導(dǎo)語(yǔ)：如何才能寫好一篇教練合同，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

乙方(受聘人) ： (以下簡(jiǎn)稱乙方)

甲乙雙方根據(jù)國(guó)家和本市有關(guān)法規(guī)、規(guī)定，按照自愿、平等、協(xié)商一致的原則，簽訂本合同。

第一條合同期限

1.合同有效期：

(1)自 ，合同期為 年。合同期滿聘用關(guān)系自然終止。

2.聘用合同期滿前一個(gè)月，經(jīng)雙方協(xié)商同意，可以續(xù)訂聘用合同。

第二條 工作崗位

1.乙方受聘為兼職 ,全面負(fù)責(zé)教練部業(yè)務(wù)及管理工作。

2.根據(jù)工作需要及乙方的業(yè)務(wù)、工作能力和表現(xiàn)，甲方有權(quán)調(diào)整乙方的工作崗位。

第三條工作條件和勞動(dòng)保護(hù)

1. 甲方實(shí)行每周工作 時(shí)，每周6天的工作制度。

2. 甲方為乙方提供符合國(guó)家規(guī)定的安全衛(wèi)生的工作環(huán)境，保證乙方的人身安全及人體不受危害的環(huán)境條件下工作。

3. 乙方一旦受聘,為了便于宣傳推廣包裝,甲方有權(quán)免費(fèi)使用乙方圖片及視頻作為永久宣傳使用。

第四條工作報(bào)酬

1. 經(jīng)甲乙雙方協(xié)商，乙方的工作崗位是兼職健身教練，每月工資參照績(jī)效制度，每月發(fā)工資時(shí)間為次月的15號(hào)。

第五條工作紀(jì)律、獎(jiǎng)勵(lì)和懲處

1.乙方應(yīng)遵守國(guó)家的法律、法規(guī)。

2. 乙方應(yīng)遵守甲方規(guī)定的各項(xiàng)規(guī)章制度和勞動(dòng)紀(jì)律，自覺服從甲方的管理、教育。

3. 乙方如違反甲方的規(guī)章制度、勞動(dòng)紀(jì)律，甲方按市府和單位的有關(guān)規(guī)定給予處罰。 第六條聘用合同的變更、終止和解除

1.聘用合同依法簽訂后，合同雙方必須全面履行合同規(guī)定的義務(wù)，任何一方不得擅自變更合同。確需變更時(shí)，雙方應(yīng)協(xié)商一致，并按原簽訂程序變更合同。雙方未達(dá)成一致意見的，原合同繼續(xù)有效。

2.聘用合同期滿或者雙方約定的合同終止條件出現(xiàn)時(shí)，聘用合同即自行終止。在聘用合同期滿一個(gè)月前，經(jīng)雙方協(xié)商同意，可以續(xù)訂聘用合同。

3.甲方單位被撤消，聘用合同自行終止。

4.經(jīng)聘用合同雙方當(dāng)事人協(xié)商一致，聘用合同可以解除。

5.有下列情形之一的，甲方可以解除聘用合同，但應(yīng)提前十天以書面形式通知受聘人。

A.乙方患病或非因工負(fù)傷醫(yī)療期滿后，不能從事原工作，也不愿從事甲方另行安排適當(dāng)工作的。

B.乙方不能勝任該工作崗位,連續(xù)兩個(gè)月不能完成私教績(jī)效任務(wù)的。

C. 乙方不履行聘用合同的。

6.有下列情形之一的，甲方不能終止或解除聘用合同

A.乙方患病或負(fù)傷在規(guī)定的醫(yī)療期內(nèi)的;

B.女職工在孕期、產(chǎn)期、哺乳期內(nèi)的(符合《實(shí)施意見》第三條第5款規(guī)定者除外);

C.法律、法規(guī)規(guī)定的其他情形。

7. 乙方要求解除聘用合同，應(yīng)當(dāng)提前三十天以書面形式通知甲方。并且乙方負(fù)責(zé)協(xié)助甲方招聘相應(yīng)人員代替乙方工作方可執(zhí)行。

第七條違反和解除聘用合同的經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償

1.乙方不能勝任工作，經(jīng)過(guò)調(diào)整工作崗位仍不能勝任工作，由甲方解除聘用合同的，甲方扣除相當(dāng)于半個(gè)月的工資作為乙方給甲方的經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償金。

2.乙方需遵守競(jìng)業(yè)規(guī)則，若乙方在職期間或離職后去同行業(yè)其他公司，乙方不得以任何原因引導(dǎo)教練員及私教客戶去他方，否則乙方須賠償五萬(wàn)元作為甲方的經(jīng)濟(jì)損失補(bǔ)償，同時(shí)，甲方保留追究一切經(jīng)濟(jì)損失的權(quán)利。

篇2

一、根據(jù)學(xué)生的年齡特點(diǎn)采取合適的發(fā)聲訓(xùn)練

合唱隊(duì)在發(fā)聲練習(xí)時(shí)要求要以姿勢(shì)、口形、呼吸、發(fā)聲等方面進(jìn)行嚴(yán)格的訓(xùn)練，通過(guò)訓(xùn)練達(dá)到掌握一定的技能技巧，并運(yùn)用到歌曲演唱中去。但每次發(fā)聲練習(xí)的時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)，一般在10―15分鐘左右。

姿勢(shì)――不論坐和站，頭部要保持正直，脖頸自然放松，不可伸長(zhǎng)，以免影響喉部器官的正常運(yùn)用。上身挺直，有精神，雙肩自然放松，稍向后但不聳肩，使胸腔不受拘束和壓力。腿不彎曲，不蹺不歪。

口形――不能過(guò)扁過(guò)寬，而要象豎著的鴨蛋，下顎要完全放松，不使運(yùn)動(dòng)過(guò)度而妨礙發(fā)聲。嘴唇要靈活有彈性和舌頭配合演唱，比說(shuō)話時(shí)的動(dòng)作稍稍夸張一些。

呼吸――呼吸是唱歌發(fā)聲的基礎(chǔ)動(dòng)力，歌者應(yīng)運(yùn)用正確的呼吸動(dòng)作并進(jìn)行呼吸練習(xí)，由淺入深逐漸引導(dǎo)大家掌握好強(qiáng)、弱、快、慢各種氣息的運(yùn)用。歌唱的呼吸要深一些，氣息控制在下肋周圍，形成歌唱發(fā)聲的支持點(diǎn)。要經(jīng)常糾正呼吸緊張，吸氣過(guò)多，發(fā)出聲響，聳肩頸粗等不良習(xí)慣。

發(fā)聲――發(fā)聲練習(xí)要以中聲區(qū)為主。低聲區(qū)的訓(xùn)練比較容易見效，因?yàn)榫毜鸵舻暮魵鈮毫^小，聲帶很自然地放松，用“mo”的母音下行練習(xí)，再用“ha”、“ho”母音從弱到強(qiáng)找準(zhǔn)位置擴(kuò)大共鳴。在掌握了一定的方法之后，再逐步向高音擴(kuò)展。高聲區(qū)的訓(xùn)練難度較大，因?yàn)槁曇粲吆魵鈮毫τ螅菀自斐陕晭Ш秃眍^緊張，此時(shí)必須打開喉嚨，抬高軟腭，用半音向上的方法，和“l(fā)u、lo、lü”的母音，輕聲高位地尋找頭腔共鳴位置，不斷鞏固、擴(kuò)大音量。聲音要求圓潤(rùn)明亮，位置集中稍靠里一點(diǎn)，即高位置發(fā)聲練唱。發(fā)聲練習(xí)要從柔和的富有彈性的音階練習(xí)開始，經(jīng)常注意克服喊叫、喉音等壞習(xí)慣。

二、要有針對(duì)性地進(jìn)行視唱練耳，難度要適宜

視唱練耳是解決識(shí)譜、音準(zhǔn)、節(jié)拍、節(jié)拍感的一種練習(xí)。它要求由易到難，循序漸進(jìn)。先從簡(jiǎn)單的音階練習(xí)到各種節(jié)拍的練習(xí)曲，包括音程和聲的練習(xí)，還可選擇一些聲部合唱練習(xí)，根據(jù)合唱隊(duì)的水平自選自編，長(zhǎng)期系統(tǒng)地練習(xí)。在合唱訓(xùn)練中，練習(xí)曲的難易程度在很大程度上決定了學(xué)生練習(xí)時(shí)的情緒，在經(jīng)過(guò)學(xué)生練到三遍能基本掌握時(shí)，學(xué)生學(xué)得比較開心，興趣地高了，因?yàn)樗麄凅w會(huì)到了收獲的喜悅；當(dāng)一首曲子唱上四五遍還未能掌握時(shí)，他們就開始顯得浮躁、不耐煩，產(chǎn)生了厭煩的情緒；反過(guò)來(lái)，太簡(jiǎn)單一唱就會(huì)的學(xué)生會(huì)感到乏味。因此，在視唱訓(xùn)練中，練習(xí)曲的難易程度一定要適當(dāng)。

三、二聲部合唱的練習(xí)要有針對(duì)性

1．加強(qiáng)音準(zhǔn)訓(xùn)練。統(tǒng)一和諧是合唱對(duì)聲音的要求，所以合唱對(duì)音準(zhǔn)的要求非常高。童聲合唱的音準(zhǔn)訓(xùn)練應(yīng)由淺入深地進(jìn)行，先練習(xí)音階、音程、旋律。通過(guò)訓(xùn)練使學(xué)生的音準(zhǔn)能力得到提高，為二聲部訓(xùn)練打下扎實(shí)基礎(chǔ)。快速時(shí)要防止音趨高，慢速時(shí)注意音偏低；強(qiáng)音要防止音趨高，輕聲注意音偏低；遇到難唱的音程，必須重點(diǎn)突破，把好音準(zhǔn)關(guān)。

2．輔助訓(xùn)練，在教學(xué)中二聲部合唱可以先由老師擔(dān)任第二聲部，與第一聲部的學(xué)生合作。第二聲部的學(xué)生先輕唱，再慢慢放開聲音跟老師唱，漸漸地讓兩聲部合起來(lái)。

四、培養(yǎng)學(xué)生對(duì)合唱的興趣，使學(xué)生在歌唱時(shí)始終保持專注投入的精神狀態(tài)

為了更好地表現(xiàn)合唱藝術(shù)作品，除了要對(duì)學(xué)生加強(qiáng)發(fā)聲、視唱、練耳等基礎(chǔ)性的訓(xùn)練之外，還應(yīng)要求學(xué)生在歌唱時(shí)，始終保持專注投入的精神狀態(tài)。

1．教師要對(duì)學(xué)生傾注自己滿腔的熱情和真摯的愛，使學(xué)生樂(lè)意與教師進(jìn)行交往，并在教師那里找到溫暖和鼓舞。

2．合理地安排各種演唱形式，給學(xué)生一些實(shí)踐的機(jī)會(huì)，進(jìn)行一些觀摩和學(xué)習(xí)活動(dòng)。如觀看專業(yè)童聲合唱團(tuán)的錄像、光盤或?qū)︿浺暨M(jìn)行欣賞學(xué)習(xí)等，開闊學(xué)生的視野，提高他們的欣賞水平。從而使學(xué)生始終保持對(duì)合唱濃厚的興趣和旺盛的活力。

篇3

2021年半年來(lái)，我執(zhí)法大隊(duì)治理車輛超限超載工作在縣委、縣政府、縣交通局的正確領(lǐng)導(dǎo)下，認(rèn)真貫徹落實(shí)《交通運(yùn)輸部辦公廳公安部辦公廳關(guān)于印發(fā)規(guī)范公路治超執(zhí)法專項(xiàng)整治行動(dòng)工作方案的通知（交辦公路〔2017〕130號(hào)）》以及《省交通運(yùn)輸廳、省公安廳關(guān)于印發(fā)治理車輛超限超載聯(lián)合執(zhí)法常態(tài)化制度化工作方案的通知》（黔交政法〔2018〕2號(hào)），積極推進(jìn)部門聯(lián)動(dòng)執(zhí)法，有力推動(dòng)治超各項(xiàng)工作持續(xù)深入開展，有效打擊了車輛超限超載違法行為。現(xiàn)將我執(zhí)法大隊(duì)治超有關(guān)工作情況報(bào)告如下：

一、主要做法及成效

（一）落實(shí)工作責(zé)任，制定方案。

2020年9月，我局和縣公安局結(jié)合實(shí)際，研究制定《黎平縣治理車輛超限超載聯(lián)合執(zhí)法常態(tài)化制度工作方案》，明確責(zé)任主體職責(zé),強(qiáng)化交通執(zhí)法工作的職能，及時(shí)與貨運(yùn)源頭企業(yè)簽訂目標(biāo)責(zé)任書，將源頭治超任務(wù)分解落實(shí)到位。并組織執(zhí)法人員深入貨運(yùn)源頭企業(yè)，強(qiáng)化貨運(yùn)源頭監(jiān)管，組織執(zhí)法人員深入重點(diǎn)建設(shè)項(xiàng)目工地和沙石場(chǎng)開展貨運(yùn)源頭治超監(jiān)管，與企業(yè)簽訂責(zé)任書，使治超工作順利開展。

（二）加大宣傳力度，營(yíng)造社會(huì)氛圍。

通過(guò)懸掛宣傳標(biāo)語(yǔ)、派發(fā)宣傳單、召開座談會(huì)等多種形式開展宣傳活動(dòng)，在全縣主要治超路段和源頭企業(yè)共懸掛治超橫幅20多條，向廣大車主派發(fā)宣傳單1000多份，利用縣新聞中心在有線電視網(wǎng)絡(luò)宣傳治超工作相關(guān)政策等方式，把宣傳工作貫穿治超工作的全過(guò)程，形成正面引導(dǎo)，做到群眾理解、社會(huì)支持和車主配合，營(yíng)造了良好的治超氛圍。

（三）強(qiáng)化源頭管理，全面推進(jìn)治超工作。

1、各方聯(lián)動(dòng)，推進(jìn)源頭治理。我大隊(duì)認(rèn)真落實(shí)源頭單位巡查制度，經(jīng)常深入貨運(yùn)、物流、維修企業(yè)及大型廠礦企業(yè)開展日常巡查，分別與15家貨運(yùn)源頭單位簽訂了治超責(zé)任書，組織執(zhí)法人員到貨運(yùn)企業(yè)開展源頭治超宣傳，加強(qiáng)對(duì)道路貨物運(yùn)輸源頭的監(jiān)督管理。組織人員深入到重點(diǎn)建設(shè)項(xiàng)目工地和沙石場(chǎng)開展貨運(yùn)源頭治超監(jiān)管，明確路政執(zhí)法中隊(duì)管轄區(qū)域及責(zé)任，加強(qiáng)了對(duì)企業(yè)的巡查監(jiān)管，對(duì)裝載量較大的貨源單位進(jìn)行了排查摸底，為貨源單位公示工作打好基礎(chǔ)。同時(shí)我局與公安局各負(fù)其責(zé)，各司其職，明確各自分工，共同做好治超工作。

2.突出工作重點(diǎn)，加大執(zhí)法力度。我局加強(qiáng)動(dòng)靜態(tài)監(jiān)控，堅(jiān)持以流動(dòng)治超為依托，重點(diǎn)加大對(duì)G356線、S242線等地方的治超力度，特別是三什江以及矮枧等重要路段的打擊力度。我大隊(duì)通過(guò)加強(qiáng)部門聯(lián)動(dòng)，以流動(dòng)巡查和舉報(bào)相結(jié)合的執(zhí)法方式打擊超限超載車輛，逐步形成全縣監(jiān)控治理網(wǎng)絡(luò)，同時(shí)嚴(yán)格執(zhí)法處罰，認(rèn)真執(zhí)行省交通運(yùn)輸廳新頒發(fā)的超限超載認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行處罰。半年來(lái)共出動(dòng)治超執(zhí)法人員64人次，出動(dòng)執(zhí)法車輛8輛，檢查車輛163輛次，卸載42噸。未發(fā)“百噸王”貨車。

二、下步工作措施

（一）繼續(xù)強(qiáng)化工作領(lǐng)導(dǎo)。按照“政府主導(dǎo)、部門聯(lián)動(dòng)、齊抓共管、綜合治理”的總體要求，貫徹落實(shí)省、市、縣決策部署，把治超工作責(zé)任落實(shí)到有關(guān)部門，加強(qiáng)治超工作領(lǐng)導(dǎo)，把治超工作列入年度計(jì)劃，作為一項(xiàng)重要工作任務(wù)來(lái)抓，明確職責(zé)，制定方案，實(shí)行目標(biāo)責(zé)任制和責(zé)任追究制度，堅(jiān)持綜合治理，推進(jìn)治超工作有序開展。

（二）進(jìn)一步落實(shí)聯(lián)合執(zhí)法機(jī)制。貫徹落實(shí)全國(guó)治超整治專項(xiàng)行動(dòng)的新規(guī)定，加強(qiáng)交通運(yùn)輸執(zhí)法部門與公安交通管理部門協(xié)調(diào)溝通，相互支持配合，制定細(xì)化執(zhí)勤計(jì)劃，合理調(diào)配執(zhí)法力量，做好相關(guān)的執(zhí)法銜接工作，按照各自職責(zé)分工，落實(shí)工作流程的每個(gè)環(huán)節(jié)，做到緊密協(xié)作。

（三）進(jìn)一步強(qiáng)化路面治理力度。堅(jiān)持路面執(zhí)法與源頭監(jiān)管并重的治超方針，交通、公安等部門積極配合，采取部門聯(lián)動(dòng)與區(qū)域聯(lián)合相結(jié)合的方式，加強(qiáng)對(duì)主要干線、危橋及其他車輛超限超載嚴(yán)重、群眾投訴多的地點(diǎn)和路段。著重加強(qiáng)對(duì)車貨總重超過(guò)49噸以上的違法超限超載車輛的查處，保持嚴(yán)管態(tài)勢(shì)。

篇4

隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快，父母?jìng)冮_始變得忙碌了，特別是農(nóng)村孩子的父母?jìng)?，為了改善生活條件，背井離鄉(xiāng)，外出務(wù)工掙錢，像我們2014級(jí)中班，就有80%的幼兒家長(zhǎng)外出打工，留守在家的兒童就由爺爺奶奶或是外公外婆照看了。

由于爺奶輩所具有的育兒觀念陳舊，幼兒的生活衛(wèi)生習(xí)慣養(yǎng)成較差，農(nóng)村的爺爺奶奶們除了照看接送孫子外，為了生計(jì)，還要忙著田間地頭的農(nóng)活，孩子無(wú)人接送，有的是一個(gè)村的孩子的家長(zhǎng)輪流接送，或者托鄰居接送，家長(zhǎng)來(lái)幼兒園的次數(shù)少，與老師的聯(lián)系就少了，給老師的家園聯(lián)系工作帶來(lái)一定的困難。

記得開學(xué)的第一次家長(zhǎng)會(huì)，家長(zhǎng)們像逛自由市場(chǎng)一樣，有的早早的來(lái)了，有的中途來(lái)，還有的家長(zhǎng)散會(huì)了才來(lái)，更離譜的是還有一位家長(zhǎng)在家長(zhǎng)會(huì)后三天才來(lái)問(wèn)：“老師，聽說(shuō)要開家長(zhǎng)會(huì)？”

不與老師聯(lián)系的家長(zhǎng)是少數(shù)的。對(duì)于這些家長(zhǎng)，我們通常采用電話通知聯(lián)系，要求家長(zhǎng)再忙也要到幼兒園參加活動(dòng)，如果家長(zhǎng)沒(méi)有電話，就用小紙條的形式通知，使得家長(zhǎng)的到會(huì)率盡可能的提高。當(dāng)然，為了更好的吸引家長(zhǎng)參與幼兒園教育，最大限度的調(diào)動(dòng)家長(zhǎng)的積極性，更新家長(zhǎng)的育兒觀念，指導(dǎo)家長(zhǎng)科學(xué)育兒，使得家庭、幼兒園、社區(qū)教育形成合力，我在家園合作中進(jìn)行了以下幾個(gè)方面的努力。

召開班級(jí)家長(zhǎng)會(huì)

每期在開學(xué)和期末各召開一次班級(jí)家長(zhǎng)會(huì)。

開學(xué)時(shí)的家長(zhǎng)會(huì)主要向家長(zhǎng)介紹本期的保教工作計(jì)劃和目標(biāo)，建立家長(zhǎng)委員會(huì)，聽取家長(zhǎng)對(duì)幼兒教育工作的要求，同時(shí)向家長(zhǎng)宣傳科學(xué)育兒知識(shí)，講解《3-6歲幼兒學(xué)習(xí)與發(fā)展指南》，推進(jìn)提出課題要求和目標(biāo)，要求家長(zhǎng)在衛(wèi)生、安全、保健方面配合幼兒園教育孩子。

期末的家長(zhǎng)會(huì)則是向家長(zhǎng)回報(bào)本期工作情況，讓幼兒展示本期所學(xué)知識(shí)和本領(lǐng)；評(píng)選表彰好家長(zhǎng)；聽取家長(zhǎng)的呼聲和意見，同時(shí)也宣傳科學(xué)育兒知識(shí)和安全保健常識(shí)。

舉辦家長(zhǎng)學(xué)校講座

農(nóng)村家長(zhǎng)，特別是爺爺奶奶們受的教育少，他們大多不識(shí)字，吃了不識(shí)字的苦頭，他們就想自己的孫子來(lái)上幼兒園了，要多認(rèn)幾個(gè)字，早點(diǎn)會(huì)做幾道算術(shù)題。他們疼愛孫子，但往往是方法欠妥，有的溺愛過(guò)頭，對(duì)孫子的要求百依百順；有的信奉“黃棍下出好人”，動(dòng)輒拳腳棍棒相加，對(duì)孩子的教育方式簡(jiǎn)單，方法粗暴。通過(guò)老師有目的、有計(jì)劃的宣傳與介紹，幫助家長(zhǎng)樹立正確的家教觀念，同時(shí)也向家長(zhǎng)進(jìn)行保教知識(shí)宣傳，提高家長(zhǎng)的教養(yǎng)質(zhì)量，對(duì)切實(shí)保護(hù)幼兒生命，維護(hù)幼兒健康起到了良好的退進(jìn)作用。三、精心創(chuàng)設(shè)家園聯(lián)系欄。

我根據(jù)本班的具體情況和學(xué)期教學(xué)教育內(nèi)容，在家園欄中創(chuàng)設(shè)有“家教快訊”、“故事車廂”、“周日計(jì)劃”、“主題活動(dòng)網(wǎng)絡(luò)圖”“月計(jì)劃”、“小喇叭”和“夸一夸”等欄目，可以讓家長(zhǎng)及時(shí)了解幼兒園的教育內(nèi)容和保教方法，使得家園教育取得同步。如“周日計(jì)劃”了解本周的教育目標(biāo)和每天的保教內(nèi)容，月計(jì)劃讓家長(zhǎng)對(duì)每月的工作有所了解，“主題活動(dòng)網(wǎng)絡(luò)圖”讓家長(zhǎng)參與主題進(jìn)程。“小喇叭”可以發(fā)動(dòng)家長(zhǎng)收集主題活動(dòng)所需材料。通過(guò)小喇叭的宣傳發(fā)動(dòng)，有很多家長(zhǎng)積極參與幼兒園組織的活動(dòng)，支持幼兒園的保教工作。我班鄧鑫小朋友的外婆心靈手巧，她結(jié)合本期主題活動(dòng)“傘的世界”給我班小朋友制作了幾把精美的紙傘，把教室裝扮得十分漂亮，其他的家長(zhǎng)也做了很多玩具到幼兒園供小朋友玩耍，極大的豐富了孩子們的活動(dòng)材料，也激發(fā)了其他家長(zhǎng)的參與熱情。

針對(duì)個(gè)別幼兒，及時(shí)進(jìn)行家訪

在發(fā)現(xiàn)有不良行為習(xí)慣的幼兒，老師就及時(shí)家訪，與家長(zhǎng)交換意見、看法，達(dá)成教育共識(shí)，及時(shí)矯正幼兒的缺點(diǎn)與錯(cuò)誤，讓其根正苗紅。有一段時(shí)間，我班的劉翼翔小朋友總愛打人，放學(xué)路上欺侮其他小孩，還有一次把糞便涂到了胡漢小朋友的衣褲上，胡漢小朋友的家長(zhǎng)很氣憤，來(lái)找老師評(píng)理。我及時(shí)進(jìn)行家訪，與劉翼翔小朋友的家長(zhǎng)交談分析原因，同時(shí)對(duì)胡漢的家長(zhǎng)做解釋工作，是孩子淘氣瞎玩。最后家長(zhǎng)與老師共同對(duì)劉翼翔指出“這樣做是不對(duì)的，以后絕對(duì)不可以了”，要求他改正錯(cuò)誤。經(jīng)過(guò)家長(zhǎng)與老師的共同努力，劉翼翔小朋友改正了錯(cuò)誤，不再攻擊其他小朋友了。

電話溝通聯(lián)系

現(xiàn)代通訊的發(fā)達(dá)為老師與家長(zhǎng)溝通搭起了方便的橋梁。在每學(xué)期開學(xué)，認(rèn)真的登記好每一位幼兒家長(zhǎng)的電話號(hào)碼，遇到有孩子缺席了、生病了，就可以及時(shí)的打電話向家長(zhǎng)了解情況，如果孩子在幼兒園生病了，也能及時(shí)的通知到家長(zhǎng)。一次，我班的李雄林小朋友沒(méi)有入園，我就翻出電話號(hào)碼本，向家長(zhǎng)打電話詢問(wèn)，結(jié)果家長(zhǎng)說(shuō)“孩子一早就出門上幼兒園來(lái)了”。我說(shuō)：“幼兒園沒(méi)有孩子，一定在路上玩了?！弊尲议L(zhǎng)去找。家長(zhǎng)及時(shí)發(fā)現(xiàn)了，把孩子找到了。我班上有小朋友生病了，老師通過(guò)電話詢問(wèn)孩子的病情，并告訴幼兒，說(shuō)“老師和小朋友都很想你”。小朋友病好了特別喜歡上幼兒園了。

QQ空間溝通聯(lián)系

篇5

【關(guān)鍵詞】高校；合唱；聲音統(tǒng)一

合唱是高等院校中一項(xiàng)重要的活動(dòng)，很多校園晚會(huì)及其他活動(dòng)中都會(huì)安排合唱節(jié)目。但是合唱表演的參加者往往來(lái)自不同的院系，其中絕大多數(shù)同學(xué)都并非音樂(lè)專業(yè)出身，甚至很多人都沒(méi)有系統(tǒng)學(xué)習(xí)過(guò)音樂(lè)知識(shí)。因而如何保證合唱中的聲音統(tǒng)一性就成為了一個(gè)教學(xué)和表演中的難點(diǎn)。以下我們對(duì)此問(wèn)題加以討論，希望能夠?qū)ο嚓P(guān)的教學(xué)和演出實(shí)踐有所幫助。

一、高校合唱表演對(duì)聲音的要求及其難點(diǎn)

合唱是多聲部音樂(lè)的一個(gè)品種，其表演的基本形式是群體歌唱。這種聲樂(lè)表演形式所追求的是差異性和一致性的有機(jī)統(tǒng)一。一方面，它要求參加的成員將各種不同的聲音組合成一個(gè)有機(jī)的整體；另一方面，這個(gè)整體又并不是由完全一樣的聲音構(gòu)成的，不同成員聲音的差異依然存在。從這個(gè)角度來(lái)說(shuō)，合唱這種藝術(shù)形式帶有一定的辯證性。但這種差異性是服從于一致性的。首先，合唱聲音中不應(yīng)出現(xiàn)基礎(chǔ)性的問(wèn)題，音準(zhǔn)、節(jié)奏必須準(zhǔn)確無(wú)誤，各個(gè)不同聲部的聲音可以被清晰地分辨出來(lái)；其次，參加者不同的音色應(yīng)凝成一個(gè)有機(jī)的統(tǒng)一體，圓潤(rùn)飽滿，而不顯得突兀。進(jìn)一步來(lái)說(shuō)，則是對(duì)聲音的層次感和對(duì)比性有要求。不同的聲部應(yīng)該層次分明，不同的音色、力度、速度之間形成對(duì)比，和聲部分應(yīng)充盈、堅(jiān)實(shí)，對(duì)旋律線條起到有力的支撐作用。但這樣的表演要求在高校的合唱演出實(shí)踐中卻并不容易達(dá)到。由于參加演出者絕大多數(shù)都并非音樂(lè)專業(yè)出身，甚至缺乏一定的音樂(lè)訓(xùn)練，因而很多同學(xué)在基本的音準(zhǔn)、節(jié)奏上都存在一些問(wèn)題，更不要說(shuō)追求音樂(lè)表現(xiàn)力了。在實(shí)際演出中，我們經(jīng)常能夠遇見聲部混亂、音高不一致、節(jié)奏不穩(wěn)的情況。簡(jiǎn)單地說(shuō)，合唱中的聲音統(tǒng)一對(duì)高校合唱演出來(lái)說(shuō)是一個(gè)必須正視的重要問(wèn)題。這就要求我們?cè)诮虒W(xué)與排練中有針對(duì)性地進(jìn)行訓(xùn)練，從而彌補(bǔ)這一缺陷。

二、高校合唱中聲音統(tǒng)一訓(xùn)練的具體方法

（一）氣息訓(xùn)練

合唱歌曲中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一些比較長(zhǎng)的樂(lè)句，有時(shí)因?yàn)楸憩F(xiàn)力的需要，還要在同一個(gè)樂(lè)句中變換節(jié)奏的快慢和力度的強(qiáng)弱。在這類樂(lè)句的表演中，演唱者應(yīng)保證自己氣息的平穩(wěn)，不能因?yàn)閾Q氣影響歌曲的表演。這就對(duì)表演者控制氣息的能力提出了一定的要求。對(duì)于非音樂(lè)專業(yè)而且又沒(méi)接受過(guò)相關(guān)的專門訓(xùn)練的同學(xué)來(lái)說(shuō)，這樣的要求并不容易達(dá)到。因而我們有必要在事前的教學(xué)、排練中對(duì)此進(jìn)行專門的訓(xùn)練。相關(guān)的訓(xùn)練方法很多。比如可以讓學(xué)生想象自己的面前有一朵花，然后模擬出自己在吸氣聞花的香氣的狀態(tài)，以此來(lái)讓學(xué)生熟悉聲樂(lè)表演中的吸氣方式。在呼吸的節(jié)奏上，可以讓學(xué)生伴隨著節(jié)拍進(jìn)行吸氣——呼氣的練習(xí)，要保證吸氣的量和呼氣的量相等。節(jié)拍可以先從簡(jiǎn)單的拍子如二二拍、二三拍等開始。在學(xué)生能夠伴隨著特定的節(jié)奏進(jìn)行有規(guī)律的呼吸后，再逐步提升拍子的復(fù)雜程度，如使用四四拍等。同時(shí)，在訓(xùn)練的初期，可以讓學(xué)生雙手叉腰作為輔助。在學(xué)生能夠按照特定的節(jié)奏進(jìn)行吸氣——呼氣之后，可以讓他們?cè)龃笪鼩夂秃魵獾牧?。再進(jìn)一步，則可以讓他們?cè)诤魵鈺r(shí)放慢速度，做到速度慢、均勻、穩(wěn)定。在具體的呼氣方式上，讓學(xué)生微微張開嘴，用舌尖抵住上排的牙齒，發(fā)出“S”的聲音。通過(guò)這樣的練習(xí)，可以讓學(xué)生掌握聲樂(lè)表演中基本的呼吸技巧，從而在實(shí)際表演的過(guò)程中不會(huì)因?yàn)閾Q氣的問(wèn)題而影響演出的效果。另外，需要注意的是，上面所說(shuō)的吸氣——呼氣練習(xí)一定要在特定節(jié)拍的配合下進(jìn)行。目前很多高校的合唱訓(xùn)練中都忽視了這一點(diǎn)，這是不正確的。因?yàn)閰⒓雍铣硌莸膶W(xué)生絕大多數(shù)都沒(méi)有接受過(guò)專業(yè)的音樂(lè)訓(xùn)練，所以他們對(duì)節(jié)奏的感知能力比較弱?；蛘哒f(shuō)，他們對(duì)節(jié)奏的認(rèn)知帶有很強(qiáng)的主觀性，不同的同學(xué)所理解的節(jié)拍是不同的。如果只是單純進(jìn)行吸氣——呼氣的練習(xí)而沒(méi)有和節(jié)拍結(jié)合起來(lái)，那么在排練及實(shí)際演出的時(shí)候，就很容易出現(xiàn)大家呼吸的節(jié)奏不一致，從而影響歌曲的節(jié)奏的情況。

（二）音準(zhǔn)及節(jié)奏訓(xùn)練

不論是聲樂(lè)還是器樂(lè)，音準(zhǔn)及節(jié)奏都是音樂(lè)表演中的核心內(nèi)容。離開了音準(zhǔn)、節(jié)奏，也就沒(méi)有音樂(lè)可言了。我們說(shuō)音樂(lè)是一門時(shí)間的藝術(shù)，而在時(shí)間中流動(dòng)并帶給聽眾藝術(shù)享受的，就正是音準(zhǔn)和節(jié)奏。由于參加高校合唱表演的同學(xué)大多沒(méi)有接受過(guò)專業(yè)的音樂(lè)訓(xùn)練，所以他們對(duì)音準(zhǔn)、節(jié)奏的認(rèn)知能力并不強(qiáng)。事實(shí)上，絕大多數(shù)同學(xué)都只是憑借自己的直覺來(lái)認(rèn)知音準(zhǔn)、節(jié)奏。有些同學(xué)可能相關(guān)的天賦比較高或是平時(shí)受到的影響多一些，感知能力就好一點(diǎn)；反之，則會(huì)差一點(diǎn)。因而，我們?cè)谶M(jìn)行合唱教學(xué)、排練時(shí)，一定要重視音準(zhǔn)、節(jié)奏這樣的基礎(chǔ)性練習(xí)。音準(zhǔn)方面，可以讓學(xué)生分成幾組，跟隨鋼琴演唱音階。考慮到現(xiàn)實(shí)中合唱曲目的選擇，這里演唱的音階不需要很長(zhǎng)。也就是說(shuō)，并不要求學(xué)生具有多寬廣的音域。特別是在高音和低音上，教師不必做出過(guò)高的要求。而應(yīng)該把重點(diǎn)放在音準(zhǔn)問(wèn)題上。即學(xué)生跟隨鋼琴聲唱出的音階在音高上必須準(zhǔn)確無(wú)誤。節(jié)奏方面的訓(xùn)練也與此類似。在講清楚了基本的節(jié)奏型之后，可以讓學(xué)生分成若干組，分別跟隨著教師的手勢(shì)發(fā)出“啊”的音。在實(shí)際訓(xùn)練中，可以先從簡(jiǎn)單的拍子開始，循序漸進(jìn)，由淺入深?？紤]到合唱曲目的特點(diǎn)，一切比較復(fù)雜的節(jié)奏型，如混合拍子、散拍子都可以不做要求。這方面需要注意的是重音的問(wèn)題。有些教師在進(jìn)行節(jié)奏方面的訓(xùn)練時(shí)，往往只在意學(xué)生對(duì)不同節(jié)奏型的理解和掌握，而對(duì)節(jié)奏中的強(qiáng)弱問(wèn)題重視不夠。這是不正確的。缺乏強(qiáng)弱變化的節(jié)奏是不能夠傳達(dá)出藝術(shù)感染力的。因而，在指導(dǎo)學(xué)生進(jìn)行節(jié)奏練習(xí)之初，教師就應(yīng)該加強(qiáng)節(jié)奏型中強(qiáng)弱音的練習(xí)，如三拍子的“強(qiáng)——弱——弱”、四拍子的“強(qiáng)——弱——次強(qiáng)——弱”等。只有讓學(xué)生在這方面養(yǎng)成了習(xí)慣，將強(qiáng)弱變化與節(jié)奏型結(jié)合在一起，他們才能在實(shí)際演唱的過(guò)程中自覺地將節(jié)拍中的強(qiáng)音和弱音表現(xiàn)出來(lái)。

（三）音量及音色訓(xùn)練

很多學(xué)生由于沒(méi)有接受過(guò)相關(guān)的訓(xùn)練，而且也缺少登臺(tái)演出的經(jīng)驗(yàn)，所以在表演合唱時(shí)往往不能很好地控制自己的音量。而且學(xué)生自身的性格因素也會(huì)對(duì)此有所影響。如有些學(xué)生性格外向，樂(lè)于表現(xiàn)自己，就會(huì)在合唱時(shí)音量比較大；而有些學(xué)生性格比較靦腆，就會(huì)聲音小一些。作為教師，應(yīng)該在教學(xué)及排練的過(guò)程中對(duì)此進(jìn)行很好的協(xié)調(diào)，讓參加表演的同學(xué)們控制好自己的音量，以免過(guò)于突出，以至于影響整體的演出效果。音色方面的訓(xùn)練也很重要，同時(shí)這也是很多教師容易忽略的一點(diǎn)。從聲學(xué)的角度來(lái)說(shuō)，音色的不同與振動(dòng)發(fā)聲的物體的材質(zhì)有關(guān)。由于每個(gè)人的天然條件不同，因而他們所展現(xiàn)出來(lái)的音色也必然各不相同。教師應(yīng)該讓學(xué)生對(duì)合唱這一藝術(shù)形式有明確的認(rèn)識(shí)，知道合唱是一種群體性表演的藝術(shù)，個(gè)人的聲音應(yīng)服從于整體的需要，不能讓自己的聲音過(guò)于明顯、突兀，以至于破壞整體的藝術(shù)效果。

（四）多聲部訓(xùn)練

在合唱演出中，通常都會(huì)用多聲部的結(jié)構(gòu)，以此來(lái)提升音樂(lè)表演的層次感、立體感和藝術(shù)性。相比齊唱，這也是一個(gè)難點(diǎn)所在，因?yàn)楹芏嗤瑢W(xué)并沒(méi)有相關(guān)的演唱經(jīng)驗(yàn)。這就需要教師在這方面進(jìn)行特別的訓(xùn)練。首先，要讓合唱的參加者對(duì)歌曲的結(jié)構(gòu)和表演形式非常熟悉，讓他們知道自己所要演唱的段落應(yīng)該在什么時(shí)候開始，這樣才不會(huì)出現(xiàn)銜接不當(dāng)?shù)那闆r。此外，每個(gè)演唱者也應(yīng)牢記自己所屬的聲部，不要在表演時(shí)聲音過(guò)高或過(guò)低，以至于影響整體的演出效果，而應(yīng)該控制好音高、音量，這樣才能很好地表現(xiàn)自己所在聲部承擔(dān)的歌曲內(nèi)容。在具體的訓(xùn)練方式上，教師可以在鋼琴上隨機(jī)彈出將要演出的歌曲的某一片段，讓學(xué)生來(lái)分辨這是屬于哪一個(gè)聲部的。這種方法可以很好地檢驗(yàn)以及提升學(xué)生對(duì)歌曲的熟悉程度。此外，還可以讓學(xué)生經(jīng)常觀摩多聲部音樂(lè)的演出視頻，以此來(lái)強(qiáng)化他們對(duì)這種音樂(lè)表演形式的認(rèn)識(shí)。另外，需要特別說(shuō)明的，就是在高音聲部，一定要設(shè)置統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。有些女生因?yàn)樽陨項(xiàng)l件較好，音域較廣，能唱出的最高音比其他人要高一些。這時(shí)一定要強(qiáng)化其音準(zhǔn)觀念，做到整個(gè)聲部協(xié)調(diào)一致，不能在演出時(shí)出現(xiàn)聲部中某幾個(gè)人的聲音特別高的情況。

三、結(jié)語(yǔ)

各個(gè)參加者的聲音協(xié)調(diào)統(tǒng)一是合唱這一群體性音樂(lè)表演形式的內(nèi)在要求。由于高校合唱中的很多參加者之前缺少相關(guān)的音樂(lè)訓(xùn)練，因而教師需要在這方面特別地加以注意。既要讓每個(gè)同學(xué)都能夠把自己的音樂(lè)才能發(fā)揮出來(lái)，又要維持整體藝術(shù)表現(xiàn)的和諧統(tǒng)一。

參考文獻(xiàn)：

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篇6

連線報(bào)道也可以稱為電話連線采訪報(bào)道，是以聲音為主要傳播載體。電話為媒介，由廣播記者在新聞現(xiàn)場(chǎng)以口述或是互動(dòng)對(duì)話的形式。把新聞信息通過(guò)直播間直接播報(bào)出去。作為與廣播消息稿、錄音報(bào)道并用的一種手段，以記者口語(yǔ)化的描述，勾勒出新聞事件的畫面，把現(xiàn)場(chǎng)氛圍呈現(xiàn)出來(lái)，使聽眾如臨其境，具有現(xiàn)場(chǎng)感，增強(qiáng)了廣播新聞的吸引力和感染力。

首先，“交通廣播”連線報(bào)道，經(jīng)驗(yàn)的總結(jié)。作為“交通廣播”記者，在近幾年的采訪報(bào)道中，深刻體會(huì)到了，連線報(bào)道在制作程序上比錄音報(bào)道更簡(jiǎn)便，表現(xiàn)形式比消息稿更加生動(dòng)，所以成為當(dāng)下廣播新聞的重要表現(xiàn)樣式。

1.“交通廣播”連線報(bào)道要講究策劃。現(xiàn)場(chǎng)連線，雖然只是一種簡(jiǎn)單的現(xiàn)場(chǎng)采訪形式。但是要做好這種連線。也需要我們前期有一個(gè)相對(duì)完整的策劃。在實(shí)踐中，每一次與對(duì)方的接觸都是采訪過(guò)程，做訪談、做錄音采訪要提前做好充分準(zhǔn)備，同樣，“交通廣播”連線報(bào)道現(xiàn)場(chǎng)連線也需要我們策劃。記者需要按照訪談的內(nèi)容來(lái)做準(zhǔn)備，經(jīng)過(guò)現(xiàn)場(chǎng)了解從中進(jìn)行篩選，找出最有現(xiàn)場(chǎng)連線價(jià)值的內(nèi)容。再進(jìn)行連線。

2.“交通廣播”連線報(bào)道要注意發(fā)揮。在實(shí)踐操作中，我們經(jīng)常會(huì)遇到一些突況，尤其是“交通廣播”連線報(bào)道做現(xiàn)場(chǎng)連線，有些事情是我們不可預(yù)知的，這時(shí)一個(gè)記者的現(xiàn)場(chǎng)發(fā)揮能力就顯得尤為重要?！敖煌◤V播”連線報(bào)道每一次成功的現(xiàn)場(chǎng)連線，背后都是記者現(xiàn)場(chǎng)發(fā)揮能力的體現(xiàn)，現(xiàn)場(chǎng)發(fā)揮有時(shí)候要比準(zhǔn)備的內(nèi)容更豐富、更精彩?！敖煌◤V播”連線報(bào)道對(duì)突發(fā)新聞而言，搶占時(shí)間上的制高點(diǎn)非常重要。廣播記者必須時(shí)刻牢記的就是連線意識(shí)，當(dāng)記者到達(dá)一個(gè)突發(fā)現(xiàn)場(chǎng)時(shí)，在對(duì)事件進(jìn)行采訪、了解事件的來(lái)龍去脈后，就應(yīng)該立即理清思路、組織語(yǔ)言，第一時(shí)間發(fā)回連線報(bào)道。

3.“交通廣播”連線報(bào)道要有層次感、完整性?，F(xiàn)場(chǎng)連線，它不是一個(gè)簡(jiǎn)單事實(shí)的陳述，需要我們對(duì)各種因素進(jìn)行重新過(guò)濾，然后篩選出有一組有層次感，相對(duì)完整的內(nèi)容。如：為了方便駕駛員對(duì)道路狀況的了解。在城管監(jiān)控指揮中心的大屏幕。每天記者通過(guò)十一次電話連線報(bào)道，針對(duì)哈爾濱市區(qū)各主要路段的交通通行狀況，中山路、尚志大街等機(jī)動(dòng)車密集的地方，現(xiàn)場(chǎng)通過(guò)連線報(bào)道，介紹交通流量與行車情況。把駕駛員最需要最關(guān)心的路面出行信息?！敖煌◤V播”連線報(bào)道第一時(shí)間更直觀更可信的傳播出去。使信息性新聞鮮活生動(dòng)起來(lái)。也使得交通廣播新聞更加富有層次感。

4.“交通廣播”連線報(bào)道要注意溝通。不僅是與采訪對(duì)象的溝通，包括采訪前、采訪中和采訪后，而且還是與主持人的溝通。現(xiàn)在，做“交通廣播”連線報(bào)道，現(xiàn)場(chǎng)連線我們也經(jīng)常會(huì)發(fā)現(xiàn)一些溝通不暢的情況，這一來(lái)是主持人與記者默契程度不夠。二來(lái)是溝通太少。主持人不知道現(xiàn)場(chǎng)情況，記者不知道主持人介紹情況。三來(lái)是配合失誤，有些是很小的錯(cuò)誤，卻可能出現(xiàn)非常不好的效果。如：“交通廣播”連線報(bào)道，采訪前與采訪對(duì)象的溝通，在連線報(bào)道前把要做連線報(bào)道將要提出的問(wèn)題一一列出，消除采訪對(duì)象的緊張感，使得連線報(bào)道更順利?！敖煌◤V播”連線報(bào)道與主持人的溝通，可以先通過(guò)導(dǎo)播溝通，導(dǎo)播在導(dǎo)播間的電腦同屏顯示功能可以傳達(dá)給主持人將要連線報(bào)道的情況和交流內(nèi)容。這樣可以充分減少連線報(bào)道帶來(lái)的小錯(cuò)誤，從達(dá)到良好的播出效果。體現(xiàn)“交通廣播”連線報(bào)道的可聽性。

其次，“交通連線”對(duì)記者的素質(zhì)要求更高。連線報(bào)道并不是記者到了現(xiàn)場(chǎng)隨便講幾句，以證明自己到過(guò)現(xiàn)場(chǎng)，是對(duì)記者提出了更高的要求。由于突發(fā)事件發(fā)生的不可預(yù)測(cè)性，事先很難做準(zhǔn)備。記者沒(méi)有現(xiàn)成的稿子可念，而必須在現(xiàn)場(chǎng)口頭描述自己的所見所聞。連線報(bào)道具有即時(shí)性、一次性以及不可剪輯的特點(diǎn)。簡(jiǎn)單來(lái)講，連線報(bào)道也是記者口頭“撰寫”的一則新聞稿，同樣必須具備新聞的基本要素?！敖煌◤V播”連線報(bào)道最重要的就是要有現(xiàn)場(chǎng)感，最簡(jiǎn)單與最常用的做法是在有背景聲的現(xiàn)場(chǎng)直接播報(bào)。

記者做“交通廣播”連線報(bào)道時(shí)也并非現(xiàn)場(chǎng)聲響越多越好。如果現(xiàn)場(chǎng)非常嘈雜。完全掩蓋了記者的聲音或是記者需要聲嘶力竭地播報(bào)是不合適的。“交通廣播”連線報(bào)道的場(chǎng)地選擇也檢驗(yàn)著一個(gè)廣播記者的經(jīng)驗(yàn)和能力。記者在事件現(xiàn)場(chǎng)不僅要采集聲音、觀察環(huán)境，在相對(duì)混亂的狀況下找到當(dāng)事人或是知情者。在各種不利采訪因素的干擾下獲得有用的信息。在獲得一手新聞素材后，還要立即整理這些素材，形成稿子，很快就要用語(yǔ)言生動(dòng)地作直播報(bào)道。這就是廣播記者不僅要具備最基本的新聞采訪基本功、新聞敏感性、政策理論水平、迅速的文字組織能力。還要具備生動(dòng)流暢的語(yǔ)言表達(dá)能力。連線時(shí)口語(yǔ)化的語(yǔ)言。盡量通俗易懂，多用現(xiàn)在進(jìn)行時(shí)態(tài)來(lái)報(bào)道新聞。要做好連線報(bào)道，要注意大量細(xì)節(jié)描述?！敖煌◤V播”連線報(bào)道，多路記者在繁華地區(qū)、路面地勢(shì)低洼地區(qū)、車輛集中地區(qū)進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)報(bào)道時(shí)，再加上些細(xì)節(jié)：某地積水已經(jīng)沒(méi)過(guò)膝蓋了。幾十人正在水中相扶的通過(guò)街道；地道過(guò)往車輛進(jìn)水熄火多少臺(tái)車了，請(qǐng)駕駛員師傅注意不要再向這個(gè)地區(qū)行駛了；路人打著傘，身上全被淋濕等細(xì)節(jié)描述，這樣就讓聽眾感同身受了。

篇7

[關(guān)鍵詞] 血管擴(kuò)張劑;硝酸甘油;聯(lián)合應(yīng)用;心絞痛

[中圖分類號(hào)] R972+.3[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]C [文章編號(hào)]1674-4721(2010)05(c)-050-02

心絞痛是心血管系統(tǒng)的常見病、多發(fā)病。近年來(lái),血管擴(kuò)張劑的應(yīng)用在臨床中日益廣泛,它對(duì)冠狀動(dòng)脈血流和心肌灌注的影響特別適用于心絞痛的治療[1]。因此,血管擴(kuò)張劑的應(yīng)用對(duì)心絞痛的臨床治療有很大意義,可以有效防止心絞痛的發(fā)生和并發(fā)癥,提高冠心病的治愈率。由于血管擴(kuò)張劑的藥物種類較多,本院2006年3月~2009年7月對(duì)57例心絞痛患者采用硝酸甘油、阿司匹林、硝苯地平聯(lián)合用藥取得良好效果,現(xiàn)將臨床應(yīng)用介紹如下:

1 資料與方法

1.1 一般資料

本院2006年3月~2009年7月共收治114例心絞痛患者,隨機(jī)分為治療組(硝酸甘油聯(lián)合應(yīng)用組)和對(duì)照組(硝酸甘油組),治療組57例,男35例,女22例,年齡36~73歲,平均54.6歲,病程為3~7年,采用硝酸甘油、阿司匹林、硝苯地平聯(lián)合應(yīng)用;對(duì)照組57例,男32例,女25例,年齡33~69歲,平均56.3歲,病程為2~7年,采用硝酸甘油單一治療,兩組患者均給予復(fù)方丹參注射液或紅花注射液靜脈滴注。其中,初發(fā)勞力性心絞痛11例,勞累性心絞痛38例,自發(fā)性心絞痛49例,臥位性心絞痛25例,梗死后心絞痛18例,有52例合并高血壓、糖尿病。

1.2 治療方法

治療組和對(duì)照組均用硝酸甘油10 mg加入5%葡萄糖或0.9%氯化鈉250 ml中靜脈滴注,并給予復(fù)方丹參注射液或紅花注射液20 ml加入5%葡萄糖或0.9%氯化鈉250 ml中靜脈滴注。治療組在對(duì)照組的基礎(chǔ)上加用阿司匹林100 mg,每日1次,硝苯地平10 mg,每日2次。待病情穩(wěn)定后,可將硝酸甘油改為舌下含服,每次10 mg,每日2次。

1.3療效標(biāo)準(zhǔn)

顯效:胸悶、心悸、氣促,心絞痛癥狀完全消失;有效:胸悶、心悸、氣促,心絞痛癥狀基本消失;基本有效:胸悶、心悸、氣促,心絞痛癥狀稍有改善,但仍感覺不適,不能活動(dòng);無(wú)效:胸悶、心悸、氣促,心絞痛癥狀沒(méi)有任何改善或加重。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)由SPSS 14.0軟件系統(tǒng)處理,兩組間資料比較采用χ2檢驗(yàn),以P

2 結(jié)果

2.1兩組療效比較

見表1。

2.2兩組患者經(jīng)治療后心電圖變化

見表2。

2.3 不良反應(yīng)

63例(治療組23例,對(duì)照組40例)患者在服用硝酸甘油后出現(xiàn)頭昏、頭脹痛、低血壓等癥狀,減少藥物劑量后反應(yīng)消失,未出現(xiàn)嚴(yán)重的副作用。

3 討論

冠心病心絞痛主要是由于左心室細(xì)胞至冠狀動(dòng)脈之間血流下降引起動(dòng)脈管腔狹窄、硬化,使局部血流量明顯下降,促使心臟心肌缺血缺氧,加重心臟的病變,由于動(dòng)脈管腔狹窄、收縮,出現(xiàn)心絞痛并伴有血壓升高[2]。而且由于斑塊內(nèi)纖維帽出現(xiàn)裂隙,表面上有血小板聚集或刺激冠狀動(dòng)脈痙攣[3],導(dǎo)致缺血性心絞痛。所以治療心絞痛的目的是緩解心絞痛的癥狀,控制心臟心肌缺血,防止心肌梗死和心臟猝死的發(fā)生。

血管擴(kuò)張劑具有擴(kuò)張血管,改變心臟的供血和血流,降低心臟的耗氧量等作用。硝酸甘油屬于硝酸脂類藥物,可以松弛血管平滑肌,從而改善體循環(huán)和冠狀動(dòng)脈循環(huán)[4]。舌下含服吸收快,生物利用度高,舌下給藥5 min就能產(chǎn)生最大效應(yīng)。主要經(jīng)肝腎循環(huán)代謝。阿司匹林通過(guò)不可逆的抑制血小板和內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)環(huán)氧化酶的通路,阻止血栓環(huán)素A的形成,從而抑制血小板聚集和血栓的形成,減少血管的粘連和冠狀動(dòng)脈痙攣[5]。血管擴(kuò)張劑聯(lián)合應(yīng)用是治療心絞痛的重要措施,聯(lián)合用藥可使藥物產(chǎn)生協(xié)同作用,降低心肌耗氧量,同時(shí)對(duì)抗有些藥物引起的反射性心動(dòng)過(guò)快,降低不良反應(yīng)的發(fā)生。

總之,冠心病心絞痛是臨床上常出現(xiàn)的疾病,血管擴(kuò)張劑聯(lián)合應(yīng)用不僅可以消除單一藥物使用時(shí)產(chǎn)生的耐藥性,還能有效減緩耐藥性發(fā)生,降低不良反應(yīng),增加心絞痛的治療效果,提高治愈率,延長(zhǎng)患者的生命,值得在臨床上廣泛應(yīng)用和推廣。

[參考文獻(xiàn)]

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[2]曹在新.不穩(wěn)定型心絞痛的治療與分析[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2008,5(13):185-186.

[3]國(guó)家“九五”攻關(guān)課題組.小劑量尿激酶溶栓治療不穩(wěn)定性心絞痛的臨床療效[J].中華心血管雜志,2000,28(6):413.

[4]何惠玉.冠心寧注射治療不穩(wěn)定型心絞痛27例療效分析[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生,2007,45(1):32.

[5]陳國(guó)偉,鄭宗鄂.現(xiàn)代心臟內(nèi)科學(xué)[M].長(zhǎng)沙:湖南科技出版社,1997:908-921.

篇8

1.使用“硝酸戊四醇酯+復(fù)方丹參滴丸”預(yù)防心絞痛發(fā)作

李女士今年54歲，患心絞痛已經(jīng)5年了。每當(dāng)?shù)搅饲锒竟?jié)，她的病情就會(huì)頻繁地發(fā)作。去年夏天，她來(lái)我科進(jìn)行診治時(shí)，我讓她同時(shí)服用硝酸戊四醇酯和復(fù)方丹參滴丸來(lái)預(yù)防此病的發(fā)作。李女士在堅(jiān)持服用這兩種藥物一段時(shí)間后，心絞痛發(fā)作的次數(shù)明顯地減少了。

硝酸戊四醇脂也叫硝酸季戊脂，屬于長(zhǎng)效硝酸脂類抗心絞痛藥。此藥是預(yù)防心絞痛復(fù)發(fā)的首選藥，其功效與硝酸甘油相似，但起效緩慢、藥效持久。硝酸戊四醇脂的用法是：每次服10―30毫克，每天服3―4次。復(fù)方丹參滴丸是由丹參、三七、冰片制成的中成藥，具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加心肌供血量、增強(qiáng)心肌收縮力的作用。此藥比復(fù)方丹參片更易被人體吸收，其藥效持久，副作用很小，在與硝酸戊四醇脂合用時(shí)可起到理想的預(yù)防心絞痛復(fù)發(fā)的作用。復(fù)方丹參滴丸的用法是：每次服10粒，每天服3次。除了使用“硝酸戊四醇脂+復(fù)方丹參滴丸”進(jìn)行治療外，心絞痛患者還可選用“布庫(kù)洛爾+復(fù)方丹參片”、“丁四硝脂+心脈寧”、“消心痛+心血康”等聯(lián)合用藥的方法來(lái)預(yù)防心絞痛的發(fā)作。

2.使用“硝酸甘油+心得安”治療心絞痛合并心率增快

王先生今年57歲，患心絞痛已經(jīng)兩年了。半個(gè)月前，他因天氣變冷而誘發(fā)了心絞痛，并出現(xiàn)了心率增快的癥狀，服用硝酸甘油后其病情未能緩解。來(lái)我科檢查后，我建議他同時(shí)服用硝酸甘油和心得安進(jìn)行治療。在用藥5分鐘后，王先生心絞痛和心率增快的癥狀就得到明顯緩解，在20分鐘后這些癥狀就全部消失了。

硝酸甘油屬于血管擴(kuò)張藥，具有松弛血管平滑肌、擴(kuò)張全身血管、減少心臟的前后負(fù)荷和心肌的耗氧量、降低左心室的壓力、改善心內(nèi)膜的血液循環(huán)等作用。在臨床上，此藥常用于治療急性發(fā)作的心絞痛。硝酸甘油兼有降壓的作用，因此非常適合同時(shí)患有高血壓的心絞痛患者使用。此藥的用法為：每次舌下含服300―500毫克，在用藥無(wú)效時(shí)可每隔30分鐘再服藥一次。心得安也叫普萘洛爾，屬于β-受體阻滯劑，具有良好的減慢心率的作用，其用法為：每次服10毫克，每天服3次。將此藥和硝酸甘油聯(lián)合起來(lái)使用，可有效地治療合并心率增快的心絞痛。除了選用“硝酸甘油+心得安”以外，心絞痛合并心率增快的患者還可選用“心痛定+維拉帕米”、“尼群地平+異搏定”或“洛爾地平+心律平”進(jìn)行治療。

3.使用“心可定+安定”治療心絞痛合并早搏

劉先生今年45歲，患心絞痛已經(jīng)兩年了。不久前，他因工作壓力大，精神過(guò)度緊張而出現(xiàn)了心絞痛急性發(fā)作和早搏的癥狀，經(jīng)自服硝苯地平其癥狀未能緩解。來(lái)我院進(jìn)行檢查后，我建議他同時(shí)服用硝苯地平和安定進(jìn)行治療。在服用這兩種藥物30分鐘后，他的病情明顯好轉(zhuǎn)。在用藥1個(gè)小時(shí)后，他的臨床癥狀就全部消失了。

心可定也叫雙苯丙胺，是治療心絞痛合并快速型心律失常（如早搏、心動(dòng)過(guò)速等）的首選藥。此藥具有抑制心肌的收縮力、松弛血管平滑肌、增加冠狀動(dòng)脈的血流量、降低冠狀動(dòng)脈的耗氧量、促進(jìn)側(cè)支循環(huán)形成等作用。在臨床上，此藥主要用于治療心絞痛，尤其在治療伴有早搏、室性心動(dòng)過(guò)速的心絞痛時(shí)效果最佳。心可定的用法是：每次服15―30毫克，每天服3次（在癥狀緩解后可改為每次服15毫克，每天服2―3次）。安定屬于苯二氮卓類鎮(zhèn)靜劑，具有抗焦慮、鎮(zhèn)靜的作用，是緩解精神緊張的首選藥。此藥的用法是：每次服2.5―5毫克，每天服3次或在睡前服1次。將此藥與心可定聯(lián)合起來(lái)使用，可有效治療因精神緊張而誘發(fā)的早搏和心絞痛。除了使用“心可定+安定”進(jìn)行治療以外，合并早搏的心絞痛患者還可選用“香豆丁心安+苯巴比妥”、“雙環(huán)己哌啶+利眠寧”、“尤心利安+安寧”進(jìn)行治療。

4.有咳嗽、咳痰癥狀的心絞痛患者可聯(lián)合使用“硝酸甘油+毛冬青”進(jìn)行治療

篇9

關(guān)鍵詞 寡核苷酸； 藥代動(dòng)力學(xué)； 定量； 核酸雜交； 酶聯(lián)橋接分析系統(tǒng)

1 引 言

反義（Antisense，AS）寡核苷酸（Oligodeoxynucleotide，ODN）、免疫刺激基序（CpG）ODN等分子，在抗腫瘤、抗病毒治療等基因治療領(lǐng)域中占據(jù)重要地位。迄今，ASODN與CpG ODN類藥物經(jīng)美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市，已有多種該類藥物處于臨床前和臨床試驗(yàn)階段\。

目前，生物樣品中ODN藥物的定量分析方法最為成熟，其中應(yīng)用最多的是非放射性同位素標(biāo)記定量分析方法， 包括毛細(xì)管電泳（Capillary electrophoresis， CE）和高效液相色譜法（High performance liquid chromatography， HPLC）。CE方法對(duì)于ODN的檢測(cè)具有高分辨率、可分辨相差一個(gè)核苷酸的ODN，其在血漿基質(zhì)中對(duì)ODN的最低定量限（Lower limit of quantification， LLOQ）約在70 g/L（約12 nmol/L）\水平。本課題組曾利用改良的毛細(xì)管非膠篩分電泳方法對(duì)硫代修飾ASODN進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究\，可描述5 mg/kg以上劑量給藥后獼猴的血漿動(dòng)力學(xué)行為，但該方法對(duì)于末端消除相數(shù)據(jù)的獲得不甚理想，對(duì)于更低劑量下（如1 mg/kg）給藥后的藥時(shí)曲線描述更是無(wú)能為力。HPLC方法的分辨率和靈敏度與CE方法相比略低。目前ODN類藥物通常在較低劑量下（≤1 mg/kg \）給藥即能發(fā)揮藥效，這對(duì)定量分析方法學(xué)的靈敏度提出越來(lái)越高的要求。上述方法的靈敏度難以達(dá)到對(duì)ODN在血漿和組織中藥代動(dòng)力學(xué)（Pharmacokinetics，PK）終末消除相的定量能力（濃度通常低于10 nmol/L） \。此外，上述兩種主流分析方法還有一個(gè)共同的缺陷，即樣品前處理過(guò)程相當(dāng)復(fù)雜，絕對(duì)回收率低，分析周期長(zhǎng)、成本高，應(yīng)用受限\。

核酸分子雜交的酶聯(lián)橋接（Enzymelinked bridging assay，ELBA）法基于核酸雜交原理，利用一個(gè)錨定的、3′端與待測(cè)反義寡核苷酸（Test ODN）序列互補(bǔ)的俘獲探針?lè)@生物基質(zhì)中的Test ODN，再通過(guò)連接酶將檢測(cè)探針（序列與俘獲探針5′端互補(bǔ)，3′端偶聯(lián)酶標(biāo)顯色系統(tǒng)）與上述核酸雜交復(fù)合物相連，建立橋接體系。S1核酸內(nèi)切酶是單鏈特異性的核酸內(nèi)切酶，可以降解雙鏈核酸中的單鏈或缺口處切割雙鏈 DNA，在上述橋接體系中，可以通過(guò)酶切將不能與檢測(cè)探針連接從而構(gòu)成完整雙鏈的差減ODN序列（即ODN的降解產(chǎn)物，其3′端與檢測(cè)探針5′端之間有1個(gè)以上的堿基缺口）去除，以保證橋接系統(tǒng)的序列長(zhǎng)度特異性。最終利用檢測(cè)探針3′端偶聯(lián)的酶標(biāo)顯色系統(tǒng)，對(duì)Test ODN原形進(jìn)行定量。酶聯(lián)橋接分析系統(tǒng)的的原理如圖1所示。該方法在靈敏度、特異性以及適用性上均較傳統(tǒng)的定量分析方法具有優(yōu)勢(shì)\，因此，基于核酸雜交的ELBA系統(tǒng)在寡核酸類藥物PK研究中具有巨大的應(yīng)用前景。本研究對(duì)所建立ELBA系統(tǒng)中的諸多條件，包括親和素包被、俘獲探針與檢測(cè)探針濃度比、T4連接酶及S1核酸酶用量、生物基質(zhì)效應(yīng)、稀釋效應(yīng)以及顯色系統(tǒng)等進(jìn)行了細(xì)致的優(yōu)化，使系統(tǒng)更具穩(wěn)定性與通用性。

圖1 酶聯(lián)橋接分析系統(tǒng)的原理

Fig．1 Principle of enzymelinked bridging assay （ELBA）

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

HeraeusBB5060培養(yǎng)箱（上海賀利氏公司）；超純水系統(tǒng)（美國(guó)MILLIPORE公司）；微量振蕩器（國(guó)華電器有限公司）；微量加樣器（美國(guó)Gilson公司）；電熱恒溫水浴鍋（北京長(zhǎng)風(fēng)公司）；MK 3酶標(biāo)儀（德國(guó)Thermo公司）。

鏈霉親和素（Streptavidin，SA, Promega公司）；鏈霉親和素包被酶標(biāo)板（StreptavidinCoated 96well plate, Cayman Chemical公司）；T4 DNA 連接酶（NEB公司）；S1核酸酶（Invitrogen公司）；酶標(biāo)抗地高辛抗體（Antidigoxigeninalkaline Phosphatase，ADAP, Roche公司）；中性親和素包被的酶標(biāo)板（ReactiBind NeutrAvidin Coated），封閉液（SuperBlock Blocking buffer）和顯色液（pNitrophenyl phosphate，PNPP）均購(gòu)自Pierce公司。

本研究中采用ODN及其核酸探針由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成，其序列結(jié)構(gòu)見表1。其它生化試劑：TrisHCl, HCl, Na2HPO4，NaCl, NaHCO3, Tween20, EDTA和曲拉通等均為分析純?cè)噭?/p>

L，加入反應(yīng)孔中，18 ℃過(guò)夜連接。洗滌后加入一定酶活單位的S1核酸內(nèi)切酶，37 ℃酶切1.5 h后洗板。

2.2.3 顯色反應(yīng) 封閉液在37 ℃反應(yīng)30 min后，加入酶標(biāo)抗體（1∶1500稀釋于2%牛血清白蛋白中），室溫振蕩反應(yīng)30 min。洗滌后加入新鮮配制PNPP顯色液，37 ℃反應(yīng)15～30 min。加入2 mol/L NaOH終止，用酶標(biāo)儀檢測(cè)405/630 nm處光吸收值（Optical density，OD）值。

2.3 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化

2.3.1 親和素包被的條件選擇 100 nmol/L Test ODN經(jīng)二次蒸餾水（ddH2O）倍比稀釋至0.39 nmol/L，隨行零對(duì)照，各濃度復(fù)孔，重復(fù)3次。考察了4種親和素包被條件對(duì)靈敏度和響應(yīng)值的影響：（1）Pierce公司中性親和素包被酶標(biāo)板；（2） CAYMAN CHEMICAL公司鏈霉親和素包被酶標(biāo)板；（3） 鏈霉親和素25 mg/L和50 mg/L包被的96孔板（包被緩沖液：15 mmol/L Na2CO3，35 mmol/L NaHCO3，pH 9.6）。

2.3.2 優(yōu)化探針濃度 從兩個(gè)角度優(yōu)化俘獲探針和檢測(cè)探針濃度: （1）Test ODN濃度為5 nmol/L時(shí)，考察俘獲探針在100 nmol/L條件下，不同濃度（50，75，100，150和200 nmol/L）檢測(cè)探針對(duì)應(yīng)OD值變化曲線，反之考察俘獲探針的最優(yōu)濃度。（2）倍比稀釋12.5 nmol/L Test ODN至0.78 nmol/L，檢測(cè)探針與俘獲探針比例分別為150∶100，150∶150 和 150∶200對(duì)方法線性的影響。

2.3.3 優(yōu)化PNPP顯色時(shí)間 獼猴血漿倍比稀釋12.50 nmol/L Test ODN至0.39 nmol/L，按照優(yōu)化后的反應(yīng)條件，考察PNPP顯色步驟中不同顯色時(shí)間（15， 20和30 min）對(duì)定量曲線線性的影響。

2.3.4 S1酶用量的優(yōu)化 獼猴血漿倍比稀釋 Test ODN 12.50 nmol/L至0.39 nmol/L，加零對(duì)照，考察S1酶不同加入量（5，10，20，40，80和100 U/孔）對(duì)線性的影響。

2.4 生物基質(zhì)的影響

分別以獼猴全血漿和ddH2O為基質(zhì)倍比稀釋12.5 nmol/L Test ODN至0.39 nmol/

L，并將另行配制的兩份同濃度的血漿樣品稀釋1倍和10倍，對(duì)比考察生物基質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

2.5 利用ELBA和CE方法對(duì)獼猴體內(nèi)低劑量給藥PK研究

4只獼猴單次靜脈滴注（v.d.）1 mg/kg Test ODN，30 min內(nèi)恒速靜脈滴注完畢，分別于給藥前（0 min）以及滴注開始后0.2，0.3，0.5，0.35，0.75，1.0，1.25，1.5，2.0，2.5，3.0，4.0，6.0 和8.0 h，在給藥部位對(duì)側(cè)后肢靜脈取血，血樣均用EDTAK2抗凝管采集，3000 g 離心收集血漿樣品于80 ℃保存待測(cè)。ELBA對(duì)樣品測(cè)定時(shí)同板隨行標(biāo)線和質(zhì)控樣品，根據(jù)標(biāo)線對(duì)生物樣品中 Test ODN進(jìn)行定量分析。

CE定量的樣品前處理和測(cè)定方法參見文獻(xiàn)\。單次靜脈滴注5 mg/kg Test ODN，給藥方式和血樣采集同ELBA方法。

血漿樣品中對(duì)Test ODN 原形、3′N1和5′N1降解產(chǎn)物進(jìn)行12.5 nmol/L至0.39 nmol/L的倍比稀釋，通過(guò)計(jì)算交叉反應(yīng)性確定該方法針對(duì)原形藥物測(cè)定的特異性，計(jì)算公式為：降解產(chǎn)物的半數(shù)效應(yīng)濃度（EC50）/Test ODN 原形的半數(shù)效應(yīng)濃度（EC50）。

2.6 數(shù)據(jù)處理

用EXCEL2007對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行整理并用ORIGIN 5.0對(duì)整理后數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合作圖，藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)使用WinNonlin進(jìn)行計(jì)算。3 結(jié)果與討論

3.1 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化

3.1.1 不同包被條件對(duì)定量范圍的影響

鏈霉親和素包被酶標(biāo)板（CAYMAN CHEMICAL公司）與自制兩種鏈霉親和素包被量的酶標(biāo)板反應(yīng)性能相同，在10 ～100 nmol/L較高濃度范圍可呈良好線性，提示增加鏈霉親和素包被量并不能提高靈敏度。與鏈霉親和素包被相比，中性親和素包被酶標(biāo)板（Pierce公司）本底較低，靈敏度高；在0.5 ～7.5 nmol/L可呈線性遞增趨勢(shì)（圖2A）。中性親和素和鏈霉親和素分子量相同，均可與生物素結(jié)合，但是前者與生物素結(jié)合時(shí)非特異性結(jié)合最低，可以大大提高特異性和靈敏度。本研究以建立高靈敏度的定量分析方法為目標(biāo)，選擇Pierce公司中性親和素包被的酶標(biāo)板進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

3.1.2 優(yōu)化探針濃度 固定 Test ODN濃度為5 nmol/L，檢測(cè)探針濃度為100 nmol/L的條件下，俘獲探針在100 nmol/L 以下信號(hào)值與濃度呈明顯正相關(guān)，大于100 nmol/L呈飽和趨勢(shì)，同樣在固定 Test ODN為5 nmol/L，俘獲探針在100 nmol/L的條件下，檢測(cè)探針濃度在100 nmol/L以下信號(hào)值與濃度呈明顯正相關(guān)，到達(dá)100 nmol/L后呈飽和趨勢(shì)（圖2B）。俘獲探針與檢測(cè)探針的不同濃度比例對(duì)該方法定量范圍的影響結(jié)果表明，當(dāng)兩者比例為2∶3時(shí)， Test ODN濃度在0.78 ～12.5 nmol/L范圍內(nèi)與響應(yīng)值呈正相關(guān)關(guān)系，且響應(yīng)值較高（圖2C）。

圖2 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化

Fig．2 Optimization of experiment conditions

A． 不同包被條件對(duì)響應(yīng)值的影響 （Effect of different coating conditions on response）; B． 俘獲探針和檢測(cè)探針濃度的優(yōu)化 （Optimization of concentrations of capture probe and detection probe）; C． 俘獲探針和檢測(cè)探針最佳比例 （Optimization of concentration ratio of capture probe and detection probe; D. PNPP顯色時(shí)間的優(yōu)化（Optimization of pnitrophenyl phosphate （PNPP） coloration time）。

3.1.3 優(yōu)化PNPP顯色時(shí)間 PNPP顯色時(shí)間延長(zhǎng)可以增強(qiáng)各濃度標(biāo)準(zhǔn)品下的信號(hào)強(qiáng)度，但是對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性影響較大，因此檢測(cè)中將顯色時(shí)間定為15 min（圖2D）。

3.1.4 優(yōu)化S1酶用量 S1 核酸酶的用量是影響所建方法的線性范圍和特異性（原形和降解產(chǎn)物的區(qū)分）的關(guān)鍵因素。S1酶用量過(guò)少不能完全去除單鏈檢測(cè)探針以及降解產(chǎn)物引起的背景信號(hào)，過(guò)多則會(huì)對(duì)結(jié)合的雙鏈雜交分子非特異降解，原形ODN的信號(hào)值下降明顯，且線性較差。根據(jù)優(yōu)化結(jié)果，本研究在Test ODN在40 U/孔的酶量下，可以獲得最優(yōu)線性范圍（圖3），并具有良好的特異性，能區(qū)分原形和降解產(chǎn)物。S1酶對(duì)3′N1降解產(chǎn)物的作用更為特異，交叉反應(yīng)性＜10%，對(duì)5′N1降解產(chǎn)物的交叉反應(yīng)性＜25%（圖4），而生物體內(nèi)ODN的大部分降解產(chǎn)物均由3′外切核酸酶產(chǎn)生ODN，即以3′端降解產(chǎn)物為主。

圖3 S1酶用量的優(yōu)化

Fig．3 Optimization of S1 nuclease amount

圖4 Test ODN原形與其3′N1 和5′N1降解產(chǎn)物的區(qū)分

Fig．4 Distinction between parent ODN and its 3′N1 and 5′N1degradation products

3.2 生物基質(zhì)對(duì)定量分析的影響

生物樣品中定量分析的難點(diǎn)在于生物基質(zhì)的干擾效應(yīng)，常規(guī)解決辦法是對(duì)樣品進(jìn)行適當(dāng)稀釋以降低信噪比，提高響應(yīng)值。本研究發(fā)現(xiàn)，低濃度生物樣品進(jìn)行稀釋處理會(huì)導(dǎo)致靈敏度下降無(wú)法檢測(cè)，與以ddH2O為基質(zhì)相比，100%獼猴血漿中同濃度 Test ODN的響應(yīng)值并未受到影響（圖5），證明ELBA方法不受血漿基質(zhì)干擾，反義寡核苷酸血漿樣品不需任何樣品前處理可直接應(yīng)用ELBA方法進(jìn)行定量分析。

3.3 方法學(xué)確證

3.3.1 定量范圍、精密度、準(zhǔn)確度 獼猴血漿中配制標(biāo)準(zhǔn)品（12.5， 6.25，3.13，1.56，0.78，0.39，0.20和0.10 nmol/L）制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，批間重復(fù)5次。隨行配制高（5 nmol/L）、中（0.50 nmol/L）、低（0.15 nmol/L）質(zhì)控樣品考察精密度和準(zhǔn)確度。ELBA方法對(duì)Test ODN在獼猴血漿中的定量范圍為0.10～6.25 nmol/L（R2＞0.99）（圖6），較CE方法的靈敏度提高了近1000倍。 5批樣品的批內(nèi)和批間質(zhì)控樣品測(cè)定結(jié)

圖5 生物基質(zhì)對(duì)ODN定量分析的影響

Fig．5 Effect of biological matrix on quantitative analysis of ODN

圖6 血漿中Test ODN定量標(biāo)準(zhǔn)曲線

Fig．6 Standard curve of quantification of Test ODN in plasma by ELBA

篇10

摘 要 “A+H”模式上市公司在關(guān)聯(lián)方及關(guān)聯(lián)交易披露方面由于受到企業(yè)會(huì)計(jì)準(zhǔn)則、上交所和深交所上市規(guī)則以及港交所主板上市規(guī)則三重法規(guī)的監(jiān)管且規(guī)定內(nèi)容不盡相同，往往無(wú)所適從，本文通過(guò)對(duì)三項(xiàng)法規(guī)關(guān)于關(guān)聯(lián)方及關(guān)聯(lián)交易分類異同的分析，以供“A+H”模式上市公司參考使用。

關(guān)鍵詞 上市公司 關(guān)聯(lián)方 關(guān)聯(lián)交易 分類

近年來(lái)，越來(lái)越多的境內(nèi)公司赴香港交易所上市，同時(shí)也有許多早年在香港上市的H股公司回歸到A股市場(chǎng)。截至2012年底，市場(chǎng)上大約有“A+H”模式上市公司81家（其中深市15家、滬市66家），“A+H”模式在擴(kuò)大融資渠道、提高市場(chǎng)影響力、開拓國(guó)際視野方面發(fā)揮了重要作用，但與此同時(shí)，作為公眾上市公司，“A+H”模式上市公司也同時(shí)受到不同上市地會(huì)計(jì)準(zhǔn)則和監(jiān)管規(guī)則的約束，披露成本大大提高，尤其是在關(guān)聯(lián)方及關(guān)聯(lián)交易披露方面，由于不同法律法規(guī)的規(guī)定內(nèi)容往往不盡相同，存在一定程度上的差異，導(dǎo)致“A+H”模式上市公司在進(jìn)行相關(guān)數(shù)據(jù)整理和履行披露義務(wù)時(shí)往往無(wú)所適從或者出現(xiàn)遺漏的情況，輕者影響上市公司聲譽(yù)和誠(chéng)信狀況，重者受到監(jiān)管機(jī)構(gòu)嚴(yán)厲懲戒和譴責(zé)，使上市公司陷入“披露危機(jī)”。為此，筆者通過(guò)對(duì)《企業(yè)會(huì)計(jì)準(zhǔn)則》、《香港交易所主板上市規(guī)則》、《上海證券交易所股票上市規(guī)則》、《深圳證券交易所股票上市規(guī)則》等法律法規(guī)中有關(guān)關(guān)聯(lián)方及關(guān)聯(lián)交易的表述內(nèi)容進(jìn)行深入剖析、研究，求得其中關(guān)于關(guān)聯(lián)方及關(guān)聯(lián)交易分類異同，以供“A+H”模式上市公司參考使用。

一、關(guān)聯(lián)交易產(chǎn)生的背景、原因及利弊分析

伴隨著世界各國(guó)公司組織形式與治理結(jié)構(gòu)的演變，關(guān)聯(lián)交易這種交易方式在母子公司、總分公司、其他具有資本紐帶關(guān)系的企業(yè)之間、以及依托控制、共同控制、重大影響為基礎(chǔ)的企業(yè)群中得到廣泛應(yīng)用，關(guān)聯(lián)交易金額也非常巨大，在公開披露的2012年年報(bào)中，“A+H”模式上市公司華能國(guó)際（SH600011/HK902）關(guān)聯(lián)交易總額179.14億元、東方電氣（SH600875/HK1072）關(guān)聯(lián)交易總額129.51、中國(guó)石化（SH600028/HK386）關(guān)聯(lián)交易總額達(dá)到5，182.06億元。關(guān)聯(lián)交易在市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)條件下產(chǎn)生并存在，但它與市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)的基本原則卻不相吻合。按市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)原則，一切企業(yè)之間的交易都應(yīng)該在市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)的原則下進(jìn)行，而在關(guān)聯(lián)交易中由于交易雙方存在各種各樣的關(guān)聯(lián)關(guān)系，有利益上的牽扯，交易并不是在完全公開競(jìng)爭(zhēng)的條件下進(jìn)行的。

關(guān)聯(lián)交易客觀上可能給企業(yè)帶來(lái)或好或壞的影響。從有利的方面講，交易雙方因存在關(guān)聯(lián)關(guān)系，可以節(jié)約大量商業(yè)談判等方面的交易成本，并可運(yùn)用行政的力量保證商業(yè)合同的優(yōu)先執(zhí)行，從而提高交易效率。從不利的方面講，由于關(guān)聯(lián)交易方可以運(yùn)用行政力量撮合交易的進(jìn)行，從而有可能使交易的價(jià)格、方式等在非競(jìng)爭(zhēng)的條件下出現(xiàn)不公正情況，形成對(duì)股東或部分股東權(quán)益的侵犯。

二、關(guān)聯(lián)方關(guān)系及其交易披露的意義

隨著我國(guó)企業(yè)改革持續(xù)深入，產(chǎn)權(quán)日益多元化，資本市場(chǎng)快速發(fā)展，機(jī)構(gòu)投資者及其他投資者隊(duì)伍日益壯大，對(duì)會(huì)計(jì)信息的要求日益提高，在這種情況下，投資者更加關(guān)心其投資的風(fēng)險(xiǎn)和報(bào)酬，他們需要會(huì)計(jì)信息來(lái)幫助其做出決策，正是由于關(guān)聯(lián)交易的普遍存在，以及它對(duì)企業(yè)經(jīng)營(yíng)狀況有著重要影響，上市公司如果運(yùn)用關(guān)聯(lián)交易進(jìn)行不當(dāng)?shù)牟僮鲿?huì)嚴(yán)重?fù)p害相關(guān)利益者的利益，致使上市公司的關(guān)聯(lián)交易引起廣泛關(guān)注。

從會(huì)計(jì)準(zhǔn)則的角度來(lái)看，關(guān)聯(lián)方關(guān)系及其交易的披露，有助于會(huì)計(jì)信息使用者了解企業(yè)真實(shí)的財(cái)務(wù)狀況和經(jīng)營(yíng)成果，進(jìn)而影響財(cái)務(wù)報(bào)告使用者對(duì)上市公司的評(píng)估結(jié)果；從上市規(guī)則的角度來(lái)看，關(guān)聯(lián)方關(guān)系可能對(duì)上市公司的經(jīng)營(yíng)成果和財(cái)務(wù)狀況產(chǎn)生影響，關(guān)聯(lián)方之間可能會(huì)發(fā)生與非關(guān)聯(lián)方不會(huì)進(jìn)行的常規(guī)交易。在關(guān)聯(lián)方交易中，也會(huì)因各種利益，利用各自存在著的控制和影響關(guān)系，使關(guān)聯(lián)企業(yè)相互之間通過(guò)轉(zhuǎn)移定價(jià)等不同方式實(shí)現(xiàn)利潤(rùn)的轉(zhuǎn)移，從而損害交易對(duì)方或其他非關(guān)聯(lián)人的利益，損害正常的社會(huì)秩序。

基于上述原因，無(wú)論從會(huì)計(jì)準(zhǔn)則還是上市規(guī)則的角度出發(fā)，完善和健全關(guān)聯(lián)交易制度，提高上市公司關(guān)聯(lián)交易信息披露的透明度，保護(hù)投資者、債權(quán)人的合法權(quán)益，準(zhǔn)確區(qū)別和判斷關(guān)聯(lián)方交易都是十分必要的，因此，企業(yè)會(huì)計(jì)準(zhǔn)則、上交所、深交所、港交所的上市規(guī)則和相關(guān)指引都對(duì)關(guān)聯(lián)方關(guān)系和關(guān)聯(lián)交易作出了明確規(guī)定，盡管規(guī)定不盡相同，但是總體原則趨同，都是要求上市公司在進(jìn)行關(guān)聯(lián)交易時(shí)能夠顧及全體股東的整體利益。

三、關(guān)聯(lián)方定義及分類分析

關(guān)聯(lián)方是《企業(yè)會(huì)計(jì)準(zhǔn)則》中關(guān)于關(guān)聯(lián)關(guān)系的定義，其對(duì)于關(guān)聯(lián)關(guān)系的認(rèn)定是以控制、共同控制或重大影響為前提條件的，《企業(yè)會(huì)計(jì)準(zhǔn)則》中關(guān)于關(guān)聯(lián)方的定義適用于所有在中華人民共和國(guó)境內(nèi)設(shè)立的企業(yè)；中國(guó)證監(jiān)會(huì)頒布的《上市公司信息披露管理辦法》以及《上海證券交易所股票上市規(guī)則》、《深圳證券交易所股票上市規(guī)則》中將這種關(guān)聯(lián)方稱之為關(guān)聯(lián)人，其適用范圍為在上交所和深交所上市的公眾公司；《香港交易所主板上市規(guī)則》第十四A章中則將這種關(guān)系定義為關(guān)聯(lián)人士，其適用于在香港交易所主板上市的企業(yè)。上述法規(guī)中關(guān)于關(guān)聯(lián)方關(guān)系在定義上的差異只是表象，仔細(xì)分析其中對(duì)于關(guān)聯(lián)方的范疇的劃分，可以將其終結(jié)歸納為下表：

（二）上交所、深交所股票上市規(guī)則對(duì)于關(guān)聯(lián)人的規(guī)定

上市公司的關(guān)聯(lián)人包括關(guān)聯(lián)法人和關(guān)聯(lián)自然人，具體如下：

1.直接或者間接控制上市公司的法人或其他組織；

2.由上述第1項(xiàng)直接或者間接控制的除上市公司及其控股子公司以外的法人或其他組織；

3.由上市公司的關(guān)聯(lián)自然人直接或者間接控制的，或者由關(guān)聯(lián)自然人擔(dān)任董事、高級(jí)管理人員的除上市公司及其控股子公司以外的法人或其他組織；

4.持有對(duì)上市公司具有重要影響的控股子公司10%以上股份的法人或其他組織 ；

5.持有上市公司5%以上股份的法人或其他組織；

6.直接或間接持有上市公司5%以上股份的自然人；

7.上市公司董事、監(jiān)事和高級(jí)管理人員；

8.第5、6項(xiàng)所述人士的關(guān)系密切的家庭成員；

9.第1項(xiàng)的董事、監(jiān)事和高級(jí)管理人員；

10.持有對(duì)上市公司具有重要影響的控股子公司10%以上股份的自然人 ；

11.根據(jù)與上市公司或者其關(guān)聯(lián)人簽署的協(xié)議或者作出的安排，在協(xié)議或者安排生效后，或在未來(lái)十二個(gè)月內(nèi)，將具有關(guān)聯(lián)法人和關(guān)聯(lián)自然人情形任意情形之一的；

12.過(guò)去十二個(gè)月內(nèi)，曾經(jīng)具有關(guān)聯(lián)法人和關(guān)聯(lián)自然人情形任意情形之一的。

（三）港交所主板上市規(guī)則對(duì)于關(guān)聯(lián)人士的規(guī)定

1.上市發(fā)行人的董事、最高行政人員或主要股東；

2.交易日期之前12 個(gè)月內(nèi)曾任上市發(fā)行人董事的任何人士；

3.中國(guó)發(fā)行人的監(jiān)事；

4.上述第1、2、3、項(xiàng)所述人士的密切家庭成員及其單獨(dú)或合計(jì)持有30%及以上投票權(quán)的公司（包括合同式合營(yíng)公司）及其子公司；

5.上市發(fā)行人的任何關(guān)聯(lián)人士持有10%及以上表決權(quán)的上市發(fā)行人任何非全資附屬公司及其子公司。

四、關(guān)聯(lián)交易定義及分類分析

《企業(yè)會(huì)計(jì)準(zhǔn)則》中將關(guān)聯(lián)方交易定義為關(guān)聯(lián)方之間轉(zhuǎn)移資源、勞務(wù)或義務(wù)的行為。上交所、深交所上市規(guī)則中將發(fā)生交易的主體界定為上市公司或者其控股子公司與上市公司關(guān)聯(lián)人之間。香港交易所主板上市規(guī)則將交易范疇擴(kuò)大到“任何交易”，