外聘合同范文
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篇1
乙方:
經甲乙雙方協商達成聘用合同,條款如下:
1、甲方聘用乙方工作,時間為 年 月 日至 年 月
日。
2、在聘用工作期間,乙方為甲方工作,乙方必須遵守甲方規定的工作職責要求,工作由甲方安排。
3、在聘用期間,甲方只負責乙方的工資,不負責四金交納和其它福利待遇(斟情考慮其它待遇)。聘用工資每月為 元。如有缺勤,適當扣除相應工資。如有工作變動,雙方協商,調整聘用工資。
4、在聘用期間,如乙方有重大違反校紀、校規的行為,本合同將中止,責任由乙方自負。對重大違紀違規的解釋權在甲方。
5、乙方聘期滿,甲乙雙方均感到合適,雙方可以簽訂續聘合同。
6、本合同經雙方簽字后生效。
7、本合同一式兩份,甲、乙雙方各執壹份,具有同等法律效力。
8、合同雙方簽字。
甲方代表:
乙方:
9、簽字時間: 年 月 日
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_________公司(單位)(以下簡稱甲方)
_________(以下簡稱乙方)
身份證號:
家庭住址:
聯系電話:
依照國家有關法律條例,就聘用事宜,訂立本勞動合同。
第一條 試用期及錄用
(一)甲方依照合同條款聘用乙方為員工,乙方工作部門為_________職位,工種為,乙方應經過三至六個月的試用期,在此期間,甲乙任何一方有權終止合同,但必須提前七天通知對方或以七天的試用工資作為補償。
(二)試用期滿,雙方無異議,乙方成為甲方的正式合同制勞務工,甲方將以書面方式給予確認。
(三)乙方試用合格后被正式錄用,其試用期應計算在合同有效期內。
第二條 工資及其它補助獎金
(一)甲方根據國家有關規定和企業經營狀況實行本企業的等級工資制度,并根據乙方所擔負的職務和其他條件確定其相應的工資標準,以銀行轉帳形式支付,按月發放。
(二)甲方根據盈利情況及乙方的行為和工作表現增加工資,如果乙方沒達到甲方規定的要求指標,乙方的工資將得不到提升。
(三)甲方(公司主管人員)會同人事部門,在如下情況,甲方將給乙方榮譽或物質獎勵,如模范地遵守公司的規章制度,生產和工作中的突出貢獻或物質獎勵,技術革新、經營管理改善,乙方也
由于有突出貢獻得到工資和職務級別的提升。
(四)甲方根據本企業利潤情況設立年終獎金,可根據員工勞動表現及在單位服務年限發放獎金。
(五)甲方根據政府的有關規定和企業狀況,向乙方提供津貼和補助金。
(六)除了法律、法規、規章明確提出的要求補助外,甲方將不再有義務向乙方提供其它補助津貼。
第三條 工作時間及公假
(一)乙方的工作時間每天為8小時(不含吃飯時間),每星期工作五天半或每周工作時間不超過44小時,除吃飯時間外,每個工作日不安排其它休息時間。
(二)乙方有權享受法定節假日以及婚假、喪假等有薪假期。甲方如要求乙方在法定節假日工作,在征得乙方同意后,須安排乙方相應的時間輪休,或按國家規定支付乙方加班費。
(三)乙方成為正式員工,在本企業連續工作滿半年后,可按比例獲得每年根據其所擔負的職務相應享受________天的有薪年假。
(四)乙方在生病時,經甲方認可的醫生及醫院證明,過試用期的員工每月可享受有薪病假一天,病假工資超出有薪病假部分的待遇,按政府和單位的有關規定執行。
(五)甲方根據生產經營需要,可調整變動工作時間,包括變更日工作開始和結束的時間,在照顧員工有合理的休息時間的情況下,日工作時間可做不連貫的變更,或要求員工在法定節假日及休息日到崗工作。乙方無特殊理由應積極支持和服從甲方安排,但甲方應嚴格控制加班加點。
第四條 員工教育
在乙方任職期間,甲方須經常對乙方進行職業道德、業務技術、安全生產及各種規章制度及社會法制教育,乙方應積極接受這方面的教育。
第五條 工作安排與條件
(一)甲方有權根據生產和工作需要及乙方的能力,合理安排和調整乙方的工作,乙方應服從甲方的管理和安排,在規定的工作時間內按質按量完成甲方指派的工作任務。
(二)甲方須為乙方提供符合國家要求的安全衛生的工作環境,否則乙方有權拒絕工作或終止合同。
第六條 勞動保護
甲方根據生產和工作需要,按國家規定為乙方提供勞動保護用品和保健食品。對女職工經期、孕期、產期和哺乳期提供相應的保護,具體辦法按國家有關規定執行。
第七條 勞動保險及福利待遇
(一)甲方按國家勞動保險條例規定,為乙方支付醫藥費用,病假工資、養老保險費用及工傷保險費用。
(二)甲方根據單位規定提供乙方宿舍和工作餐(每天________次)。
第八條 解除合同
(一)符合下列情況,甲方可以解除勞動合同
(1)甲方因營業情況發生變化,而多余的職工又不能改換其它工種。
(2)乙方患病或非因工負傷,按規定的醫療期滿后,不能從事原工作,也不能調換其它工種
(3)乙方嚴重違反企業勞動紀律和規章制度,并造成一定后果,根據企業有關條例和規定應予辭退
的,甲方有權隨時解除乙方的勞動合同。
(4)乙方因觸犯國家法規被拘留,勞動教養、判刑,甲方將作開除處理,勞動合同隨之終止。
(二)符合下列情況,乙方可以解除勞動合同。
回答人的補充 XX-05-10 06:07
(1)經國家有關部門確認,勞動安全,衛生條件惡劣,嚴重危害了乙方身體健康的。
(2)甲方不履行勞動合同或違反國家政策、法規、侵害乙方合法利益。
(3)甲方不按規定支付乙方勞動報酬的。
(三)在下列情況下,甲方不得不解除勞動合同。
(1)乙方患病和因工負傷,在規定的醫療期內的。
(2)乙方因工負傷或患職業病,正在進行治療的。
(3)女員工在孕期、產期或哺乳期的。
(四)乙方因工負傷或患職業病、醫療終結經政府有關部門確認為部分喪失勞動能力的,企業應予妥善安置。
(五)任何一方解除勞動合同,一般情況下,必須提前一個月通知對方,或以一個月的工資作為補償,解除合同的程序按企業有關規定辦理。
(六)乙方在合同期內,持有正當理由,不愿繼續在本企業工作時,可以提出辭職,但須提前一個月書面通知甲方,經甲方批準后生效。辭職員工如系由企業出資培訓,在培訓期滿后,工作未滿合同規定年限的,應賠償甲方一定的培訓費用。未經甲方同意擅自離職,甲方有權通過政府勞動部門,要求乙方返回工作崗位,并賠償因此給甲方造成的經濟損失。
回答人的補充 XX-05-10 06:08
第九條 勞動紀律
(一)乙方應遵守國家的各項規定和企業的《員工手冊》以及單位的各項規章制度。
(二)乙方如觸犯刑律,受法律制裁或違反《員工手冊》和甲方規定的其它規章制度,甲方有權按《員工手冊》等規定,分別給予乙方相應的紀律處分,直至開除,因乙方違反《員工手冊》和其它規章制度,造成本企業利益受到損害,如企業聲譽的損害、財產的損壞,甲方根據嚴重程度,可采取一次性罰款措施。
(三)如果乙方違反合同規定,貪污受賄,嚴重玩忽職守或有不道德、粗魯行為,引起或預示將引起嚴重損害到他人人身和財產利益,乙方觸犯刑律受到法律制裁等,上述種種,甲方有權立即予以開除,并不給予"合同補償金"和"合同履約金"。乙方貪污受賄或損害他人人身和財產利益所造成的損失。由乙方負完全承擔賠償責任。
回答人的補充 XX-05-10 06:08
(四)乙方在合同期內和以后,不得向任何人泄漏本企業的商業機密消息。乙方在職期間不得同時在與本企業經營相似的企業、團體以及與本企業有業務關系的企業團體兼職。乙方合同終止或其他原因由本企業離職時,應向部門主管人員交回所有與經營有關的文件資料,包括通信、備忘錄、顧客清單、圖表資料及培訓教材等。
第十條 合同的實施和批準
(一)本合同經_____________討論制定,報經_______批準,用_______文字書寫,內容以中文為準,合同解釋權屬本公司人事部。
(二)單位《員工手冊》、《雇員犯規及警告通告》及其它經濟紀律規定均為合同附件,是合同的組成部分。
回答人的補充 XX-05-10 06:08
(三)本合同一經鑒定,甲、乙雙方必須嚴格遵守,任何一方不得單方面修改合同內容,如有未盡事宜或與政府有關規定抵觸時,按政府有關規定處理。
(四)本合同自鑒定之日生效,有效期為________年于________年_______月_______日到期,合同期滿前兩個月,如雙方無異議本合同自行延長________年。
(五)本合同一式兩份,甲乙雙方各執一份,由甲方上級主管部門和國家勞動管理部門監督執行。
篇2
二、合同期自 年 月 日起至 年 月 日止;
三、受聘方的工作任務(另附頁);
四、受聘方的月薪為人民幣 元,其中 %可按月兌換外匯;
五、聘方的義務:
1、向受聘方介紹中國有關法律、法規和聘方有關工作制度以及有關外國專家的管理規定。
2、對受聘方的工作進行指導、檢查和評估。
3、向受聘方提供必要的工作和生活條件。
4、配備合作共事人員。
5、按時支付受聘方的報酬
六、受聘方的義務:
1、遵守中國的法律、法規,不干預中國的內部事務。
2、遵守聘方的工作制度和有關外國專家的管理規定,接受聘方的工作安排。業務指導、檢查和評估。未經聘方同意,不得兼任與聘方無關的其他勞務。
3、按期完成工作任務,保證工作質量。
4、尊重中國的宗教政策。不從事與專家身份不符的活動。
5、尊重中國人民的道德規范和風俗習慣。
七、合同的變更、解除和終止:
1、雙方應信守合同,未經雙方一致同意,任何一方不得擅自更改、解除和終止合同。
2、經當事人雙方協商同意后,可以變更、解除和終止合同。在未達成一致意見前,仍應當嚴格履行合同。
3、聘方在下述條件下,有權以書面形式通知受聘方解除合同:
(1)受聘方不履行合同或者履行合同義務不符合約定條件,經聘方指出后仍不改正的;
(2)根據醫生診斷,受聘方在病假連續30天后不能恢復正常工作的;
4、受聘方在下述情況下,有權以書面形式通知聘方解除合同:
(1)聘方未按合同約定提供受聘方必要的工作和生活條件;
(2)聘方未按時支付受聘方報酬。
八、違約金:
當事人一方不履行合同或者履行合同義務不符合約定條件,即違反合同時。應當向另一方支付500-20xx美元(或相當數額的人民幣)的違約金。
受聘方因不可抗力事件要求解除合同,需出具有關機構證明,經聘方同意后,離華的費用自理;受聘方若無故解除合同,除離華費用自理外.還應當向聘方支付違約金。
聘方因不可抗力事件要求解除合同.經受聘方同意后,離華費用由聘方負擔;聘方若無故解除合同.除負擔受聘方離華費用外,還應當向受聘方支付違約金。
九、本合同附件為合同不可分割的-部分,與合同具有同等效力。
十、本合同自雙方簽字之日起生效,合同期滿即自行失效。當事人一方要求簽訂新合同,必須在本合同期滿90天前向另一方提出,經雙方協商同意后簽訂新合同。
受聘方合同期滿后,在華逗留期間的一切費用自理。
十一、仲裁
當事人雙方發生合同糾紛時,盡可能通過協商或者調解解決。若協商。調解無效,可向國家外國專家局設立的外國文教專家事務仲裁機構申請仲裁。
本合同于 年 月 日在 (地點)簽訂,一式兩份,每份都用中文和文寫成.兩種文本同等作準。
篇3
乙方:_________
一、雙方本著友好合作精神,自愿簽訂本合同并保證認真履行合同中約定的各項義務。
二、甲方的義務:
1.甲方必須有聘專資格證書,必須在外教到學校后2周內與其簽訂國家外專局標準合同。
2.向外教介紹中國有關法律、法則和聘方有關工作制度以及有關外國專家的管理規定。
3.對外教的工作進行指導、檢查和評估。
4.向外教提供必要的工作和生活條件。
5.配備合作共事人員,協助辦理簽證、居留證等手續。
6.按時支付外教的報酬,嚴格按合同兌現外教所有待遇。
7.按時結算本中心服務費用。
三、乙方的義務:
1.按甲方學校(企業)的要求按時按質提供外教。
2.乙方有權對甲方的外事工作進行協查和評估。
3.合同期間免費為甲方提供外事咨詢。
四、服務費的收取:
本次服務共為甲方聘請美國外教(_________)名。甲方需在外國專家(外教)到甲方單位(學校)的七個工作日內向乙方支付全部服務費用共計人民幣(_________)元整。
五、合同的變更、解除和終止:
1.雙方應信守合同,未經雙方一致同意,任何一方不得擅自更改、解除和終止合同。
2.經當事人雙方協商同意后,可以變更、解除和終止合同。在未達成一致意見前,應當嚴格履行合同。
六、本合同自雙方簽字之日起生效,自雙方各自義務履行完畢即自行失效。當事人一方要求簽訂新合同,必須在本合同期滿30天前向另一方提出,經雙方協商同意后簽訂新合同。
七、受聘方合同期滿后,在華逗留期間的一切費用自理。
八、仲裁
當事人雙方發生合同糾紛時,盡可能通過協商或者調解解決。若協商、調解無效,可向國家外國專家局設立的外國文教專家事務仲裁機構申請仲裁。
九、本合同一式兩份,傳真件有效。
甲方(蓋章):_________ 乙方(蓋章):_________
篇4
二、合同期自年月日起至年月日止。
三、受聘方的工作任務(另附頁):
四、受聘方的月薪為人民幣元,其中%可按月兌換外匯。
五、聘方的義務:
1.向受聘方介紹中國有關法律、法規和聘方有關工作制度以及有關外國專家的管理規定。
2.對受聘方的工作進行指導、檢查和評估。
3.向受聘方提供必要的工作和生活條件。
4.配備合作共事人員。
5.按時支付受聘方的報酬。
六、受聘方的義務:
1.遵守中國的法律、法規,不干預中國的內部事務。
2.遵守聘方的工作制度和有關外國專家的管理規定,接受聘方的工作安排、業務指導、檢查和評估。未經聘方同意,不得兼任與聘方無關的其他勞務。
3.按期完成工作任務,保證工作質量。
4.尊重中國的宗教政策。不從事與專家身份不符的活動。
5.尊重中國人民的道德規范和風俗習慣。
七、合同的變更、解除和終止:
1.雙方應信守合同,未經雙方一致同意,任何一方不得擅自更改、解除和終止合同。
2.經當事人雙方協商同意后,可以變更、解除和終止合同。在未達成一致意見前,仍應當嚴格履行合同。
3.聘方在下述條件下,有權以書面形式通知受聘方解除合同:
(1)受聘方不履行合同或者履行合同義務不符合約定條件,經聘方指出后,仍不改正的;
(2)根據醫生診斷,受聘方在病假連續30天后不能恢復正常工作的。
4.受聘方在下述情況下,有權以書面形式通知聘方解除合同:
(1)聘方未按合同約定提供受聘方必要的工作和生活條件;
(2)聘方未按時支付受聘方報酬。
八、違約金:
當事人一方不履行合同或者履行合同義務不符合約定條件,即違反合同時,應當向另一方支付500—2000美元(或相當數額的人民幣)的違約金。
受聘方因不可抗力事件要求解除合同,需出具有關機構證明,經聘方同意后,離華的費用自理;受聘方若無故解除合同,除離華費用自理外,還應當向聘方支付違約金。
聘方因不可抗力事件要求解除合同,經受聘方同意后,離華費用由聘方負擔;聘方若無故解除合同,除負擔受聘方離華費用外,還應當向受聘方支付違約金。
九、本合同附件為合同不可分割的一部分,與合同具有同等效力。
十、本合同自雙方簽字之日起生效,合同期滿即自行失效。當事人一方要求簽訂新合同,必須在本合同期滿90天前向另一方提出,經雙方協商同意后簽訂新合同。
受聘方合同期滿后,在華逗留期間的一切費用自理。
十一、仲裁
當事人雙方發生合同糾紛時,盡可能通過協商或者調解解決。若協商、調解無效,可向國家外國專家局設立的外國文教專家事務仲裁機構申請仲裁。
本合同于年月日在(地點)簽訂,一式兩份,每份都用中文和文寫成,兩種文本同等作準。
聘方受聘方
外國文教專家標準聘用合同附件
一、工作任務
(業務部門應將受聘方擔任的工作任務詳細列出,不能簡單化。對受聘方的工作應有質量要求。)
二、工資待遇
1、直接報酬(貨幣工資)每月人民幣元。工資以人民幣支付,工資自到職之日起至合同期滿之日止.按月發給,不足整月的,按日計發。日工資為月工資的1/30(二月份同)。工資的70%以內可按月兌換外匯,受聘方應當按照《中華人民共和國個人所得稅法》依法交納個人所得稅。
2、間接報酬聘方將保障受聘方在華生活的基本條件:
(1)提供附設家具、臥具、電話、電視機,電冰箱。衛生間、取暖和降溫設備的住房。(對聘期在半年(一學期)以上的受聘方提供的住房須配有廚房。)
(2)提供公費醫療(聘方應支付受聘方的全部醫療費用。就目前在華工作的外國文教專家的工資水平和我國涉外醫院對外國人的醫療價格,尚不具備讓他們自己負擔一部分醫療費用的條件)。受聘方須在聘方指定的涉外醫院就醫,在非指定醫院就醫費用自理。受聘方的掛號、就醫交通、鑲牙、整容、保健按摩.配眼鏡。住院用餐和服用非醫療性的滋補藥品以及醫生出診等費用自理。
(3)為工作地點和住所相距較遠的受聘方提供上下班交通,或給予適當的交通補貼。
(4)國際機票(中國至受聘方國家最近距離經濟艙國際機票)
(5)行李運輸費(如果空運,應以24公斤行李分離運輸價格計價.不要以隨機運輸價格計價。也可按國際機票費的1/5人民幣[大致等于24公斤行李分離運輸費]支付受聘方。因中美航線規定可免費承運兩大件64公斤,所以,對來自美國的受聘方可不負擔其行李運輸費。)
三、工作時間和休息休假
1、受聘方每日工作時間為八小時,每周工作時間為五天。
2、聘方安排受聘方延長工作時間,將依據法定標準支付高于正常工作時間的工資報酬。
3、受聘方享受中國下列節日休假:
元旦、春節、國際勞動節、國慶節以及法律、法規規定的其他節假日。
4、受聘方可按其國籍和信仰相應享受下列節日休假:
圣誕節兩天;宰牲節(古爾邦節)三天;開齋節一天、潑水節一天。
5、受聘方可享受帶薪年休假。受聘方合同期為一年的,享受帶薪休假四周。受聘方在教育機構工作,合同期為一學年的,享受所在教育機構的一個假期(寒假或暑假)帶薪休假。
6、受聘方連續在華工作一般不得超過五年,再次應聘來華工作須在兩年以后。
四、病假和事假
1、受聘方請病假,須憑聘方指定的涉外醫生證明,受聘方在一個合同期(一年或一學年)內,累計病假不滿三十天,工資按照100%發給;超過三十天后,聘方有權解除聘用合同;若未解除合同,工資將按70%發給,直至恢復正常工作為止。
2、在合同期內受聘方因公在中國境內出差,在當地政府指定的涉外醫院就診的醫療費用,由聘方支付;因私外出就診的醫療費用自理。在合同期內,聘方在臺灣、香港、澳門地區和中國境外就診的醫療費用自理。
3、受聘方請事假須經聘方同意,聘方將按日扣發工資,在合同期(一年或一學年)內,事假累計不得超過十天,連續事假不得超過三天:超過一天,將扣發兩天工資。
4、未經聘方同意而擅離職守的,曠職一天,扣發三天工資,情節嚴重的,聘方有權解除合同,并追究受聘方的違約責任。
五、合同試用期和信譽保證金
1、受聘方的試用期為60天,在試用期內,聘方如發現受聘方健康狀況或專業水平等不能勝任本聘用合同規定的工作任務,有權解除合同。
2、受聘方屬自薦或他人介紹而應聘的,應在來華前交納一定數額(600-900美元.聘方也可自行確定)的信譽保證金以證明自己確有誠意應聘,聘方收到錢款后辦理受聘方來華手續。聘期結束后聘方將如數退還本人。
3、聘方提供受聘方來華國際機票的,可由受聘方自購機票{以旅費作信譽保證金},合同期滿前予以報銷。
六、(當事人雙方認為標準聘用合同中沒有涵蓋的其他事項。)
七、聘用合同附件各項條款的確定和變更均須由當事人雙方協商,并以書面形式做出約定,任何口頭協議均視為無效。
篇5
一、 合同期自________________ 年 _________ 月 _________ 日起至 _______________ 年 ___________ 月 __________ 日止。
二、 受聘方的工作任務(另附件):
三、 受聘方的月薪為人民幣 ________________ 元,其中_______%可按月兌換外匯。
四、聘方的義務:
1、向受聘方介紹中國的有關法律、法規和聘方有關工作制度以及有關外國專家的管理規定。
2、對受聘方的工作進行指導、檢查和評估。
3、向受聘方提供必要的工作的條件和居住的條件。
4、配備合作共事人員。
5、按時支付受聘方的報酬。
五、受聘方的義務:
1、遵守中國的法律、法規,不干預中國的內部事務。
2、遵守聘方的工作制度和有關外國專家的管理規定,接受聘方的工作安排、業務指導、檢查和評估。未經聘方同意,不得兼任與聘方無關的其他勞務。
3、按期完成工作任務, 保證工作質量。
4、尊重中國的宗教政策。不從事與專家身份不符的活動。
5、尊重中國人民的道德規范和風俗習慣。
六、合同的變更、解除和終止:
1、雙方應信守合同,未經雙方一致同意,任何一方不得擅自更改、解除和終止合同。
2、經當事人雙方協商同意后,可以變更、解除和終止合同。在未達成一致意見前,仍應當嚴格履行合同。
3、聘方在下述條件下,有權以書面形式通知受聘方解除合同:
(1)受聘方不履行合同或者履行合同義務不符合約定條件,經聘方指出后,仍不改正的;
(2)根據醫生的診斷,受聘方在病假連續30天后不能恢復正常工作的。
4、受聘方在下述情況下,有權以書面形式通知聘方解除合同:
(1)聘方未按合同約定提供受聘方的工作條件;
(2)聘方未按時支付受聘方報酬。
七、違約金:
當事人一方不履行合同或者履行合同義務不符合約定條件,即違反合同時,應向另一方支付500~2000美元(或相當數額的人民幣)的違約金。
受聘方因不可抗力事件要求解除合同,需出具有關機構證明,經聘方同意后,離華的費用自理;受聘方若無故解除合同,除離華費用自理外,還應當向聘方支付違約金。聘方因不可抗力事件要求解除合同,經受聘方同意后,離華的費用聘方負擔;聘方若無故解除合同,除負擔受聘方離華費用外,還應當向受聘方支付違約金。
八、本合同附件為合同不可分割的一部分,與合同具有同等效力。
九、本合同自雙方簽字之日起生效,合同期滿即自行失效。當事人一方要求簽定新合同,必須在本合同期滿90天前向另一方提出,經雙方協商同意后簽定新合同。
受聘方合同期滿后,在華逗留期間的一切費用自理。
十、仲裁
當事人雙方發生合同糾紛時,盡可能通過協商或者調解解決。若協商、調解無效,可向國家外國專家局設立的外國文教專家事務仲裁機構申請仲裁。
本合同于年月日在
篇6
1.總則
2.注冊資本
3.批準及注冊
4.資本轉讓
5.董事會
6.總經理、副總經理
7.場地使用費
8.技術合作
9.采購及銷售
10.利潤
11.財務會計
12.外匯收支
13.稅務
14.職工錄用和獎勵
15.工資標準和獎勵
16.合營期限
17.其他事項
18.仲裁
19.合同文本
20.法定地址、文件通知
_________、_________和_________、_________、_________,根據《中華人民共和國中外合資經營企業法》(以下簡稱《合資法》)以及《實施條例》規定,按照平等互利的原則,在中華人民共和國_________市建立合營企業。從事生產反射器、注塑模具及其他資料制品,供出口和在中華人民共和國境內銷售,經多次商談,一致同意訂立本合同。
第一章 總則
1.本合同的各方為:
_________、_________為一方(以下簡稱甲方),由_________代表甲方對本合同負責。
_________、_________、_________為一方(以下簡稱乙方),由_________代表乙方對本合同負責。
本合同由甲、乙雙方授權的代表簽訂。
2.雙方同意成立的合營企業定名為:_________(以下簡稱“合營企業”)
中 文:_________
英 文:_________
地 址:_________
3.雙方根據平等互利的原則,為了有利發展中國國民經濟,而從事反射器;注塑模具、以及其他塑料制品的設計、生產和內外銷售。
合營企業將盡力在中華人民共和國境內采購原材料及包裝材料,如遇無貨供應或質量、價格不符合要求時,也可由合營企業進口解決。
4.雙方本著長期真誠合作的愿望,在產品質量、規格品種、包裝裝璜及經濟效益等方面力求達到國際同類產品的先進水平。
合營企業的初期生產規模為:年產_________套符合_________國_________標準的_________反射器,接受訂單生產年產值為_________元的注塑模具。乙方負責_________反射器的返銷,保證投產后的前_________年使合營企業的外匯收支達到自身平衡。且_________年后返銷比例不低于_________%,乙方負責為合營企業每年從中國境外承接不少于_________元產值的注塑模具訂單。合營企業產品的內銷由甲方負責。
5.合營企業為中華人民共和國的法人,必須遵守中華人民共和國有關的法律、法令、條例和規則,并受中華人民共和國法律的管轄和保護。
第二章 注冊資本
6.合營企業為有限責任公司,各方的經濟責任以注冊資本為限,并按資本比例分配利潤,分擔風險及虧損。
7.合營企業總投資為_________美元。注資本總額為_________美元,其中甲方占資本額的_________%,乙方占資本額的_________%。
8.甲、乙方出資如下:
甲方:_________美元,其中:
(1)機器設備,價值約_________美元;
(2)廠房,價值約_________美元;
(3)現金,相當于_________美元的人民幣現金。
乙方:_________美元外匯現金。
第三章 批準及注冊
9.本合同應由_________市批準,自批準之日起生效。并送交中華人民共和國對外經濟貿易部備案。
10.合營企業接到上述批準證書后,應向工商行政管理局辦理注冊登記、領取營業執照。在合營企業取得營業執照后,甲、乙雙方將根據工程進度需要,分別繳付資金,每期各方須繳付數額由董事會決定。
各方繳資后,由合營企業發給投資證明書。
第四章 資本轉讓
11.注冊資本轉讓時合營者擁有先買權,未經合營者同意,不得轉讓或抵押給他。但當一方提出轉讓時,合營者應在_________個月內給予答復,否則作為放棄先買權論。
12.轉讓注冊資本的價格,應根據合營企業中該方投資的帳面價值,由合營雙方本著公平合理的原則協商解決。
13.注冊資本轉讓時,應_________個月內向原審批機構申請批準。并向中華人民共和國對外經濟貿易部備案,批準后再向工商行政管理局辦理變更注冊手續。
第五章 董事會
14.合營企業領到營業執照之日,即為合營企業董事會成立之日,董事會人數為_________人,其中甲方_________人,乙方_________人,董事人選由雙方各自委派和調換、董事長由甲方委任,副董事長二人,由甲方委派一人,乙方委派一人擔任。
15.董事會是合營企業的最高權力機構,其職權在合營企業章程內規定,董事長是合營企業的法定代表,董事長不能履行職責時,應授權副董事長或其他董事代表合營企業。
16.董事會會議每年至少召開一次,由董事長召集并主持。董事會會議應由_________分之_________以上董事出席才能舉行。董事不能出席時,可出具委托書,委托他人代表其出席和表決。董事會的決議應由出席董事或其代表一致同意才能通過。董事會會議一般在合營企業的法定地址舉行,也可以在董事會同意的其他地點舉行,合營企業不負擔出席董事會會議的旅費。董事會會議期間的膳宿由合營企業安排并支付費用。
17.董事不從合營企業支付薪金,他們的酬勞將在合營企業的全年凈利中提取一定比率(比率由董事會議定)作為董事會的分紅。并按下列比例分配:
董事長_________%
副董事長各_________%
董事各_________%
第六章 總經理 副總經理
18.合營企業設總經理一人,副總經理三人,均由甲方提名,董事會聘任,負責執行董事會會議的各項決議,組織領導合資企業的日常經營管理工作。在董事會授權范圍內,總經理對外代表合營企業。對內任免下屬人員,并行使董事會授予的其他職權。
19.合營企業的重要文件由總經理簽署后生效。
20.若總經理或副總經理未能適當履行職務時,董事會有權解聘或降職。
第七章 場地使用費
21.合營企業使用的土地是中國政府的資產,合營企業須向政府交付適當的土地使用費,合營企業與所在地土地主管部門簽訂的租用土地使用權協議,應為本合同不可分割的一部分。
22.最初_________年的土地使用費,定為每年每平方米人民幣_________元,其后,土地使用費可按市政建設發展的情況而調整。
第八章 技術合作
23.合營企業與_________簽訂的技術轉讓協議,作為本合同不可分割的一部分,其有效期與本合同相同。
24.合營企業根據技術轉讓協議,向_________支付技術轉讓費_________美元,技術轉讓內容及技術轉讓費的支付辦法,在技術轉讓協議中另行規定。
第九章 采購及銷售
25.合營企業與乙方簽訂的采購與銷售協議,作為本合同不可分割的一部分,其有效期與本合同相同。
26.合營企業所需的原材料應盡先在國內購買。對無法供應的品種或質量、價格不符合合營企業要求時,可由合營企業從國外進口。
27.根據雙方簽訂的采購與銷售協議,合營企業在中國國內銷售的產品,在由甲方負責通過其銷售部門銷售。合營企業的出口產品,由乙方負責在中國國外銷售,具體辦法在采購與銷售協議中另行規定。
第十章 利潤
28.合營企業所獲得的全部利潤,按《中華人民共和國中外合資經營企業所得稅法》規定繳納所得稅后,按下列百分比提取:儲備基金_________%;企業發展基金_________%;職工獎勵及福利基金_________%。
繳稅與提取上述三項基金后的凈利潤,每年根據合營雙方的出資比例進行分配。
29.對于乙方分得的利潤,應根據合營企業的外匯結余情況,在不影響正常生產的原則下,此利潤可根據董事會的決定分一次或幾次支付,以前年度的虧損未彌補前不得分配利潤,以前年度未分配的利潤,可并入本年度利潤分配。
第十一章 財務會計
30.合營企業應執行中華人民共和國有關中外合營企業的財務會計規定,必須建立完整、嚴格的財務制度。
31.合營企業的一切單據、帳簿、報表均使用中文記載,同時應用英文定期編制財務報表。合營企業董事會聘請的在中國注冊的會計師有權查閱合營企業的一切單據、帳簿、報表,并直接向董事會提出報告。
32.合營企業以人民幣為記帳單位,人民幣與其他貨幣間的換算,按同時期中華人民共和國外匯管理局_________分局匯率牌價結算。
33.合營企業的固定資產,按《中華人民共和國中外合資經營企業所得稅法施行細則》的規定,由董事會決定其折舊年限。
34.合營企業應在中國銀行_________分行分別開立外匯帳戶和人民幣帳戶,并接受開戶銀行對外匯支出的監督。
35.合營企業在經營過程中遇流動資金不足時,總經理可根據董事會規定的權限,向中國銀行或國外銀行借款,但不得移作它用或彌補虧損。
36.合營企業的財政會計年度,從每年一月一日起至十二月三十一日止。
第十二章 外匯收支
37.合營企業的一切外匯事宜,必須按《中華人民共和國外匯管理暫行條例》和有關管理辦法的規定辦理。
38.合營企業的外匯收支必須做到:
(1)保證合營企業的每年外匯收入大于支出。
(2)外匯結算人民幣時,應按照當時規定的牌價辦理。
(3)合營企業在中國境內支付費用、貨款、勞動報酬等,除根據有關規定支付外匯者外,一律以人民幣結算。
39.根據《合資法》的規定,下列外匯可以匯出:
(1)乙方分得的利潤及技術轉讓費。
(2)乙方資本轉讓后所得的資金。
(3)合同期滿或合同期滿前應清償給乙方的資金。
(4)用于進口原料、設備、備件所需的外匯,以及派往國外人員的旅差費。
(5)其他按有關規定可以匯出的開支。
第十三章 稅務
40.合營企業按照中國的有關法律和條例規定繳納各項稅金。
41.合營企業職工按照《中華人民共和國個人所得稅法》規定繳納個人所得稅。
第十四章 職工錄用和辭退
42.合營企業所需職工,由甲方或中國勞動管理部門采用公開招聘方式,經考試擇優錄取后,簽訂勞動合同。
43.如因生產技術等變化,職工確有多余,或經培訓后仍不能適應要求,也無法改調其他工種時,合營企業可按勞動合同解雇并給補償。
44.合營企業應制訂規章制度和職工守則,對違反者分別予以警告、記過、扣薪直至開除處分。
第十五章 工資標準和獎勵
45.合營企業職工工資目前按平均月薪_________元人民幣計算,其中包括合營企業向中國政府指定的部門繳納國家對職工的各種保險費、補貼費和福利措施費等。隨著合營企業生產發展,職工工資應逐步增加。今后中國政府對工資、福利、補貼等有新的規定時,合營企業應據此相應調整。
46._________方高級職員工資、社會保險、旅差費標準參照_________方國家或地方標準,由董事會核定。_________方高級職員原則上與_________方高級職員同工同酬。
47.按照合營企業的經營結果,年終從獎勵和福利基金中提出一定數目的基金,獎給工作好的職工,對于在技術上、生產上或管理上有特殊貢獻者,由董事會決定給予特殊獎勵。
第十六章 合營期限
48.合營雙方同意,合營企業的期限為_________年。自營業執照簽發之日起算,期滿前一年經一方提出,其他方同意可以延長,延長期限由雙方協商決定,并在期滿前六個月向原審批機構辦理延長報批手續。
49.在發生下列情況之一時,可以提前終止合同:
(1)在一個適當的開始期后,合營企業因嚴重虧損而不能繼續營業;
(2)由于一方不履行合同或章程規定的義務,致使合營企業無法繼續營業;
(3)由于不可抗力的事件,如嚴重自然災害或戰爭等,致使合營企業無法繼續營業;
(4)不能達到預期的目標并看不到發展的前景。
提前終止合同必須經董事會召開特別會議作出決議,報請原審批機構批準。
50.合同期滿或提前終止時,董事會應組成清算小組負責清理。董事會在清算完畢后才能解散。清算辦法按照《合資法》的《實施條例》第103—105條所規定的清算程序和手續辦理。同時董事會應向原審批機構及工商行政管理局辦理注銷手續,繳回營業執照。清算后應還給各方的財產,必須按照各方在合營企業的投資比例計算。
第十七章 其他事項
51.合營雙方履行下列事項:
_________方:
(1)負責向政府申請批準,并向工商行政管理局辦理注冊登記。
(2)負責將廠房及租用的場地等,交給合營企業使用。
(3)負責招聘職員職工。
(4)負責合營企業的產品及原材料國內運輸。
(5)負責辦理保證提供水、電、煤氣、燃料、電話、電報掛號及電傳的工作。
(6)負責辦理乙方人員的簽證及其辦公、交通、生產等安排。
(7)負責向所在地的環境衛生管理部門申請許可證。
_________方:
(1)負責按期提供所需的全部機器設備。儀器、原材料、技術資料和文件及原料、產品的國外運輸。
(2)負責提供建廠規劃,并負責設備安裝、試車、試生產的全面技術指導。
(3)負責按照生產的需要,對職工進行技術培訓。
(4)負責提供有關合營企業產品在國外市場上銷售趨勢的報告的技術資料。
(5)按照雙方簽訂的《技術轉讓協議》,提供技術和設計,如有任何關于侵犯第三者權益的爭議時,由簽訂該協議的轉讓方負責,_________方將不分擔任何法律責任。
(6)負責_________方人員到_________方國內學習、培訓的安排。
第十八章 仲裁
52.合營各方如在解釋或履行本合同及其附件發生爭議時,應首先在董事會內本著互相信賴、平等互利的精神進行協商,求得解決。若不能解決時,可以邀請雙方同意的第三者進行調解。
53.調解不成時,則申請仲裁解決。仲裁在中國國際貿易促進委員會對外經濟貿易仲裁委員會進行。按該會《對外貿易仲裁委員會仲裁程序暫行規則》辦理。費用由敗訴方承擔;仲裁機構的裁決是終局的,對各方都有約束力。
54.在解決爭議期間。除爭議事項外,合營各方應繼續履行合營企業合同、章程所規定的其他各項條款。
第十九章 合同文本
55.本合同和附屬協議的修改。須經董事會協商同意,經各方授權代表簽署書面文件,并報原審批機構批準。
56.本合同用中文和英文寫成,均為正式文本。具有同等效力。本合同所有附件,均為本合同不可分割的部分。
第二十章 法定地址、文件通知
57.合營各方的法定地址:
甲 方:_________
乙 方:_________
58.合營各方發送通知的辦法,如用電報、電傳通知時,凡涉及各方權利、義務的,應隨之以書面信件通知。
合同各方的法定地址即為各方的收件地址。
59.本合同于_________年_________月_________日由甲、乙雙方的授權代表在中國簽字。
甲方(蓋章):_________
乙方(蓋章):_________
法定代表或授權代表(簽字):_________ 法定代表或授權代表(簽字):_________
_________年____月____日
_________年____月____日
篇7
聘用合同須以書面形式確定,任何口頭協議都將視為無效。
2.簽訂合同
合同簽署時間應在外教來華前,已在華的應在入職之前;
出于綜合考慮,我們建議如果受聘外教在國外,應在受聘外教來華前簽訂正式合同。
如果受聘外教在我國境內, 應該在受聘外教到職前簽訂正式合同。
3.簽訂人
簽署人應為法人代表或法人代表所授權的人。被授權者應有授權書,其他人簽字的合同均視為無效合同。
4.合同期限
合同期以一年為宜,但連續在華合同期總計不宜超過五年。
篇8
師),雙方本著友好合作的精神,簽訂本合同。
第一條聘期為__年(學校可按學期、學年定),自__年__月__日到
職之日起,至__年__月__日離聘之日止。
第二條受聘方的工作任務,商定如下:
__________________________________
受聘方應按時、按質完成以上工作任務。聘方應為受聘方提供必要的工作生活
條件。受聘方在工作中提出的合理化建議,聘方應予采納。雙方應積極合作。
第三條中國政府法定的工作日為:每周六天,每天八小時(教師按周課時填
寫)。
第四條聘方每月付給受聘方工資人民幣____元,并按附件規定提供各項
生活待遇。
第五條受聘方應遵守中國政府的法律、法令、有關規定和聘方的工作制度。
第六條雙方均不得無故提前終止合同。受聘方如中斷合同,必須在離華前一
個月向聘方提出書面申請,未經聘方同意,受聘方仍應照常進行工作。聘方自同意
之日起的兩周后,停發工資,并停止提供受聘方及其家屬的有關生活待遇,回國的
一切費用自理。
受聘方違犯中國政府法令,聘方有權提出解聘。自提出解聘之日起一個月內工
資照發,但受聘方應在此期間內安排回國。聘方負擔受聘方及其家屬在中國境內的
旅費,國際旅費自理。
對瀆職的受聘方,聘方有權提出解聘,自提出解聘之日起一個月內,安排受聘
方回國。受聘方及其家屬回國的旅費,由聘方支付,其它一切費用自理。
第七條受聘方因健康原因,經醫生證明連續病休兩個月后仍不能繼續工作,
聘方有權提出提前終止合同,并根據受聘方的健康狀況,于一個月內安排其回國。
聘方提供受聘方及其家屬回國的飛機票和負擔按規定限量的行李托運費。
第八條本合同自聘期開始之日起生效。任何一方如要求延長聘期,均應在合
同期滿前三個月向對方提出,由雙方協商確定,并另簽延聘合同。延聘合同系本合
同不可分割的組成部分。本合同的各項條款在延聘期內繼續有效。雙方均未提出延
長聘期或一方不同意延長聘期時,本合同期滿即失效。
第九條本合同在執行中如有爭議,由雙方協商解決。
第十條本合同用中文和____文(外文略)寫成,兩種文本具有同等效力。
聘方____(蓋章)
篇9
MSP430作為電子標簽主控芯片,超低功耗設計;設計了無線閱讀器和無線智能電子標簽通信系統,所設計的車輛無線閱讀識別系統采用韋根、485協議與數據采集主板相連接,兼容所有傳統停車場;可實現遠距離自動讀取車輛信息并進行不停車收費。
關鍵詞:紅外;射頻;STC10F08XE;MSP430;不停車收費
1 概述
隨著社會經濟的飛速發展,人們生活水平大大提高,汽車尤其是私家車越來越多地走進百姓家里。據工業化和信息化部統計,2010年全國共生產汽車1826萬輛,銷售1806萬輛,儼然我國已經成為了一個汽車消費大國。但隨之而來的是在停車場進出時會出現嚴重的堵塞現象。為了提高人們的生活質量以及出行安全,現代的停車場管理系統有必要引入智能化、網絡化的控制,即具有遠距離讀卡功能的不停車收費管理系統[1]。
文章首先對停車場讀卡系統的各模塊進行選型分析,得出適合小區停車場管理系統的最佳方案。因此文章主要考慮對現有停車場管理系統進行優化。通過對比現有停車場,定量分析電子標簽的功耗情況以及實際測量讀卡角度、距離等參數,從而提出一種低功耗、遠距離,兼容性好的停車場管理系統方案。
2 系統方案設計
一個完整的停車場遠距離讀卡系統主要包括一個閱讀器和一個電子標簽(即用戶使用的卡片),然后在兩者之間使用某種無線通信技術進行數據通信,進而實現遠距離讀卡的功能[2]。
目前市場上的遠距離讀卡系統主要包括超聲波讀卡和2.4G藍牙讀卡,兩種方案都各有優缺點,而本系統結合現在小區停車場的實際需求,自主引入一種紅外觸發機制來實現電子標簽的低功耗和方向性,通信距離雖然較另外兩種較短,但完全滿足現實需求,即成本較低、無輻射的紅外射頻讀卡設計方案。詳細對比如表1所示。
閱讀器通過一組紅外發射管在停車場出入口形成一個紅外檢測區域,電子標簽放在汽車里面,在平常處于睡眠狀態,當汽車進入到紅外檢測區域時,電子標簽通過一個紅外接收管接收紅外觸發信號,若觸發信號正確,則電子標簽會被喚醒[3],然后利用射頻發射電路將車主的信息發送給閱讀器,閱讀器通過射頻接收模塊接收數據并對數據進行解碼,最后通過韋根或485上傳給管理系統。
3 硬件設計
根據上述的停車場方案,設計出硬件系統框圖如圖1所示。
3.1 閱讀器設計
3.1.1 閱讀器主控芯片
由于本系統是放置在露天環境中,各種干擾較多,需保證系統的抗干擾能力和穩定性;而且本設計方案所需資源至少為2個定時器、紅外數據IO口、射頻數據IO口以及3中通訊協議IO口,故采用STC10F08XE作為微處理器,其硬件資源豐富,機器周期為1T,是新一代的8051單片機,指令代碼完全兼容傳統8051,但是速度快8至12倍。
篇10
[關鍵詞]水蛭;炮制;仿生提取;抗凝活性
[Abstract]In order to determine the scientificalness of traditionally processed Whitmania pigra, water extraction method and bionic extraction method were used respectively to extract the anticoagulating active components in W pigra hanging dry products, talcum powder fried products and wine immersingbaked products Activated partial thromboplastin time (APTT), prothrombin time (PT), thrombin time (TT), and antithrombin activity were selected as the activity indexes to evaluate the anticoagulant activities of different processed W pigra Then the contents of protein in different processed W pigra were measured by Coomassie brilliant blue method to preliminarily explain the reason of anticoagulant activity changes When water extraction method was used, the results of APTT, PT, TT and antithrombin activity showed that the anticoagulant activities of W pigra were decreased both in talcum powder fried products and wine immersingbaked products, and the activity order was as follows: hanging dried products> wine immersingbaked products>talcum powder fried products This order was same as the protein content order While when bionic extraction was used, APTT was shortened in talcum powder fried products, but all the other results indicated the anticoagulant activities of W pigra processed products were increased, and the activity order was as follows: wine immersingbaked products>talcum powder fried products>hanging dry products As compared with water extraction, the bionic extraction was more similar to the absorption process of W pigra in human digestive system after oral administration and was more scientific Therefore, the traditional processing method can not only modify the taste and smell, but also enhance the anticoagulant activity of W pigra
[Key words]Whitmania pigra; processing; bionic extraction; anticoagulant activity
doi:10.4268/cjcmm20161013
水蛭是一味傳統的動物類中藥,具有明顯的抗凝血作用,近年來廣泛用于心腦血管疾病的治療。《中國藥典》2015年版(一部)收錄了3種水蛭,分別為水蛭科動物螞蟥,即寬體金線蛭Whitmania pigra Whitman、水蛭Hirudo nipponica Whitman和柳葉螞蟥W. acranulata Whitman[1]。調查顯示,臨床使用的水蛭95%以上為寬體金線蛭[2]。其常用的處理方法為清水吊干,炮制方法為滑石粉燙制、酒浸悶烘(酒炙)等,其中《中國藥典》2015年版(一部)收錄的炮制方法為滑石粉燙制[1]。目前研究表明,炮制使水蛭的抗凝活性降低[35],可能基于此原因,臨床應用中多選用其清水吊干品,少數選用滑石粉燙制品。在現有的研究水蛭炮制品抗凝活性的報道中,研究者所采用的提取方法大多為水提取法。而水蛭的抗凝活性成分為蛋白類物質[69],口服后需經胃腸道消化降解入血發揮作用,因此水提取所得活性成分與水蛭在體內發揮作用的物質可能完全不同。本實驗模擬蛋白質在體內代謝的真實過程,以蛋白質在胃腸內消化吸收的實際時間和生理環境對水蛭及其炮制品進行仿生酶解提取,針對不同的凝血途徑,選取活化部分凝血酶時間(APTT)、凝血酶原時間(PT)、凝血酶時間(TT)和抗凝血酶活性作為指標測定其體外抗凝活性,同時與水提取法進行對比,最后采用考馬斯亮藍法測定各提取物的蛋白含量,綜合評價不同炮制方法對水蛭抗凝活性的影響,為水蛭炮制提供科學依據。
1材料
DF101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(河南省予華儀器有限公司);梅特勒托利多FE20實驗室pH計(梅特勒托利多儀器上海有限公司);LGPABER型血小板聚集凝血因子分析儀(北京世帝科學儀器公司);TU1901雙光束紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)。
水蛭,市售,清水吊干品,經北京中醫藥大學中藥學院鑒定系楊瑤B教授鑒定為寬體金線蛭W pigra;滑石粉,市售;黃酒,市售,古越龍山牌紹興黃酒五年陳(浙江古越龍山紹興酒股份有限公司)。胃蛋白酶(1∶1萬,北京拜爾迪生物技術有限公司);胰蛋白酶(1∶250,北京拜爾迪生物技術有限公司);APTT,PT,TT試劑盒(上海太陽生物技術有限公司);牛血清白蛋白(BSA,SigmaAldrich);考馬斯亮藍G250(北京拜爾迪生物技術有限公司);凝血酶(SigmaAldrich);纖維蛋白原(來源于牛血漿,北京拜爾迪生物技術有限公司);95%乙醇、85%磷酸、濃鹽酸、氫氧化鈉、三羥甲基氨基甲烷(Tris)等為分析純試劑;實驗用水為去離子水。
健康日本大耳白兔(雄性),質量約2 kg,符合國家健康一級動物標準,動物許可證號為SCXK(京)20150005。
2方法
21水蛭的炮制
211清水吊干品凈制取水蛭清水吊干品,洗凈,切段,冷凍干燥24 h后,打粉,過3號篩,得清水吊干品粗粉,-20 ℃密封保存。
212滑石粉燙制將滑石粉置鍋內,武火炒至靈活狀態時后,加入水蛭的清水吊干品適量,不斷翻動,燙至微鼓起時取出,篩去滑石粉,放涼[1],去離子水快速沖洗去除殘存的滑石粉,冷凍干燥24 h后,打粉,過3號篩,得滑石粉燙制品粗粉,-20 ℃密封保存。
213酒浸悶烘取水蛭清水吊干品稱重,切段,加黃酒,水蛭黃酒10∶1,拌勻至酒吸盡,悶透,放入40 ℃烘箱中干燥至微變色,質酥脆時取出[1011],冷凍干燥24 h后,打粉,過3號篩,得酒浸悶烘品粗粉,-20 ℃密封保存。
22水蛭及其炮制品活性成分的提取
221水提取法稱取水蛭及其炮制品粗粉各150 g,分別加入10 mL去離子水(抗凝血酶活性測定實驗中:取各炮制品粗粉100 g加入5 mL去離子水,其余操作相同),室溫下磁力攪拌5 h,15 000 r?min-1離心20 min,取上清液,備用。
222仿生提取法取10 mL人工胃液(人工胃液:9 mL濃HCl,加水定容至1 000 mL),加入胃蛋白酶(酶底比125%[12]),攪拌均勻后分別加入水蛭或其炮制品粗粉150 g(抗凝血酶活性測定實驗中:取各炮制品粗粉100 g加入5 mL人工胃液,其余操作相同),37 ℃磁力攪拌3 h(蛋白質在胃內的消化吸收時間);用pH 1300的NaOH溶液將反應液pH調至胰蛋白酶生理條件(pH 680),加入胰蛋白酶(酶底比75%[12]),37 ℃磁力攪拌2 h(蛋白質在小腸內的消化吸收時間);將反應樣品取出,置于85 ℃的水浴中滅活15 min,自然冷卻至室溫;以15 000 r?min-1離心20 min,取上清液,備用。
23抗凝活性測定
231血漿制備將健康兔耳緣靜脈注射烏拉坦麻醉后,頸動脈取血,與質量濃度為38%的枸櫞酸鈉抗凝劑(9∶1)混勻后以4 000 r?min-1離心15 min,分離出貧血小板血漿(PPP)。
232APTT測定取PPP 50 μL于測試杯中,分別加入水蛭各樣品提取液50 μL,APTT試劑50 μL,測試珠1粒,37 ℃孵育5 min后,立即取出加入37 ℃預溫的0025 mol?L-1的CaCl2溶液50 μL,記錄凝固時間,同時以試劑空白為參比記錄其APTT(其中水提樣品以水為空白參比,仿生提取樣品以空白酶解液為空白參比。空白酶解液按22項下仿生提取法所述,除不加水蛭粗粉外,其余操作相同)。
233PT測定取PPP 50 μL于測試杯中,分別加入水蛭各樣品溶液50 μL,測試珠1粒,37 ℃孵育3 min后,立即取出加入37 ℃預溫的PT試劑100 μL,記錄凝固時間,同時以試劑空白為參比記錄其PT。
234TT測定取PPP 50 μL于測試杯中,分別加入水蛭各樣品溶液50 μL,測試珠1粒,37 ℃孵育5 min后,立即取出加入37 ℃預溫的TT試劑50 μL,記錄凝固時間,同時以試劑空白為參比記錄其TT。
24抗凝血酶活性測定[1]
241三羥甲基氨基甲烷鹽酸(TrisHCl)緩沖液的配制取02 mol?L-1三羥甲基氨基甲烷溶液25 mL與01 mol?L-1HCl溶液40 mL,加水定容至100 mL,調節pH 740。
242抗凝血酶活性測定取樣品上清液100 μL,置試管中,加入含纖維蛋白原05%的TrisHCl緩沖液(臨用配制)200 μL,搖勻,置37 ℃水浴中溫浸5 min,滴加10 U?mL-1的凝血酶溶液(每4 min滴加1次,每次2 μL,邊滴加邊輕輕搖勻)至凝固,記錄消耗凝血酶溶液的體積,并計算抗凝血酶活性。
25蛋白質含量的測定
251BSA標準溶液的制備精密稱取1000 mg牛血清白蛋白(BSA),加水定容至10 mL,搖勻,即得質量濃度為10 g?L-1的BSA母液,備用。
252考馬斯亮藍溶液的制備精密稱取1000 mg考馬斯亮藍G250,加入95%乙醇5 mL溶解,再加入85%磷酸10 mL,加水定容至100 mL,搖勻,過濾,得質量濃度為010 g?L-1的考馬斯亮藍溶液,備用。
253牛血清白蛋白標準曲線的制作取BSA母液,用水稀釋成一系列質量濃度(005,01,02,04,06,08,10 g?L-1),取不同濃度的BSA標準液各50 μL,分別加入4 mL考馬斯亮藍溶液,搖勻,避光反應5 min后立即取出,選取595 nm,測吸光度(空白對照:50 μL水加4 mL考馬斯亮藍溶液,搖勻后避光保存5 min,測吸光度)。
254水蛭不同炮制品的蛋白含量測定將水蛭各水提取樣品與各仿生提取樣品均稀釋20倍,各取50 μL,分別加入4 mL考馬斯亮藍溶液,搖勻,避光反應5 min后立即取出,選取595 nm,測吸光度。水提取法以水為空白對照(50 μL水加4 mL考馬斯亮藍溶液),仿生提取法以空白酶解液(按22項下仿生提取法操作,除不加水蛭粗粉外,其余操作相同)為空白對照(50 μL空白酶解液加4 mL考馬斯亮藍溶液)。
3結果
31APTT測定
測定水蛭及其炮制品水提物及仿生提取物的APTT,結果見表1。
無論采用水提法還是仿生提取法,與空白組相比,不同炮制品均有顯著的抗凝效果,但是炮制前后抗凝活性對比時,不同提取方法顯現出明顯的差異。
APTT所反映的內源性凝血途徑中,水提取法結果顯示,2種炮制品較清水吊干品APTT均縮短,表示炮制降低了清水吊干品的抗凝活性。仿生提取法結果顯示,滑石粉燙制品較清水吊干品APTT縮短,表示滑石粉燙制使清水吊干品的抗凝活性降低;酒浸悶烘品較清水吊干品APTT延長,表示酒浸悶烘使清水吊干品的抗凝活性升高。
32PT測定
測定水蛭及其炮制品水提物及仿生提取物的PT,結果見表2。
PT所反映的外源性凝血途徑中,水提取法結果顯示,2種炮制品相比清水吊干品PT均縮短,表示炮制降低了清水吊干品的抗凝活性。而仿生提取法結果中,2種炮制品與清水吊干品相比PT均延長,表示炮制使清水吊干品的抗凝活性升高。
33TT測定
測定水蛭及其炮制品水提物及仿生提取物的TT,結果見表3。
TT所反映的共同凝血途徑中,水提取法結果顯示,2種炮制品相比清水吊干品TT明顯縮短,表示炮制降低了清水吊干品的抗凝活性。而仿生提取法結果與水提取法結果相反,2種炮制品相比清水吊干品TT均大幅延長,表示2種炮制法均顯著提高了清水吊干品的抗凝活性,此結果與PT測定結果一致。
34抗凝血酶活性測定
記錄各樣品消耗凝血酶體積,并計算抗凝血酶活性,結果見表4。
水提取法結果顯示,滑石粉燙制后抗凝活性降低,酒浸悶烘品與清水吊干品抗凝血酶活性相同。而仿生提取法結果顯示,2種炮制品相比清水吊干品抗凝血酶活性顯著提升,表示2種炮制法均提高了水蛭的抗凝活性,且酒浸悶烘優于滑石粉燙制。凝血酶滴定法測定抗凝血酶活性反映了凝血酶催化下纖維蛋白原向纖維蛋白轉化的過程,與TT反映的作用途徑類似,因此活性順序與TT測定結果基本一致。但此法測定過程中每次加入的凝血酶體積為2 μL,因此靈敏度不夠,在水提法中不足以反映清水吊干品和酒浸悶烘品的差異。
35蛋白質含量測定
以BSA為對照品,采用考馬斯亮藍染色法測定水蛭及其炮制品中(稀釋20倍)蛋白質的含量,標準曲線線性回歸方程為Y=0383 93X+0046 51(R2=0998 0,n=7)。采用水提取法和仿生提取法所得水蛭及其炮制品中的蛋白質含量(以BSA計),見表5。
采用水提取法時,水蛭不同炮制品中蛋白質含量順序為清水吊干品>酒浸悶烘品>滑石粉燙制品。采用仿生提取法時,水蛭不同炮制品蛋白質含量順序為清水吊干品>酒浸悶烘品>滑石粉燙制品。
36水蛭及其不同炮制品性狀比較
實驗中發現,不同炮制方法得到的水蛭粗粉顏色,氣味及粉碎難度也有明顯不同,結果見表6。
可見,炮制使水蛭更易粉碎,同時很好地矯正了水蛭的濃烈腥味。
4討論
水蛭發揮抗凝作用的活性成分為蛋白質類物質[68],因此采用水提取法和仿生提取法所得到的成分將會產生很大的差異,這將對抗凝活性產生決定性的影響。本實驗的研究結果表明,采用2種提取方法研究炮制對水蛭抗凝活性的影響時,所得到的結果幾乎完全相反。水提取法中,APTT,PT,TT及抗凝血酶活性4種抗凝評價指標均顯示,炮制使水蛭抗凝活性明顯降低,這一結果與多數采用水提法的研究者所得到的結論相同[35]。而在仿生提取法中,采用滑石粉燙制法時,除反映內源性凝血途徑的APTT指標較炮制前縮短外,反映外源性凝血途徑的PT與反映共同凝血途徑的TT和抗凝血酶活性均較炮制前大幅增加;酒浸悶烘炮制品的4種指標均較炮制前明顯延長,明確表示水蛭經此法炮制后抗凝活性升高。
由于水蛭通常以口服形式給藥,因此采用仿生提取法所測定的抗凝活性與在人體內發揮藥效作用的過程更接近,結果也比水提取法更具科學性。對于2種提取方法所得到的抗凝活性結果相悖的情況,可能的原因分析如下。
41滑石粉燙制對水蛭抗凝活性的影響
水蛭在經滑石粉燙制過程中,高溫使蛋白質變性失活,水溶性降低[4,13]。因此采用水提取時水溶性蛋白減少,會造成抗凝活性降低。實驗中,水提取法所得樣品蛋白質含量測定結果表明,炮制后蛋白質的含量明顯降低,且蛋白質含量與抗凝活性具有直接的相關性。經過滑石粉燙制后,水蛭中蛋白質高級結構被破壞,結構變得疏松,與炮制前相比變性后的蛋白質一級結構更容易被酶解而釋放出活性肽,這與蛋白類食物加熱制熟后更易于消化吸收的現象相似,原因可能是酶解反應的存在促進了蛋白質的進一步溶解。反映外源性凝血途徑的PT、反映共同凝血途徑的TT和抗凝血酶活性均較炮制前升高;但反映內源性凝血途徑的APTT有所降低,推測作用于APTT途徑的活性物質主要是分子量較大的蛋白質,而作用于其他2種途徑的活性物質主要是相對分子質量較小的肽類成分。
此外,采用仿生提取法時,各炮制品抗凝活性順序與蛋白質含量沒有表現出相關性,原因可能是考馬斯亮藍染色法要求標準品與待測樣品結構性質相近,水提取法活性物質主要是大分子蛋白質類物質,比較適合采用該法測定;而仿生酶解法活性產物多為相對分子質量較小的肽類物質,與BSA結構性質差異較大,此法所得蛋白含量結果不能有效反映酶解產物中全部蛋白及肽類物質含量。水蛭酶解后抗凝活性增強可能是活性肽含量升高導致,而與蛋白含量沒有直接的相關性。
42酒浸悶烘對水蛭抗凝活性的影響
對于水蛭酒浸悶烘品,采用水提取法時抗凝活性也較炮制前有所降低,但活性明顯高于滑石粉燙制品。推測黃酒中的乙醇(含量約為15%)使活性蛋白變性,烘干時選取的溫度雖遠小于燙制的高溫,但在某種程度上也會導致蛋白質的變性,溫度和有機溶劑的共同影響導致水溶性降低,但其破壞程度遠小于滑石粉的高溫燙制。蛋白質含量測定結果也表明,酒浸悶烘品的蛋白含量較炮制前降低,但遠高于滑石粉燙制品。采用仿生提取法時,結果表示酒浸悶烘使水蛭抗凝活性大幅升高,可能是發揮抗凝作用最好的炮制方法,在此之前有研究者也得出過相同的結論[10]。傳統炮制認為酒制可增強藥物活血的作用,有文獻報道虎杖、丹參、大黃等經酒制后活血作用顯著提升[1516]。有研究者指出,黃酒悶水蛭一可矯味、矯臭;二可增強其破血逐瘀通經之功效;三可引藥上行,在治療腦血管疾病方面更能發揮較好的療效[14]。本實驗結果也為酒浸悶烘的炮制方法提供了理論依據。
實驗中所使用的黃酒成分復雜,為確定黃酒中的其他成分是否會對體外抗凝活性測定產生影響,將黃酒中液體成分減壓蒸干后,剩余的焦糖色素和糖類、氨基酸、維生素等加水復溶(質量濃度與提取所用相同),測定其APTT,PT,TT,其結果與水的凝血時間接近。因此,水蛭酒浸悶烘品的抗凝活性大幅提升與黃酒中這部分成分無關。此外,實驗中發現在打開酒浸悶烘品的密封包裝后,能聞到明顯的醇味,于是進一步對粗粉烘烤(70 ℃)4 h,期間不斷翻動,盡可能除去殘留的微量乙醇,但處理后仍然可以聞到輕微醇味。而醇的存在會影響凝血酶的活性,導致凝血時間延長。酒浸悶烘品在體內是否也具有最好的抗凝效果有待進一步考證。
43炮制的去腥、矯臭作用
滑石粉燙制法與酒浸悶烘法均能很好地起到去除腥味的作用。而且由于黃酒中含有糖和乙醇,去腥作用更好,酒浸悶烘品不僅沒有清水吊干品的濃烈腥味,還具有明顯的肉類香味。炮制后,水蛭的腥臭味得到了極大地改善,從而易被患者接受,因此炮制后的水蛭更適合臨床應用。
5結論
采用水提取法和仿生提取法研究水蛭不同炮制品的抗凝活性結果幾乎完全相反,水提取法顯示水蛭經炮制后APTT,PT,TT,抗凝血酶活性均降低。而采用仿生提取法時,滑石粉燙制后除APTT外,PT,TT,抗凝血酶活性均較炮制前顯著增加;酒浸悶烘使4個抗凝指標全部較炮制前增加。仿生提取法模擬了胃腸吸收的實際過程,其結果相比于傳統的水提取法有更高的可信度。
此外,炮制可使水蛭更易粉碎,同時能夠矯臭、矯味,易被患者接受。因此,建議臨床上在使用水蛭作為抗凝藥時,采用滑石粉燙制或酒浸悶烘法進行炮制,打粉沖服,將取得較好的療效。
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