【摘要】本研究旨在探究mPEG修飾的紅細(xì)胞Rh抗原的穩(wěn)定性。利用紅細(xì)胞膜蛋白SDS-PAGE電泳技術(shù)分析mPEG修飾后紅細(xì)胞膜蛋白與mPEG結(jié)合情況，用紅細(xì)胞血影凝集實(shí)驗(yàn)及4℃CPD保養(yǎng)液保存的修飾紅細(xì)胞與匹配血液體外混血實(shí)驗(yàn)，觀察mPEG修飾后紅細(xì)胞Rh抗原被遮蔽的穩(wěn)定性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：不同保存時(shí)間的mPEG修飾的紅細(xì)胞在模擬輸血（即混血前后）的血型保持不變，同時(shí)mPEG修飾的紅細(xì)胞在保存過(guò)程中游離血紅蛋白水平正常，并且混血后經(jīng)37℃孵育的mPEG修飾的紅細(xì)胞游離血紅蛋白水平低于不混合的修飾的紅細(xì)胞。比較分析PEG特異的碘染和考馬斯亮藍(lán)染的顯色圖譜發(fā)現(xiàn)，特殊的碘染顯示出mPEG與紅細(xì)胞膜蛋白結(jié)合的條帶，mPEG-SPA與紅細(xì)胞膜蛋白結(jié)合后導(dǎo)致蛋白分子遷移速度發(fā)生改變。mPEG修飾的紅細(xì)胞血影凝集實(shí)驗(yàn)證實(shí)，修飾紅細(xì)胞在質(zhì)膜裂損后mPEG仍有效地遮蔽抗原。結(jié)論：mPEG-SPA不論在紅細(xì)胞膜蛋白被單獨(dú)提取后，還是膜破損后以及存活狀態(tài)下，均能與紅細(xì)胞膜蛋白穩(wěn)固結(jié)合。

【關(guān)鍵詞】mPEG修飾紅細(xì)胞；Rh抗原；紅細(xì)胞

RhAntigenStabilityofmPEGModifiedRedBloodCells

AbstractTheobjectiveofstudywastoinvestigatetheRhantigenstabilityofmPEG-modifiedRBC.RBCmembraneproteinSDS-PAGEtechnologywasusedtoanalyzethecombinationofthemPEGmodifiedRBCmembraneproteinwithmPEGmolecules;theRBCghostcoagulationtestand4℃CPD-preservedmodifiedRBCmixedwithmatchedbloodwereusedtoobservethestabilityofRBCRhantigencamouflagedbymPEG.TheresultsshowedthatthebloodgroupsofstoredmPEG-modifiedRBCwerekeptconsistencybeforeoraftersimulatingtransfusion,i.e.mixtureofmodifiedRBCwithmatchedbloods,whiletheplasmahemoglobinaftersimulatingtransfusionwasnotonlywithinthenormalrangeduringthestorage,butalsolessthanthatbeforesimulatingtransfusionevenafterincubationat37℃.TheelectrophoresispatternstainedwithiodineandCoomassiebluedisplayedthebandsofmPEGcombinedwithRBCmemberaneproteinandtheslowmobilityofmembraneprotein.ThehemagglutinationofPEGylationRBCghostsdidnottakeplaceandmPEGstillcoveredtheantigen.Inconclusion,mPEG-SPAcanbindtheerythrocytewithitsextractedmembraneproteininbothghostsandlivingerythrocytes.

KeywordsmPEGmodifiedredbloodcell;Rhantigen;redbloodcell

mPEG-SPA可以與蛋白質(zhì)和多肽中的賴氨酸（K）、精氨酸(R)的胺基、組氨酸(H)的咪唑基以及酪氨酸(Y)的羥基發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，形成共價(jià)結(jié)合鍵，從而結(jié)合到蛋白質(zhì)多肽上［1］，達(dá)到遮蔽抗原的作用。mPEG與紅細(xì)胞膜Rh抗原結(jié)合后是否穩(wěn)定，進(jìn)入人體后是否會(huì)脫落，這些問(wèn)題關(guān)系到修飾后紅細(xì)胞進(jìn)入人體后的安全性。為此，我們采用mPEG修飾的紅細(xì)胞膜蛋白SDS-PAGE電泳、紅細(xì)胞血影凝集實(shí)驗(yàn)以及用4℃CPD保養(yǎng)液保存的修飾紅細(xì)胞與匹配血液進(jìn)行的體外混血實(shí)驗(yàn)，對(duì)mPEG修飾后紅細(xì)胞Rh抗原被遮蔽的穩(wěn)定性進(jìn)行了初步的研究。

論文關(guān)鍵詞：前S1；抗原檢測(cè)；體會(huì)

論文摘要：前S1抗原（Pre-S1Ag）檢測(cè)是對(duì)乙肝“兩對(duì)半”尤其是e抗原和HBV-DNA測(cè)定的重要補(bǔ)充和加強(qiáng)。前S1抗原酶免測(cè)定試劑盒經(jīng)過(guò)在北京、四川、浙江、河南、深圳、海南等近百家醫(yī)院與乙肝“兩對(duì)半”檢測(cè)聯(lián)合應(yīng)用后正式推向臨床，充分顯示了該試劑在病毒性乙型肝炎的臨床診斷，指導(dǎo)治療等方面的重要價(jià)值。筆者就前S1抗原檢測(cè)談?wù)勛约旱捏w會(huì)。

S、前S2和前S1是乙型肝炎病毒（HBV）的三種成分，含有前S1的蛋白主要存在于Dane顆粒和管型顆料上，前S1蛋白在病毒感染、裝配、復(fù)制和刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)以及在病毒侵入肝細(xì)胞等方面起著十分重要的作用。

1基因結(jié)構(gòu)

乙肝病毒為嗜肝DNA病毒，約3200個(gè)氨基酸，由一個(gè)不完全雙鏈DNA組成。長(zhǎng)鏈L含4個(gè)開(kāi)放讀碼框架，為病毒蛋白的編碼區(qū)：S、C、P、X；短鏈S相當(dāng)于長(zhǎng)鏈的50%~100%，其不固定端可被內(nèi)原性DNA多聚酶延長(zhǎng)，使病毒成為完整的雙鏈。HBV基因組編碼HBV抗原，所有四個(gè)功能性讀碼框架位于DNA負(fù)鏈，P基因編碼DNA聚合酶，C基因編碼HbcAg，S基因編碼S抗原，前S1抗原和前S2抗原，X基因編碼X產(chǎn)物。編碼不同形式的表面抗原（HBsAg）的HBV基因區(qū)域由大蛋白（LHBs），中蛋白（MHBs）和小蛋白（SHBs）組成，在第一和第二個(gè)起始密碼子之間的序列稱為Pres1，在第二和第三個(gè)之間為Pres2，從第三個(gè)密碼子到終點(diǎn)密碼子的序列為S。

2臨床意義和用途

摘要目的：用單克隆抗體鑒定白細(xì)胞共同抗原并對(duì)其性質(zhì)進(jìn)行初步分析。方法：用B細(xì)胞株3D5免疫Balb/c小鼠得到單抗5H12，借助間接免疫熒光及流式細(xì)胞儀分析，檢測(cè)5H12抗原在多種白細(xì)胞表面的表達(dá)情況，并從白細(xì)胞膜中提取5H12抗原，通過(guò)增殖試驗(yàn)、聚丙烯酰胺凝膠電泳及免疫印跡對(duì)其特性進(jìn)行初步分析。結(jié)果：5H12抗原表達(dá)于多種白細(xì)胞表面，包括休止T細(xì)胞、休止B細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、體外PHA激活的T細(xì)胞、體外anti-μ激活的B細(xì)胞、也表達(dá)在T細(xì)胞株(Jurkat、Peer)、B細(xì)胞株(3D5、Daudi、CESS、BJAB)、單核細(xì)胞株U937和髓細(xì)胞株K652表面。增殖試驗(yàn)表明，該抗原與相應(yīng)單抗結(jié)合后導(dǎo)致B細(xì)胞活化抑制。對(duì)抗原的初步分析顯示：5H12是一種單鏈蛋白質(zhì)分子，分子量為22kD。結(jié)論：5H12是一種單鏈膜蛋白分子，屬于白細(xì)胞共同抗原，與B細(xì)胞活化有關(guān)。

關(guān)鍵詞白細(xì)胞共同抗原5H12分子量

Identificationofleukocytecommonantigen(LCA)5H12anddiscoveryofitseffectonBcellactivation

WANGYun-Ping,ZHANGShu-Zhen,ZHULi-Ping.

DepartmentofImmunology,BinzhouMedicalCollege,Binzhou256603

AbstractObjective:Toidentifyleukocytecommonantigen(LCA)withmonoclonalantibody(McAb)andanalyzetheLCA.Methods:ImmunizedBalb/cmicewithBcellline3D5andobtainedMcAb5H12，thendetectedtheexpressionof5H12antigenonvariouskindsofleukocytesandwhitecelllinesbyindirectimmunofluorescenceandflowcytometricanalysisandfinallyisolatedandpurified5H12antigenfromcellmembraneandanalyzedthe5H12byproliferationtest,SDS-polyacrylamidegelelectrophoresis(SDS-PAGE)andWestern-blotting.Results:5H12wasexpressedonapanelofhumanleukocytesandwhitecelllinesincludingrestingTcells,restingBcells,monocytes,neutrophils,PHA-activatedTcells,anti-μ-activatedBcells,Tcelllines(Jurkat,Peer),Bcelllines(3D5,Daudi,CESS,BJAB),binationof5H12antigenwith5H12McAbcouldinduceinhibitionofBcellactivationinadose-dependentmannerandthissuggestedthat5H12mightplayaroleintheprocessthatledtoBcellactivationandproliferation.SDS-PAGEandWestern-blottinganalysisindicatedthat5H12isa22kDone-peptide-chainprotein.Conclusion:5H12isaone-peptide-chainmembraneproteinmolecule,itisaLCAandrelatedtocellactivation.

關(guān)鍵詞：抗體

天皰瘡是累及皮膚黏膜的一種自身免疫性大皰性疾病。目前已證實(shí)天皰瘡是以患者體內(nèi)出現(xiàn)針對(duì)自身表皮角質(zhì)形成細(xì)胞上的橋粒芯糖蛋白（dcsnoglein,Dsg)的特異性抗體IgG，能與角質(zhì)形成細(xì)胞結(jié)合產(chǎn)生棘層松解，導(dǎo)致臨床上所見(jiàn)的松弛性水皰和大皰，其中Dsg1、Dsg3及其抗體在天皰瘡中發(fā)揮極其重要的作用。本文就抗原抗體及其臨床意義作一綜述。

1抗原抗體

1.1抗原現(xiàn)已明確天皰瘡抗原Dsg屬于橋粒的跨膜成分,屬粘附分子中的鈣粘素超家族的成員,其基因位于18q12.1上。Dsg分為Dsg1、Dsg2、Dsg3三類，其中Dsg2表達(dá)于所有的橋粒組織中，Dsg1、Dsg3主要限于復(fù)層鱗狀上皮。Dsg1分子量約160KD，主要分布于表皮上層的角質(zhì)細(xì)胞膜上，以顆粒層和顆粒下層優(yōu)勢(shì)表達(dá)［1］，為落葉性天皰瘡（PF）的靶抗原；Dsg3的分子量約為130KD，主要分布于表皮基底層，在基底層上層的角質(zhì)形成細(xì)胞表面，是尋常性天皰瘡（PV）的靶抗原。楊春俊等［2］在天皰瘡抗原的定位研究中，用金標(biāo)記包埋后采用免疫熒光技術(shù)，發(fā)現(xiàn)PF和PV的靶抗原在角質(zhì)形成細(xì)胞間的部位相同，均位于橋粒復(fù)合體上。Dsg1及Dsg3分子同其他鈣粘素分子一樣具有5個(gè)串聯(lián)重復(fù)、大小大致相等的胞外結(jié)構(gòu)域（extracellulardomain,EC)，其中ECⅠ對(duì)應(yīng)胞外氨基端殘基，EC5位于羥基端。Dsg1及Dsg3的不同主要在于Dsg1的1～4胞外結(jié)構(gòu)域具有同源性，Dsg3的5個(gè)胞外結(jié)構(gòu)域均具有同源性。

天皰瘡抗原的5個(gè)胞外結(jié)構(gòu)域中，EC0、EC2、EC4之間具有相對(duì)較大的同源性，能被天皰瘡患者的血漿特異性識(shí)別，因此，這些表位被稱為“免疫優(yōu)勢(shì)表位”或“致病性表位”，特異性的識(shí)別該表位的抗體被稱為“致病性抗體”，其中EC1-2及EC3-4具有抗原特異性，與天皰瘡抗體具有高度的親和力，從而為天皰瘡的血清學(xué)診斷與鑒別提供了新的途徑［3］。

1.2抗體天皰瘡抗體（PAb)是天皰瘡發(fā)病的關(guān)鍵因素。1964年Beumer等證實(shí)在天皰瘡病人的血清中存在抗鱗狀上皮的細(xì)胞間抗體，并且發(fā)現(xiàn)在天皰瘡皮損的邊緣有免疫球蛋白和補(bǔ)體沉積。最近，Amagai［4］用ELISA方法，通過(guò)重組Dsg1、Dsg3，發(fā)現(xiàn)天皰瘡的臨床表現(xiàn)是由患者體內(nèi)抗橋粒芯蛋白自身抗體的類型所決定。且國(guó)內(nèi)外多數(shù)研究認(rèn)為尋常性天皰瘡中天皰瘡抗體IgG4是其發(fā)病中的重要致病性抗體亞類。國(guó)內(nèi)李逾等［5］為研究天皰瘡抗體（PAb）各亞類在致病中的作用，在培養(yǎng)的組織中加入純化的天皰瘡抗體IgG1～I(xiàn)gG4，免疫熒光檢查發(fā)現(xiàn)IgG4的熒光最強(qiáng)，其次為IgG3、IgG1、IgG2，說(shuō)明IgG4與抗原有較強(qiáng)的親和力。而當(dāng)各亞型濃度相同時(shí)，致培養(yǎng)表皮細(xì)胞棘層松解程度相同。另外，在培養(yǎng)的表皮細(xì)胞中加入天皰瘡抗體繼續(xù)培養(yǎng)24h，細(xì)胞的整體外觀無(wú)明顯變化，48～72h，細(xì)胞間隙漸增寬，細(xì)胞出現(xiàn)松解和小水皰。由此奠定了天皰瘡抗體在天皰瘡發(fā)病中的重要地位。

摘要：目的研究人類白細(xì)胞抗原(HLA)-DR3、DR7、DR13、DR53等位基因與乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)宮內(nèi)感染的關(guān)系，探討HBV宮內(nèi)感染的遺傳易感性，確定HBV宮內(nèi)感染的易感基因和保護(hù)基因。方法采用聚合酶鏈反應(yīng)/序列特異性引物(PCR-SSP)技術(shù)檢測(cè)HBsAg陽(yáng)性孕婦及其新生兒各187例外周靜脈血血塊中HLA-DR3、DR7、DRl3、DR53等位基因型分布及頻率。結(jié)果(1)宮內(nèi)感染組孕婦HLA-DR3基因頻率為2414％(7／29)，顯著高于非宮內(nèi)感染組孕婦的633％(10／158)(P=0007)。其余各表型比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>005)。(2)宮內(nèi)感染組新生兒HLA-DR3基因頻率為1724％(5／29)，顯著高于非宮內(nèi)感染組新生兒的506％(8／158)(P=0033)。其余各表型比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>005)。(3)母嬰HLA-DR3同陽(yáng)性在宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0049)；母嬰HLA-DR7、DR13、DR53同陽(yáng)性在宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>005)。結(jié)論HBsAg陽(yáng)性孕婦及其胎兒同時(shí)或任一攜帶HLA-DR3，易導(dǎo)致HBV宮內(nèi)感染；HLA-DR3是HBV宮內(nèi)感染的易感基因。

【關(guān)鍵詞】乙型肝炎病毒；宮內(nèi)感染；人類白細(xì)胞抗原DR等位基因(HLA-DR)

肝炎是一種嚴(yán)重危害人類健康的世界性傳染病，我國(guó)是乙肝高發(fā)區(qū)，乙肝病毒的母嬰傳播不僅造成人群中眾多的HBsAg攜帶者，而且是引起成人慢性肝炎、肝硬化以及肝癌的重要因素。迄今，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，人類白細(xì)胞抗原DR等位基因(HLA-DR)與乙型肝炎病毒(HBV)感染密切相關(guān)，而HLA-DR等位基因與HBV宮內(nèi)感染的關(guān)系爭(zhēng)議較多。本文通過(guò)研究HLA-DR3、DR7、DR13、DR53與HBV宮內(nèi)感染的關(guān)系，探討HBV宮內(nèi)感染的遺傳易感性，為防制HBV宮內(nèi)感染提供理論依據(jù)。

1對(duì)象與方法

11對(duì)象以2003年6月～2004年11月太原市省各市級(jí)醫(yī)院篩檢，并在太原市傳染病院婦產(chǎn)科進(jìn)行產(chǎn)前檢查及分娩的HBsAg陽(yáng)性孕婦及其新生兒各187例作為研究對(duì)象。并根據(jù)新生兒有無(wú)宮內(nèi)感染，分為宮內(nèi)感染組(29例)和宮內(nèi)未感染組(158例)，2組在年齡分布、文化程度、職業(yè)構(gòu)成等均衡可比。

12方法

【關(guān)鍵詞】前列腺腫瘤；抗原,CD3；抗體親和力；四聚體

BiologicalactivityoftetramerofbispecificsinglechainantibodyagainsthumanprostatespecificantigenandCD3molecule

【Abstract】AIM:Tostudythebiologicalactivityoftetramerofbispecificsinglechainantibodyagainsthumanprostatespecificantigen(PSA)andCD3molecule.METHODS:Flowcytometry(FCM)wasusedtodetectthebindingactivityofbispecificsinglechainantibodytoCD3positivecelllineJurkatandprostatecarcinomacelllineLNCaP.Theefficacyoftheantibodiyinmediatingtumorcelllysisinvitrowasdeterminedbyusingthe51Crreleasetest.Forinvivoevaluationoftheantibodysactivity,anudemousemodelwasused.ThemicewereinoculatedwithLNCaPprostatecancercells.RESULTS:ItwasdemonstratedthatthetetramerofbispecificsinglechainantibodycouldbindtotheJurkatandLNCaPcellswithhighspecificity.Thepercentsofthecellsbondbytheantibodywere70.4%and81%,respectively.Invitro,withactivatedCTLsaseffectorcells,aspecificlysisofLNCaPcellsmediatedbytheantibodywasconfirmedby51Crreleaseassay.ThespecificlysisrateofLNCaPcellswaspositivelycorrelatedtotBsAbconcentrationoreffector/targetcellratio.Thehighestspecificlysisrateswere(80.3±5.2)%and(78.6±5.5)%infixedantibodyconcentrationgroupandfixedeffector/targetcellratiogroup,respectively.Invivo,theantibodycouldsuppressthetumorgrowthinnudemicesignificantlyascomparedtothegrouptreatedonlywithCTLsandtheuntreatedcontrolgroup(P<0.0001).CONCLUSION:ThetetramerofbispecificsinglechainantibodyagainsthumanprostatespecificantigenandCD3moleculehasagoodbiologicalactivityinbindingantigens,mediatinglysisofLNCaPcellsandinhibitingtumorgrowth.

【Keywords】prostaticneoplasms;antigens,CD3;antibodyaffinity;tetramer

【摘要】目的：研究抗前列腺特異抗原(PSA)/抗CD3雙特異性單鏈抗體四聚體的生物活性.方法：利用流式細(xì)胞儀和51Cr釋放試驗(yàn)評(píng)價(jià)雙特異性單鏈抗體四聚體的抗原親和活性和體外介導(dǎo)殺傷靶細(xì)胞的效果.利用裸鼠前列腺癌模型分析其在體內(nèi)介導(dǎo)細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷的能力.結(jié)果：抗PSA/抗CD3雙特異性單鏈抗體四聚體可以特異性結(jié)合表達(dá)前列腺癌細(xì)胞和CD3陽(yáng)性的淋巴瘤細(xì)胞，陽(yáng)性結(jié)合率分別為70.4%和81%.在體外，有細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞存在時(shí)該四聚體可引起前列腺癌細(xì)胞的裂解，在抗體濃度固定組和效應(yīng)細(xì)胞/靶細(xì)胞比例固定組，靶細(xì)胞裂解率分別隨著效應(yīng)細(xì)胞/靶細(xì)胞比例和抗體濃度的增加而增加，最高裂解率分別可以達(dá)到(80.3±5.2)%和(78.6±5.5)%.與對(duì)照組比較，接種前列腺癌細(xì)胞的裸鼠在體內(nèi)注射激活的細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞的同時(shí)接受該四聚體的治療后，腫瘤生長(zhǎng)明顯受到抑制(P<0.0001).結(jié)論：抗PSA/抗CD3雙特異性單鏈抗體四聚體具有良好的生物學(xué)活性，具有體外殺傷腫瘤細(xì)胞和體內(nèi)抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用.

【關(guān)鍵詞】前列腺腫瘤；抗原，CD3；抗體親和力；四聚體

［摘要］目的：在外源抗原表位表達(dá)載體系統(tǒng)中構(gòu)建并表達(dá)乙型肝炎病毒(HBV)抗原表位，并對(duì)其診斷敏感性進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法：人工合成編碼HBV“a”抗原決定簇表位中24個(gè)氨基酸(S124147)的寡核苷酸序列，克隆入外源抗原表位表達(dá)載體系統(tǒng)FHVRNA2I3位點(diǎn)，構(gòu)建重組質(zhì)粒，在原核pET系統(tǒng)(BL21細(xì)胞)中表達(dá)。通過(guò)ELISA和Westernblot檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物的抗原性，并以表達(dá)產(chǎn)物為包被抗原,通過(guò)ELISA和Westernblot檢測(cè)58份乙肝患者血清抗HBs。結(jié)果：嵌和蛋白可與抗HBs特異性結(jié)合，其ELISA檢測(cè)抗HBs陽(yáng)性率為77.5%，Westernblot的為68%，而對(duì)照試劑盒的為62%。結(jié)論：在外源抗原表位表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)的HBV重組抗原表位具有良好的抗原性，有診斷應(yīng)用價(jià)值。

［關(guān)鍵詞］HBV;抗原表位;抗原性;FHVRNA2載體系統(tǒng)

StudyonAntigenicityofHBVRecombinantEpitope

Abstract：ObjectiveConstructionandExpressionHBVrecombinantepitopeinaforeignepitopepresentingvector，andevalutionofdignosticsensitivityforantiHBswithHBVepitope.MethodsOligonucleotidsencodedtwentyfouraminoacids(aaS124147)whichiswithin"a"antigenicdeterninantweresynthesizedandinsertedintoaforeignepitopepresentingcarrierI3site(FHVRNA2cDNAI3).HBVepitopewasexpressedinaprokaryoticcellularsystem(BL21cell).TheexpressionproductwasanalyzedanditsantigenicitywasfurtherstudiedbyELISAandWsternblotmethodwithchimericproteinascoatingantigen.weusedchimericproteinascoatingantigentotestantiHBswithELISAandWsternblotin58seralsamples.ResultsThechimericproteinreactedwithantiHBsseralspecially.ThedetectionpositiveratioofantiHBsis77.5%and68%respectivelybyELISAandWsternblotwithchimericproteinascoatingantigen,thecontrol''''swas62%.ConclusionHBVepitopeexpressedinaforeignepitopepresentingcarrierpossessedgoodantigenicityanddiagnosticvalue.

Keywords：HBV；Epitope；Antigenicity；FHVRNA2carriersystem

乙型肝炎病毒(HBV)是乙型肝炎的病原體，并引起慢性肝炎和肝硬化，而且與肝癌的發(fā)生密切相關(guān)。迄今，對(duì)HBV感染最有力的預(yù)防和控制措施，仍是發(fā)展疫苗。FHVRNA2載體系統(tǒng)［1］是一個(gè)以昆蟲(chóng)小RNA病毒flockhousevirus外殼蛋白為載體的新型抗原表位表達(dá)載體，此系統(tǒng)中表達(dá)的載體蛋白可自動(dòng)組裝成病毒樣顆粒，使插入的外源抗原表位可以暴露在顆粒的表面，保持天然構(gòu)象和免疫學(xué)特性。本研究擬將HBVa抗原表位插入到FHV外殼蛋白上，并對(duì)其抗原性及診斷意義進(jìn)行了研究。

1腫瘤特異性免疫機(jī)制及腫瘤的免疫逃逸機(jī)制腫瘤在機(jī)體內(nèi)能引發(fā)體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答，而以后者為主.腫瘤抗原在細(xì)胞內(nèi)加工成肽段后與細(xì)胞表面的主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ(majorhistocompatibilitycomplex,MHCⅠ)類分子結(jié)合并呈遞給CD8+細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，或先從腫瘤細(xì)胞上脫落，再由抗原提呈細(xì)胞攝取、加工成肽段后與表面MHCⅡ類分子結(jié)合并呈遞給CD4+輔助性T淋巴細(xì)胞，進(jìn)而誘發(fā)機(jī)體的抗腫瘤細(xì)胞免疫應(yīng)答.值得注意的是CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞的激活都需要MHC抗原肽復(fù)合物和免疫共刺激分子的協(xié)同刺激作用［1］，而共刺激分子的缺失正是腫瘤引發(fā)的機(jī)體外周免疫耐受的可能機(jī)制之一.腫瘤由于其極大的異質(zhì)性和遺傳不穩(wěn)定性，在機(jī)體環(huán)境長(zhǎng)時(shí)間的免疫選擇壓力下，會(huì)啟動(dòng)一系列的免疫逃避機(jī)制，對(duì)抗機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng).這些機(jī)制分別針對(duì)T細(xì)胞對(duì)腫瘤的識(shí)別階段和效應(yīng)階段，包括腫瘤抗原的丟失、MHCⅠ類分子表達(dá)下調(diào)、抗原加工缺陷、表達(dá)干擾細(xì)胞毒作用的蛋白酶及表達(dá)FasL等［2］.

2腫瘤疫苗的設(shè)計(jì)策略

2.1總體思路針對(duì)腫瘤抗原在機(jī)體內(nèi)免疫原性下降，造成特異性細(xì)胞免疫激活不足，外周免疫耐受的狀況，腫瘤疫苗設(shè)計(jì)策略的總體思路是應(yīng)用各種技術(shù)，增強(qiáng)免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤抗原的識(shí)別能力，改善免疫微環(huán)境，引發(fā)有力的特異性抗腫瘤細(xì)胞免疫，阻止腫瘤進(jìn)展，最終消除腫瘤.

2.2腫瘤細(xì)胞疫苗腫瘤細(xì)胞疫苗是將整個(gè)腫瘤細(xì)胞作為抗原導(dǎo)入患者體內(nèi)，誘導(dǎo)特異性的抗腫瘤免疫應(yīng)答.由于腫瘤細(xì)胞帶有腫瘤的全部抗原，無(wú)需考慮分離腫瘤特異性抗原（tumorspecificantigen,TSA），而且由于自體腫瘤細(xì)胞具有和正常組織相同的人類白細(xì)胞抗原，不會(huì)引發(fā)機(jī)體的免疫排斥反應(yīng)，因此被認(rèn)為是理想的腫瘤疫苗方案.但是自體腫瘤組織來(lái)源十分有限，并且考慮到TSA的表達(dá)具有一定的組織特異性，因此這種方法的應(yīng)用受到了限制［3］.后來(lái)，人們開(kāi)始使用人工培養(yǎng)的同種異體腫瘤細(xì)胞系進(jìn)行腫瘤疫苗的研究.不同腫瘤細(xì)胞的混合能夠提供一系列的TSA，有利于增加腫瘤疫苗的免疫原性，減小其發(fā)生抗原丟失的幾率［2］.但是，單獨(dú)使用自體或異體的腫瘤細(xì)胞難以產(chǎn)生足夠強(qiáng)度的免疫應(yīng)答，免疫佐劑的使用極大地改善了這種情況.隨著基因工程的進(jìn)展，人們開(kāi)始對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行基因修飾，將編碼免疫共刺激分子如CD80，CD86的基因，導(dǎo)入腫瘤細(xì)胞中，為T(mén)細(xì)胞活化提供第二信號(hào)，有效地打破了腫瘤的外周免疫耐受.近年來(lái)，也有人將編碼一些細(xì)胞因子如IL2，IL12，粒巨噬細(xì)胞集落刺激因子（granulocytcmacrohagecolonystimulatihyfactor,GMCSF）等的基因?qū)肽[瘤細(xì)胞，期望通過(guò)細(xì)胞因子蛋白的表達(dá)，改善腫瘤組織局部免疫微環(huán)境，增強(qiáng)T細(xì)胞的抗腫瘤免疫效應(yīng)［4］.然而，近些年來(lái)臨床實(shí)驗(yàn)表明，即使在實(shí)驗(yàn)中能夠誘發(fā)滿意免疫反應(yīng)的腫瘤細(xì)胞疫苗，在轉(zhuǎn)化成臨床有效的治療性腫瘤疫苗時(shí)都遇到了困難.Fifis等［5］的研究發(fā)現(xiàn)，大鼠結(jié)腸癌細(xì)胞系經(jīng)體外培養(yǎng)后免疫同源小鼠，引發(fā)了免疫反應(yīng)和腫瘤保護(hù)效應(yīng).然而，當(dāng)他們對(duì)荷瘤小鼠進(jìn)行同樣處理時(shí)，卻大大促進(jìn)了腫瘤的生長(zhǎng)，提示腫瘤細(xì)胞能夠通過(guò)一系列機(jī)制抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，包括分泌免疫抑制因子IL10，腫瘤生長(zhǎng)因子β阻止有效的免疫反應(yīng)；分泌血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，GMCSF等因子活化具有免疫抑制作用的骨髓源性細(xì)胞；激活特異的調(diào)節(jié)性CD4+CD25+T細(xì)胞以下調(diào)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的效應(yīng)等.

2.3腫瘤抗原疫苗腫瘤能夠引起機(jī)體特異性免疫反應(yīng)的現(xiàn)象引發(fā)了對(duì)腫瘤抗原的研究.腫瘤抗原包括多個(gè)層次：完整的蛋白質(zhì)分子、抗原肽及純化的DNA.關(guān)于腫瘤DNA疫苗，下文將另行討論.目前將腫瘤抗原分為T(mén)SA和腫瘤相關(guān)抗原（tumorassociated,TAA）.TSA是指只存在于腫瘤細(xì)胞，而TAA并非腫瘤細(xì)胞特有的抗原，只是在發(fā)生腫瘤時(shí)此類抗原的表達(dá)明顯上調(diào).Tabi等［2］認(rèn)為，腫瘤抗原必須在全部或大多數(shù)患有相同腫瘤患者的大部分腫瘤細(xì)胞中呈普遍的高表達(dá)狀態(tài).他將腫瘤抗原分為5類：①突變抗原；②腫瘤細(xì)胞過(guò)度表達(dá)抗原；③癌睪抗原;④組織特異性分化抗原；⑤病毒抗原.

單獨(dú)應(yīng)用腫瘤抗原蛋白存在免疫原性差的問(wèn)題，這是由于腫瘤細(xì)胞可通過(guò)抗原、HLA缺失等機(jī)制發(fā)生逃逸.劉宏利等［6］結(jié)合了肽疫苗和DNA疫苗各自的特點(diǎn)，以P815腫瘤細(xì)胞的CTL表位（P815A3543）為模型，合成該表位加多聚賴氨酸的顆粒性多肽，并制備含有編碼此表位和GMCSF基因的表達(dá)質(zhì)粒，制成了新型的顆粒性肽DNA復(fù)合疫苗，這種疫苗利于APC的攝取加工，可誘導(dǎo)有效的CTL應(yīng)答，從而預(yù)防小鼠致命性P815腫瘤細(xì)胞攻擊，并可部分根除腫瘤.

【論文關(guān)鍵詞】手術(shù)前；傳染性指標(biāo)；檢測(cè)臨床意義

【論文摘要】目的探討患者手術(shù)前傳染性指標(biāo)檢測(cè)的臨床意義。方法對(duì)我院1998年10月至2007年11月經(jīng)初步資料回顧與統(tǒng)計(jì)，對(duì)受血患者手術(shù)前作HBsAg、抗-HCV抗體、抗HIV抗體、梅毒螺旋體抗體4項(xiàng)傳染性指標(biāo)的檢測(cè)共4692人次。結(jié)果其中男2964人次，女1728人次，年齡最大82歲，最小2歲，平均41歲，術(shù)前發(fā)現(xiàn)HBsAg陽(yáng)性92人次，抗-HCV抗體陽(yáng)性3人次，抗HIV抗體陽(yáng)性4人次，梅毒螺旋體抗體陽(yáng)性0人次。結(jié)論手術(shù)前傳染性指標(biāo)檢測(cè)有效地防范和杜絕了輸血糾紛的發(fā)生，為醫(yī)療安全、醫(yī)護(hù)健康、患者早日康復(fù)做出重大的貢獻(xiàn)。

抗-HIV抗體檢測(cè)是采用雙抗原夾心兩步法檢測(cè)人血清或血漿樣本中的(HIV1/2)型抗體。抗-HCV抗體的檢測(cè)所用包被抗原為合成多肽抗原和基因工程抗原(包括HCV病毒結(jié)構(gòu)區(qū)核心抗原和非結(jié)構(gòu)區(qū)抗原)。HBsAg采用夾擊心法原理檢測(cè)人血清原理檢測(cè)人血清或血漿中的乙肝表面抗原。梅毒螺旋體抗體的檢測(cè)一步雙抗原夾心法原理(ELISA)檢測(cè)人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗體。

根據(jù)衛(wèi)生部《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》相關(guān)規(guī)定的要求，結(jié)合當(dāng)前醫(yī)療管理標(biāo)準(zhǔn)，我院自1998年10月至2007年11月對(duì)臨床手術(shù)科室明確提出，凡行手術(shù)患者，在手術(shù)前應(yīng)作乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)，人類免疫缺陷病毒抗體(抗-HIV抗體)，梅毒螺旋體抗體，丙型肝炎病毒抗體(抗-HCV抗體)4項(xiàng)傳染性指標(biāo)的檢測(cè)，而有關(guān)供血者更是在輸血前必須做以上4項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)，目的是保證患者用血安全和醫(yī)務(wù)工作者的身體健康。

1、資料與方法

我院1998年10月至2007年11月經(jīng)初步資料回顧與統(tǒng)計(jì)，對(duì)受血患者手術(shù)前做HBsAg、抗-HCV抗體、抗HIV抗體、梅毒螺旋體抗體4項(xiàng)傳染性指標(biāo)的檢測(cè)共4692人次，其中男2964人次，女1728人次，年齡最大82歲，最小2歲，平均41歲，手術(shù)前發(fā)現(xiàn)HBsAg陽(yáng)性92人次，抗-HCV抗體陽(yáng)性3人次，抗HIV抗體陽(yáng)性4人次，梅毒螺旋體抗體陽(yáng)性0人次。

近視眼是一種嚴(yán)重危害青少年視力的常見(jiàn)病、多發(fā)病，如何預(yù)防和治療近視、防止近視的進(jìn)展是當(dāng)今眼科學(xué)界的重大課題。在近視的發(fā)病機(jī)理方面，至今仍眾說(shuō)紛紜，歸結(jié)起來(lái)不外遺傳和環(huán)境兩大因素［1］。盡管許多眼科學(xué)者在眼色素膜炎的免疫學(xué)和免疫病理學(xué)上做了大量的工作，但尚未有從免疫學(xué)角度分析近視的病因和發(fā)病機(jī)理的報(bào)道。而這種從免疫學(xué)觀點(diǎn)出發(fā)的病理學(xué)探究能夠促進(jìn)對(duì)近視的治療新見(jiàn)解以及近視發(fā)病機(jī)理新概念的形成［2］。近視的免疫學(xué)探究也將從根本上為預(yù)防、控制和治療近視開(kāi)辟一條廣闊的途徑。本文僅就近視的臨床免疫學(xué)探究進(jìn)行綜述。

1近視和其相關(guān)抗原

1.1ABO抗原近年來(lái)，ABO抗原已被用于免疫遺傳性疾病的探究上，已知的可能和ABO抗原有關(guān)的眼病有原發(fā)性閉角型青光眼、近視性屈光不正、老年性白內(nèi)障及視網(wǎng)膜色素變性［3］。

有關(guān)近視的遺傳方式看法不一，主要觀點(diǎn)有多因子遺傳、隱性遺傳、常染色體隱性遺傳、單因子遺傳、常染色體顯性遺傳等。胡誕寧等［1］對(duì)近視眼患者家族的社會(huì)調(diào)查結(jié)果顯示，父母雙方均為高度近視者，子代100%為高度近視。而有的資料卻表明，雙親單純性近視或變性近視，子代不一定都出現(xiàn)近視。孫成甲［4］在臨床探究中發(fā)現(xiàn)，父母都有近視而其子女患近視的不足半數(shù)。還有人認(rèn)為中低度近視的發(fā)病有肯定的家族傾向性，和遺傳密切相關(guān)［5］。另外，通常人眼各部分遺傳性不同，軸長(zhǎng)、角膜曲率及晶狀體后曲率遺傳性大，而晶狀體厚度及前曲率和遺傳無(wú)關(guān)，Sorsby［4］認(rèn)為決定近視眼遺傳的主要成分是軸長(zhǎng)。

1.2HLA抗原HLA是比ABO血型系統(tǒng)更為復(fù)雜和重要的強(qiáng)抗原系統(tǒng)。HLA抗原稱人類組織相容性抗原，又稱人類白細(xì)胞抗原，是具有極高度遺傳性的多型性膜抗原［6］。HLA抗原根據(jù)其構(gòu)造、機(jī)能，分為Ⅰ類和Ⅱ類抗原。

目前已知有20多種眼病和HLA抗原有關(guān)［7］。1983年王蓉芳等人［8］發(fā)現(xiàn)HLA-B8陽(yáng)性者易患高度近視，而HLA-B15陽(yáng)性者不易患高度近視。Пучковская［9］發(fā)現(xiàn)，先天性近視和HLA-B7和HLA-B12是有聯(lián)系的，當(dāng)近視患者同時(shí)有HLA-B7和HLA-B8抗原時(shí)，發(fā)生視網(wǎng)膜脫離的危險(xiǎn)性升高。