導(dǎo)語(yǔ)：大鼠肢體缺血論文一文來(lái)源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢(xún)客服老師，歡迎參考。

【摘要目的摘要：觀察大鼠肢體缺血再灌注后肝臟的損傷性變化，以及牛磺酸對(duì)肝臟損傷性變化的保護(hù)效應(yīng)，探索牛磺酸對(duì)大鼠肢體缺血再灌注后肝臟功能保護(hù)功能的可能機(jī)制.方法摘要：實(shí)驗(yàn)用Wistar大鼠30只，隨機(jī)分為對(duì)照(control,C)組，缺血再灌注(ischemiareperfusion,IR)組和牛磺酸+缺血再灌注(taurine+ischemiareperfusion,TR)組，每組10只.觀察缺血4h再灌注4h各組大鼠血漿中XOD,LDH,MDA,AST,ALT和SOD的變化；觀察肝組織XOD,MDA,ROS,MPO和Ca2+的變化；觀察肝線粒體GSHPX和Ca2+的變化.結(jié)果摘要：?jiǎn)渭冎w缺血再灌注組大鼠血漿中LDH［(190.16±13.36)μkat/L］,XOD［(758.82±151.53)nkat/L］,MDA［(5.19±0.67)nmol/L］,ALT［(78.40±6.45)nkat/L］,AST［(47.70±4.47)nkat/L］等較正常對(duì)照組血漿中LDH［(122.39±14.87)μkat/L］,XOD［(543.61±43.51)μkat/kg］,MDA［(1.27±0.21)nmol/L］,ALT［(20.50±3.70)nkat/L］,AST［(25.25±2.98)nkat/L］明顯增加，而SOD［（1.30±0.15)μkat/L］較對(duì)照組(1.80±0.16)μkat/L明顯降低；單純肢體缺血再灌注組大鼠肝組織XOD［(104.69±12.34)μkat/Kg］,MDA［(2.66±0.08)nmol/L］,ROS［(771.65±100.69)μkat/L］,MPO(0.47±0.04),［Ca2+］［(0.248±0.050)mmol/L］較正常對(duì)照組肝組織XOD［(59.01±10.50)μkat/kg］,MDA［(1.29±0.14)nmol/L］,ROS［(606.45±52.01)μkat/L］,MPO［(0.28±0.06)］,［Ca2+］［(0.123±0.014)mmol/L］均明顯增加；缺血再灌注組大鼠肝線粒體GSHPx活性［(20.34±4.67)nkat/L］和正常對(duì)照組［(31.17±11.50)nkat/L］比較明顯降低，而［Ca2+］濃度［(0.38±0.06)mmol/L］則高于正常對(duì)照組［(0.14±0.03)mmol/L］.牛磺酸+缺血再灌注組大鼠血漿中LDH［(158.29±4.87)μkat/L］,XOD［(758.82±151.53)nkat/L］,MDA［(2.81±0.19)nmol/L］,ALT［(64.40±9.05)nkat/L］,AST［(38.70±8.10)nkat/L］較單純?nèi)毖俟嘧⒔M明顯降低，而SOD［(1.50±0.17)μkat/L］則增加；肝組織XOD［(94.19±13.50)μkat/L］,MDA［(1.67±0.12)nmol/L］,ROS［(710.81±55.34)μkat/L］,MPO(0.36±0.04),［Ca2+］［(0.192±0.426)mmol/L］等指標(biāo)也較單純?nèi)毖俟嘧⒔M明顯降低，此外牛磺酸+缺血再灌注組大鼠肝線粒體GSHPx活性［(22.50±3.17)nkat/L］和單純肢體缺血再灌注組相比明顯增加，而Ca2+濃度［(0.31±0.06)mmol/L］則降低，損傷減輕.結(jié)論摘要：牛磺酸可以減輕大鼠肢體缺血4h再灌注4h后所致的肝損傷.

【再灌注損傷；肝功能；四肢；牛磺酸

0引言

牛磺酸是體內(nèi)含量最豐富的氨基酸，具有廣泛的生物學(xué)功能［1］.已有很多實(shí)驗(yàn)資料［2-6］證實(shí)牛磺酸具有清除自由基和抗脂質(zhì)過(guò)氧化功能等.本實(shí)驗(yàn)我們?cè)诖笫笾w缺血再灌注模型上觀察肝臟的損傷性變化以及觀察預(yù)先給予牛磺酸對(duì)這一變化的影響，旨在探索肢體缺血再灌注時(shí)遠(yuǎn)隔器官損傷及其可能的發(fā)生氣制，以及牛磺酸的保護(hù)效應(yīng)，為避免或延緩肢體缺血再灌注損傷的發(fā)生、發(fā)展提供理論依據(jù).

1材料和方法

1.1材料健康雄性Wistar大鼠30只，體質(zhì)量（250±50）g，購(gòu)自河南醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，醫(yī)動(dòng)字摘要：D410116號(hào)）；所用生化測(cè)定試劑盒均購(gòu)自南京建成生物制品公司，其余所需試劑均為市售分析純產(chǎn)品，722分光光度計(jì)購(gòu)自上海精密科學(xué)儀器公司，低溫高速離心機(jī)購(gòu)自德國(guó)Hittech公司.

1.2方法

1.2.1模型復(fù)制采用本室常規(guī)方法［7］制作大鼠肢體缺血再灌注模型，乙醚淺麻醉下用橡皮圈環(huán)繞結(jié)扎大鼠雙后肢根部，阻斷血流4h后松解，恢復(fù)血流灌注4h，自腹主動(dòng)脈取血處死動(dòng)物，并收集血液，4℃,3500r離心15min，取血漿，裝入干凈的Epperdorf管，-70℃保存.

1.2.2動(dòng)物分組將實(shí)驗(yàn)大鼠分籠喂養(yǎng)30d，術(shù)前12h禁食，自由飲水，室溫（25±2）℃，濕度40%~50%.隨機(jī)分為3組，每組10只，①正常對(duì)照組摘要：常規(guī)飼養(yǎng)，雙后肢松弛環(huán)繞橡皮圈，不阻斷血流，余操作同缺血再灌注組組.②缺血再灌注組摘要：常規(guī)飼養(yǎng)，按模型操作.③牛磺酸+缺血再灌注組摘要：在缺血再灌注前30d天天灌服牛磺酸一次，劑量為200mg/kg體質(zhì)量，其余操作同缺血再灌注組.

1.3觀測(cè)指標(biāo)

1.3.1血漿生化指標(biāo)測(cè)定取血漿測(cè)定谷草轉(zhuǎn)氨酶（ALT）,谷丙轉(zhuǎn)氨酶（AST）,乳酸脫氫酶（LDH）,黃嘌呤氧化酶（XOD）,丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）的含量.

1.3.2肝組織及其線粒體生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)束實(shí)驗(yàn)時(shí)，迅速取出肝組織，液氮速凍后-70℃保存.取部分肝組織制成10%勻漿，測(cè)定黃嘌呤氧化酶（XOD）,丙二醛（MDA）,髓過(guò)氧化物酶（MPO）,活性氧（ROS）及Ca2+含量；測(cè)定線粒體中GSHPX和Ca2+含量.ALT,AST,LDH,XOD,MDA,MPO,ROS,GSHPX和Ca2+用比色法測(cè)定；肝線粒體的制備參照文獻(xiàn)［8］進(jìn)行.

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理摘要：結(jié)果以x±s表示，用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行單因素方法分析以及SNKq檢驗(yàn).

2結(jié)果

2.1各組大鼠血漿ALT,AST,LDH,XOD,MDA和SOD含量的變化和正常對(duì)照組比較，單純?nèi)毖俟嘧⒔MMDA,XOD,ALT,AST和LDH均明顯升高，分別升高了3.09倍,39.6%,2.82倍,88.9%和55.4%,（P%26lt;0.05）；而SOD則降低了27.7%，(P%26lt;0.05)；牛磺酸+缺血再灌注組組和單純?nèi)毖俟嘧⒔M比較，MDA,XOD,ALT,AST和LDH分別降低了45.9%,7.2%,15.3%,18.9%和16.8%，(P%26lt;0.05)；而SOD則升高了14.8%（P%26lt;0.05），損傷減輕（表1）.

表1各組大鼠血漿SOD,XOD,ALT,AST,LDH和MDA含量(略)

aP%26lt;0.05vsbP%26lt;0.01正常對(duì)照，cP%26lt;0.05vs缺血再灌注.

2.2各組大鼠肝組織中XOD,MDA,MPO,ROS和Ca2+含量變化和正常對(duì)照組比較，單純?nèi)毖俟嘧⒔MXOD,MDA,ROS,MPO,LDH和Ca2+均明顯升高，分別升高了77.4%,1.06倍,27.2%,66.8%,30.1%和1.02倍，（P%26lt;0.05）；牛磺酸+缺血再灌注組和單純?nèi)毖俟嘧⒔M比較，XOD,MDA,ROS,MPO,LDH和Ca2+分別降低了10.0%,37.2%,7.9%,11.7%,24.8%(P%26lt;0.05)和22.6%(P%26lt;0.05)，損傷減輕(表2).

表2各組大鼠肝組織XOD,MDA,ROS,MPO和Ca2+含量(略)

aP%26lt;0.05vs正常對(duì)照組;cP%26lt;0.05vs缺血再灌注組.

2.3各組大鼠肝線粒體中GSHPX活性和Ca2+含量變化單純?nèi)毖俟嘧⒔M和正常對(duì)照組比較，Ca2+(0.38±0.06vs0.14±0.03)mmol/L明顯升高，升高1.71倍（P%26lt;0.05）；而GSHPX(20.34±4.67vs31.17±11.50)nkat/L則降低了34.8%,（P%26lt;0.05）；和單純?nèi)毖俟嘧⒔M比較，牛磺酸+缺血再灌注組Ca2+(0.31±0.06mmol)降低了18.4%（P%26lt;0.05），而GSHPX(22.50±3.17nkat/L)則升高了10.7%（P%26lt;0.05），損傷減輕.

3討論

大量探究證實(shí)組織缺血缺氧后的損傷不僅發(fā)生在缺氧當(dāng)時(shí)，更主要的是發(fā)生在缺血組織迅速恢復(fù)血供時(shí)［9］.肝臟損傷是肢體缺血再灌注致遠(yuǎn)隔器官損傷的一個(gè)非常重要的臟器損傷.

反映肝功能的ALT,AST和反映脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的XOD是三個(gè)很重要的酶.當(dāng)肝在受到損傷的早期，血清ALT,AST含量即可升高，是評(píng)價(jià)肝功能的非常重要的指標(biāo).XOD是氧自由基產(chǎn)生的主要酶.在肝細(xì)胞受損時(shí)，此酶活性明顯升高.SOD和GSHPx對(duì)機(jī)體的氧化和抗氧化平衡起著至關(guān)重要的功能，此酶能清除超氧陰離子自由基，防止膜脂質(zhì)過(guò)氧化連鎖反應(yīng)所造成的損傷，保護(hù)細(xì)胞.MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，是衡量機(jī)體組織過(guò)氧化損傷程度的指標(biāo).LDH也屬于胞質(zhì)酶，其血漿水平的高低可反映組織受損的嚴(yán)重程度.MPO是中性粒細(xì)胞（PMN）嗜天青顆粒中含量較高的酶，組織中MPO活性的高低可定量表示組織中PMN聚集的程度.

在本實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)，大鼠肢體缺血再灌注后肝組織中MPO含量升高，表明PMN在肝內(nèi)血管黏附、聚集或游出到間質(zhì)增多，進(jìn)而促使黃嘌呤脫氫酶大量轉(zhuǎn)化為黃嘌呤氧化酶，引起“呼吸爆發(fā)”，產(chǎn)生大量氧自由基.同時(shí)，由于SOD及GSHPx活性降低，清除自由基能力下降，自由基大量堆積，引發(fā)過(guò)氧化反應(yīng)，肝組織受到損傷.由于細(xì)胞膜遭到破壞，通透性增加，致胞質(zhì)酶和溶酶體酶漏出，造成組織和細(xì)胞的進(jìn)一步損傷［10］.我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中觀察到的血漿中LDH,ALT,AST升高就是由于細(xì)胞膜通透性升高，酶釋放入血所致.組織的過(guò)氧化反應(yīng)增強(qiáng)，主要表現(xiàn)為MDA增多.這些改變又加重了組織細(xì)胞損傷，形成自由基增多和組織損傷之間的“惡性循環(huán)”.

牛磺酸是體內(nèi)含量最豐富的氨基酸，具有廣泛的生物學(xué)功能［1］.具有穩(wěn)定細(xì)胞膜、調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)和抗脂質(zhì)過(guò)氧化功能［11］，是機(jī)體內(nèi)源性抗損傷和細(xì)胞保護(hù)物質(zhì)，可明顯減輕肢體缺血再灌注后的細(xì)胞壞死［12］.本實(shí)驗(yàn)中我們觀察到灌服牛磺酸的大鼠肢體缺血再灌注后，肝細(xì)胞損傷程度明顯減輕，同時(shí)SOD，GSHPx活性增加.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示摘要：牛磺酸能減輕肢體缺血再灌注后繼發(fā)的肝臟損傷，而這一效應(yīng)和其避免或減輕肢體缺血再灌注后機(jī)體的過(guò)氧化反應(yīng)增強(qiáng)有關(guān).它的這一功能對(duì)保護(hù)機(jī)體避免或延緩肢體缺血再灌注損傷的發(fā)生、發(fā)展有一定的意義.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示摘要：牛磺酸可能通過(guò)提高LIR后肝細(xì)胞及其線粒體內(nèi)自由基清除酶活性、減少自由基生成和穩(wěn)定細(xì)胞膜而達(dá)到保護(hù)肝臟的功能.其具體機(jī)制還有待于進(jìn)一步闡明.

【參考文獻(xiàn)

［1］汪朝暉，張賢康，繆明用，等.牛磺酸對(duì)大鼠肝線粒體氧自由基損傷的保護(hù)功能［J］.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2000,35(2)摘要:111-113.

［2］門(mén)秀麗，張連元，董淑云，等.牛磺酸對(duì)大鼠肢體缺血再灌注后肺損傷時(shí)細(xì)胞凋亡的影響［J］.中國(guó)病理生理雜志,2004,20(3)摘要:421-424.

［3］萬(wàn)福生，劉波，趙小曼，等.牛磺酸對(duì)大鼠在體缺血再灌注心肌線粒體呼吸酶系的影響［J］.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床，2000,20(4)摘要:45-47.

［4］齊鷹，吳玉玲，蘇靜怡.牛磺酸對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)功能及機(jī)制探索［J］.中國(guó)循環(huán)雜志,1995,10(4)摘要:225-227.

［5］萬(wàn)福生，趙小曼，雷厲.牛磺酸對(duì)大鼠心肌缺血損傷的保護(hù)［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),1996,12(1)摘要:42-44.

［6］JuxtableRJ.Physiologicalactionoftaurine［J］.PhysiolRew,1992,72(1)摘要:101-130.

［7］張連元，楊林.生理科學(xué)實(shí)驗(yàn)教程［M］.北京摘要：人民軍醫(yī)出版社,2001摘要:29-30.

［8］張連元，楊林.生理科學(xué)實(shí)驗(yàn)教程［M］.北京摘要：人民軍醫(yī)出版社,2001摘要:168.

［9］王嶺，華積德.失血性休克和再灌注大鼠多臟器細(xì)胞損傷的實(shí)驗(yàn)探究［J］.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),1994,15(6)摘要:429-431.

［10］張連元，張之瑋，董淑云，等.川芎嗪對(duì)創(chuàng)傷家兔的抗脂質(zhì)過(guò)氧化功能［J］.現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),1995,12(8)摘要:4-6.

［11］門(mén)秀麗，張連元，董淑云，等.牛磺酸在大鼠止血帶體克后肺損傷中的保護(hù)功能［J］.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2004,25(2)摘要:144-146.

［12］張連元,董淑云,許玉鳳，等.牛磺酸對(duì)大鼠止血帶休克的影響［J］.中國(guó)病理生理雜志,1993,9(2)摘要:208-210.