導語：如何才能寫好一篇生物細胞分析，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

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[關鍵詞] 肝細胞癌；血清；代謝物組；LC-MS；主成分分析；模式識別

[中圖分類號] R735.7 [文獻標識碼] C[文章編號] 1674-4721（2011）06（a）-085-02

目前，臨床上診斷肝癌的主要方法為病理、影像和血清AFP檢查。這些檢測手段中，病理法屬于有創性檢查，對患者造成組織損傷，不能作為常規檢查方法；B超、CT、磁共振成像對小肝癌灶檢出率較低；血清AFP檢查診斷肝癌靈敏度低，因此，建立一種無損、準確、靈敏的肝癌診斷方法具有重要的臨床價值。代謝組學是一種通過考察生物體系受刺激或擾動后代謝產物隨時間的變化，并以此來研究生物體系代謝途徑的新技術[1-2]。代謝組學作為新興的學科，已成功應用于疾病診斷、藥物作用模型的鑒別和確證、藥物作用機制研究等領域[3-6]。目前代謝組學分析中常用的兩種檢測手段是核磁共振（NMR）技術和質譜（MS）及其聯用技術。相比于NMR靈敏度低、檢測動態范圍窄等弱點，現代MS技術的優勢是具有很高的靈敏度和專屬性，可以實現對多個化合物的同時快速分析與鑒定，現已成為生物分析中的首選方法。本研究采用LC-MS法檢測肝癌患者和健康人血清中代謝物，比較分析兩組血清代謝物組的差異，同時利用PCA對MS數據進行模式識別，以期建立肝癌的診斷模型。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Agilent 1100型高效液相色譜儀，Agilent LC/MSD Trap XCT Plus 型質譜儀、高壓二元梯度泵、二極管檢測器、自動進樣器、柱溫箱、Chemstations化學工作站等（美國Agilent公司），日立20PR-52D型高速冷凍離心機，電熱真空干燥箱（上海申光儀器儀表有限公司），KQ- 250 DE型數控超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司），Milli-Q純化水制備系統(Millipore公司)。甲醇、乙腈均為色譜純（美國fisher公司）。

1.2 樣品的采集

分別采集30份男性肝癌患者以及30份健康男性 （無相關病史的健康人群)受試者靜脈血5 ml 至促凝管中，室溫下靜置1 h后在4℃、13 000 g離心10 min），置-80℃貯存備用。采血前禁食12 h。肝癌診斷標準按照2001年中國抗癌協會肝癌專業委員會修訂的肝癌臨床診斷標準[8]，上清液LC-MSn分析。

1.3 LC-MS 條件

反向液相色譜（RP-LC），色譜柱：Prevail C18（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流動相A：10mM甲酸銨緩沖液（甲酸調PH 4.0）；B：0.1%甲酸乙腈，A與B梯度洗脫：0～5 min，B%10～30，5～9 min，B% 30～60，9～20 min，B%60～70，20～25 min，B%70～100；柱溫：25°C；流速：0.8 ml/min；質譜條件：ESI離子源，離子源溫度350℃，毛細管電壓3.5 kV，霧化壓力285.8 kPa，霧化壓力60.0 Psi，干燥氣流速11.0 L/min，質譜掃描范圍75～800 m/z，正離子檢出模式。

2 結果

2.1 血清樣品檢測總離子流圖

按照以上實驗方法，對血清樣本進行了分析測定，圖1中A、B分別是健康人和肝癌患者血清典型的LC-MS總離子流譜，圖中可見，正常人血清樣本的總離子流圖與肝癌患者血清樣本的總離子流圖有明顯區別。

A為健康人血清；B為肝癌患者血清

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2.2 肝癌的生物標記物

通過LC-MS檢測，與正常人相比，肝癌患者血清中牛磺酸和組氨酸含量減少，而苯丙氨酸、酪氨酸含量增加。牛磺酸是重要的抗氧化物質，曾有研究報道，其在肝硬化患者血清中含量增加，而肝癌患者血清中牛磺酸含量沒有改變[7]，但筆者研究發現牛磺酸在肝癌患者血清中含量減少，推測牛磺酸的含量與肝癌病情程度有關，需要進一步研究。

2.3 模式識別分析

利用PCA對正常人和肝癌患者兩組血清LC-MS數據進行模式識別分析，得到相應血清標本的PCA得分圖（3D PCA Scores plot)。得分圖中每一個點代表了一個標本，見圖2。從圖2中可以直觀地看出各血清標本在空間上的位置以及相互聚合程度，圖2中肝癌和健康人標本顯著分離，說明兩者血清代謝物組確實存在顯著差異。

3 討論

為了探討利用代謝組學技術結合模式識別分析診斷肝癌的可行性，對肝癌患者血清LC-MS數據進行PCA分析。結果表明肝癌患者可與健康人標本100%區分開來，利用基于LC-MS代謝組學技術結合PCA的模式識別方法診斷肝癌診斷結果可靠。有利于臨床早期診斷、早期治療肝癌。此外，由于代謝組學反應的是基因和蛋白表達終端的變化、是對基因組學和蛋白組學在代謝物研究上的放大，因此利用此技術診斷疾病更靈敏、快速。

[參考文獻]

[1]羅和古，丁杰，岳廣欣，等.大鼠肝郁脾虛證的代謝組學研究[J].中西醫結合學報，2007，5(3):307-313.

[2]Jeffrey R，Idle1，Frank J，Gonzalez．Metabolomics[J].Cell Metabolism，2007， 12(6):348-350.

[3]Clayton，T.A，Lindon，J.C，Cloarec，O，et al.Pharmacometabonomic phenotyping and personalized drug treatment[J].Nature，2006，440(7087):1073-1077.

[4]黃成鋼.中藥研究的必然趨勢—中藥復方系統研究[J].中國藥學雜志，2000，35(7):4331.

[5]周宏偉，譚鳳儀，鐘音，等.代謝組學及其在微生物領域的研究進展[J].分析化學，2007，35(2):309-314.

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    新課標和新教材最突出特點是以學生發展為中心,體現學生主體地位,面向全體學生,注重學生思維能力和學習方式的培養,倡導探究性學習和注重與現實生活的聯系。所以在課堂教學設計中筆者采用以學生發展為本的主體性教學模式,從學生的認知水平出發,結合教學內容,精心設計問題,營造探究氛圍,使學生在觀察、討論、探究、合作交流中相互啟迪、自主學習、構建模型。

    二、教學分析

    1.教材分析

    “物質出入細胞的方式”是浙科版普通高中課程標準實驗教科書生物必修1《分子與細胞》的第三章第二節的內容。第二章已經介紹了細胞膜的化學組成和細胞膜的功能,這一節是在此基礎上探討細胞膜控制物質進出的幾種方式,在細胞膜的亞顯微結構基礎之后,帶領學生繼續探究細胞膜控制物質進出功能的方式和原理。這樣的編排符合學生認知規律,有助于幫助學生建立結構與功能相適應的觀點。

    2.學情分析

    通過前幾章節的學習,學生對于細胞的分子組成、基本結構和探究的基本步驟已有了一定的認識,能理解細胞膜是系統的邊界,并且大部分學生已經對生物有了較濃厚的學習興趣,很渴望在此基礎上進一步探究物質是怎樣進出細胞的,有哪些方式等有關細胞功能方面的知識。

    3.教學重難點

    (1)教學重點:比較物質出入細胞的各種方式的異同。

    (2)教學難點:理解滲透作用原理。

    三、教學目標

    1.知識目標

    (1)簡述擴散的特點。

    (2)闡明滲透的概念及原理。

    (3)比較說明紅細胞吸水與失水的原因;概述被動轉運和主動轉運的概念;比較擴散、易化擴散和主動轉運。

    2.能力目標

    (1)學會綜合運用比較、分析、歸納、綜合等科學思維方法。

    (2)設計實驗,逐步領悟探究過程的一般方法與基本思想,培養自身的科學探究能力以及語言表達的能力。

    (3)通過構建模型和概念圖,提高知識建構能力。

    3.情感、態度與價值觀目標

    (1)通過分析擴散和滲透作用的過程,滲透生命活動不斷發展變化以及適應的特性,逐步學會自覺地利用發展變化的觀點認識生命。

    (2)領悟科學探究思想,體驗探究活動中的成就感。

    (3)通過探討問題,設計實驗,培養合作意識和實事求是地對待實驗結果的態度。

    四、教學策略與手段

    (1)改變過去單純的教師講授和學生接受的教學方式,以問題探究教學為主線,教師通過多媒體創設問題情境,引導學生運用討論法、實驗法、學案導學、模型建構等方法開展學習,充分調動學生學習的積極性,發揮學生主體的作用。

    (2)課前準備:

    ①學生預習本節課相關知識,提出相關問題;

    ②教師針對教學設計準備好相關的多媒體課件、學案,實驗所需的材料和用具。

    五、教學過程

    1.導課

    教師組織引導學生思考(多媒體展示不同物質通過不含蛋白質的脂雙層):

    (1)什么樣的分子能夠通過脂雙層?什么樣的分子不能通過?

    (2)氨基酸不能通過無蛋白質的脂雙層,但是能進出細胞的原因是什么?

    學生活動:學生觀察,思考問題,根據教師引導總結出不同物質通過細胞膜的幾種方式。

    教學設計意圖:創設問題情境,學生主動參與學習過程,激發學習興趣。

    2.學習擴散

    教師組織引導學生親手實驗將墨水滴到燒杯中并觀察現象,并引導學生討論什么是擴散。

    學生活動:學生實驗,觀察實驗現象,討論、交流。

    師生共同總結出擴散是分子從高濃度處向低濃度處運動的現象。

    教學設計意圖:學生實驗,吸引學生注意力,體現學生在學習中的主體地位。

    3.學習滲透

    教師演示實驗,實驗裝置如圖1所示。

    教師設計問題串:

    (1)漏斗的液面為什么上升?

    (2)如果用一層紗布代替玻璃紙,液面還會升高嗎?

    (3)如果燒杯中也是同樣濃度的蔗糖溶液,結果會怎么樣?

    學生在教師的指導下歸納出產生滲透現象兩個必要條件以及滲透的方向是從低濃度溶液到高濃度溶液。

    教學設計意圖:通過觀察演示實驗,學生經歷“現象——問題——分析——結論”,主動構建出滲透作用的條件,提高歸納總結的能力。

    教師通過多媒體動畫演示微觀展示滲透實驗。

    問題探究:

    (1)滲透是水分子跨過膜的擴散。擴散的方向是怎么樣的?

    (2)那么滲透作用與擴散現象相矛盾嗎?

    學生活動:思考、回顧前面擴散有關知識,通過相互討論在教師指導下得出回答滲透是水分子跨過膜的擴散。

    教學設計意圖:學生在實驗的基礎上通過多媒體的清晰展示,清楚觀察到了微觀的滲透現象,使抽象的知識具體化,從而得出滲透的概念,突破難點。

    4.學習被動轉運

    教師通過多媒體動畫演示氧和二氧化碳進出細胞的現象。創設問題情境:給出擴散的實驗數據,請學生分析數據(表1),構建數學模型,繪出坐標曲線。

    學生活動:建構模型繪出曲線(圖2)。

    教師用多媒體演示展示葡萄糖進入紅細胞的現象。創設問題情境:給出葡萄糖跨紅細胞膜的實驗數據(表2),請學生分析數據,構建數學模型,繪出曲線。

    學生活動:建構模型繪出曲線。

    教師組織引導學生觀察曲線后,評價擴散和易化擴散有何異同點。

    學生歸納總結。

    教學設計意圖:用多媒體演示物質跨膜運輸的各種方式,直觀形象表現出事物的空間中的關系。學生構建模型,需要進行表格與曲線的相互轉換,使抽象的問題直觀化、具體化,能夠變抽象思維為形象思維,有助于把握問題的本質。

    5.學習主動轉運

    教師組織引導,創設問題情境:

    (1)海帶中碘的濃度高出海水中碘濃度的200倍,但是海帶照樣從海水中吸收碘,由低濃度一側向高濃度一側運輸。

    (2)人的紅細胞和血漿中的各種離子濃度如下頁表3所示。

    以上兩種情況說明細胞對離子的吸收是從低濃度到高濃度,這種運輸方式是主動運輸。教師引導學生根據資料中思考主動運輸與被動轉運相比兩者的區別。

    學生活動:思考、討論回答,總結主動轉運的特點。

    教學設計意圖:創設問題情境,自然引入主動轉運,提高學習興趣。

    師生共同小結:設計表格對擴散、易化擴散、主動轉運進行比較。

    6.課堂反饋

    教師組織引導一:實驗探究:現有兩瓶沒有標簽的蔗糖溶液,請學生利用所提供的材料(半透膜、漏斗、燒杯、橡皮筋),根據今天學習的知識,設計一種實驗方案,比較兩瓶溶液濃度的高低,并預期實驗結果及得出相應結論。

    學生活動:分組討論、設計實驗方案并預期實驗結果及結論。

    教學設計意圖:充分發揮自身自主探究能力,培養自身的實驗設計能力,逐步領悟探究過程的一般方法與基本思想,提高語言表達、分析歸納的能力。

    教師組織引導二:建構模型:請嘗試畫圖表示隨氧氣濃度與離子運輸速率的關系,并分析曲線各階段的限制因素。

    學生活動:繪制曲線圖(圖4)。

    教學設計意圖:通過模型建構復習鞏固知識,突出教學難點。

    六、問題研討

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[關鍵詞] 翼狀胬肉；角膜緣干細胞；生物羊膜；淚膜破裂時間

[中圖分類號] R473.77 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2013）06（c）-0043-02

翼狀胬肉是局部球結膜纖維血管組織增生并侵犯角膜的常見眼表疾病，不僅影響美觀，還常伴眼紅、異物感等不適癥狀。目前治療以手術為主。為探討初發性翼狀胬肉采用手術切除聯合生物羊膜移植及自體角膜緣干細胞移植治療的臨床療效，該研究對自體角膜緣干細胞移植及生物羊膜移植治療翼狀胬肉這兩種主流手術方法進行分析，探討其臨床療效，現對該院2009年5月―2011年3月住院初發性翼狀胬肉病例73例進行分析，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院住院初發性翼狀胬肉病例73例（79眼），隨機分為2組。自體角膜緣干細胞移植組35例（39眼），其中男17例20眼，女18例19眼，年齡38～65（46.7±6.8）歲；胬肉頭部侵入角膜緣約2～4 mm，平均（2.6±0.4）mm。羊膜移植組38例（40眼），其中男20例20眼，女18例20眼，年齡36～68歲（44.5±7.4）歲；胬肉頭部侵入角膜緣約2～4 mm，平均（2.5±0.5）mm。

1.2 淚膜穩定性測定（BUT）

熒光素鈉滴入患者結膜囊后，在裂隙燈下用鈷藍濾光片觀察一次瞬目到淚膜出現干斑所需要的時間。分別測量3次取平均值。

1.3 羊膜的取材與規格

采用成品獨立包裝的羊膜片。國食藥監械字20043061180號，產品批準文號：規格：面積2.5 cm×2.5 cm，厚度0.1～0.3 mm，上皮面向上貼附于濾紙上。手術時用生理鹽水復水10 min即可使用。

1.4 手術方法

1.4.1 角膜緣干細胞移植組 ①胬肉切除：0.5%愛爾卡因滴眼液表麻術眼，顯微鏡下操作，胬肉浸潤麻醉采用0.1%腎上腺素+2%利多卡因適量進行，于胬肉頸部剪開球結膜，分離時向上、下方及鼻側分離。胬肉頭部前0.5 mm剖切，自角膜面完整干凈的剔除胬肉頭部，分離胬肉頸部至半月皺襞，將胬肉組織剪除。將鞏膜表面筋膜組織清除，燒灼止住出血點出血。②角膜緣干細胞移植：將術眼上方球結膜與其下筋膜分離，切取一結膜瓣，要比受區結膜缺損大小形狀略大，向下分離至角膜緣內1mm處剪除。平鋪此帶角膜緣干細胞的結膜瓣于受區鞏膜表面。10-0尼龍線帶鞏膜淺層間斷縫合固定角膜緣及植片兩側，余植片與結膜殘端間斷縫合。取材區結膜無需縫合自行修復。

1.4.2 羊膜移植組 ①胬肉切除：同角膜緣干細胞組。②羊膜移植：剪取復水后的羊膜，t要略>缺損范圍1 mm大小，將上皮面朝上緊貼于暴露的鞏膜區，球結膜和羊膜用10-0尼龍線間斷對位縫合，對多余的羊膜進行修剪， 中央縫合羊膜植片2針固定在淺層鞏膜上，角膜緣固定2針。

兩組手術術前滴雙氯芬酸鈉眼液及典必殊眼液3～5 d，4次/d。術后術眼涂四環素可的松眼膏，繃帶加壓24 h后，典必殊眼液點眼，6次/d，持續1周后逐漸減量。術后8～10 d拆除縫線。同時兩組患者于術后1周、1個月及3個月檢查淚膜破裂時間。

1.5 療效評定標準

痊愈：術區光滑潔凈，角膜創面上皮覆蓋，結膜無充血平整，無胬肉增生和新生血管；復發：結膜明顯充血，局部增厚，角膜創面有胬肉增生及新生血管。

1.6 統計方法

采用SPSS10.0統計軟件對數據進行處理，計量資料采用均數加減標準差表示（x±s）表示，進行t檢驗，計數資料進行χ2檢驗。

2 結果

術后2～3 d兩組患者均有不同程度的植片及結膜充血、異物刺激感和水腫， 4～5 d后逐漸減輕。自體角膜緣干細胞移植組術后創面愈合時間3～7（4.4±0.8）d。生物羊膜移植組術后創面愈合時間5～8（6.5±0.6）d。兩組比較差異有統計學意義（t=2.34， P

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【關鍵詞】生物技術；現狀；特點；環境保護；應用

由于工業化進程的飛速發展，工業“三廢”、城市汽車尾氣，飲用水的的污染，生態環境受到嚴重破壞。甚至影響到了人們的日常生活。人們疾病發病率急劇上升。因此加大對環境保護工作的投入是當前擺在面前十分嚴峻的問題，許多傳統的環保工藝處理技術已不能適應現在環保工作的需求，迫切需要一種新的環保治理方式。而現代生物技術以其眾多的優點，正越來越多地被應用到了環境保護處理過程當中。

一、我國現代環境面臨的現狀

當前，我國環境保護工作面臨的形勢十分嚴峻，集中表現在工業化學污染嚴重、農用化肥及農藥污染、水資源嚴重短缺、飲用水源遭到污染情況嚴重、土地沙漠化趨勢比較明顯、耕地面積大量流失、森林草原等植被遭到嚴重破壞、許多珍稀物種動植物滅絕等等。這些問題都是事關我國經濟社會發展的速度和水平及人民生產生活狀況，必須得到我們的重視。

二、現代生物技術的特點

現代生物技術在生態環境中應用的很廣泛，是因為，它有獨特的優點：1、以生物為對象，不依賴地球上的有限資源，而針對再生資源的利用；2、在常溫常壓下進行，過程簡單化，可持續操作，可以節約能源，減少環境污染；3、開辟了生產高純度、優質、安全可靠的生物制品的新途徑4、可解決常規技術和傳統方法下不能解決的問題；5、可定向地按人們的需要創造新物種、新品種和其他有經濟價值的生物類型。

三、現代生物類型在環境保護中的應用

因為現代生物可以有效地降低環境保護工作中的成本，不受天氣氣候、場地等的影響，可以隨時發揮作用，可以創造可再生資源，能夠徹底去除有害物質等，它憑借著這些優點，在環境保護中起到重要的作用。可以使現代生物技術的運用范圍迅速擴展，可以對農村中的牲畜糞進行加工，產生清潔能源，不會對環境造成污染，徹底去除污染物，提高了環境保護的工作。

1、對污水的生物凈化。要用生物技術對廢水進行處理，可以應用酶聯免疫技術、PCR技術、電子顯微技術、基因差異顯示技術、生物傳感器等現代生物技術對環境進行檢測與評估。應用酶聯免疫技術對環境中的農藥及其一些代謝物一一項新技術。國內外根據這項技術開發出了殺菌劑、除草劑、殺蟲劑等農藥和抗菌素等對污染物的酶聯免疫的分析方法。而我國也在這方面取得了一些新發展，例如開展了生物監測方法的研究，研究了各種生物的綜合指標，利用生物監測技術評價環境質量，利用冷凍干燥且發光的細菌，根據它的發光強度變化的特點來斷定水質污染的程度，從而研究提出了上海蘇州河水水質發光細菌測試和評價方法。污水中的有毒物質的成分十分復雜，包括各種酚類、氰化物、重金屬、有機磷、有機汞、有機酸、醛、醇及蛋白質等等，是環境污染中最難治理并且必須治理的一種污染形勢。微生物通過自身的生命活動可以解除污水的毒害作用，從而使污水中的有毒物質轉化為有益的無毒物質，使污水得到凈化。應用遺傳工程的技術構建出符合人們需要的微生物高效菌和可以講解很多種污染物功能的超級菌，從而提高對污染物的講解能力，加快講解的速度，增強凈化污水的能力。當今固定化酶和固定化細胞技術處理污水就是生物凈化污水的方法之一。固定化酶和固定化細胞技術是酶工程技術。固定化酶又稱水不溶性酶，是通過物理吸附法或化學鍵合法使水溶性酶和固態的不溶性載體相結合，將酶變成不溶于水但仍保留催化活性的衍生物，微生物細胞是一個天然的固定化酶反應器，用制備固定化酶的方法直接將微生物細胞固定，即是可催化一系列生化反應的固定化細胞。運用固定化酶和固定化細胞可以高效處理廢水中的有機污染物、無機金屬毒物等。

2、對于那些固體廢物，我們可以產用生物講解的方法，例如焚燒、熱處理等，這種辦法具有成本低、操作簡單、容易管理、運行費用低等優點。這也可以成為“生物反應堆”，與傳統的挖坑填埋相反，可以允許適量的水分進入，增加濕度，微生物可以很好地生長和繁殖，從而加速了廢物的降解和穩定。又分為好氧生物處理，這是指利用好氧生物在有氧的條件下新陳代謝，利用好氧生物技術將廢物處理；壞氧生物處理，是指壞氧生物在無氧的條件下生長代謝作用處理廢物；準好氧生物處理，這是使填埋場里具有某種好氧條件，靠垃圾分解產生的發酵熱造成內外溫差，空氣可以自然的通過填埋體，促進垃圾的分解和穩定，它不需要通風，節省能量，減少對地下水的污染，可以使危險氣體例如CH4、H2S等產量降低等；混合生物技術，是把好氧和壞氧生物技術綜合起來，它主要的特點就是增加了揮發有機酸對空氣具有危險性的污染物的講解，并且降解的速度很快。

3、生物修復技術出現在80年代以來的治理環境污染的生物工程技術，主要是利用了生物本身的獨特分解有機物的能力，去消除污染環境中的污染物，達到消除污染的目的。它包括微生物修復和植物修復。人們可以利用植物對某些污染物進行吸收，作為這些污染物的生存介質，達到凈化的功能，而微生物被運用在去除土壤中的重金屬污染、石油污染等多種污染物，具有典型的處理速度快、無二級污染、經濟實惠等特點。

4、環境生物技術應用在預防污染上也十分廣泛。利用分子遺傳技術可以將生產過程中產生的廢棄物直接轉化為新能源或副產品，例如微生物化肥，利用DNA重組及蛋白質工程技術快速生成的酶，把它應用在生產環節中，減少使用化學無極品從而達到清潔生產的目的；利用分子生物種群、基因技術、DNA修復可以改變一些物質的分子結構，可以加大降解性或加速自然講解的速度，這種降解途徑徹底，一般不會帶來副作用；有的是通過共代謝作用，將農藥轉為了避免負面效應，就需要用基因工程的方法對已知有降解農藥作用的微生物進行改造，改變其生化反應途徑，以希望獲得最佳的降解、除毒效果。例如生物化肥、生物農藥、生物可降解塑料膜等大量使用在實際生活中，取代了化學制成品農藥、化肥的使用。它是無污染的，所以在農作物聲中得到了廣泛的應用。能降解農藥的微生物，有的是通過礦化作用將農藥逐漸分解成終產物CO2和H2O，要想徹底消除化學農藥的污染，最好全面推廣生物農藥。

四、結論

我們現在的地球已經被我們傷害的遍體鱗傷，我們必須采取最有效又不傷害它的方法來幫地球治療。更新環保理念，利用生物技術，我們要把治理變為提前預防的方針。利用新的成果技術，加強對沒有受到污染的環境預防，對那些已經受到危害的環境，要做盡早的處理措施，從根本上解決環境保護的問題。隨著我們的環保意識的逐漸增強，環境保護已經成為了社會關注的焦點。而現代生物技術是以集約化、商品化、國際化、集科學化和環保化為一體的基本特征，在高新技術革命中，占有最重要的地位，也必將會在將來對社會產生深遠的影響。

參考文獻

[1]張偉峰.現代生物技術在環境保護工作中的應用[J].時代報告,2011（9）

[2]趙淑蘭.淺議現代生物技術在環境保護工作中的應用[J].科技信息，2010（16）

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一、合理辨別細胞有絲分裂各時期圖形及染色體行為

要想合理辨別細胞有絲分裂各時期圖形及染色體的行為，第一，需要了解動植物細胞器的中心體.第二，明確動物細胞分裂的后末期現象及一個細胞分裂成兩個細胞的過程，植物細胞在分裂末期由中央赤道板位置形成細胞板，并向周圍進行擴展，促使一個細胞分裂成兩個細胞.第三，合理繪制動植物細胞有絲分裂后期圖像，首先，正確畫染色置，確保著絲點靠近兩級.其次，確保染色體形狀、大小及顏色與上面所附著的基因相同.最后，大多數生物在細胞的每一級均有成對存在的同源染色體.

例1圖1中表示動物細胞在有絲分裂的分裂期各種距離或長度隨時間的變化規律曲線，敘述正確的是（A）

A.曲線a代表兩個中心體間的距離

B.曲線b代表姐妹染色單體共用的著絲點間的距離

C.曲線c代表染色體與細胞兩級間的距離

D.曲線d代表染色體紡錘絲的長度

解析由于題中給出從有絲分裂的分裂期開始，兩個中心體在前期分開，可用a曲線表示.兩個著絲點是從后期分開，距離從0開始增加，因此10分鐘開始進入后期，用c曲線表示著絲點間的距離.同時商茲舊體向兩極移動，所以d曲線表示著絲點距細胞兩極的距離.附著在著絲點的紡錘絲從前期形成到末期消失，因此b代表紡錘絲的長度.本題的答案為A.

二、正確認識與卵細胞形成過程

與卵細胞的形成過程既有相同點又有一定的區別，不同點是在細胞分裂后期產生，細胞質分裂具有均勻性特點.1個精原細胞能夠分解為4個，精細胞分解為的過程不屬于減數分裂過程.而卵細胞在形成過程中，細胞質分裂處于不均勻現象，能夠由1個卵原細胞分解為3個極體，形成過程處于無變形階段.兩者的相同點是，染色體行為及染色體、DNA數量相同.

例2圖2中哪個細胞是次級卵母細胞繼續分裂過程中染色體平均分配的示意圖（B）

解析試題分析：題中圖A是卵原細胞在減數分裂第一次分裂過程中處于后期的初級卵母細胞圖，判斷依據是每個四分體中的同源染色體已彼此分開，開始分別移向細胞兩極，但細胞質的分配是不平均的；圖B是減數第二次分裂后期的次級卵母細胞圖，判斷依據是著絲點已分裂；圖C是精原細胞在減數分裂第一次分裂后期的初級精母細胞圖，判斷依據是同源染色體已彼此分裂，正在移向細胞兩極，但細胞質的分配是平均的；圖D有兩種可能，一種可能是精原細胞進行減數分裂第二次分裂后期圖，第二種可能是卵原細胞減數分裂過程中第一極體的分裂后期圖.故答案是B.

三、明確有絲分裂及減數分裂圖形的區別

首先，需要對是否是減數的第一次分裂進行判斷，對有絲分裂圖像中的減數第一次分裂、第二次分裂及有絲分裂圖像進行比較，在對第一次分裂的染色體進行判斷時，需要結合染色體的行為來進行.其次，對減數第二次分裂及有絲分裂進行比較.最后，對細胞中染色體的奇數及細胞質分裂不均勻等現象進行判斷.

例3二倍體生物細胞正在進行著絲點分裂時，敘述正確的是（C）.

A.細胞中一定不存在同源染色體

B.著絲點分裂一定導致DNA數目加倍

C.染色體DNA一定由母鏈和子鏈組成

D.細胞中染色體數目一定是其體細胞的2倍

二倍體生物細胞進行著絲點分裂時，細胞處于有絲分裂后期或減數第二次分裂后期，前者細胞中存在同源染色體；著絲點分裂導致染色體數目加倍，但DNA數目不變；DNA復制方式為半保留復制，則DNA中一定有一條母鏈和一條子鏈；有絲分裂后期染色體數目增加，是體細胞染色體數目的2倍，減數第二次分裂后期，染色體數也暫時加倍，但與體細胞中染色體數相等.故答案選C.

篇6

[關鍵詞]干細胞；人牙周膜干細胞；免疫磁珠；流式細胞計量術；免疫細胞化學

[中圖分類號]R783.5 [文獻標識碼]A [文章編號]1008-6455（2008）05-04

Isolation, identification and bionomics of human periodontal ligament stem cells

PAN Feng1,DING Yin1,WANG Guang1,ZHAO Yu2,NI Hua2

(1.Department of Orthodontics,Stomatology Hospital,The Fourth Military Medical University,Xi'an 710032,Shaanxi,China; 2.Center of Tissue Engineering, Stomatology Hospital,The Fourth Military Medical University)

Abstract:ObjectiveTo isolate and identify the periodontal ligament stem cells and demonstrate its bionomics. MethodsPDLSCs were isolated by immunomagnetic method. The flow cytometry and immunocytochemistry procedure were used to disclose the cell cycle and surface marker of the PDLSCs.Osteoinduction and adipoinduction were done to conform the multidirectional differentiation of PDLSCs. ResultsThe acquired cells had clonality and low proliferation. Most of the cells were in phase G0 /G1 and there were high expression of CD146 and CD44 on these cells, meanwhile, CD34 and CD45 were of low expression. The cells were Vimentin and STRO-1 positive while their multidirectional differentiation ability was confirmed in vitro. Conclusionimmunomagnetic method was an effective way to isolate and purify the PDLSCs. The acquired cells showed the characteristics of stem cells.

Key words:stem cell;human periodontal ligament stem cell;immunomagnetic beads;flow cytometry;immunocytochemistry

研究證實牙周膜內存在具有橫向分化能力的干細胞(牙周膜干細胞)，在體外微環境作用下還可分化為成牙骨質細胞或成骨細胞[1-2]。因此，牙周膜干細胞（PDLSCs）作為一種新發現的干細胞，在牙周組織工程研究中有較大的應用前景。但是牙周膜組織量小、分離困難，一直成為制約牙周膜干細胞研究的重要原因。已有的克隆篩選法操作程序繁瑣，周期較長[1]，因此需要尋找簡便、快捷的篩選方法來分離牙周膜干細胞。本研究應用免疫磁珠技術對人牙周膜干細胞進行篩選，并擴增培養，通過對牙周膜干細胞生長曲線、克隆形成率、細胞周期、細胞表面抗原標記物測定及多向分化能力的研究對其生物學特性進行研究，以期建立一種便捷有效的分離方法并明確牙周膜干細胞的生物學特性，為進一步研究牙周損傷的發病機理及臨床治療提供基礎。

1材料和方法

1.1實驗材料和設備：α-MEM培養基（Gibco，美國），羊抗小鼠磁珠試劑盒（Dynalbiotech，美國)，基質蛋白-l單克隆抗體(STRO-1，R&D，美國)， ABC型免疫組化檢測試劑盒(Dkao，美國)；小鼠抗人波形絲蛋白單抗(Vimentin，Dkao，美國)；CD44-FITC、CD146-FITC、 CD34-FITC、CD45-FITC小鼠抗人單克隆抗體（Beckmen Coulter，美國）；CO2孵箱(Heraeus，德國)；YJ-875型超靜工作臺(蘇州凈化設備廠，中國)；流式細胞分析儀(Beckmen Coulter，美國)；倒置相差顯微鏡及照相系統(Olympus，日本)。

1.2實驗方法

1.2.1 取材及細胞培養：收集臨床拔除的正常人牙周健康、無齲的新鮮第3磨牙，刮取根中1/3牙周膜組織，移入10cm無菌培養皿內，滴加少許α-MEM培養液保持組織濕潤，銳性分離牙周膜組織約1mm3組織塊，將分離的組織塊以1mm間距平鋪于6孔板內，以無菌蓋玻片覆蓋組織塊，加入培養液(含100ml/L 胎牛血清，100μmol/L2抗壞血酸，2mmol/L2谷胺酰胺，100U/ml青霉素，100μg/ml鏈霉素的α-MEM 培養液)，置入37℃、50ml/L CO2的孵箱中培養，待多數組織塊周圍有細胞游出后去除蓋玻片，常規培養，每3天換液1次，細胞生長達80%匯合時傳代。

1.2.2磁珠分離篩選牙周膜干細胞：將5μl磁珠劇烈振蕩后移入離心管內，加入5ml含1％胎牛血清的PBS沖洗，放置于磁力架上靜置2min后去上清，重復一次后重懸，置4℃備用。收集第4代人牙周膜細胞1×108個，以含1％胎牛血清的PBS重懸，加入小鼠抗人STRO-1抗體，4℃孵育60min，每隔10min輕振以防沉淀。以含1％胎牛血清的PBS清洗3次，去除殘留抗體后重懸并加入磁珠，4℃孵育30min，每5min輕振一次。離心，去除含空白磁珠的上清液，以含1％胎牛血清的PBS重懸，將離心管置于磁力架上2min，緩慢棄除上清及未與磁珠結合的細胞。以含1％胎牛血清的PBS再次重懸并清洗與磁珠結合的細胞2次，棄上清，加入磁珠分離液，輕晃均勻2min后置于磁力架上2min，取上清液，重復2次以去除殘存磁珠，離心，加入5ml含10％胎牛血清的α-MEM培養液，重懸，調整細胞濃度為1×104/ml接種于6孔板內，37℃、50ml/L CO2的孵箱中培養。

1.3 牙周膜干細胞生物學特性的研究

1.3.1細胞生長曲線測定：分別取篩選培養的牙周膜干細胞及牙周膜細胞，以1×103cells/孔接種于96孔塑料板，每組3孔，隔日換液。每天取一組，MTT法測各孔OD值，連續測10天，以時間為橫軸、細胞數為縱軸繪制生長曲線。

1.3.2 克隆形成率測定：將收集的對數生長期牙周膜細胞的培養上清1 500rpm離心10min，經0.22μm直徑的小濾器過濾后，與培養基以l:l比例混合作為適應性培養基。取篩選培養的牙周膜干細胞，調整細胞密度至10～15個/ml，100μ1/孔接種于96孔培養板中，培養12h后標記單個細胞孔，并補液至200μ1/孔，5天換液，光鏡下觀察克隆形成情況。

1.3.3 流式細胞儀分析

1.3.3.1細胞周期分析：取篩選培養的牙周膜干細胞，胰酶消化，調整細胞密度為1×107/ml， PBS清洗2次，加入0.01mol/LPBS重懸，再加入預冷的無水乙醇2ml吹打混勻，4℃過夜，離心棄乙醇，0.01mol/LPBS清洗2次，加入5ml/L碘化丙錠1ml，4℃30min，過300目的尼龍篩網，流式細胞儀上機，進行細胞周期檢測。

1.3.3.2表面抗原測定：取篩選培養的牙周膜干細胞, 棄去培養液，PBS清洗兩次，以含0.25% 胰蛋白酶的PBS液消化5 min，制成單細胞懸液，再以含2%牛血清白蛋白和0.1%偶氮鈉的磷酸鹽緩沖液(流式緩沖液)沖洗細胞, 調整細胞密度為3.0×109/L，每個Eppendof管加100μL細胞懸液，室溫下分別與CD44-FITC、CD146-FITC、 CD34-FITC、CD45-FITC小鼠抗人單克隆抗體5μL避光孵育15min，再以流式緩沖液清洗細胞，1 000rpm離心5min，將細胞重懸于含1%多聚甲醛的流式緩沖液0.5ml固定。使用同型對照單克隆抗體確定背景標記。用流式細胞儀分析熒光細胞，專用配套軟件計算細胞表面抗原陽性率，單位用%表示。

1.3.3.3 免疫細胞化學染色：取篩選培養的PDLSCs制備細胞爬片， 免疫細胞化學ABC法進行STRO-1及Vimentin染色，陰性對照以PBS替代一抗，進行細胞來源及表達檢測，光鏡下觀察。

1.3.3.4體外多向誘導分化：①礦化誘導：取篩選培養的牙周膜干細胞制成細胞懸液，調整細胞密度為2×104/ml接種于6孔板中，以含10%胎牛血清的α-MEM培養24h后換礦化誘導液(100μg/ml鏈霉素、100U/ml青霉素、10mmol/Lβ-甘油磷酸鈉、50μg/ml維生素C、1×10-8mol/L地塞米松、10ml/L胎牛血清、α-MEM培養液)培養，隔日換液。培養3周后吸棄培養液, PBS清洗, 95%酒精固定10min ,PBS清洗2次,加入0.1%茜素紅(Alizarin Red-S)室溫染色30min，去離子水清洗3次，光鏡下觀察。②成脂誘導：取篩選培養的牙周膜干細胞制成細胞懸液，調整細胞密度為1×105/ml接種于6孔板中，以含10%胎牛血清的α-MEM培養24h后換成脂誘導液（地塞米松10-6mol/L、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤0.5mmol/L、胰島素10mg/L、消炎痛100mmol/L、α-MEM培養液）培養，隔日換液。培養3周后吸棄培養液，PBS清洗，10％中性甲醛固定10min，PBS清洗2次，油紅O染色10min，去離子水清洗3次，鏡下觀察。

2結果

2.1形態學觀察：所篩選細胞大部分呈類梭形，核為卵圓形、位于胞質中央，似成纖維樣細胞（如圖1）。

2.2 細胞生長曲線測定：牙周膜細胞及牙周膜干細胞生長曲線均呈倒“S”形，在接種后1天兩者細胞量均減少，自第2天起，細胞生長均加速，第8天達到生長高峰，進入“平臺期”，此后，細胞生長速度減慢。總體而言，干細胞生長速度明顯低于牙周膜細胞（如圖2）。

2.3 牙周膜干細胞生物學特性研究

2.3.1 克隆形成率：10～12天有細胞克隆形成，鏡下觀細胞呈集落狀生長，細胞形態成梭形，體積較小，排列緊密，中心細胞界限不清，呈圓形或不規則形狀，周邊細胞呈梭形或多角形。共獲得克隆株43株，克隆形成率為14.93％。

2.3.2細胞周期分析：細胞周期動力學結果顯示：大多數細胞處于G0/G1期(78.2％)，即靜止期和DNA合成前期。G2期為2.3％，S期為19.5％。表明細胞增殖緩慢，大多數處于靜止期或緩慢增殖期(如圖3)。

2.3.3 細胞表型特征鑒定：表面抗原CD146和CD44檢測陽性率為92.8％及91.7％，CD34和CD45陽性率為1.6％及2.3％ （如圖4）。

2.3.4 免疫細胞化學染色：篩選培養的牙周膜干細胞中STRO-1及Vimentin均為陽性染色，具有間充質干細胞的特征（如圖5～6）。

2.3.5 成骨誘導：成骨誘導液繼續培養8天后，細胞呈復層生長，局部增厚，12天左右中央出現許多顆粒樣改變，并逐漸連接成片，密度增高。21天左右孔板底部出現肉眼可見針尖大小灰白色小結節，并逐漸增大。茜素紅染色可見紅色礦化結節（如圖7）。

2.3.6 成脂誘導：經成脂誘導液培養至第10天左右，可見細胞形態發生改變，較培養初期更為飽滿，至21天時油紅O染色陽性，細胞胞漿內有大量脂滴形成（如圖8）。

3討論

以往成體干細胞的分離純化常用方法有密度梯度離心法、貼壁培養法、克隆化培養篩選，但這些方法操作繁瑣，且所需時間較長，不利于臨床應用。根據干細胞表面特異性受體能選擇性結合或粘附其它信號分子的原理，采用免疫磁珠篩選、流式細胞分選法分離和鑒定干細胞己廣泛開展[3,9]。Seo[1]的研究結果顯示人牙周膜干細胞表達間充質干細胞的特異性標志STRO-1，并利用免疫磁珠篩選首次成功獲得人牙周膜干細胞。Gay等[4]使用STRO-1抗體對牙周膜細胞進行標記后，通過流式細胞儀對其進行篩選，獲得27％STRO-1陽性細胞。在本實驗中，我們通過使用包被二抗的免疫磁珠對復合STRO-1的牙周膜細胞進行分離純化，獲得牙周膜干細胞，篩選程序簡單、迅速，細胞活性保持較好。經細胞生長曲線測定，牙周膜干細胞較同一來源的牙周膜細胞生長慢，符合干細胞慢增殖周期的特點。

克隆形成能力是干細胞的特點，高秦等[10]對人牙周膜細胞進行了克隆化培養，結果顯示細胞培養10～15天有克隆形成，克隆形成率為0.62％。Gay等[4]對牙周膜干細胞及骨髓基質干細胞的克隆形成情況進行了比較，發現牙周膜干細胞有50個克隆形成，骨髓基質干細胞有35個克隆形成，證實牙周膜干細胞有較強的克隆形成能力。成體干細胞處于由周圍間質細胞及其所分泌的相關生長因子或配體形成的微環境中，這些生長因子或配體與干細胞相互作用，控制干細胞的更新和分化。故為提高克隆形成率并盡可能的保持純化后的細胞的未分化狀態，本研究借鑒了高秦等[10]人牙周膜干細胞克隆化培養的方法，收集了牙周膜細胞的培養上清與普通培養基以一定比例混合，制備成適應性培養基，對所篩選的牙周膜干細胞進行了克隆化培養，共得到43個克隆，克隆形成率為14.93％，證實所獲得細胞具有干細胞自我更新的特性。

細胞周期是反映細胞增殖動力學的重要指標。干細胞是處于相對靜止狀態的一群細胞，這種慢周期的特點是大多數成體干細胞的共同特征[11-12]。但在外界因素作用下，干細胞周期也會相應變化[13-14]。本研究對所篩選牙周膜干細胞的細胞周期分析顯示，與高秦等[10]的結果有一定差異，可能原因有：①細胞來源不同，因不同個體的干細胞狀態不會完全一致；②細胞獲取方法不同，高秦等通過克隆化培養獲取牙周膜干細胞，而本研究采用的是免疫磁珠直接篩選，不同的方法導致細胞所受外界條件刺激的不同，進而可能影響到細胞周期的變化。

目前，學者們還未找到牙周膜干細胞的特異性表面抗原標記物。Seo等[1]的研究結果顯示牙周膜干細胞表達間充質干細胞表面抗原STRO-1及血管周圍細胞表面標記物CD146及CD44。Nagatomo等[15]發現牙周膜干細胞表達細胞表面抗原CD105、CD166及STRO-1。Ivanovski等[16]發現牙周膜干細胞或骨髓基質干細胞均無CD14、CD45和CD34表達。高秦等[10,21]研究結果顯示人牙周膜干細胞波形蛋白（Vimentin）及STRO-1呈陽性表達。在實驗中我們對分離培養的細胞進行了表面抗原測定及免疫細胞化學染色，結果顯示：Vimentin及STRO-l染色陽性，顯示其間充質干細胞來源，此外，流式細胞分析結果顯示間充質干細胞標記物CD44及CD146在牙周膜干細胞中高表達，而內皮細胞標記物CD34，造血系細胞標記物CD45的表達極低，從正反兩方面證實了以往學者的結論。而多向分化研究結果也證實牙周膜干細胞可以經誘導分化為成骨細胞及脂肪細胞，符合干細胞特征。

綜上所述，本實驗所篩選培養的人牙周膜干細胞為多角形、成纖維型細胞外觀，具備克隆形成能力及慢細胞周期特點，免疫細胞化學染色及流式細胞術檢測證實所培養細胞表達CD44、CD146、Vimentin、STRO-1，不表達CD34、CD45，均與文獻報道一致。此外，經誘導培養，所培養細胞可分化為成骨細胞及脂肪細胞，進一步證實牙周膜干細胞具有多向分化能力。

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1. 初步學會觀察植物細胞質壁分離和復原的方法。

2. 理解植物細胞發生滲透作用的原理。

二、實驗原理

當細胞液的濃度小于外界溶液的濃度時，細胞液中的水分就透過原生質層進入外界溶 液中，使細胞壁和原生質層都出現一定的收縮。由于原生質層比細胞壁的收縮性大，當細胞不斷失水時，原生質層就會與細胞壁逐漸分離開，也就是分升了質壁分離當細胞液的濃度大于外界溶液的濃度時，外界溶液中的水分就透過原生質層進入細胞液中，整個原生質層就會慢慢地恢復成原來的狀態，使植物細胞逐漸發生質壁分離復原。

三、材料用具

紫色洋蔥鱗片葉、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、滴管、鑷子、刀片、吸水紙、清水、0.3g/ml蔗糖溶液

四、實驗過程（見書P60）

物理實驗報告 ·化學實驗報告 ·生物實驗報告 ·實驗報告格式 ·實驗報告模板

五、討論

1．如果將洋蔥表皮細胞浸潤在與細胞液濃度相同的蔗糖溶液中，這些表皮細胞會出現什么現象？

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關鍵詞：財務分析；報告；認識

中圖分類號：F276 文獻標識碼：A 文章編號：1001-828X（2012）07-0-01

當前，企業面臨的市場競爭環境越來越激烈，企業生存、發展和獲利也變得不確定，企業利益相關人為了自身利益的需要，希望及時、全面和客觀了解企業的財務經營狀況，以便做出正確的決策。而財務分析報告能直觀的揭示企業經濟內涵，滿足管理層、債權人對企業經濟活動的事前、事中預測和決策分析的需要。但作為財務工作人員，一般長于實務處理而短于財務報告的分析，苦于無問題可分析或拘囿于模式化分析。為此，筆者結合工作實際，談談自己對如何提升財務分析報告能力的認識。

一、財務分析報告概述

1.財務分析報告的類型

財務分析報告按內容劃分為綜合分析、專題分析和簡要分析報告。綜合分析報告是對企業整體財務情況進行分析，涵蓋了企業所有財務報表的分析，主要用于年度、半年和季度財務分析，屬于定期財務分析的范疇。它具有涉及面廣，信息量大的特點，對財務報告使用者做出各項決策有深遠的影響，也是企業財務分析報告最主要的內容。專題分析報告是對企業經濟活動中的重大經濟問題或薄弱環節進行專門分析，屬于不定期財務分析的范疇。它具有時間不固定、分析事項單一的特點，利于財務報告使用者解決企業的特定問題。簡要分析報告是對主要經濟指標進行概要的分析，主要用于月度或旬的財務分析，屬于不定期和定期財務分析的范疇。它具有簡明扼要、重點分析的特點，主要反映企業特定財務指標的分析或預測今后發展趨勢。

財務分析報告按分析時間可分為定期分析報告與不定期分析報告。定期分析報告主要受到財務制度強制性規定，主要向外部利益相關人提供企業一定時期的財務狀況，如綜合分析報告。而不定期報告不具有強制性規定，主要用于內部管理者對企業進行財務分析和財務決策，如專題分析報告。

2.財務報告的分析方法

財務分析方法主要有比較分析法、比率分析法和辨證分析法。比較分析法、比率分析法是基礎的分析方法。比較分析法是通過對經濟指標在數據上的比較來揭示經濟指標之間數量關系和差異；比率分析法是將兩個性質不同但相關的指標加以對比，找出客觀聯系。辨證分析法是財務報告分析最重要的分析方法，主要按照尋找差異-分析原因-措施建議的程序，揭示比較分析和比率分析中反映出企業財務報表中的變化和存在的問題的原因，通過對問題的深入分析，提出合理可行的解決辦法并形成相應的財務分析報告。

二、財務報告分析常見問題或不足

1.財務分析報告高度不夠

財務分析報告的編制是財務部門，而閱讀者主要是企業管理層，由于受到部門的局限性，財務分析報告只能站在財務的角度，而難以站在企業管理的高度。易出現“就財務而財務、就數據而數據”的問題，財務分析視角難以拓展，不能將指標數據和數據背后的經營實質聯系起來。這種與企業管理脫節，不能滿足企業管理層“真正想了解的信息”，只能稱為數據的羅列表述，而不是真正意義上的財務分析報告。

2.財務分析方法不科學

企業經營是一個動態的過程，財務報表數據雖然是靜態的，但這種靜態是相對的，而動態是絕對的，所以財務分析報告需要樹立辨證分析法的觀點來分析靜態的數據。目前，存在問題是分析方法不科學，習慣于靜態分析，靠經驗來判斷靜態數據背后的動態問題。造成無法揭示問題的本質，結果只能是“抓大放小、避重就輕”。

3.財務分析整體性差

在進行財務分析時，只有將多種指標結合起來，從整體上進行分析，層層深入、遞進式分析判斷，才能深挖出指標背后的問題。財務報表分析人員在進行財務分析時，常常習慣于單項指標分析和判斷，比如一個財務指標數值受到多種因素的影響，但分析時一般局限于一個指標進行反復分析，鮮于舉一反三的分析。即使進行多個指標綜合分析判斷時，一般也只是將各個指標數值簡單地加權計算，而沒有將各個指標數值之間的因果關系有機地聯系起來，更難以分析出指標背后的經濟實質。

三、如何提升財務分析報告能力

1.充分了解財務分析報告的目的

首先，在撰寫財務分析報告之前要明確分析報告的類型，有針對性的收集資料，以提高分析的效率和效果捕捉報表使用者希望“真正了解的信息”。其次，要辨證的進行財務分析，不同指標用于不同的財務分析目的，結果也不同，所以應辨證看待分析結果。比如資產負債率指標，當評價企業償債能力時，是越小越好，但用于財務杠桿分析，高的資產負債率，可能表明企業充分利用財務杠桿效應，對企業財務最大化不是劣勢而是優勢。再次，要了解財務報告對象不同，對于對外公布的財務分析報告，應使用約定俗成的語言，注重分析的完整性，防止社會公眾的誤解。對于企業管理層使用的財務分析報告，語言力求通俗易懂，要重點進行問題分析。

2.注意財務分析報告格式的規范化

財務分析報告屬于寫作的范疇，但不同于一般的文學作品，其更傾向于公文類的模式。財務分析報告內容一般包括前言段、說明段、分析評價段和建議措施段，根據分析目的不同可能有所取舍。一是要先草擬提綱和段落層次，然后搜集整理相關資料，確定分析方法，按照找出差異—原因分析—建議措施步驟來反映問題和揭示問題。二是要注意分析的廣度和深度，有所側重。分析問題過廣可能使財務分析報告抓不住重點，但分析的過窄可能使問題交代的不清楚。三是在財務分析報告形式上可以充分利用計算機應用技術，采用文字處理與圖表相結合的方法，使財務分析報告形象生動、一目了然。在格式上力求簡明扼要，對重大差異或重要的指標應標以特殊符號，以引起有關方面的重視。

3.財務分析報告應注意的事項

一是財務分析報告的寫作人員要注重素材積累，多了解一些宏觀經濟情況，把握企業財務狀況以外的客觀原因。要重點搜集同行業競爭對手資料，因為同行是財務分析最好的“參照物”。二是要注意橫向和縱向溝通，橫向要和企業其他部門溝通，以全面了解企業經營情況，防止企業財務分析報告出現“坐井觀天”現象。縱向要向企業管理高層多匯報、多請示，以了解企業未來經營戰略的方向，吃透企業政策，使財務分析報告發揮“導航器”作用。三是要注重財務分析報告文字表達，行文要盡量流暢、簡明，避免口語化。同時對財務數據多角度分析，避免輕易對財務數據下肯定結論，防止不準確的結論誤導財務報告閱讀者。

參考文獻：

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【關鍵詞】 分娩； 無保護會陰接生； 會陰裂傷；

會陰產傷的發生率是評價產科質量的重要指標之一。對產婦而言，如何以痛苦最輕，影響最小的方式分娩是許多產科從業人員關心的重要問題，隨著人們生活水平的提高和保健意識的增強，產婦及其家屬對產科質量的要求也越來越高，采取有效的措施預防會陰產傷的發生，為患者提供安全的助產服務，具有重要的臨床意義和社會價值。無保護會陰接生的少干預理念，給產婦和胎兒一個自然低創的分娩模式，本院于2012年底開展這項助產新技術，本文通過回顧性分析無保護會陰接生與傳統托肛保護會陰接生法在會陰裂傷及第二產程時間、產后2 h出血量等方面進行比較，探討無保護會陰接生的操作要點及臨床療效，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月-2013年3月本院采用無保護會陰接生產婦99例作為觀察組，患者年齡（27.49±2.90）歲，孕37～41周，同時選取同期分娩的采用傳統托肛法保護會陰產婦99例作為對照組，患者年齡（28.27±2.80）歲，孕37～41周，兩組產婦均為經陰道分娩的足月、單胎、頭位初產婦。骨盆測量均在正常范圍，無會陰側切指征，無第二產程延長及胎兒宮內窘迫，無妊娠期并發癥、產前通過產檢及B超排除巨大兒和生長受限兒等。

1.2 方法

1.2.1 觀察組 采用無保護會陰接生法，產婦臥于多功能電動產床上，床尾抬高30°，呈半臥位，宮縮時產婦雙手抱膝屈曲，貼近腹部，臀部抬高2～3 cm，臀裂以下離開床面，指導產婦正確運用腹壓，在宮宿間歇時停止，當胎頭撥露3 cm左右時，根據情況準備接生，待胎頭撥露至會陰體后聯合緊張時單手開始控制露頭速度，同時不要有協助胎頭俯屈的動作，不干預胎頭娩出角度和方向。建議著冠前不超過1 cm的娩出速度，雙頂徑娩出時，指導產婦均勻短暫用力，一般都可在宮縮時娩出，無需刻意協助仰伸，放棄傳統右手對會陰托壓的保護動作，讓胎頭緩慢地以仰伸方式依次娩出頂骨、枕骨、額骨、鼻、口、頦。速度可較前略快，當胎頭娩出后，擠凈口鼻黏液，不要急于讓胎肩娩出，耐心等待下一次宮縮，宮縮時雙手托住胎頭，產婦用力，盡量讓胎肩自然復位，娩出，最后勻速出胎體。

1.2.2 對照組 采用傳統的托肛法。胎頭撥露至需要保護會陰時，消毒會陰巾放于陰道口與皮膚之間，以右手拇指與其余四指分開，利用手掌大魚際肌及手腕部力量頂住會，宮縮時向上內方托壓，間歇時保護會陰手稍放松.以免擠壓過久引起會陰水腫，保護會陰直至胎兒娩出[1]。

1.3 評價標準 會陰裂傷評定標準：（1）會陰完整：會皮膚及陰道黏膜完整無裂傷；（2）Ⅰ度裂傷：會皮膚及陰道入口黏膜撕裂，未達肌層，一般出血不多；（3）Ⅱ度裂傷：指裂傷已達會陰體肌層，累及陰道后壁黏膜，甚至陰道后壁兩側溝向上撕裂，裂傷可不規則，出血較多；（4）Ⅲ度裂傷：裂傷向下擴展，外括約肌斷裂[2]。

1.4 統計學處理 采用SPSS 17.0軟件對所得數據進行統計分析，兩組產婦會陰撕裂程度比較采用秩和檢驗，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗，以P

2 結果

3 討論

無保護會陰接產法是利用分娩機轉中胎頭枕骨以恥骨弓為支點的仰伸動作，充分伸展以會陰體為核心的盆底組織，陰道口得以最大化，最后達到胎頭雙頂徑娩出的徑線，會陰整體的充分伸展與擴張保護了會陰，減少了撕裂傷發生[3]。無保護會陰接產法近零俯屈的方式讓胎頭持續、緩慢仰伸，盆底的各肌肉束向外、向兩側呈放射性伸展，下方會陰體完全伸展變薄，兩側充分擴張，胎頭的娩出壓力轉向恥骨，同時接生過程中強調半臥位分娩，旨在將骨盆出口充分打開，以最大徑線將胎兒娩出。上述資料中兩組均無Ⅲ度會陰裂傷，其中無保護會陰接生法6例會陰完整，會陰裂傷多為表淺傷，會陰裂傷程度和傳統會陰保護接產組相比，差異有統計學意義（P

雖然分娩是生理過程，但是許多產婦并不能很好地調整自己心態，對分娩存在內心恐懼和不安，情緒過于緊張，就會影響到整個產程進展，從而造成難產，無保護會陰接生法中助產人員與產婦的溝通以及助產士的耐心尤為重要，應該持續給予產婦心理及情感上的鼓勵，消除產婦的內心恐懼感，宮縮間歇時應與產婦溝通使其均勻用力，胎兒雙頂徑娩出后應繼續指導產婦注意控制呼吸節奏。2篇國外的RCT 發現，助產士在分娩過程中幫助胎頭俯屈并保護會陰，不能減少會陰損傷，但可以減輕產后疼痛。一項多中心前瞻性RCT 發現，在納入的1076例產婦中，協助分娩組會陰裂傷的發生率為32.5%，不協助組為35.8%，其中Ⅲ度裂傷的發生率分別為2.7%和0.9%；協助分娩組會陰側切率為17.9%，不協助組為10.1%，新生兒結局兩組間比較則無統計學意義[7]。另一項RCT納入5471例產婦，協助分娩組產后24 h疼痛的發生率為31.1%，不協助組為34.1%，會陰側切在不協助分娩組明顯減少，但手取胎盤的發生率增加[8]。

對兩組孕婦第二產程時間比較差異無統計學意義（P>0.05）。實際接產時，在胎頭即將著冠時，無保護會陰接產注重控制仰伸速度，講究單手控制防止露頭速度過快，產力均勻的情況下，提倡宮縮時娩出胎兒，使胎頭按頂骨、枕、額骨、面、下頦，依次娩出，同時復位、外旋轉，胎肩下降、娩出，對于產力過強的產婦，則于宮縮間歇期緩慢娩出，整個胎體的娩出幾乎都是一個自然而然的分娩過程，減少了人為手法干預的風險，預防了產傷的誘因。一項RCT納入了252例采用硬膜外麻醉的孕婦，在其宮口開全后立即用力與休息后用力比較。宮口開全后休息后再用力能減少產婦用力時間，但對于胎兒的Apgar評分、臍帶血pH值、會陰損傷發生率、器械助產的使用率，兩者沒有差別[8]，無保護會陰接產沒有過快加速產程，也沒有刻意阻擋胎兒的娩出，而是讓分娩在胎兒和產道相互可適度的時限內完成。

無保護會陰接產對于助產人員的培訓要求、產科服務模式的轉變及與傳統接產理念的撞擊，尤其潛在的風險等影響因素還需要探索研究，無保護會陰接生操作方便，以產婦為中心，減少助產士頸椎、腰椎疲勞，避免職業病的發生，符合自然分娩、綠色分娩的理念[9]，會陰保護效果良好，值得臨床研究推廣。

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關鍵詞:生物教學;環保;教育;生態

環境與人類的生存及社會經濟建設關系密切，隨著現代化進程的不斷深入，環境問題已經引起各國和人民的關注，環境保護需要全人類共同長期努力才能達到的。環境保護一直以來是我國的一項基本國策，也是我國可持續發展戰略的重要環節，普及環保知識，讓更多的人特別是廣大中學生增強環保觀念成為當務之急。只有懂得與大自然和諧相處，才能更好的掌握人類的未來。生物是研究生命現象和本質的一門基礎自然學科，而環保教育是生物科學賦予生物教學的一項重要任務［1］。因此，開展環保教育非常必要，對中學學生進行環保教育不僅是時代賦予教師的神圣使命，更是教師義不容辭的責任。

一、環保教育與生物學的關系

現在中學生物教科書中有很多關于環境保護教育的內容，有直接說明環保教育的，也有間接的。如初中生物教科書第二冊“生物與環境”中:什么是環境、環境構成要素、環境問題、環境保護基本原則等，“探索生物的奧秘”中:環境污染、自然環境保護等，都是有關于環境或環保相關的內容。還有植物生長與環境的關系、動物的擬態、生物的多樣性、動物的保護、生物進化、資源保護、人口問題等等。這么多豐富多彩與環境有關的內容出現在生物教科書中，足以說明環境或環保教育在生物教學中的重要性。

(一)生物與環境

生物的生存依賴一定的環境，又影響環境，同時環境中的各種因素又影響生物的生活，如生活在草原上的兔子，以草為食物，依賴環境中的空氣、陽光、水等而生存;然而由于兔子以草為食物，又會對草原環境造成一定影響，若兔子大量繁殖，將會對草原造成很大的破壞，這樣又會造成食物短缺而限制兔子的數量。當前，各種工業與生活廢水的排放也造成大的影響，比如流入湖泊的工業與生活廢水，嚴重威脅著魚、蝦和貝類等水生動物的生存，破壞了湖泊生態系統的食物鏈，使湖泊變成“死湖”，甚至影響到周邊的農作物與樹木。生物與環境是相互依賴又相互影響的關系，只有保護好環境，生物才能自由自在的生活下去。

(二)人口問題

人口的龐大對自然資源需求的壓力無疑加大了自然環境的壓力，人口增加將會引起糧食不足，必然導致毀林開荒、毀草墾殖、過度放牧和捕撈，造成自然生態環境的破壞，使資源耗竭，生態失衡。目前我國雖然堅持不懈地植樹造林和保護森林資源，但我國的生態環境仍比較脆弱，盡管中國是世界上能源、礦產資源較豐富的國家之一，有很多資源儲量在世界上居于前列，但是我國現人口接近14億，人均資源占有量并不高。因此，控制人口，提高人口素質，才能有效地減輕環境的壓力。

(三)生物的多樣性

所謂生物多樣性是指在一定空間范圍內多種多樣活的動物、植物和微生物有規律地結合在一起的總稱，有生態系統多樣性、物種多樣性等，生物多樣性是人類賴以生存和發展的重要物質基礎，是全人類共同的財富，是人類能否實現可持續發展這一長遠目標的保證。可以用實例讓學生了解生物多樣性和重要性。比如云南德宏就是一個生物資源非常豐富的地方，有許多野生動植物資源，素有“熱帶亞熱帶物種基因庫”的美稱。生物的多樣性為人類提供了食物、藥材、衣物等生活必需品，還提供了清潔的空氣和適宜的環境溫度。而一旦生物多樣性遭到破壞，人類的必需品就會短缺，適宜居住的環境將遭到破壞，將會給人們造成是無法挽回的損失。因此，在中學生物教學中，我們應當抓住一切機會向學生進行環保教育，讓他們在學習中深刻體會保護環境的重要性，讓他們認識到，保護生物多樣性，保護環境是我們大家共同的責任。

二、如何從中學生物教學中體現環保教育

在中學生物教學中體現環保教育的因子，可以從很多方面入手，主要以課堂教學入手，實踐為輔，把理論知識與實際生活相結合，根據學生的心理特點，設計出吸引學生學習，感興趣的生動活潑的教學方案，內容要豐富多彩，形式可以多種多樣。

(一)通過書本理論知識學習，強化學生環保意識

課堂教育是學生學習知識的重要場所，很多時候在學生心里教師的一舉一動、一言一行有著更大的影響力。因此，作為生物教師往往可以通過作為教師的影響力，將有關環境保護的一些理念傳輸給學生，使其逐漸產生環保意識并從自我做起。從這個角度講，生物老師有責任將環保相關知識以有趣的、學生容易接受的方式融入課堂，使學生在愉快、輕松的學習中得到了環保知識，并增加了環保觀念。比如:在學習“光合作用”這一節中，可以先介紹光合作用的過程和原理。讓學生先了解光合作用的全過程，包括植物是怎么吸收利用二氧化碳，釋放出氧氣的;然后聯系生活講述溫室效應、全球變暖的危害，引出二氧化碳的主要危害作用。同時列舉數字介紹我國森林破壞的程度，通過用一棵樹每天吸收多少二氧化碳，釋放多少氧氣，從而推算出一棵樹一生的價值與貢獻，可得出綠色植物重要性。使學生看到保護環境的重要性，從而增強學生的危機感，強化學生環保意識。又如:在“生物的多樣性”教學時，聯系所學的食物鏈、食物網，可以列舉一些益蟲消滅害蟲的例子，結合濫捕、濫殺、濫食野生動物的情況，導致許多物種瀕臨滅絕，環境問題日益嚴重［2］。使學生認識到只有與自然和諧相處，我們才能更好的生存下去。

(二)通過生物教學環節，加強學生環保意識

生物教學不但可以利用教材中的環保知識，同時可以利用各種媒體的宣傳知識，在課堂上給學生傳遞或穿插一些最新的環境保護相關知識。1．創設上課前后的5分鐘環保演講每節課老師可以利用5分鐘的時間給學生，讓他們上臺演講，內容圍繞學生通過課外的各種來源所了解或積累的有關環境與環保相關知識，來談談自己的看法。如:大氣污染日益嚴重，在全國600多個城市中，大氣質量符合國家一級環境質量的不足1%，許多大城市大氣污染程度已名列世界前列。目前，我國的二氧化硫年排放量多達2000萬噸，位居世界第一，成為造成酸雨的主要原因之一。通過類似方式既可以讓學生關心國家和社會，同時也可以了解環境污染的現實和環境保護的重要，又可以通過演講鍛煉膽量，提高學生的表達能力。2．課堂穿插環保意識在緊張的課堂之余，作為中學生物教師，可以通過視頻或小故事等方式進行環保的介紹，不僅放松了學生的心情，也可以豐富生物教學內容。比如關于的霧霾的視頻，可以讓學生了解因為工業生產、機動車尾氣排放、冬季取暖燒煤等原因導致了大氣中的顆粒物濃度增加，在氣象條件作用下就形成揮之不去的霧霾，當吸入人的呼吸道后對人體有害，如長期吸入，嚴重者會導致死亡等。通過這些與現實相關的視頻或小故事可以激發學生對環境及環保認識的積極性，并在潛移默化中在學生的心里種下環保的種子，使學生認識到環保應從我做起，從小事做起。

(三)通過實踐活動的開展，增進學生的環保意識

增強學生的環保意識可以開展一些實踐活動，把環保教育與生活聯系起來，既可以培養學生的動手能力、實踐能力，又能提高環保意識，并能影響與帶動身邊的人，使更多的人參與進來進而增加大家的環境保護意識。

1．鼓勵學生進行環保相關小實驗

動手做一些小實驗是提高中學生學習興趣的主要方法之一，可以根據學生自己的愛好自愿參加，成立一些興趣小組。把相關環保的一些實驗插入課堂教學，即使在課堂中不能短時間完成，也可以分給興趣小組的人一起做，一起觀察，讓他們自覺地學習實驗原理及相關知識。當然前提是讓學生提升興趣的，又能讓學生從中汲取相關環保知識。如光合作用的實驗，光合作用的原料是二氧化碳、水，合成有機物，儲存能量，釋放氧氣。6CO2+6H2OC6H12O6+6O2+ATP(光照、葉綠素)［3］。可以選用2株相同的植物，分別放入2個密閉的玻璃容器中，分別放入NaOH、Na2CO3溶液密閉封好，置于陽光下觀察一個星期，根據結果對實驗分析，得出結論，并說明綠色植物對環境的重要性。還可以做水土流失的實驗等等，根據教材內容帶領興趣小組設計出合適的實驗，對實驗結果進行分析，有的實驗會存在誤差，引導學生發現問題、解決問題，一舉兩得［4－5］。

2．開展有環保創意的小活動

在學生學習的課余時間，組織一些喜聞樂見的活動，將所學習的理論與實際聯系起來，擴大學生視野。比如利用身邊的一些廢舊、廢棄物品，制作設計一些有創新意義、有環保價值的作品，并加以相應的獎勵;這樣既培養了學生的想象力，又培養了學生的動手能力，對智力的開發有很大幫助，同時還讓學生切身感受到變廢為寶的真實涵義。通過此類活動，可使學生進一步認識到環保的重要性，鞏固學生的環保意識。

3．舉辦演講比賽或知識競賽

積極開展環境保護宣傳，對學生進行環保教育。可推動學校每年舉辦一次關于環境教育的演講比賽、知識競賽等。在老師的帶領和引導下，讓學生設計活動的過程，形式可多種多樣，來加深學生的環保意識，讓環保教育的觀念根深蒂固。如:3月12日“植樹節”可以開展綠化美化環境活動，使學生參加植樹、種花種草或舉辦演講活動或知識競賽，使學生認識到植物在大自然的重要作用。6月5日是“世界環境日”，目的是喚醒和動員全世界注意全球環境狀況和人類活動對環境的危害，結合環境日來教育學生保護環境應該從小做起、從我做起、從現在做起，保護地球生態環境，從而保護人類自己。

4．調查周圍環境

環境問題是普遍存在的，可以安全的前提下組織學生深入所在地區開展調查活動，了解自己生活的周圍環境污染狀況及帶來的種種不良影響，以及人們為此付出的代價。讓學生親身感受生態環境對人類生存與發展的重要性。同時也可以讓學生通過上網、去圖書館或相關部門調查了解這幾十年來的環境變化。通過相關的調查活動讓學生親身體驗，讓大家認識環境保護的迫切性，更好地激發學生保護環境的意識。

三、開展環保教育勢在必行

生物教學作為環境教育的重要學科之一，使生物教學成為環境教育的基礎，知道當今面臨的環境問題、環境危機，已經嚴重地威脅著人類和其他生物的生存與持續發展。同時也在指導著學生如何去保護環境、愛護環境。目前我國正處在工業化和城鎮化快速發展的時期，對自然資源的開發強力度加大，污染物排放量急劇增長，對環境的壓力不斷增加，環境形勢十分嚴峻。因此，在中學生物教學中，我們可以通過各種教育手段和形式來提高學生的“環保”意識，讓他們深刻體會保護環境的重要性，并把這種意識轉化為一種習慣。尤其黨的“十”上，提出了生態文明建設，從國家層面強調了生態環境保護的重要性。可以此為契機，鼓勵青少年提高科學素質和熱愛生物科學，熱愛家鄉的思想和品質。當今世界我們人類立身的生態環境已經受嚴重的威脅，開展環保教育勢在必行，保護環境是每一個公民應盡的責任和義務，作為教師都應該引導學生愛護環境，保護我們賴以生存的家園。

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