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1材料與方法

1.1動物SPF級KM小鼠，體質量18～22g;SPF級豚鼠，體質量250～300g，均由廣州中醫藥大學實驗動物中心提供，合格證號：SCXK粵20030001。

1.2受試藥物牛大力水提物由廣州中醫藥大學藥理教研室提供，濃縮液濃度為1g/mL，使用時用蒸餾水稀釋成不同的濃度。

1.3藥品、試劑與儀器美沙芬由廣州白云山光華制藥股份有限公司生產，批號：727008;氨茶堿由天津力生制藥股份有限公司生產，批號：784136;氨水由廣東光華化學廠有限公司生產，批號：20070806;酚紅由上海三愛思試劑有限公司生產，批號：0040309;枸櫞酸由廣州化學試劑廠生產，批號：00605032;醋酸由廣州化學試劑廠生產，批號：06040204;氫氧化鈉由天津市百世化工有限公司生產，批號：006730;UNICO7200型光柵分光光度計由尤尼柯(上海)儀器有限公司提供;YLS6B智能熱板儀由山東省醫學科學院設備站生產;超聲霧化器由江蘇魚躍醫療設備有限公司生產。

1.4牛大力對小鼠酚紅祛痰的影響[2]取KM小鼠60只，雌雄各半，隨機分為5組，即空白組，陽性對照組，牛大力水提物高(20g·kg-1·d-1)、中(10g·kg-1·d-1)、低(5g·kg-1·d-1)劑量給藥組。陽性對照組以沐舒坦30mg·kg-1·d-1灌胃，空白組給予等容積蒸餾水，連續5d。于末次給藥后30min，腹腔注射50g/L酚紅生理鹽水溶液0.5mL/只，30min后小鼠脫頸椎處死，剝離氣管周圍組織，剪下自甲狀軟骨下至氣管分支處一段氣管放入盛有2mL生理鹽水的試管中，剪開浸泡10min后，加1mol/LNaOH溶液0.1mL，離心取上清液采用紫外分光光度計于波長546nm處測定吸光度D值。

1.5牛大力對家鴿氣管纖毛運動的影響[3]取家鴿50只，隨機分為5組，分別為空白組，陽性對照組，牛大力水提物高(16g·kg-1·d-1)、中(8g·kg-1·d-1)、低(4g·kg-1·d-1)劑量給藥組。陽性對照組以20mg·kg-1·d-1劑量的沐舒坦灌胃，空白組給予等容積蒸餾水，連續3d。末次給藥后手持家鴿頸部拉直與水平面平行，拔除頸部毛，不麻醉，背位固定，沿頸中線切開，剝離氣管，將周圍軟組織分離清楚，使氣管自甲狀軟骨至胸骨段充分暴露，并小心將氣管表面外膜剝離干凈，于末次給藥后0.5、1、2h以5號針頭從靠心臟端插入氣管，使針頭靠近氣管內壁推入0.05mL中華墨汁，觀察1min內墨汁沿氣管向前運動的距離。

1.6牛大力對小鼠氨水引咳的鎮咳作用[4-5]分組和給藥方法同1.4項下。陽性對照組按美沙芬10mg·kg-1·d-1灌胃，空白組給予等容積蒸餾水，連續5d。末次給藥1h后將小鼠放入玻璃鐘罩內，用超聲霧化器將濃氨水均勻地噴入玻璃鐘罩內，噴霧10s，立即取出小鼠，觀察和記錄小鼠的咳嗽潛伏期和4min內的咳嗽次數。

1.7牛大力對豚鼠枸櫞酸引咳的鎮咳作用[6]采用豚鼠枸櫞酸引咳法(序貫法)，以175mg/L枸櫞酸在玻璃鐘罩內連續噴霧90s，觀察5min內咳嗽次數進行篩選，咳嗽次數小于10次者棄除。將篩選合格的豚鼠分為5個組，分別為空白組，陽性對照組，牛大力水提物高(16g·kg-1·d-1)、中(8g·kg-1·d-1)、低(4g·kg-1·d-1)劑量給藥組。陽性對照組以8mg·kg-1·d-1美沙芬灌胃，空白組給予等容積蒸餾水，連續5d。于末次給藥后1h(美沙芬0.5h)，按預選方法，用枸櫞酸引咳，觀察豚鼠自噴霧開始至出現咳嗽的潛伏期及噴霧停止后5min內的咳嗽次數。

1.8牛大力對豚鼠的平喘作用[7-8]取250～300g豚鼠，按整體噴霧致喘法，用4g/L磷酸組胺與20g/L氯化乙酰膽堿以體積比1：2混合液超聲霧化器噴霧25s致喘，挑選潛伏期在150s內出現哮喘的豚鼠為合格的敏感動物。將合格豚鼠分為5個組，分別為空白組，陽性對照組，牛大力水提物高(16g·kg-1·d-1)、中(8g·kg-1·d-1)、低(4g·kg-1·d-1)劑量給藥組。陽性對照組以氨茶堿1.2g·kg-1·d-1劑量灌胃，空白組給予等容積蒸餾水，連續7d。于末次給藥后1h(氨茶堿0.5h)，按預選方法記錄各組動物出現哮喘的潛伏期。

1.9統計學方法采用SPSS11.5統計軟件進行T檢驗分析。

2結果

2.1牛大力對小鼠酚紅祛痰的影響表1結果表明，牛大力水提物能顯著增加小鼠氣管酚紅排泌量，與空白組比較差異有顯著性意義(P<0.05)，隨著劑量的增加，祛痰作用增強，呈現良好的量效關系。提示牛大力水提物具有較好的祛痰作用。

2.2牛大力對家鴿氣管纖毛運動的影響表2結果表明，牛大力水提物高劑量組藥后1h炭末推進距離與空白組比較差異有顯著性意義(P<0.05)，表明其對家鴿氣管纖毛運動有明顯的影響。

2.3牛大力對小鼠氨水引咳的鎮咳作用表3結果表明，牛大力水提物能顯著延長咳嗽潛伏期，減少咳嗽次數，與空白組比較差異有顯著性意義(P<0.05或P<0.01)。提示牛大力水提物對氨水誘導的小鼠咳嗽有較好的鎮咳作用。

2.4牛大力對豚鼠枸櫞酸引咳的鎮咳作用表4結果表明，不同劑量的牛大力水提物均能延長枸櫞酸引咳豚鼠的咳嗽潛伏期，減少豚鼠5min內的咳表1各組對小鼠酚紅祛痰的影響表2各組對家鴿氣管纖毛運動的影響表3各組對小鼠氨水引咳的鎮咳作用比較嗽次數，以高劑量組效果顯著，與空白組比較差異有顯著性意義(P<0.05)。提示牛大力水提物對枸櫞酸引咳的豚鼠有一定的鎮咳作用。

2.5牛大力對豚鼠的平喘作用表5結果表明，不同劑量的牛大力水提物對組胺-乙酰膽堿誘發的哮喘有明顯的保護作用，能使引喘潛伏期顯著延長，與空白組比較差異有顯著性意義(P<0.01)。提示牛大力水提物有較好的平喘作用。表4各組對豚鼠枸櫞酸引咳的鎮咳作用表5各組對豚鼠的平喘作用比較

3討論

到目前為止，有關牛大力對呼吸系統疾病的藥理研究尚未見報道，臨床證明其對慢性支氣管炎有一定療效，本實驗從鎮咳、袪痰和平喘三個方面對其進行了初步研究，目的為其進一步開發利用提供可靠的藥理學依據。

慢性支氣管炎是由于感染或非感染因素引起的氣管、支氣管黏膜及其周圍組織的一種慢性非特異性炎癥，臨床主要表現為咳、喘、痰癥狀，因而鎮咳、祛痰和平喘在慢性支氣管炎的癥狀控制中起重要的作用。文獻報道[9]化學物質氨水、枸櫞酸可通過刺激呼吸道感受器，引起支氣管平滑肌收縮，興奮引發神經沖動，激活腦內咳嗽中樞從而引起咳嗽反射。本實驗結果表明牛大力水提取物能顯著抑制氨水引發小鼠咳嗽反應次數及枸櫞酸引起豚鼠咳嗽反應次數，延長咳嗽潛伏期，說明該藥可作用于有關的化學感受器，保護支氣管黏膜免受刺激，達到鎮咳效果。痰是由氣管、支氣管的腺體和杯狀細胞所分泌，它的存在是引起咳嗽以致喘息的重要原因。痰液的清除有賴于黏液膠的物理特性和黏液、氣道及纖毛之間的相互作用。本實驗結果表明牛大力水提取物能增加小鼠氣管酚紅排出量，加速家鴿氣管黏膜的黏液纖毛運動，表明其可促進腺體分泌，使分泌量增加，稀釋痰液從而達到化痰祛痰作用。中醫認為哮喘是宿痰內伏于肺，遇誘因而引發，使痰阻氣道，肺失肅降，氣道攣急。文獻報道[10]組胺可通過興奮體內H1和H2組胺受體產生廣泛而復雜的生理和病理作用。本實驗采用磷酸組胺和氯化乙酰膽堿混合液復制豚鼠哮喘模型，主要是由于在哮喘急性發作時，這兩種物質是導致氣管痙攣收縮的主要介質，結果表明，牛大力水提取物對組胺-乙酰膽堿誘發的哮喘有保護作用，能對抗組胺、乙酰膽堿等過敏介質引起的氣管、支氣管收縮，明顯延長哮喘潛伏期。綜上所述，牛大力水提取物具有止咳、祛痰及平喘作用。

【摘要】[目的]觀察牛大力的祛痰、鎮咳及平喘作用。[方法]通過小鼠氣管酚紅法、家鴿纖毛運動實驗、小鼠濃氨水引咳法、豚鼠枸櫞酸引咳法及豚鼠組胺-乙酰膽堿超聲霧化法觀察牛大力的祛痰鎮咳平喘作用。[結果]牛大力能顯著增加小鼠氣管酚紅排泌量，促進家鴿氣管內墨汁運動，減少氨水引發小鼠和枸櫞酸引發豚鼠咳嗽反應的次數，延長咳嗽潛伏期，對抗組胺-乙酰膽堿引起的豚鼠支氣管哮喘(均P<0.05或P<0.01)。[結論]牛大力具有一定的祛痰、鎮咳及平喘作用。

【關鍵詞】牛大力/藥理學慢性支氣管炎/中藥療法疾病模型動物小鼠豚鼠家鴿

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