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1器材與方法

1.1材料

正己烷（A.R），天津化學試劑廠產品；無水乙醇（A.R），天津化學試劑廠產品；氫氧化鈉（A.R），河北辛集化工廠產品；染料木素對照品（含量約為98%），Sigma公司產品。淡豆豉（SemenSojaePraeparatum）購自石家莊市樂仁堂藥店，經河北醫科大學中醫學院藥用植物教研室嚴玉平副教授鑒定為正品，留樣憑證存放于河北醫科大學中醫學院藥用植物教研室。

1.2儀器

λ-2紫外分光光度儀（美國PE公司）、RE-52A旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）、BS223S電子天平（德國賽多利斯公司）。

1.3樣品溶液制備［6］取符合實驗要求的淡豆豉，粉碎，過10目篩，精密稱取5g。加正己烷40ml超聲振蕩脫脂25min，棄去正己烷，重復1次。殘渣加入50ml70%乙醇溶液，85℃熱回流提取3次，1h/次，收集提取液。減壓回收溶劑至干，加NaOH（0.01mol/L）溶液溶解，定容為250ml，作為供試品液。精密移取供試品液2ml置100ml量瓶中，加NaOH（0.01mol/L）溶液定容至刻度，搖勻。平行操作3份。

1.4標準曲線繪制精密稱取120℃干燥至恒重的染料木素10.2mg，置50ml容量瓶中，加0.01mol/LNaOH溶液定容至刻度，搖勻。精密吸取此溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0ml分別置于100ml容量瓶中，加0.01mol/LNaOH定容至刻度，搖勻，以0.01mol/LNaOH溶液為空白溶液，在271nm處測吸收度。以吸收度（Y）為縱坐標，染料木素濃度(μg/ml)（X）為橫坐標繪制標準曲線（見圖1），結果表明染料木素濃度與吸收度呈良好線性關系。回歸方程為Y=0.1698X+0.0059，r=1.0000。

1.5樣品測定以0.01mol/LNaOH溶液為空白溶液，在271nm處測吸收度。每個樣品重復測定2次。

2結果

2.1溶劑的選擇從染料木素的結構特點及理化性質可知，其具有強疏水性，難溶于水、稀鹽酸等，微溶于甲醇、乙醇。選擇上述溶液作為染料木素的溶出介質不適宜。根據染料木素及異黃酮類化合物的理化特性（結構中含有酚羥基呈現弱酸性，易溶于稀堿），選擇稀氫氧化鈉（0.01mol/L）溶液溶解大豆提取物中異黃酮類化合物，是簡便可行的。

2.2波長選擇由對照品紫外掃描圖譜(圖2)可得知，最大吸收峰都在271nm，且最大吸收峰周圍干擾較小，我們就把271nm作為測定波長。

2.3線性關系考察本法中，染料木素在0.51～4.08μg/ml范圍呈良好線性關系(見圖1)，相關系數r=1.0000，測定上限可達8.0μg/ml，下限為0.2μg/ml。

2.4回收率實驗精密吸取標準品溶液25，50，25，50，25μl，分別置5只5ml容量瓶中,再分別精密加入供試液150μl，0.01mol/LNaOH定容至刻度，搖勻，按“1.3.3”項操作，計算回收率，結果平均回收率為99.3%，RSD為2.1%。見表1。

2.5精密度實驗精密吸取標準品溶液100μl，分別置5只5ml容量瓶中,加0.01mol/LNaOH定容至刻度，搖勻，按“1.4”項操作，測定吸收度，RSD為1.9%。

2.6樣品測定取已制備好的3份樣品溶液測定，每份樣品按測定程序測定2次，以染料木素計量大豆異黃酮含量，所得結果見表2。表1加樣回收率（略）表2樣品中大豆異黃酮含量（略）

3討論

淡豆豉為常用藥食同源物質，其最新報道有降血糖、血脂的作用，但有關淡豆豉中總異黃酮的質量分析報道較少［7］。我們經過研究對比，確定用一種簡單易行的紫外分光光度法對其主要有效成分—異黃酮類成分進行測定，建立了一種淡豆豉的質量控制標準。

本法簡便、快速、選擇性好、線性范圍寬、重復性好、能全面反映樣品中大豆異黃酮的總含量，適用于淡豆豉中總異黃酮的質量檢測和測定，尤其是生產過程的質量控制。

采用稀堿溶液溶解異黃酮，增加了異黃酮的溶解度，使得淡豆豉中總異黃酮含量測定準確度大大提高。同時由于淡豆豉中異黃酮與堿發生反應，使得其最大吸收波長發生紅移，紫外吸收峰遠離末端吸收，也提高了淡豆豉中總異黃酮含量測定準確度。

【參考文獻】

［1］楊淑媛,田元蘭,丁純孝.新編大豆食品［M］.北京：中國商業出版社,1989：284.

［2］C．LeeHolder，MonaI.Churchwell，DanielR.Doerge.QuantificationofSoyIsoflavones，GenisteinandConjugatesinRatBloodUsingLC/ES-MS［J］.AgricFoodChem.，1999，47：3764.

［3］牛麗穎,王鑫國,葛喜珍,等.淡豆豉提取物降糖有效部位研究［J］.中藥藥理與臨床,2002,20(5):21.

［4］王鑫國,葛喜珍,白霞,等.淡豆豉對去卵巢大鼠脂代謝的影響［J］.中藥材,2003，26(9),652.

［5］王強,叢曉東,余伯陽,等.中藥分析［M］.福州：福建科技出版社,1993:193.

［6］竇玉紅,崔力劍,黃蕓,等.正交設計優選淡豆豉中總異黃酮的提取工藝［J］.河北中醫藥學報,2006,21（2）:33.

［7］崔力劍,黃蕓,杜淑娟,等.紫外分光光度法測定淡豆豉中異黃酮的含量［J］.河北中醫藥學報,2004,19(3):32.

【摘要】目的建立一種測定大豆發酵制品——淡豆豉中異黃酮類成分含量的紫外分光光度法分析方法。方法以染料木素為對照品，利用染料木素與氫氧化鈉產生反應，在271nm波長處有最大吸收點，用紫外分光光度法測定淡豆豉中總異黃酮的含量。結果淡豆豉中總異黃酮的含量為9.884mg/g，加樣回收率為99.3%，相對標準偏差為2.1%。結論方法簡便、準確、重現性好,可作為測定淡豆豉中總異黃酮的含量的一種手段，適用于淡豆豉及其它豆制品的日常分析和質量控制。

【關鍵詞】大豆淡豆豉氫氧化鈉異黃酮分光光度法