ph值對(duì)凝膠劑的黏度有較大影響，陰道可耐受的ph為5.0～6.0，綜合考慮皮膚和凝膠黏度的因素，將ph選定為5.5～6.0，以氫氧化鈉為ph調(diào)節(jié)劑進(jìn)行調(diào)節(jié)，有較好的外觀和黏度，且對(duì)藥物無影響［6，8］。

    通過正交實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)無水乙醇作為增溶劑［6］對(duì)制劑的收得率影響不大，可以忽略，原因可能是由于麻瘋樹酚為水溶性物質(zhì)，較易溶解于水中。

    通過正交實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)丙二醇作為保濕劑［6］對(duì)處方的影響較大，濃度越高，影響越大，而且陰道濕度本身較大，所以綜合考慮，處方作為陰道用藥，不需要進(jìn)行保濕。

【 參考 文獻(xiàn)】

 

篇7

【關(guān)鍵詞】 雙氯芬酸鈉 水凝膠 輻射 卡波姆凝膠

卡波姆凝膠是良好的經(jīng)皮給藥骨架控釋型藥物載體，因其藥物釋放速率較高而日益受到青睞，筆者通過將輻射制備的雙氯芬酸鈉水凝膠與卡波姆凝膠藥物透皮性進(jìn)行比較，以評(píng)價(jià)水凝膠作為經(jīng)皮給藥制劑控釋型藥物載體的可行性。

1 儀器與材料

Agillent 1100高效液相色譜儀，紫外檢測器，自動(dòng)進(jìn)樣器。100.0%雙氯芬酸鈉對(duì)照品。9cm×9cm×0.2cm 雙氯芬酸鈉透皮吸收劑（自制）。甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），水為雙蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法

2.1 輻射交聯(lián)雙氯芬酸鈉水凝膠與雙氯芬酸鈉卡波姆凝膠的制備

2.1.1 雙氯芬酸鈉水凝膠的制備 取1個(gè)250ml燒杯，稱重。精密稱取0.25g雙氯芬酸鈉，加入PEG 1g、PVP 2g，加100g蒸餾水，超聲溶解，制備藥物濃度為0.25%Labrasol的含量為1.5%的雙氯芬酸鈉水凝膠。

2.1.2 雙氯芬酸鈉卡波姆凝膠配制 精確稱取雙氯芬酸鈉0.25g，置于 50ml容量瓶中，加蒸餾水定容至50ml，搖勻。稱取卡波姆1.0g，加入45ml蒸餾水中，放置過夜，溶脹。加入配制的雙氯芬酸鈉試液，用15%NaOH溶液調(diào)節(jié)pH為8.0，加蒸餾水至100g，混勻。同時(shí)配制無Labrasol和1.5%Labrasol的0.25%雙氯芬酸鈉卡波姆凝膠。

2.2 體外滲透實(shí)驗(yàn) 取人工皮膚樣本（半徑為1.1cm）6張，將各人工皮膚固定在改良的Franz擴(kuò)散池接受室與相應(yīng)的供應(yīng)室之間（接受室內(nèi)徑為0.95cm），夾子固定（接受室體積為7ml）。將雙氯芬酸鈉的1.5%Labrasol水凝膠兩份（半徑0.95cm）分別加于1、2號(hào)，無Labrasol卡波姆凝膠兩份加于3、4號(hào)，1.5%Labrasol卡波姆凝膠兩份加于5、6號(hào)擴(kuò)散池與人工皮膚之間，外敷同面積的保鮮膜，防止水分蒸發(fā)，夾子固定。在接受液為10%的乙醇、恒溫37.5℃、300r/min攪拌條件下，分別于0.5、1、3、7、12、24h從接受池中取樣300μl，同時(shí)補(bǔ)充同體積的經(jīng)37.5℃預(yù)熱的新鮮接受液。樣品離心20min（2000r/min），取上清液測定樣品中雙氯芬酸鈉的含量，并計(jì)算單位面積累積透過量（Q）。

3 結(jié)果

雙氯芬酸鈉卡波姆凝膠與雙氯芬酸鈉水凝膠單位面積的藥物累積透皮量與時(shí)間的折線圖見圖1。水凝膠與卡波姆凝膠HPLC測定值及單位面積藥物累積透皮量（Q）見表1。可以看出含1.5%Labrasol雙氯芬酸鈉水凝膠前2h的藥物累積透皮量分別是不含Labrasol和含1.5%Labrasol雙氯芬酸鈉卡波姆凝膠的2.93倍和3.14倍，說明雙氯芬酸鈉水凝膠藥物起效較卡波姆凝膠快，并且24h時(shí)含1.5%Labrasol雙氯芬酸鈉水凝膠藥物累積透皮量是含1.5%Labrasol卡波姆凝膠的1.39倍，說明水凝膠較卡波姆凝膠可提高藥物釋放量。將時(shí)間與累積透皮量進(jìn)行回歸，求得回歸方程，結(jié)果見表2。根據(jù)直線方程可以求出藥物滲透速率和評(píng)價(jià)藥物透皮能力的表觀透皮系數(shù)（Kp），見表3。輻射制備的雙氯芬酸鈉水凝膠與無Labrasol和含1.5%Labrasol 雙氯芬酸鈉卡波姆凝膠的藥物表觀透皮系數(shù)（Kp×105）分別為71.31±8.12、57.27±2.60和38.57±3.80，輻射制備的雙氯芬酸鈉水凝膠的（Kp）值是無Labrasol和含1.5%Labrasol雙氯芬酸鈉卡波姆凝膠的1.25和1.85倍。表1 HPLC測定值及累積透皮量 表2 時(shí)間與累積透皮量的回歸方程表3 滲透速率和表現(xiàn)透皮系數(shù)

4 小結(jié)

卡波姆是丙烯酸與丙烯基庶糖交聯(lián)的高分子合成聚合物，分子結(jié)構(gòu)中含56%～68％的羧酸基團(tuán)，聚丙烯酸的分子內(nèi)氫鍵作用很強(qiáng)，卡波姆具有內(nèi)在特有的交聯(lián)結(jié)構(gòu)，其良好的粘滯性和親水凝膠性使其具有較好的控、緩釋作用。

造成水凝膠與卡波姆疑膠透皮性差異的原因，是它與兩者內(nèi)在結(jié)構(gòu)不同引起的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)雙氯芬酸鈉水凝膠的藥物透皮性也較卡波姆凝膠好，說明這種制劑滿足作為透皮吸收制劑的條件。

【參考文獻(xiàn)】

1 祁容，何仲貴.智能水凝膠研究進(jìn)展及其在醫(yī)藥與生物工程中的應(yīng)用.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，118（16）：447-451.

2 劉兆民，肖慧.HDPE膜預(yù)輻射接枝NIPA/AAC環(huán)境制備敏感性水凝膠.輻射研究與輻射工藝學(xué)報(bào)，2004，22（4）：209-212.

篇8

abstract： in this study, we collected sponge sample from zhanjiang offshore sea area, and sponge ingredient were extracted by organic solvent benzine, chloroform, normal butyl alcohol and ethyl acetate, and identified and analyzed with the spectroscopic technique such as gel permeation chromatography (gpc), gas chromatopraphy-mass spectrometry (gc/ms), liquid chromatograph-mass spectrometer (lc-ms). the data indicates that the sponge has many kinds of compound, and affirms five kinds of compound such as hexanedioic acid， bis(2-ethylhexyl) ester，n-hexadecanoic acid，1,3-cyclopentanedione, 2,4-dimethyl-，1,2-dithiolane-3-pentanoic acid, and 26 kinds of compound molecular weights, but also has many kinds of matter also to wait for further analysis.

關(guān)鍵詞： 海綿；分離提純；化學(xué)成分

key words： sponge; purification; chemical component

中圖分類號(hào)：o69文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：a文章編號(hào)：1006-4311（2011）04-0199-04

0引言

海綿中含有豐富的生物活性物質(zhì)。海綿(marine sponge) 是屬于動(dòng)物界、海綿動(dòng)物門(spongia)的一類低等多細(xì)胞海洋生物。從海水、海底沉積土到海洋動(dòng)植物,以及一些熱泉涌、水熱狹縫等,包羅萬象的生態(tài)圈,造就了海綿共附生微生物一個(gè)復(fù)雜多樣的群體,同時(shí),產(chǎn)生了獨(dú)特的有別于陸地微生物的多種具有生物活性的次級(jí)代謝產(chǎn)物。本研究利用海南豐富的海綿資源，從中篩選出化合物，通過色譜、光譜分析技術(shù)鑒定其結(jié)構(gòu)特征，并分析其生物活性。有望篩選出結(jié)構(gòu)與活性不同于其他海洋來源的化合物，為進(jìn)一步開發(fā)新的海洋藥物提供生物資源，具有非常重要的意義。

1材料方法

1.1 材料樣品采集地：湛江近海海域。樣品處理：從海水中采摘健康的海綿樣品后，分別置于無菌塑料袋中，一般在2h內(nèi)送回實(shí)驗(yàn)室處理，不能及時(shí)送回實(shí)驗(yàn)室的則放于冰盒內(nèi)低溫短時(shí)間保存。

1.2 試劑與儀器

三氯甲烷分析醇廣州化學(xué)試劑廠產(chǎn)品

正丁醇分析醇廣州化學(xué)試劑廠產(chǎn)品

乙酸乙酯分析醇廣州化學(xué)試劑廠產(chǎn)品

石油醚分析醇天津市福晨化學(xué)試劑廠產(chǎn)品

10ml移液槍

hp6890/5973msd 氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀

hplc高效液相儀/氨基酸分析儀（water 2487 dualλ absorbance detector）

agilent 1100-esquire hct液質(zhì)聯(lián)用儀

gpc凝膠滲透色譜儀（分子量測試范圍：150—270，000）

真空干燥箱dzx—3型（6020b）寧波海曙賽福實(shí)驗(yàn)儀器廠

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3．1 化合物的提取分離海綿用無菌海水浸洗3遍，然后擠干，以去除表面附著物及夾帶的海水微生物。用無菌剪刀進(jìn)行解剖，用2ml 甘油保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)，用5ml 95%工業(yè)酒精浸取3次，每次24小時(shí)。提取物冷凍干燥成白色粉末后，將濃縮物分散于5ml水中，再用各2ml，1.5ml，1.5ml石油醚分別提取三次，得可溶物5ml，再用極性逐漸增大的三氯甲烷，正丁醇，乙酸已脂以同樣的方法提取三次，各得可溶物5ml，提取余相水溶物5ml。

1.3.2 氣相—質(zhì)譜聯(lián)用儀測定有機(jī)相分別取200μl用于氣相—質(zhì)譜連用儀（gc/ms）進(jìn)行測定分析。色譜條件為： 色譜柱 hp-ffap（30m×0.25mm, 0.25μm）,60°c ，4°c/min150°c， 6°c/min，250°c，進(jìn)樣溫度 250°c，載氣 he，分流比 80：1，柱流量 1.0μm/min；質(zhì)譜條件為：ei源，電離電壓 70ev，離子源溫度 230°c，掃描范圍 40-500aum，進(jìn)氣量 1μl。

1.3.3 高效液相色譜測定有機(jī)相冷凍干燥后用于高效液相及液質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行測定分析。高效液相分析儀條件為：分離系統(tǒng)：waters 2695 separations module，色譜柱：waters c－18（3×15mm），柱溫：25±5℃，流動(dòng)相：甲醇，水梯度洗脫，洗脫條件如表1。

檢 測 器：waters 2487 dual λ absorbance detector，檢測波長： 254nm，進(jìn)樣量：6μl，控制系統(tǒng)：waters empower 軟件。供試品溶液配制：正丁醇萃取液中加入800μl甲醇，三氯甲烷提取物、石油醚提取物以及乙酸乙酯提取物中加入1.3ml甲醇，混勻后以12000轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速離心15min。取上層溶液待分析用。

1.3.4 液質(zhì)聯(lián)用儀測定液質(zhì)聯(lián)用儀分析條件為：儀器型號(hào)為agilent 1100-esquire hct，色譜柱c18，內(nèi)徑4.60*300mm，流動(dòng)相甲醇+水梯度洗滌，洗脫條件如表2。

對(duì)水溶物做凝膠色譜分析，gpc的條件為：示差檢測器 waters 1515+2414，兩根柱子串聯(lián)：型號(hào)分別是ultrahydrogeltm120和ultrahydrogeltm500，柱溫55℃，檢測器溫度50℃，流動(dòng)相：水流速：0.6ml/min。

轉(zhuǎn)貼于中國

中國1.3.5 凝膠色譜測定柱子型號(hào)：ultrahydrogeltm500、ultrahydrogeltm120（分子量范圍100～40萬，雙柱串聯(lián)）。填料：葡聚糖。柱溫55℃。流動(dòng)相：純水。流動(dòng)相速度：0.6ml/min。waters 泵1515，示差檢測器2414；檢測器50℃。

2結(jié)果分析

2.1 氣相—質(zhì)譜聯(lián)用儀（gc/ms ）結(jié)果及分析①正丁醇提取液分析（圖1）。結(jié)果顯示正丁醇提取液中含有4種化合物： a）出峰時(shí)間在36.02處有一個(gè)化合物：結(jié)構(gòu)為：hexanedioic acid, bis（2-ethylhexyl） ester，分子量：370.31，分子式：c22h42o4。b)出峰時(shí)間在36.90處有一個(gè)化合物：結(jié)構(gòu)為：n-hexadecanoic acid，分子量：256.24，分子式：c16h32o2。c)出峰時(shí)間在39.68處有一個(gè)化合物：結(jié)構(gòu)為：1，3-cyclopentanedione，2，4-dimethyl-，分子量：126.07，分子式：c7h10o2。d)出峰時(shí)間在40.73處有一個(gè)化合物：結(jié)構(gòu)為：1，2-dithiolane-3-pentanoic acid，分子量：206.04，分子式：c8h14o2s2。②石油醚提取液分析（圖2）。結(jié)果顯示石油醚提取液中含有1種化合物：tetradecanoic acid。分子量：228.21，分子式：c14h28o2。

2.2 高效液相結(jié)果及分析:（ 圖均已積分）①正丁醇提取液分析（圖3）。②石油醚提取液分析（圖4）。③三氯甲烷提取液分析（圖5）。④乙酸乙酯提取液分析（圖6）。

2.3 液質(zhì)聯(lián)用儀結(jié)果分析①正丁醇提取液分析（圖7、8）。分析結(jié)果有八個(gè)化合物存在，并占有一定含量。其中以6號(hào)化合物感應(yīng)強(qiáng)度最大，且在一級(jí)質(zhì)譜圖中可以明顯確定其分子量為565.6（ms m/s:566.6（m+）；588.6（m+na），見圖9和圖10）。和背景化合物比較,可以確定為新的化合物。其他化合物由于現(xiàn)有條件無法做出更深一步的判斷，待以后深入研究。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)中曾改變紫外波長為210進(jìn)行比較分析，但是最后由于波長210下的色譜和質(zhì)譜比較重合性較差，所以選擇波長外280的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。但波長210下的分析數(shù)據(jù)可供參考，為以后進(jìn)一步研究做參考。見圖11。②乙酸乙酯提取液分析（圖12、13）。分析結(jié)果有四個(gè)比較明顯的化合物存在，并占有一定含量。但化合物由于現(xiàn)有條件無法做出更深一步的判斷，待以后深入研究。它們的質(zhì)譜圖如圖14-17。

2.4 凝膠色譜結(jié)果及分析（圖18-20）分析結(jié)果表明：水相中化合物有兩大類，分子量大概在10，000左右和小于100的化合物存在，并占有相當(dāng)大含量。但由于現(xiàn)有條件無法做出更深一步的判斷，待以后深入研究。

以下為凝膠色譜的標(biāo)準(zhǔn)圖如圖21：

分子量分別為：277000、12900、1460、106。

3討論與小結(jié)

本論文的研究工作主要取得以下結(jié)果：①以海綿為分離樣品，采用多種分離技術(shù)分離得到多種化合物。結(jié)果表明，石油醚，三氯甲烷，正丁醇，乙酸乙酯分別能提取到有機(jī)化合物，而水相中也能得到化合物。②以氣相—質(zhì)譜聯(lián)用儀分析技術(shù)分離得到hexanedioic acid、bis(2-ethylhexyl)ester、n-hexadecanoic acid、1,3-cyclopentanedione、2,4-dimethyl-，1,2-dithiolane-3-pentanoic acid5種化合物。③石油醚，三氯甲烷，正丁醇，乙酸乙酯提取液經(jīng)高效液相技術(shù)分離共得到26種化合物。其中有些物質(zhì)是重復(fù)的，說明很多化合物可能是同時(shí)溶于有機(jī)相或同時(shí)溶于其中某幾項(xiàng)。同時(shí)也說明有些化合物的性能或結(jié)構(gòu)是非常相似，在一定程度上比較難以分離，需改進(jìn)技術(shù)或改變方法來進(jìn)行深一步的研究試驗(yàn)。④以液質(zhì)聯(lián)用儀分離技術(shù)分離得到12個(gè)不同分子量的化合物。其中以分子量為565. 6（ms m/s:566.6（m+）；588.6（m+na））的化合物可以確定為新化合物，因?yàn)樵谏V庫和相關(guān)文獻(xiàn)中都沒提及過該分子量的化合物。以后的研究工作將以此化合物為重點(diǎn)進(jìn)行研究，相信通過更深入的分析鑒定，能確定該化合物的結(jié)果和特征。⑤以凝膠色譜分析技術(shù)得到溶于水相中的化合物有兩大類，分子量大約在10，000da左右和小于100da，兩者都有相當(dāng)高含量。根據(jù)現(xiàn)有條件，估計(jì)分子量小于100的化合物中可能有海綿中的一些小分子的酸和堿等化合物，當(dāng)然也可能是實(shí)驗(yàn)的誤差，使一些甘油未除盡，所以還有點(diǎn)甘油存在；而分子量在10，000左右的化合物很可能是一些不易溶于以上4種有機(jī)溶劑的高分子聚合物，當(dāng)然也有可能是提純過程中留下的極小部分的細(xì)胞碎片。⑥本研究利用該領(lǐng)域還未有人用氣質(zhì)聯(lián)用儀，液質(zhì)聯(lián)用儀技術(shù)來互補(bǔ)分析海綿中的有機(jī)物成分，通過對(duì)有機(jī)相和無機(jī)相的分析，對(duì)海綿中的化合物分離提取是比較全面的。但是由于客觀條件的限制，目前的研究結(jié)果中仍存在有未確定的化合物，例如水相中分子量在10，000左右的化合物和質(zhì)譜中有顯示而色譜中未能查到的化合物，及質(zhì)譜中一些含量不高的小峰所代表的化合物作更深入的研究奠定了一定的基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

[1]weissman kj.polyketide biosynthesis:understanding and exploiting modularity .philos transact a math phys eng sci ,2004, 362(1825):2671～2690.

[2]piel j , hui d , wen g.antitumor polyketide biosynthesis by an uncultivated bacterial symbiont of the marine sponge theonella swinhoei. proc natl acad sci usa,2004 ,101（46）:16222～16227.

[3]hu jinfeng , et al . plakortides i-l ,four new cyclic peroxides ides from an undescribed jamaican sponge plakortis sp.(homosclerophorida , plakinidae) . tet rahedron ,2001,57(46) :9379～9383.

[4]abrell lm ,borgeson b ,crews p. chloro polyketides from the cultured fungus (aspergillus) separated from a marine sponge. tet rahedron lett ,1996,37 (14) :2331～22334.

[5]moffitt mc ,neilan ba.evolutionary affiliations within the superfamily of ketosynthases reflect complex pathway associations.j mol evol,2003,56(4):446-57.

[6]schirmer a, gadkari r, et al .metagenomic analysis reveals diverse polyketide synthase gene clusters in microorganisms associated with the marine sponge discodermia dissoluta.appl environ microbiol, 2005,71(8):4840-4849.

[7]徐平，李文均.聚酮類化合物生物合成途徑基因陽性菌株生物多樣性.研究微生物學(xué)報(bào)，2005，45(6)：821～826.

篇9

>> 銅仁市碧江區(qū)珍珠花生中10種農(nóng)藥殘留測定 甘薯中5種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的快速測定方法 直接提取法檢測有機(jī)氯農(nóng)藥殘留方法探尋 大米中7種有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留分析方法研究 氣相色譜法測定土豆中8種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留 我國土壤中殘留有機(jī)氯農(nóng)藥的研究 蔬菜和水果中有機(jī)氯類，擬除蟲菊酯類農(nóng)藥多殘留檢測方法 GC法測定30種黔產(chǎn)中藥材中11種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留 氣相色譜法測定草莓中9種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留方法研究 探究有機(jī)磷殘留農(nóng)藥在蔬菜中的檢測方法 土壤中有機(jī)氯農(nóng)藥分析方法研究 徐州養(yǎng)牛帶生鮮奶中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留水平研究 基于QuEChERS凈化―氣相色譜法檢測蔬菜中16種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留 蔬菜中有機(jī)磷類和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的檢測方法研究 氣相色譜―電子捕獲檢測器測定黃瓜中多種有機(jī)氯農(nóng)藥和除草劑殘留 基質(zhì)分散固相萃取―氣相色譜法測定茶葉中13種有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留 蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的快速檢測方法分析 果蔬中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測方法 產(chǎn)婦體內(nèi)有機(jī)氯農(nóng)藥殘留對(duì)血中4種生殖激素水平的影響 傳感器技術(shù)在有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測中的應(yīng)用 常見問題解答 當(dāng)前所在位置：l.

[2] 農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)出版研究中心.蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定：NYT 761-2008[S].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2010.

[3] 岳永德，朱魯生.農(nóng)藥殘留分析[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2004.

篇10

    摘要:目的 探討不同濃度新型促滲劑壬代環(huán)戊雙醚對(duì)雙氯芬酸鈉凝膠的透皮吸收影響。方法 采用改良Frans擴(kuò)散池進(jìn)行體外透皮吸收實(shí)驗(yàn)。流動(dòng)相:甲醇乙酸水溶液(pH=3.0)(體積比70∶30),紫外檢測波長284 nm。結(jié)果 壬代環(huán)戊雙醚含量在2.0%時(shí)透皮吸收最好。結(jié)論 壬代環(huán)戊雙醚具有較好的促滲作用,是較好的新型促滲劑。

    關(guān)鍵詞:壬代環(huán)戊雙醚;雙氯芬酸鈉凝膠;透皮吸收;新輔料

    經(jīng)皮給藥系統(tǒng)是目前藥劑學(xué)研究的熱點(diǎn)之一[1]。其可維持穩(wěn)定持久的血濃,避免胃腸道的破壞及肝臟首過效應(yīng),毒性和不良反應(yīng)小,使用方便。然而在治療量下許多藥物難以滲透皮膚,必須使用促滲劑增加藥物穿透性和透皮速率。在實(shí)際應(yīng)用中,常用的有油酸及其酯類、二甲亞砜及其衍生物和氮酮等,其中以氮酮(azone)最為普遍[2]。

    本室合成一種新的透皮吸收促進(jìn)劑――壬代環(huán)戊雙醚[3],化學(xué)名為2正壬基1,3二氧戊環(huán)。由癸醛和乙二醇在對(duì)甲基苯磺酸催化下脫水環(huán)合而成。性狀為無色、透明、無毒、略有香味的稀油狀液體。其合成方法、藥理毒性另文報(bào)道。

    雙氯芬酸鈉為非甾體抗炎藥[4],口服易引起胃腸道反應(yīng),采用經(jīng)皮給藥方法,可以消除其對(duì)胃腸道的刺激,但經(jīng)皮吸收又受到角質(zhì)層的限制,透皮速率較小,需添加促透劑以改善藥物的透皮釋藥。本文選用雙氯芬酸鈉為模型藥物結(jié)合不同濃度的新型促滲劑壬代環(huán)戊雙醚研究其對(duì)藥物透皮制劑吸收的影響,考察壬代環(huán)戊雙醚新型促滲劑的開發(fā)價(jià)值。

    1  試劑、儀器與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    1.1  試劑與儀器

    高效液相色譜儀(LC―10A,日本島津),智能透皮實(shí)驗(yàn)儀(TP―2A,南京紅藍(lán)電子科技中心),改良Frans擴(kuò)散池(購自沈陽藥科大學(xué)),ZD―85雙功能氣浴恒溫振蕩器(江蘇金壇市富華儀器有限公司),卡波姆940(Carbomer,美國Goodrich公司),雙氯芬酸鈉(北京雙鶴藥業(yè)有限公司),雙氯芬酸鈉對(duì)照品(購自中國藥品生物制品檢定所),壬代環(huán)戊雙醚(本室合成),氮酮(azone,藥用,廣州化學(xué)助劑廠),甲醇(色譜醇,南京漢邦試劑廠),其他試劑均為分析純。

    1.2  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 

    昆明種小白鼠,體質(zhì)量20~22 g,SPF級(jí),雌、雄兼用,福建醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,合格證號(hào)為醫(yī)動(dòng)字第23―006號(hào)(質(zhì))。

    2  實(shí)驗(yàn)方法 1  雙氯芬酸鈉凝膠劑的制備

    取雙氯芬酸鈉150 g溶解于60 ℃ 1 500 mL丙二醇中,另將150 g卡波姆940加入800 mL蒸餾水中充分溶脹,攪拌下將雙氯芬酸鈉溶液加入卡波姆基質(zhì)中,并分別加入質(zhì)量濃度為0%,0.5%,1.0%,1.5%,2.0%,25%,3.0%的壬代環(huán)戊雙醚、2.0%的氮酮,用三乙胺調(diào)pH為7.5,攪拌使成凝膠狀,蒸餾水加至1 000 g,攪勻,分裝即得。 2  含量測定 2.1  色譜條件  

    色譜柱shimpack ODS柱(4.6 mm×150 mm,10 μm);檢測波長284 nm;流動(dòng)相:甲醇乙酸水溶液(pH調(diào)3.0)(體積比70∶30);流速:1.0 mL?min-1;柱溫為室溫;進(jìn)樣量:20 μL。柱效以雙氯芬酸鈉計(jì),理論塔板數(shù)不低于3 000。 2.2  標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備  

    精密稱取105 ℃干燥至恒重的雙氯芬酸鈉對(duì)照品50 mg,置于50 mL量瓶中,用流動(dòng)相溶解定容,振蕩搖勻,備用。精密量取標(biāo)準(zhǔn)液0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 mL置于100 mL量瓶中,用流動(dòng)相溶解定容,振蕩搖勻。精密吸取20 μL進(jìn)高效液相儀測定峰面積,以峰面積(A)為縱坐標(biāo)與雙氯芬酸鈉質(zhì)量濃度(ρ)進(jìn)行線性回歸,得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程: A=2377.15 ρ+01152,r=0.9998,線性范圍:5.0~30.0 μg?mL-1。 2.3  穩(wěn)定性試驗(yàn)  

    取雙氯芬酸鈉適量,加接收液生理鹽水配成高低不同濃度的溶液,分別在0,2,4,8,12,24 h處測定峰面積,RSD分別為0.78%和0.61%。結(jié)果表明,雙氯芬酸鈉在24 h內(nèi)穩(wěn)定。 2.4  精密度試驗(yàn) 

    精密吸取對(duì)照品溶液(15.078 μg?ml-1)20 μL,分別于同一日內(nèi),不同日內(nèi)重復(fù)進(jìn)樣5次,測得RSD分別為1.19%和2.13%。 3  體外透皮試驗(yàn) 3.1  離體鼠皮的制備  

    取體質(zhì)量20~22 g健康小鼠,處死后立即剃除腹部毛,剝離腹部皮膚,除皮下脂肪,用生理鹽水沖洗后浸泡于生理鹽水中,置于4℃冰箱冷藏,24 h內(nèi)使用。 3.2  體外透皮試驗(yàn)  

    試驗(yàn)裝置的透皮面積為4.52 cm2,接受池體積為10.05 mL。磁力攪拌器速度為60 r/min,實(shí)驗(yàn)溫度為(37±0.5) ℃恒溫水浴。接受液為生理鹽水。

    將雙氯芬酸鈉凝膠均勻涂布于預(yù)先處理好的鼠皮上,固定在釋放池下端(角質(zhì)層朝向玻璃管側(cè)),凝膠含壬代環(huán)戊雙醚的質(zhì)量濃度分別為0%,0.5%,1.0%,15%,2.0%,2.5%,3.0%和含2.0%的氮酮在1,2,4,6,8,10,12,14 h取樣4 mL,立即補(bǔ)充同溫生理鹽水4 mL,以0.45 μm微孔濾膜過濾,取續(xù)濾液,于284 nm處測定峰面積。 3.3  接受液含量測定和累積透皮量的計(jì)算  

    將所測峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算濃度,并量取接受液的體積,按以下公式計(jì)算累積釋放藥量(Q)。 4  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    數(shù)據(jù)的錄入和分析處理在SPSS l0.0統(tǒng)計(jì)軟件上完成。不同濃度各時(shí)間點(diǎn)累積透皮藥量比較采用重復(fù)測量的方差分析,用LSD法作多重比較。

    3  結(jié) 果

    體外鼠皮透皮吸收試驗(yàn)結(jié)果見表1。表1  含不同濃度壬代環(huán)戊雙醚和氮酮的雙氯芬酸鈉凝膠的體外釋放量(略)

    本實(shí)驗(yàn)對(duì)含藥量相同,但含壬代環(huán)戊雙醚濃度不同的7種凝膠分別進(jìn)行6次體外鼠皮透皮吸收試驗(yàn),經(jīng)重復(fù)測量的分析,表明在6種濃度中,2.0%,2.5%,3.0%組的透皮藥量顯著高于其他濃度組(P0.05),在時(shí)間方面以14 h組最高(P0.05);但是2.5%,30%組的透皮藥量與2.0%組的透皮藥量差異無顯著性。同樣2.0%濃度組的氮酮略低于2.0%濃度組壬代環(huán)戊雙醚(P0.05),兩者差異無顯著性。

    綜合考查,ρ=2.0%的壬代環(huán)戊雙醚對(duì)雙氯芬酸鈉凝膠累積透皮藥量較高,選擇其為本凝膠的促滲劑。

    4  討 論