導語：大鼠直腸注入甲醛分析論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

【關鍵詞】內(nèi)臟痛覺

Suppressiveeffectofintrathecaladministrationofdiazepamonvisceralpaininducedbyrectalinstillationofformalininrats

【Abstract】AIM:Toexplorewhetherdiazepamhasasuppressiveeffectonvisceralpainatthespinallevel.METHODS:Byintrathecaldrugadministration,theeffectofdiazepamonpersistentvisceralpaininducedbyrectalinstillationofformalinwasstudied.RESULTS:Rectalinstillationofformalininducedobviousvisceralpainresponses,whichoccurredmainlywithin0~75minaftertherectaladministrationofformalin.Intrathecalpretreatmentwiththreedosesofdiazepamsuppressedthevisceralpainresponsesinducedbyformalinandtheanalgesicactionofdiazepamwasmainlywithin0~60minaftertherectaladministrationofformalin.CONCLUSION:Intrathecalpretreatmentwithdiazepamsuppressesthevisceralpaininducedbyrectalinstillationofformalin,whichsuggeststhatdiazepamexertssomesuppressiveeffectonvisceralpainatthespinallevel.

【Keywords】diazepam;visceralpain;formaldehyde;latency

【摘要】目的：研究地西泮在脊髓水平對內(nèi)臟痛有無抑制作用.方法：采用鞘內(nèi)給藥的方法觀察地西泮對大鼠直腸注入甲醛致持續(xù)性內(nèi)臟痛的抑制作用.結果：①直腸注入甲醛可引起大鼠劇烈的內(nèi)臟痛反應，疼痛反應主要集中在甲醛刺激大鼠直腸后的75min內(nèi).②鞘內(nèi)預先注入三個劑量的地西泮均可抑制甲醛刺激大鼠直腸誘發(fā)的內(nèi)臟痛，鎮(zhèn)痛作用主要集中在甲醛刺激直腸后的0~60min.結論：鞘內(nèi)注射地西泮可抑制大鼠直腸注入甲醛引起的內(nèi)臟痛覺，提示地西泮在脊髓水平對內(nèi)臟痛有抑制作用.

【關鍵詞】地西泮；內(nèi)臟痛覺；甲醛；潛伏期

0引言

地西泮（diazepam,valium,安定）是苯二氮革類的典型代表藥物，也是臨床上最常用的鎮(zhèn)靜、催眠及抗焦慮藥.以往研究表明，鞘內(nèi)注入地西泮可抑制軀體痛覺的傳入［1］.但其是否可以作用于脊髓從而抑制內(nèi)臟痛覺的傳入尚無定論.故本實驗利用甲醛內(nèi)臟痛模型，應用鞘內(nèi)注射地西泮至腰骶膨大的方法探索地西泮在脊髓水平對內(nèi)臟痛是否有抑制作用.

1材料和方法

1.1材料

雄性SpragueDawley(SD)大鼠48只，體質(zhì)量180~220g（第四軍醫(yī)大學動物實驗中心提供），實驗前3d將大鼠置于20~24℃，濕度為50%~60%的環(huán)境，保持晝夜節(jié)律.實驗時，將大鼠隨機分為6組（每組8只）：直腸對照組：直腸注入0.5mL生理鹽水；模型組：直腸注入0.5mL20g/L甲醛；鞘內(nèi)對照組：鞘內(nèi)注入10μL生理鹽水，10min后直腸注入0.5mL20g/L甲醛；低劑量實驗組：鞘內(nèi)注入10μL濃度為0.4g/L的地西泮，10min后直腸注入0.5mL20g/L甲醛；中劑量實驗組：鞘內(nèi)注入地西泮的濃度為1.6g/L，其余同低劑量實驗組；高劑量實驗組：鞘內(nèi)注入地西泮濃度為3.0g/L，其余同低劑量實驗組.地西泮（針劑）購于西安利君制藥股份有限公司.實驗過程中，保持溫度（20~24℃）、濕度（50%~60%）和周圍環(huán)境安靜，避免不必要刺激的影響.本實驗操作嚴格遵守國際疼痛學會(IASP)制定的《關于使用清醒動物進行疼痛研究的綱要》.

1.2方法

1.2.1鞘內(nèi)置管術經(jīng)腹腔注射戊巴比妥鈉（40mg/kg）深度麻醉大鼠后，從C7水平沿背正中線向尾部切開皮膚、皮下組織、肌肉，暴露并去除T4椎板（約1mm×1mm），切開硬脊膜，經(jīng)鞘內(nèi)向尾部置入內(nèi)腔充盈7μL生理鹽水的聚乙烯PE8導管（內(nèi)徑0.28mm，外徑0.6mm，購自日本Natume公司），根據(jù)動物大小確定置入導管從入口到腰骶膨大處的長度（大約3～5cm），經(jīng)導管注入生理鹽水后見硬膜破口處有腦脊液流出證明導管在蛛網(wǎng)膜腔內(nèi).封外口，局部青霉素抗感染.術后單籠飼養(yǎng)3～5d，觀察動物狀態(tài)良好，無活動障礙，則可進行實驗［2］.

1.2.2鞘內(nèi)給藥鞘內(nèi)置管術未引起大鼠運動障礙和毒性反應.鞘內(nèi)對照組和三個實驗組的大鼠在實驗玻璃箱適應30min后，乙醚麻醉，用10μL微量注射器（寧波鎮(zhèn)海玻璃儀器廠）將10μL生理鹽水或不同濃度地西泮以0.5μL/s的速度注入預先置好的聚乙烯PE8導管，后用7μL生理鹽水洗脫，確保地西泮注入到脊髓，封外口.動物實驗完畢后，解剖證實導管內(nèi)口開口于蛛網(wǎng)膜下腔腰骶膨大處.局部脊髓無損傷及陳舊性出血，說明本實驗結果可靠.

1.2.3內(nèi)臟疼痛的行為學觀察將30cm×30cm×30cm的透明有機玻璃箱置于高于實驗臺45cm的玻璃臺上，實驗前30min將大鼠置于其中使其適應環(huán)境，后用乙醚將其麻醉，在肛門周圍裸露皮膚涂抹凡士林（避免甲醛接觸肛周皮膚引起軀體痛覺），將直徑1.5mm的圓頭細管迅速經(jīng)肛門插入直腸（鞘內(nèi)對照組和實驗組鞘內(nèi)生理鹽水或地西泮處理10min后進行此操作），按分組要求分別將0.5mL生理鹽水或0.5mL20g/L甲醛溶液注入大鼠直腸.以5min為間隔，觀察并記錄90min內(nèi)大鼠的內(nèi)臟痛相關行為（viseralpainrelatedbehaviors,VPRB）的數(shù)目［3］［A：大鼠舔或輕咬腹部、下肢及會陰周圍的皮膚；B：伸展軀體使其拉長；C：腹部收縮側屈身體；D：全身收縮使背部拱起呈弓形，持續(xù)時間(t)<30s；E：全身收縮使背部拱起呈弓形，30s60s］，同時記錄大鼠出現(xiàn)第一個上述動作的時間，即潛伏期(latency).根據(jù)記錄的內(nèi)臟痛相關行為，用公式S=1A+2B+3C+4D+5E+6F計算所得數(shù)值評估大鼠直腸注入甲醛后不同時間段的疼痛反應(spontaneousnociceptiveresponse).

統(tǒng)計學處理：用SPSS11.0軟件進行統(tǒng)計學處理.數(shù)據(jù)以x±s表示，用重復測量數(shù)據(jù)的方差分析對不同組的內(nèi)臟疼痛反應做統(tǒng)計學分析，用Dunnettt法分析第一個內(nèi)臟痛相關行為的潛伏期.P＜0.05為差異有顯著性.

2結果

2.1直腸注入甲醛后誘導的疼痛反應以15min為間隔，統(tǒng)計大鼠直腸注入不同溶液后90min內(nèi)的行為學指標(見表1).大鼠直腸注入甲醛，可引起了大鼠劇烈的內(nèi)臟痛覺，疼痛反應主要集中在甲醛刺激直腸后的75min內(nèi)，其中，在甲醛刺激直腸后15~30min，疼痛反應最劇烈.

2.2鞘內(nèi)給予地西泮抑制大鼠內(nèi)臟痛覺反應鞘內(nèi)注射生理鹽水對內(nèi)臟痛覺影響較小(表1).3個實驗組與模型組比較，內(nèi)臟疼痛反應均明顯減弱(P<0.001).鞘內(nèi)應用三個濃度地西泮發(fā)現(xiàn)：鞘內(nèi)注射地西泮的鎮(zhèn)痛作用主要集中在甲醛刺激直腸后的0~60min，鞘內(nèi)地西泮濃度為3.0g/L時，地西泮的鎮(zhèn)痛作用的持續(xù)時間最長，為60min，而低濃度的地西泮（0.4g/L,1.6g/L）的鎮(zhèn)痛作用持續(xù)45min.

2.3各組大鼠出現(xiàn)第一個VPRB的潛伏期直腸對照組、模型組、鞘內(nèi)對照組、低劑量實驗組、中劑量實驗組、高劑量實驗組第一個VPRB的潛伏期分別為(79.2±11.8)s;(22.5±1.4)s;(24.1±1.7)s;(47.3±5.3)s;(42.3±3.5)s;(69.2±7.2)s.模型組第一個VPRB的潛伏期較直腸對照組明顯縮短（P<0.05），但模型組和鞘內(nèi)對照組第一個VPRB的潛伏期無顯著差異(圖1).實驗組與模型組比較，實驗組第一個VPRB的潛伏期較模型組明顯增加(P＜0.05).表1各組大鼠直腸注入生理鹽水或甲醛后內(nèi)臟疼痛反應(略)

3討論

內(nèi)臟痛（visceralpain）是一種臨床上常見的疼痛現(xiàn)象.目前研究內(nèi)臟痛的模型較多，但在實驗過程中易混雜軀體痛覺的影響.在本研究中，我們直接將0.5mL濃度為20g/L的甲醛溶液通過圓頭塑料管注入大鼠直腸，觀察并計數(shù)內(nèi)臟痛相關行為發(fā)現(xiàn)，直接將甲醛注入直腸后大鼠的內(nèi)臟痛行為反應較直腸對照組強烈，并且大鼠出現(xiàn)第一個VPRB的潛伏期較直腸對照組也明顯縮短，表明直接將甲醛注入大鼠直腸可誘發(fā)大鼠的內(nèi)臟痛覺，并且甲醛誘發(fā)的內(nèi)臟痛覺呈單相，主要集中在甲醛刺激直腸后的75min內(nèi)，這不同于將甲醛注入直腸壁致內(nèi)臟痛所呈現(xiàn)的雙相時程［3］.另外，本研究在直腸注入甲醛之前，將凡士林涂抹在大鼠的肛門周圍，避免了軀體痛覺的影響，因此，本研究中甲醛刺激大鼠直腸引起的內(nèi)臟痛有特異性.

另外，將三種不同劑量的地西泮注入大鼠的蛛網(wǎng)膜下腔，發(fā)現(xiàn)鞘內(nèi)注入地西泮對大鼠的內(nèi)臟痛覺有抑制作用，主要表現(xiàn)在兩個方面：①直腸注入甲醛后的75min內(nèi)，實驗組大鼠的內(nèi)臟痛反應較模型組明顯減弱；②鞘內(nèi)注入地西泮后，大鼠出現(xiàn)第一個VPRB的潛伏期較模型組明顯延長.另外，地西泮對內(nèi)臟痛抑制作用的持續(xù)時間與地西泮劑量成依賴關系，即鞘內(nèi)注入的地西泮劑量越大，其對內(nèi)臟痛的抑制時間越長.

鞘內(nèi)地西泮對內(nèi)臟痛的抑制作用可能與中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的GABA有關.以往的很多證據(jù)表明，GABA及其受體在疼痛的調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮重要的作用［4］.另外，骶髓后連合核（sacraldorsalcommissualnucleus,SDCN）是位于腰骶膨大處的重要核團［5］，是盆腔內(nèi)臟傷害性信息感覺傳遞的中繼站［6］，其內(nèi)分布大量的GABA免疫陽性的神經(jīng)元、終末以及GABAA受體［5,7-8］.地西泮作為GABAA受體的配體之一，可作用于GABAA受體，促進GABA與GABAA受體的結合，通過增強Cl-通道開放的頻率增強GABA對GABAA受體的作用而顯示中樞抑制作用.在本實驗中，鞘內(nèi)注射地西泮至腰骶膨大，地西泮可能作用于SDCN上的GABAA受體，促進GABA與GABAA受體的結合能力，增強了GABAA受體上Cl-通道開放的頻率，進一步抑制了內(nèi)臟痛覺傳入神經(jīng)元間的突觸活動，使內(nèi)臟痛覺傳入過程受阻，因此，鞘內(nèi)地西泮預處理10min后將甲醛注入直腸，大鼠的內(nèi)臟疼痛反應以及出現(xiàn)第一個VPRB的潛伏期較模型組分別減少和延長.但至于地西泮是否真正可以增強GABA與SDCN上GABAA受體的結合，并無確切報道，有待于進一步探究.

【參考文獻】

［1］PomeranzB,NguyenP.Intrathecaldiazepamsuppressesnociceptivereflexesandpotentiateselectroacupunctureeffectsinpentobarbitalanesthetizedrats［J］.NeurosciLett,1987,77(3):316-320.

［2］LopachinRM,RudyTA,YakshTL,etal.Animprovedmethodforchroniccatheterizationoftheratsubarachoidspace［J］.PhysiolBehav,1981,27(3):559-561.

［3］MiampambaM,CheryCrozeS,DetolleSarbachS,etal.AntinociceptiveeffectsoforalclonidineandS128134inacutecoloninflammationinrats［J］.EurJPharmacol,1996,308(3):251-259.

［4］MalcangioM,BoweryNG.GABAanditsreceptorsinthespinalcord［J］.TrendsPharmacolSci,1996,17(12):457-462.

［5］LuY,JinSX,XuTL,etal.ExpressionofcfosproteininsubstancePreceptorlikeimmunoreactiveneuronsinresponsestonoxiousstimuliintheurinarybladder:Anobservationinthelumbosacralcordsegmentsoftherat［J］.NeurosciLett,1995,198(2):139-142.

［6］UeyamaT,ArakawaH,MizunoN.Centraldistributionofefferentandafferentcomponentsofthepudendalnerveinrat［J］.AnatEmbryol(Berl),1987,177(1):37-49.

［7］AntalM,PetkoM,PolgarE,etal.DirectevidenceofanextensiveGABAergicinnervationofthespinaldorsalhornbyfibersdescendingfromtherostralventromediamedulla［J］.Neuroscience,1996,73(2):509-518.

［8］BohlhalterS,WeinmannO,MohlerH,etal.LaminarcompartmentalizationofGABAAreceptorsubtypesinthespinalcord:Animmunohistochemicalstudy［J］.JNeurosci,1996,16(1):283-297.