導(dǎo)語(yǔ)：大鼠股骨骨折愈合影響論文一文來(lái)源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢(xún)客服老師，歡迎參考。

他汀類(lèi)藥物是目前臨床用于降低膽固醇、預(yù)防心血管疾病的常用藥物，其功能機(jī)制是抑制羥甲基戊二酰輔酶A還原酶，從而降低肝臟膽固醇的合成.Mundy等［1］的探究第一次表明，他汀類(lèi)藥物具有激活成骨細(xì)胞、促進(jìn)骨合成代謝功能，這一發(fā)現(xiàn)為臨床治療骨質(zhì)疏松和骨折愈合提供了新的思路，成為目前對(duì)于探究骨代謝新藥的一個(gè)熱點(diǎn)新問(wèn)題.為了進(jìn)一步探索該藥物的成骨功能及其機(jī)制，我們通過(guò)建立大鼠骨折模型［2］的方法，進(jìn)行了該藥物對(duì)大鼠骨折愈合影響的初步實(shí)驗(yàn)探究.

1材料和方法

1.1動(dòng)物模型制備和分組健康12周齡雌性SD大鼠20只，體質(zhì)量(238±22)g.以10g/L戊巴比妥鈉按40mg/kg腹腔注射麻醉，麻醉成功后，將大鼠仰臥于手術(shù)臺(tái)上，常規(guī)去毛、備皮、碘伏消毒，于右大腿中段外側(cè)取縱形皮膚切口，長(zhǎng)約2cm，沿股外側(cè)肌間隙鈍性分離進(jìn)入達(dá)股骨干，固定股骨，在骨干中1/3段用線鋸鋸斷成橫行骨折，此過(guò)程中注重保護(hù)坐骨神經(jīng)和肌肉組織，然后，以直徑約1.5mm的克氏針逆行穿入骨折近端且從后側(cè)股骨大粗隆穿出，復(fù)位骨折后再將其順行穿入骨折遠(yuǎn)段髓腔，生理鹽水沖洗，逐層關(guān)閉傷口.然后，將動(dòng)物隨機(jī)分成兩組（每組10只）摘要：給藥組（Fracture+Simvastatin）以5mg/kg隔日灌胃給辛伐他汀藥物一次；對(duì)照組（Fracture+Vehicle）以同樣方法給和等量的生理鹽水.

所有的受試大鼠在術(shù)后6wk處死，并且處死前第10日和第4日分別皮下注射鹽酸四環(huán)素和鈣黃綠素行雙熒光標(biāo)記，處死后的大鼠取右側(cè)股骨標(biāo)本.

1.2觀察指標(biāo)

1.2.1CR攝片將大鼠完整右側(cè)股骨干骨折標(biāo)本經(jīng)計(jì)算機(jī)X線攝相儀（CR）攝片（距離摘要：90cm、電壓摘要：40KV、電流摘要：3.2mA%26#12539;s），觀察大鼠股骨骨折骨痂的連續(xù)性和測(cè)量骨痂最大直徑.

1.2.2密度測(cè)定應(yīng)用NorlandXR36雙能X線骨密度測(cè)量?jī)x（DEXA，美國(guó)），采用小物體掃描模式，準(zhǔn)確度0.01%，掃描速度60mm/s,分辨率（resolution）1.0mm×1.0mm，掃描寬度5.0cm的參數(shù)值，進(jìn)行右側(cè)股骨中1／3段（骨痂）骨密度的測(cè)量.測(cè)量時(shí)，將固定骨折部位的克氏針拔除，其范圍包含了以每個(gè)骨折部位為中心的無(wú)克氏針矩形區(qū)域，即摘要：感性趣區(qū).

為了評(píng)價(jià)精確度，隨機(jī)選取一例，在位置不變的情況下，連續(xù)測(cè)量BMD各5次，精確度用變異系數(shù)CV表示（CV＝5%）.

1.2.3形態(tài)學(xué)染色將骨折骨痂標(biāo)本，置入40g/L多聚甲醛和0.6mol/L戊二醛混合緩沖固定液中（pH=7.2～7.4），在4℃條件下固定24～48h，再經(jīng)0.3mol/LEDTA2Na緩沖液（pH=7.4，4℃）脫鈣，隔5～7h更換脫鈣液，經(jīng)過(guò)3～5wk后，經(jīng)鑒定，脫鈣完全.然后,梯度乙醇脫水,二甲苯透明，縱向石蠟包埋,5μm連續(xù)切片，HE染色，透明后中性樹(shù)膠封片，Olympus顯微鏡下作普通光鏡觀察.

1.2.4骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)測(cè)定將骨痂標(biāo)本固定后逐級(jí)脫水，浸入3∶7的甲基丙烯酸甲酯中24h［真空負(fù)壓651.88mmHg(1mmHg=0.133kPa),1次］，然后以半聚合甲基丙烯酸甲酯包埋制成實(shí)驗(yàn)標(biāo)本.采用JungK硬組織切片機(jī)，每個(gè)標(biāo)本連續(xù)切6張10μm和4張5μm厚的不脫鈣骨切片，其中5μm薄片采用甲苯胺藍(lán)染色用于普通光學(xué)顯微鏡下觀察和測(cè)量，10μm厚片用于熒光顯微鏡下觀察測(cè)量.

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理摘要：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)建立EXCEL數(shù)據(jù)庫(kù)，資料用SPSS11.0來(lái)處理，采用成組t檢驗(yàn).數(shù)據(jù)用x±s表示，以P＜0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2結(jié)果

2.1CR攝片觀察觀察大鼠離體右側(cè)股骨干CR片發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組和給藥組大鼠骨折端均有連續(xù)性骨痂包繞，骨折線模糊或消失，骨痂量沒(méi)有明顯的差別，未發(fā)現(xiàn)內(nèi)固定克氏針?biāo)蓜?dòng)現(xiàn)象，但是，給藥組有3只股骨干的骨折骨痂塑形明顯好于對(duì)照組；測(cè)量所得兩組骨痂最大直徑寬度，對(duì)照組摘要：（4.35±0.48）mm，給藥組摘要：（4.43±0.39）mm，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異無(wú)顯著性（P＞0.05）.

2.2骨密度測(cè)量骨痂骨密度測(cè)量結(jié)果(g/cm2)顯示，對(duì)照組摘要：0.1208±0.0101，給藥組摘要：0.1292±0.0075，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異有顯著性（P＜0.05）.

2.3組織學(xué)觀察給藥組和對(duì)照組比較骨痂中均主要以骨性骨痂為主，軟骨骨痂少見(jiàn)或基本消失，小梁骨成熟度較高，成骨細(xì)胞功能活躍，破骨細(xì)胞少見(jiàn)，不典型，骨小梁粗細(xì)均勻一致，間距無(wú)明顯增寬，二者比較無(wú)明顯的組織形態(tài)學(xué)差異.

2.4骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)測(cè)量對(duì)照組及給藥組的BV/TV（%），Tb.Th（μm），Tb.N（#/mm），Tb.Sp（μm）分別是31±5，40±6；157±48，136±38；3.0±0.4，3.8±0.5；351±25，314±25.其中，兩組Tb.Th經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異無(wú)顯著性（P＞0.05），BV/TV，Tb.N，Tb.Sp經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異有顯著性（P＜0.05）.

3討論

他汀類(lèi)藥物是臨床上廣泛應(yīng)用的一種降血脂藥物，然而，Mundy等［1］通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，在對(duì)3萬(wàn)多種天然或人工化合物的篩選中，意外發(fā)現(xiàn)它還是所選藥物中唯一具有激活成骨細(xì)胞、促進(jìn)骨合成代謝功能的藥物.該實(shí)驗(yàn)將他汀類(lèi)藥物加入小鼠（2T3）和人（MG63）成骨細(xì)胞培養(yǎng)液中，經(jīng)印跡雜交方法分析顯示，BMP2mRNA的表達(dá)水平明顯提高，而且BMP2的表達(dá)成特異性，但它并沒(méi)有增加BMP4、IL6、甲狀腺素及相關(guān)多肽的表達(dá).在經(jīng)2.5μL辛伐他汀處理的人MG63成骨細(xì)胞培養(yǎng)液中，BMP2的產(chǎn)量可增加2.7倍.體外藥物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，辛伐他汀可刺激成骨細(xì)胞增加特異性熒光素酶的活性.但是，這一功能可以被還原酶的下游代謝產(chǎn)物甲羥戊酸所阻斷，盡管甲羥戊酸可能和細(xì)胞膽固醇合成通路無(wú)關(guān)，但仍提示他汀類(lèi)藥物的促骨形成功能和此酶受抑制有關(guān).此外，他汀類(lèi)藥物還可提高體外培養(yǎng)的新生小鼠顱蓋骨細(xì)胞的數(shù)量和新骨生成量.

Sugiyama等［3］進(jìn)行了更深入的探究，他們將一種包含了人類(lèi)BMP2基因5’F啟動(dòng)子區(qū)的熒光素酶報(bào)告基因轉(zhuǎn)染給人類(lèi)骨肉瘤細(xì)胞，在加入辛伐他汀后發(fā)現(xiàn)，該藥物具有促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞BMP2基因表達(dá)的專(zhuān)一性.而對(duì)于BMP4或猴病毒40啟動(dòng)子活性幾乎沒(méi)有影響，通過(guò)反轉(zhuǎn)錄PCR分析和堿性磷酸酶檢測(cè)顯示其能誘導(dǎo)BMP2mRNA和蛋白表達(dá)的增加.

目前，對(duì)于他汀類(lèi)藥物的探究結(jié)果并不一致，Mundy等［1］的實(shí)驗(yàn)認(rèn)為他汀類(lèi)藥物促進(jìn)骨形成，抑制骨吸收；而Maritz等［4］認(rèn)為不同的他汀類(lèi)藥物和劑量對(duì)骨的影響是不一樣的，高劑量既增加骨形成，又增加骨吸收；低劑量降低骨形成，同時(shí)增加骨吸收；并且不能阻止因卵巢切除所引起的骨丟失；Bjarnason等［5］認(rèn)為氟伐他汀在目前臨床治療劑量下對(duì)骨再建參數(shù)沒(méi)有影響，而其他他汀類(lèi)藥物則有待進(jìn)一步探究.在臨床探究中，他汀類(lèi)藥物是否具有骨保護(hù)功能而降低骨折危險(xiǎn)性，也存在截然相反的觀點(diǎn)［6-9］.

本組實(shí)驗(yàn)中給藥組和對(duì)照組比較發(fā)現(xiàn)，給藥組離體股骨骨痂塑形較好，雖然組織形態(tài)學(xué)未見(jiàn)明顯差異，但是，BMD值顯著增加，骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)參數(shù)中，BV/TV，Tb.N值顯著增加，Tb.Sp值顯著減少，表明骨量增加.由此可見(jiàn)，辛伐他汀具有明顯的成骨功能，這種成骨功能表現(xiàn)為離體股骨骨痂骨密度和骨量的增加，反映在骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)靜態(tài)參數(shù)指標(biāo)中，主要是通過(guò)顯著增加Tb.N（P＜0.05），而不是增加Tb.Th（P%26gt;0.05），這也間接說(shuō)明，該藥物對(duì)骨吸收的功能并不是顯著抑制.

從各方面的探究來(lái)看，認(rèn)為他汀類(lèi)藥物促進(jìn)骨形成的功能機(jī)制主要是通過(guò)增加BMP2啟動(dòng)因子的數(shù)量，從而促進(jìn)成骨細(xì)胞合成BMP2，而B(niǎo)MP2是公認(rèn)的成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化促進(jìn)因子［10］.有關(guān)他汀類(lèi)藥物直接的對(duì)骨折愈合影響的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探究目前報(bào)道甚少，本實(shí)驗(yàn)我們嘗試從骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)方面來(lái)探索其對(duì)骨折愈合的影響，探究結(jié)果初步證實(shí)，辛伐他汀可以顯著增加骨折骨痂的骨量和骨密度，具有促進(jìn)骨折愈合的功能；但是，由于骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)動(dòng)態(tài)參數(shù)指標(biāo)受骨痂成熟度的影響明顯，給實(shí)際測(cè)量帶來(lái)不確定性，因此，本實(shí)驗(yàn)未采用該指標(biāo)的測(cè)量和統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，對(duì)于該指標(biāo)更確切的觀察，應(yīng)在骨痂改造塑形基本或全部完成后進(jìn)行.這也提示摘要:用骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)指標(biāo)進(jìn)行骨折愈合探究時(shí)，應(yīng)在骨折愈合的后期.

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