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【摘要】目的研究與建立新雪片的質量標準。方法采用薄層色譜法（TLC）對新雪片中穿心蓮、梔子、冰片進行定性鑒別;采用反相高效相色譜法（RPHPLC）測定新雪片中梔子苷的含量。結果TLC專屬性強。HPLC準確可靠。梔子苷在0.256～1.280μg范圍內呈良好線性關系（r=0.9999），平均回收率為97.12%，RSD=1.43%（n=6）。結論該方法可靠、準確，能有效地控制制劑質量。

【關鍵詞】新雪片；梔子苷；質量控制；薄層色譜

QualityStandardforXinxueTablets

Abstract:ObjectiveToeslablishandstudythequalitystandardforXinxuetablets.MethodsConnonAndrographisHerb,CapeJasmineJasmineFruit,BorneolwereidentifiedbyTLC,andGeniposedecontentinTabletswasdeterminedbyRP-HPLC.ResultsTLCmethodwasspecific.HPLCmethodwasaccurateandreliable.TheGeniposedeshowedagoodlinearrelationshipintherangeof0.256～1.280μg(r=0.9999)andaveragerecoverywas97.12%,RSD=1.43%(n=6).ConclusionThismethodisreliable,accurateandcanbeusedtocontrolthequalityofthepreparationeffectively.

Keywords:XinxueTablets;Geniposede;Qualitycontrol;TLC

新雪片為《中華人民共和國衛生部藥品標準（WS3B281397）·中藥成方制劑》第14冊所收載，后經國家藥典委員會修訂（藥品標準頒布件零069），為國家非典指揮部指定的非典用藥新雪顆粒的不同新劑型,由磁石、石膏、滑石、寒水石、硝石、芒硝、梔子、竹葉卷心、廣升麻、穿心蓮、珍珠層粉、沉香、冰片、人工牛黃14味組成，具有清熱解毒功能，用于各種熱性病之發熱，如扁桃腺炎、上呼吸道炎、咽炎、氣管炎、感冒所引起的高熱，以及溫熱病之煩熱不解。原標準中［鑒別］項只有3個理化鑒別，1個薄層色譜鑒別（膽酸、豬去氧膽酸），較簡單，不足以控制藥品質量。為此本文對新雪片的鑒別、含量測定進行研究，制訂能控制藥品質量的標準。現報道如下。

1材料與儀器

LabALLiance高效液相色譜儀，Model500檢測器；UP250H超聲清洗器（功率300W，頻率40kHz，熊貓集團南京電子計量有限公司生產）；硅膠G（青島海洋化工廠）；層析缸（20cm×10cm)；層析柱（內徑10mm)；ZF2型三用紫外分析儀（上海市安亭電子儀器廠）；梔子苷、穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯、冰片對照品（中國檢定所提供），樣品及陰性樣品（由廣西藥物研究自制）；甲醇（色譜純）；水（重蒸水）；其他試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1薄層色譜鑒別

2.1.1梔子［1］取本品適量，研細，取約10g。加甲醇50ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇10ml使溶解，轉移至已處理好的柱子（活性炭0.5g，100～200目中性氧化鋁2g，二者混合均勻后，濕法裝柱，內徑為1.5cm)上，用甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水20ml使溶解，濾過，濾液用正丁醇振搖提取2次，40ml/次，合并正丁醇液。用濃氨試液洗滌2次，10ml/次。棄去洗液，再用水洗滌2次，20ml/次，棄去水洗液，取正丁醇層液，蒸干，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取梔子苷對照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品溶液。再按處方比例，取缺梔子的其它藥材按新雪片［制法］制備，再按供試品溶液的制備方法制備，所得溶液作為陰性對照溶液。照薄層色譜法［1］實驗，吸取上述3種溶液各10μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨水（10∶4∶0.3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。結果見圖1。

2.1.2穿心蓮［1］取本品適量，研細，取約5g，加乙醇30ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯對照品，加甲醇制成每毫升各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液。再按處方比例，取缺穿心蓮的其它藥材按新雪片［制法］制備，再按供試品溶液的制備方法制備，所得溶液作為陰性對照溶液。照薄層色譜法［1］實驗，吸取供試品溶液與陰性對照溶液各10μl，對照品溶液5μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇（4∶3∶0.5）為展開劑，展開，取出晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置中，分別顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。結果見圖2。

2.1.3冰片取本品適量，研細，取約5g，加乙醚30ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取冰片對照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品溶液。再按處方比例，取缺冰片的其它藥材按新雪片［制法］制備，再按供試品溶液的制備方法制備，所得溶液作為陰性對照溶液。照薄層色譜法［1］實驗，吸取上述3種溶液各5μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以環己烷醋酸乙酯（8.5：1.5）為展開劑，展開，取出晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。結果見圖3。

2.2含量測定

2.2.1色譜條件與系統適應性實驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（20∶80）作為流動相；檢測波長為238nm。柱溫（23±1℃），理論板數按梔子苷峰計算應不少于5000。

圖1梔子TLC圖譜（略）

圖2穿心蓮TLC圖譜（略）

圖3冰片TLC圖譜（略）

2.2.2線性關系考察精密稱取梔子苷對照品12.8mg，置100ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液（0.128mg·ml-1）。精密吸取對照品貯備液（0.128mg·ml-1）1.0，2.0，2.5，3.0，4.0，5.0ml溶液，分別置10ml量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取各溶液20μl，按上述色譜條件測定峰面積值。以峰面積值為縱坐標（Y），進樣量（μg）為橫坐標（X），繪制標準曲線，并求得回歸方程為Y=7.27E5X-1.13E3,r=0.9999。可見，梔子苷在0.256～1.28μg（濃度1.28～64.0μg·ml-1）間呈良好線性關系。

2.3精密度實驗取樣品，按正文含量測定項下方法制成供試品溶液，在選定的色譜條件下，依法操作測定，重復進樣6次，峰面積平均值為355159，RSD=0.59%。

2.4穩定性實驗取樣品，按正文含量測定項下方法制成供試品溶液，分別在放置0，2，4，6，8，12，24h后，依法測定，結果峰面積平均值為375006，RSD=0.29%。表明供試品溶液在24h內穩定性好。

2.5重復性實驗取同一樣品（批號060201）6份，精密稱定：0.242，0.2157，0.2383，0.2293，0.2056，0.2128g。按供試品溶液的制備方法制備6份供試品溶液，依法測定，結果含量平均值為2.10mg·g-1，RSD=0.85%。表明方法重復性較好。

2.6加樣回收率實驗取已知含量的樣品（批號060201，含量為2.1mg/g）6份，精密稱定，置錐形瓶中，分別精密加入梔子苷對照品（0.128mg/ml）2ml，按供試品溶液的制備方法制備，依法測定，計算回收率。結果見表1。表明本方法回收率較好。

表1梔子苷回收率實驗數據（略）

2.7供試品溶液的制備及測定取本品，研細，取約0.2g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入50%甲醇20ml，稱定重量，超聲處理40min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，濾過，取續濾液，再用微孔濾膜（0.45μm）濾過，作為供試品溶液。另精密量取梔子苷對照品貯備液2ml，置10ml量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液（每毫升含25.6μg）。再按處方比例，取除梔子外的其它藥材，按［制法］制備，然后按制供試品溶液方法制備，作為陰性對照溶液。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，按上述的色譜條件注入液相色譜儀，照高效液相色譜法［1］測定，按外標法計算含量。結果見表2及圖4～6。

3討論

新雪片是由磁石、石膏、寒水石、滑石、穿心蓮、竹葉卷心、梔子、沉香、廣升麻、芒硝、硝石、珍珠層粉、人工牛黃、冰片等14味藥材組成，具有清熱解毒功能，用于各種熱性病之發熱，如扁桃腺炎、上呼吸道炎、咽炎、氣管炎、感冒所引起的高熱以及溫熱病之煩熱不解。方中石膏、寒水石、滑石為處方君藥，都是礦物藥材，難以制定薄層色譜和含量測定方法。穿心蓮、梔子、竹葉卷心為方中臣藥，穿心蓮中的穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯在水中溶解度很低，而在穿心蓮中含量亦較低，加上新雪片的制備方法為水提取，穿心蓮藥材絕大部分為水煮，只有極少部分為粉碎成粉末后壓片而成，這就使得穿心蓮內酯的含量在新雪片中的含量更低，故測定穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯意義不大，竹葉卷心其成分未詳，梔子有明顯的抗菌消炎作用，其主要有效成分為梔子苷，且為全部水提取，故選擇梔子苷作為新雪片定性和定量的指標成分。

表26批新雪片樣品測定數據（略）

圖4梔子苷對照品HPLC圖（略）

圖5陰性對照品HPLC圖（略）

圖6供試品HPLC圖（略）

通過薄層色譜實驗，確定了新雪片中梔子、穿心蓮、冰片的薄層色譜鑒別方法，陰性對照表明其他成分對本法無干擾，說明該方法專屬性較強，結果可靠。

本品參照《中國藥典》2005年版Ⅰ部“梔子”及其制劑中梔子含量測定方法［1］及有關文獻，并結合本品的性質特征，進行優化含量測定條件，建立本品梔子苷的含量的測定方法，并就該測定方法進行了方法學的研究。研究結果表明，本方法簡便、靈敏、準確、專屬性強，可作為控制新雪片的梔子苷含量方法。

【參考文獻】

［1］國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學工業出版社，2005：173，189，附錄VIB，附錄VIQ.