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【摘要】目的探索研究幾種水溶性維生素（VitB1、VitB6、VitB12andVitC）對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用。方法采用改良的MTT法，來檢測小鼠腹腔巨噬細胞活性。結(jié)果VitB150μl(0.0025μg),VitB6200μl(0.002μg),VitB12200μl(0.002μg),VitC200μl(0.08μg)均對小鼠腹腔巨噬細胞有活性增強作用。結(jié)論幾種水溶性維生素（VitB1、VitB6、VitB12andVitC）對小鼠腹腔巨噬細胞活性有增強作用。

【關(guān)鍵詞】水溶性維生素；MTT法；小鼠巨噬細胞

Tostudytheactivationofinvitromicemacrophageswithvariouswatersolublevitamins

【Abstract】ObjectiveToproposestudyingtheeffectofvariouswatersolublevitamins(VitB1,VitB6,VitB12andVitC)ofinvitromicemacrophagesactivation.MethodsThearticletookthemodifiedmethodofMTTtoexplosetheactivationofinvitromricemacrophages.ResultsVitB150μl(0.0025μg),VitB6200μl(0.002μg),VitB12200μl(0.002μg),VitC200μl(0.08μg)allstimulatedtheeffectofinvitromicemacrophages.ConclusionVariouswatersolublevitamins(VitB1,VitB6,VitB12andVitC)whichwereabletostimulatetheactivationofinvitromicemacrophagesundercertainconcentration.

【Keywords】watersolublevitamin;MTTmethod;micemacrophage

維生素是維持人體正常生理功能及細胞內(nèi)各種能量代謝生化反應(yīng)所必需的一類低分子量有機化合物。盡管機體對這類物質(zhì)需求量相對很少，但是它們卻十分重要，是人體必不可少的微量物質(zhì)，如果缺乏，可引起各種各樣的疾病。因此某些種類維生素對人體的免疫系統(tǒng)的免疫功能也起著重要作用，影響免疫系統(tǒng)的各種細胞功能。最近許多年，國內(nèi)外營養(yǎng)免疫學(xué)者都在研究探討各種維生素對免疫系統(tǒng)的作用，企圖探明各種維生素對免疫細胞活化的增強或抑制，為提高機體免疫力，本文選用和人類基因組具有相當(dāng)部分同源性小鼠，選用體外實驗檢測維生素B1、B6、B12和維生素C對小鼠腹腔巨噬細胞活性作用的研究。Mosmon(1983)［1］報道噻唑藍（MTT）比色法，經(jīng)后人改良，使這種方法更加完善成熟，成為定量、重復(fù)性好、簡便易行檢測免疫細胞活性的好方法。我們采用此法，檢測小鼠腹腔巨噬細胞的活性，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1材料與方法

1．1實驗動物和主要試劑及實驗儀器ICR小鼠體重（20±2）g，雄性，由首都醫(yī)科大學(xué)實驗動物部提供。RPMI1640培養(yǎng)液為Hyclmone公司產(chǎn)品。噻唑藍（MTT）為Sigma公司產(chǎn)品，10%十二烷基磺酸鈉（SDS）為BRL公司產(chǎn)品，淋巴細胞分離液為TBD生物技術(shù)發(fā)展中心產(chǎn)品，液體石蠟油為北京旭東化工廠產(chǎn)品，VitB1（5mg/ml）、VitB6（5mg/ml）、VitB12（0.5mg/ml）均為天津金耀氨基酸有限公司產(chǎn)品，VitC（400mg/ml）為北京雙鶴藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，酶標(biāo)儀為SLT公司產(chǎn)品（型號為A-5082）。

1.2方法（1）對小鼠腹腔注射（VitB1、VitB6、VitB12和VitC，無菌液體石蠟油），取ICR小鼠40只分成4組，每組10只，分別為1組、2組、3組和4組。1組為VitB1實驗組，第1天對其中5只小鼠腹腔注射無菌生理鹽水0.2ml/只，作為對照，另外5只小鼠腹腔注射VitB10.05ml/只作為實驗組。2組為VitB6實驗組，第1天對其中5只小鼠腹腔注射無菌生理鹽水0.2ml/只，作為對照，另外5只小鼠腹腔注射VitB60.2ml/只作為實驗組。3組為VitB12實驗組，第1天對其中5只小鼠腹腔注射無菌生理鹽水0.2ml/只，作為對照，另外5只小鼠腹腔注射VitB120.2ml/只作為實驗組。4組為VitC實驗組，第1天對其中5只小鼠腹腔注射無菌生理鹽水0.2ml/只，作為對照，另外5只小鼠腹腔注射VitC0.2ml/只作為實驗組。以上4組小白鼠經(jīng)腹腔注射生理鹽水和維生素，均于48h后再經(jīng)腹腔注射無菌液體石蠟油0.1ml/只。48h后行頸椎脫臼處死。（2）巨噬細胞的制備：將處死的小白鼠行腹部皮膚消毒后，持鑷提起腹中部皮膚并剪開，暴露腹膜，避開血管剪開腹膜一小口。用毛細吸管取出腹腔液，并收集于試管中。作好標(biāo)記后離心，棄上清，洗3次，立即進行臺盼藍染色，計算活細胞數(shù)。細胞數(shù)108/ml。（3）噻唑藍比色法，將制備的小鼠巨噬細胞按組分管，每組實驗管（孔）3管（孔）對照管（孔）3管（孔）。37℃溫育2h后，每管加10%SDS（溶于雙蒸水），輕輕震蕩，待甲簪顆粒完全釋放后，再用酶標(biāo)儀測OD570值。

2結(jié)果

2.1VitB1對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用VitB1對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用，VitB150μl（0.0025μg）對小鼠腹腔巨噬細胞活性有增強作用，P<0.01，見圖1。

2.2VitB6對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用VitB6對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用,VitB6200μl(0.002μg）對小鼠腹腔巨噬細胞活性有增強作用，P<0.01，見圖2。

2.3VitB12對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用VitB12對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用，200μl(0.002μg)對小鼠腹腔巨噬細胞活性有增強作用，P<0.001，見圖3。

2.4VitC對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用VitC對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用，200μl(0.08μg)對小鼠腹腔巨噬細胞活性有增強作用，P<0.01，見圖4。

3討論

Mosmon（1983年）［1］報道噻唑藍（MTT）比色法測定細胞活性。MTT可被各種類型的活性細胞（RBC除外）攝取，活性強的細胞攝取較多的MTT，在線粒體內(nèi)被脫氫酶還原為甲簪顆粒（Formazan）,顏色由黃變深紫，加入SDS使細胞完全裂解釋放出甲簪，在波長570nm下酶標(biāo)儀測量OD值，

OD值越高，其甲簪濃度越高，反應(yīng)活的細胞活性越強［2，3］。因此，MTT法可定量檢測各種細胞的活性。我們曾經(jīng)報道幾種水溶性維生素對小鼠淋巴細胞活性的作用［4］。本報道VitB1、VitB6、VitB12和VitC對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用，它們在一定濃度下對小鼠腹腔巨噬細胞活性有增強作用，VitB12尤為顯著。VitB1、VitB6、VitB12均涉及體內(nèi)細胞正常生理生化功能，因此，它們當(dāng)然參與小鼠腹腔巨噬細胞的生化反應(yīng)，完成正常生理功能。VitC經(jīng)臨床實驗證實［5］，它具有抗氧化作用，增強巨噬細胞的吞噬殺菌功能，并有增強淋巴細胞功能（曾已報道）的VitC還參與免疫球蛋白的二硫鍵的形成，從而促進免疫球蛋白的合成。有增加補體C1和干擾素的產(chǎn)生，以及增強NK細胞的活性，因此增強人體抗腫瘤的作用［6，7］。

營養(yǎng)免疫是當(dāng)今熱門的研究課題之一。人體許多種疾病都涉及免疫系統(tǒng)，免疫系統(tǒng)有防御、監(jiān)視、耐受和調(diào)節(jié)功能。各種營養(yǎng)素，是人體依存最為重要的環(huán)境因素，也是維持人體正常免疫功能和健康的物質(zhì)基礎(chǔ)。各種維生素雖然人體每日需要量很少，它們常以輔酶或輔基的形式參與酶的功能，尤其是B族的維生素，因此它們在調(diào)節(jié)人體物質(zhì)代謝過程中起著關(guān)鍵的作用。研究各種維生素對人體免疫系統(tǒng)的作用是營養(yǎng)免疫的重要任務(wù)。

【參考文獻】

1Mosmann,T.Repidcolorimetricassayforcellulargrowthandsurviralapplicationtoproliferationandcytotoxicityassays.JImmunolMeth，1983,65：55-63.

2陳哲生.噻唑藍比色法檢測細胞的活性.上海醫(yī)學(xué)檢驗雜志，1994，9（4）：205-206.

3陳哲生.噻唑藍比色法用來研究人類淋巴細胞和小鼠巨噬細胞細胞的活性.上海免疫學(xué)雜志,1992,12(5)：269-317.

4孫明潔.幾種水溶性維生素對小鼠淋巴細胞活性的作用.中華中西醫(yī)雜志,2005，21（6）：2805-2806.

5蔭士安，汪之瑣主譯.現(xiàn)代營養(yǎng)學(xué).第八版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004，213-285.

6徐世俠，吳育云.補充維生素A和維生素C對營養(yǎng)缺乏所致免疫功能低下的影響.中國公共衛(wèi)生,1998，14（12）：741-743.

7杜衛(wèi)東,沈道明,黃春錦,等.大劑量維生素C對急性胰腺炎患者細胞免疫功能的影響.胃腸病學(xué),2002,7(4)：213-215.