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【摘要】目的:測定冠心病患者與健康對照者血漿中MBL含量,分析其變化情況,從固有免疫的角度探討冠心病的可能致病機制。方法:采集100例冠心病(CHD)患者空腹靜脈血,健康對照者60例,采用ELISA法對血漿中MBL含量進行檢測。結果:100例冠心病人血漿MBL含量的平均值為3900μg/L,標準差為3209;60例健康對照組血漿MBL含量的平均值為2056μg/L,標準差為1824。冠心病組血漿MBL含量高于健康對照組,經t檢驗,t=4071,P<001,差別有統計學意義。結論:冠心病組血漿MBL水平高于健康對照組,二者均值比較差別有統計學意義,血漿MBL參與了冠心病的發生、發展過程。

【關鍵詞】冠心病;MBL;ELISA;含量

【ABSTRACT】Objective:ThemainpurposeofthisstudyistomeasuretheMBLlevelinplasmawithcoronaryheartdiseaseandtrytoanalyzethepossiblemechanismofCHDsdevelopmentfromtheviewofinnateimmune.Methods:100bloodsamplesofCHDpatientsand60thatofhealthcontrolswerecollectedandtestedbyELISA.Results:TheplasmalevelofMBLwere3900μg/L,SD3209incases,while2056μg/L,SD1824incontrols.TheplasmalevelofMBLincasesishigherthanthatofcontrols(t=4071,P<001).Conclusion:TheplasmalevelofMBLishigherinCHDpatientsthanthatincontrols.

【KEYWORDS】CHD;MBL;ELISA;Plasmalevel

冠心病(coronaryheartdisease,CHD)是一種嚴重危害人類健康的疾病,其發病率和死亡率居首位,尤其在發達國家更為嚴重,而在我國也呈逐年上升趨勢[1]。其病因和發病機制尚未完全闡明,近年來,冠心病發病的炎癥學說越來越得到重視[2],對一些炎性因子和急性期蛋白的研究也越來越深入。甘露聚糖結合凝集素(mannanbindinglectin,MBL)是一種兼有調理素和直接激活補體功能的免疫分子,參與構成抗感染的第一道防線[3]。國外有些學者報道MBL與動脈粥樣硬化發生、發展有關[4~7],但國內尚無報道,因此本研究主要測定冠心病患者血漿中MBL含量,并對其變化進行分析,從天然免疫的角度探討冠心病的可能致病機制,為其輔助診斷和治療提供資料。

1材料與方法

11實驗材料

主要設備:低溫冰柜(thermo,美國);酶標儀(Starfax2100,美國);普通高速離心機(TGL168,上海)

主要試劑:MBLELISA試劑盒(北京現代高達生物技術有限責任公司)

12實驗方法

121標本的收集:空腹靜脈血標本用EDTAK2抗凝管(2ml)收集。

冠心病(CHD)組:共100例,為河北北方學院附屬第一醫院20049~200510月住院的冠心病患者,男51例,女49例;年齡45~70歲,平均(6041±9443)歲。病例均經心電圖、心肌酶譜和臨床癥狀等綜合診斷,符合WHO冠心病診斷標準。

健康對照組:60例,為來院進行健康體檢者,男性32例,女28例,年齡43~71歲,平均(6027±7198)歲,病例無冠心病癥狀、體征,超聲心動圖及心電圖均正常。冠心病組與健康對照組組間年齡無統計學差異。

122標本的處理

取1ml全血放入15ml離心管中,5000轉/min離心5min,分離血漿,-86℃保存,供測定血漿MBL含量。

123血漿中MBL含量測定

按MBLELISA試劑盒說明書,基本操作如下:

標本及試劑準備:冠心病、健康對照血漿標本從低溫冰柜(-86℃)中取出,溶解并恢復至室溫,離心(3500轉/min5min)。取上清2μl,用標本稀釋液對標本進行200倍稀釋(加入398μl標本稀釋液[PBS+005%BSA]),混勻。所有實驗用試劑均在室溫平衡后使用。

操作步驟:

①取100μl稀釋標本加入酶標板中,同時做對照,第一孔加100μl稀釋液作空白,第二孔向后依次加含MBL不同濃度(0,1,2,5,10,25,50,100ng/ml)的標準液各100μl,標準孔均作復空;

②置37℃水浴1h;

③將板中的液體棄去,每孔加入150μl洗板液進行清洗,室溫靜置3min,棄去洗板液,反復3遍;

④清洗后,每孔加入100μl酶標記的MBL抗體,37℃1h,使酶標抗體與標本充分結合。

⑤清洗,操作同③;

⑥清洗后,每孔加入底物A、B各50μl,室溫避光15min。每孔加入終止液50μl,輕輕混勻20s;

⑦用酶標儀比色測定波長為450nm,參考波長為620nm。在20min內完成。

2結果

用SPSS130軟件進行統計分析,冠心病組、健康對照組血漿MBL含量的比較,采用兩樣本均數比較的t檢驗。

100例冠心病人血漿MBL含量的平均值為3900μg/L,標準差為3209;60例健康對照組血漿MBL含量的平均值為2056μg/L,標準差為1824。冠心病組血漿MBL含量高于健康對照組,經t檢驗,t=4071,P<001,差別有統計學意義,見表1。表1冠心病組與對照組MBL含量水平比較

3討論

人類血清MBL濃度主要受結構基因外顯子1密碼子點突變的影響和啟動子區多態性的調控[8~11]。國外已有一些MBL基因與冠心病的相關性研究[4~6],但對血漿MBL濃度與冠心病的相關性研究很少,只有冰島的一份前瞻性研究報告[7]:高濃度的血漿MBL者,尤其是糖尿病病人、高血脂、血沉升高人群患心肌梗死的概率較低,提示MBL可能與清除動脈粥樣硬化因素有關。雷克雅未克Landspitali大學的瓦爾迪馬森(HelgiValdimarsson)和同事分析了當地的研究資料,共納入了1967年以后的近2萬參試者。在對其中987名70歲參試者的橫斷面研究中,作者發現,MBL水平高(>1000mg/L)與水平低相比,心肌梗塞風險下降36%(P<0001)。為證實此結論,研究者對另一個有1309名中年人的人群進行了前瞻性分析。結果發現MBL水平高和心肌梗塞風險減弱有關聯的跡象,但不如前一橫斷面分析中的那樣強烈,對總人群、吸煙者或高血壓病人也沒達到統計學意義。但這次分析證實,高水平MBL對糖尿病人(P=002)或高膽固醇血癥病人(P=0004)與心肌梗塞風險大為減小有關。鑒于上述在糖尿病人中的結論“測量MBL可用于心性風險的輔助評估,也可能幫助評估預防治療的需要”,本研究發現,100例冠心病人血漿MBL含量的平均值為3900μg/L;60例健康對照組血漿MBL含量的平均值為2056μg/L。經t檢驗,t=4071,P<001,二者均值比較差別有統計學意義,說明血漿MBL可能參與冠心病的發生、發展,但具體作用及機制還有待進一步研究。

參考文獻

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