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篇1

【摘要】理論免疫學用數學的方法來研究和解決免疫學問題，以及對免疫學相關的數學方法進行理論研究的一門科學。隨著高通量方法和基因組數據的出現，理論免疫學從受體交聯和免疫原理、Jerne的相互作用網絡和自我選擇等經典建模方法開始向信息學、空間擴展模型、免疫遺傳學和免疫信息學、進化免疫學、分子生物信息學和表遺傳學、高通量研究方法和免疫組學等方面轉變。

【關鍵詞】免疫學, 理論；數學模型；生物數學

Advances of theoretical immunology

JIN Yan

（Basic medical college, Liaoning Universtity of Traditional Chinese Medicine, LIAONING Shenyang, 110032,）

【Abstracts】Theoretical immunology is to develop mathematical methods that help to investigate the immunological problems, and to study the mathematical theory on immunology. With the advent of high-throughput methods and genomic data, immunological modeling of theoretical immunology shifted from receptor cross linking, Jerne interaction networks and self-non self selection, toward the informatics, spatially extended models, immunogenetics and immunoinformatics, evolutionary immunology, innate immunity and epigenetics, high-throughput research methods and Immunomics. Immunology, Theoretical; Mathematical Models; biomathematics

理論免疫學[1]（Theoretical Immunology）是指用數學的方法來研究和解決免疫學問題，以及對免疫學相關的數學方法進行理論研究的一門科學。理論免疫學是免疫學與數學交叉的邊緣學科，也稱數學免疫學（Mathematical Immunology），是生物數學的一個分支。由于免疫現象復雜，從免疫學中提出的數學問題往往也十分復雜，需要進行大量計算工作，因此從近年興起的復雜系統研究的角度來講[2]，理論免疫學也稱復雜免疫學（Complex Immunology）。理論免疫學的任務就是揭示免疫系統運行的規律和機制，及其病理機制。數學模型（Mathematical Models）和數據分析是理論免疫學的主要方法，計算機是研究和解決理論免疫學問題的重要工具。

雖然從上個世紀中期，數學模型已經開始應用于免疫學，但傳統的模型大部分是基于微分方程[3]、差分模型和元胞自動機（Cellular Automata）[4]。這些傳統模型以少數成份（一種受體和一種抗原，或兩個T細胞群之間等）參與的簡單動力學為主要研究內容。直到2000年，人們才開始對免疫學的復雜性進行數學建模。隨著高通量方法（High Throughput Methods）和基因組數據（Genomic Data）的出現，理論免疫學開始轉向信息學（Informatics）方面[5]。與分子免疫學的生物信息學（Bioinformatics）分析一樣，當前免疫學研究中與復雜性有關的主要研究目標大多集中在高通量測量計劃和系統免疫學（System Immunology）或免疫組學（Immunomics）計劃。在數學模型水平上，分析方法也從以微分方程為主的簡單系統轉向廣泛應用Monte Carlo模擬（Monte Carlo simulations）。這種向更多分子和更多計算的轉變態勢與復雜系統涉及的所有研究領域出現的轉變極為相似。同時，理論免疫學中另一個重要轉變是，人們關注焦點從對外源性的適應性免疫系統的轉向更多考慮固有免疫系統的平衡。

1理論免疫學經典模型

免疫學是生物學的一個領域，很早就認識到了數學建模和數學分析方法的作用。早在上個世紀60年代和70年代，數學模型已經應用于免疫學的不同領域，例如：抗原-受體的相互作用、T和B細胞群動力學、疫苗接種、生發中心動力學、病毒動力學和免疫系統對病毒的清除[6]等。現在的許多免疫學原理和觀點都是數學模型的結果。

1.1 受體交聯和免疫原理

受體交聯[7-9]（Receptor Cross Linking）和免疫原理（Immunon Theory）是由Alan Perelson提出、Carla Wofsy作了進一步分析。這個原理根據的事實是，低價抗原不能激活B細胞，而高價抗原（即抗原擁有多個重復基序）即使在抗原密度非常低（3-4目）的情況下也能夠激活B細胞。Sulzer和Perelson[10-13]據此發展了這個理論和數學模型并提出，抗原能夠聚集B細胞受體，從而激活B細胞。這個結論是B細胞免疫的基礎之一。

盡管數學模型對免疫學發展的貢獻的例子還有很多，但是免疫網絡（Immunological Networks）的概念和自我選擇（Self-Non Self Selection）問題占有相當重要的地位。

1.2 Jerne的相互作用網絡

假設受體庫（Receptor Repertoire）是滿的，即受體庫中每一個分子都有其相對應的受體，并且這些受體可以特異性地與其它受體相互作用。Jerne據此提出免疫調節網絡[14]（Regulatory Immune Networks）的存在。抗原激活的淋巴細胞可產生新受體，這些受體對于其它淋巴細胞來說是抗原，等等，以此類推。這個網絡的概念對理論學家來說很有吸引力，特別是在提出神經網絡（Neural Networks）中的認知行為（Cognitive Behavior）概念之后，提出了更多的免疫網絡模型[15][16]。有人用元胞自動機和布爾網絡（Boolean networks）建立大尺度行為（Large Scale Behavior）模型，有人用常微分方程（ODEs）來建立自身調節網絡模型（Local Regulatory Networks）。隨著時間的推移，人們對Jerne網絡學說逐漸失去了興趣，其主要原因是Jerne網絡學說的理論模型和實際的實驗證據沒有很好的相關性。

1.3 自我選擇

調節性網絡實際上是理論免疫學中自我選擇這個大課題的一部分。假設表達自身反應性受體的淋巴細胞被機體清除（陰性選擇）。大多數陰性選擇可能是由于中樞性耐受（Central Tolerance）所導致的（T細胞在胸腺，人和小鼠的B細胞在骨髓）。陰性選擇機制失敗可導致自身免疫性疾病。人們通過多種途徑對自我選擇展開研究。有人從分子的角度和基于特殊的選擇機制來研究，而有人則建立了更為復雜的模型，例如Polly Matzinger的危險模型[17][18]（Danger Model）和Irun Cohen的侏儒模型[19-27]（Homunculus Model）。這些模型都是想反映真實的復雜系統，盡管僅通過檢測免疫系統的成分，人們是無法接近問題的實質，但是他們的嘗試拓寬了我們的視野。直到今天，關于獲得和打破（自身免疫性疾病）耐受的途徑，也沒有一個公認的解釋。

2理論免疫學的現代模型

理論免疫學的模型和問題現在正逐漸向分子理論免疫學方向發展。這種理論方向的演變與大量基因組全序列的檢測、分子生物學工具的巨大進展、高通量測量技術的發展、空間分布（Spatial Distribution）作用的測量和建模能力的發展等實驗技術的發展是分不開的。同時，計算機處理能力和建模技術的發展也是影響現論免疫學的重要因素。

2.1 Immsim、Simmune和其它復雜模型

免疫學中，最大膽的嘗試可能就是建立一個免疫系統的系統模型。第一個建立這樣模型的嘗試是上世紀80年代由IBM公司Philip Seiden開發的IMMSIM模型[28-31]。其設計的主要目的是為了在計算機上進行免疫應答試驗。IMMSIM采用了克隆選擇原理的基本觀點，認為免疫細胞和免疫分子獨立地識別抗原，免疫細胞被競爭地選擇，以產生更好的識別抗原的克隆種類。IMMSIM模型的基礎是空間擴展的元胞自動機，它用位串（或比特流，Bitstrings）代表受體、抗原和MHC分子的可變性。到目前為止，抗原和受體多樣性的位串表示方法已被許多其他研究者[32,33,34]所采用。IMMSIM包括了適應性免疫系統的所有主要成份：CD4和CD8 T細胞、B細胞及其相應的受體，MHC Ⅰ類和Ⅱ類分子和一些細胞因子。但是IMMSIM模型仍然是對免疫系統的粗略描述。因此，人們在此基礎上又進行了其它的開發。

第一個較有影響的是由Martin. Meier-Schellersheim開發的Simmune[35-36]。這個系統嘗試建立一個足夠寬廣和復雜的平臺，從而能夠對免疫學的任意實際過程進行模擬。它不僅是一個特殊模型，更是一個建模技術或語言。

還有應用了Monte Carlo模擬[37-38]或稱免疫模擬（Immunosi m）、狀態圖[39]（State-Charts）等多種數學模型，試圖涵蓋免疫系統所有可能細節并建立動力學模型。在這個方向上，最有影響的是Sol Eforni的模型。此模型嘗試提供胸腺空間擴展動力學的完全模擬，并以此來研究細胞選擇[40]。這些綜合模擬的優勢在于他們涵蓋了當前免疫學的所有細節。但是這些模型也有缺點，他們過于復雜，因此對于所觀察到的動力學變化，我們無法充分理解其原因及模型對參數變化的敏感性。

2.2 空間擴展模型

從分子水平上講，免疫學復雜系統分析的最大進展是細胞內分子定位[41]（Molecule Localization）測量技術。免疫突觸（Synapses）的發現就是利用了該技術。人們建立了多個細胞膜動力學模型，用來解釋突觸的形成以及突觸的分子動力學。細胞膜動力學模型也應用于B細胞。這些模型中，有的是假設一個固定的細胞膜在二維晶格上（2D Lattice），有的假設一個自由漂浮的細胞膜[42-44]。另一個研究方向的是受體動力學，以及受體與其它細胞膜成份，比如Src家族激酶和脂筏[45]（Lipid Rafts），之間的相互作用。目前此領域的所有模型都是以廣泛的數值模擬（Numerical Simulation）為基礎的。

空間擴展模擬的另一個領域是生發中心動力學的模擬。經典模型主要采用ODEs來描述一或兩個總體的均勻動力學[46]（Homogenous Dynamics），而現代模擬主要應用Monte Carlo模擬[47-49]來研究多空間擴展或者均勻總體之間的相互作用，但是也有一些是采用ODEs。

2.3 免疫遺傳學和免疫信息學

不同基因組的排列和不同等位基因的序列使免疫遺傳（Immunogenetic）數據庫得到了全面的發展[50-51]。免疫遺傳數據庫IMGT儲存了多個物種的T和B細胞受體基因序列（B細胞H鏈和T細胞β/δ鏈的V、D和J基因，L鏈/α鏈/γ鏈的V和J基因）。該庫也包括了最新的MHC分子的基因序列（包括經典和非經典的）。另外，IMGT數據庫還包括了大量的淋巴細胞受體重排序列。

這樣龐大的數據庫是伴隨著免疫信息學（Immunoinfor matics）工具的大量發展而建立的。其中包括用于junction分析[52]、免疫基因對準（Immunogene Alignment）以及系統發育的工具[53-55]。所有這些工具的基礎都是將生物信息學理念應用于免疫學。免疫遺傳數據庫日漸顯現的重要性表明，免疫學建模逐漸向基因化方向轉變。

2.4 進化免疫學

與B細胞重排受體多重序列的測量一樣，多細胞生物中免疫基因的不斷積累，使免疫系統發育學（Immuno-Phylogenetics）得以快速發展。目前研究的主要焦點是適應性免疫系統的起源。適應性免疫是免疫系統的一部分，通過隨機基因重組以適應新病原體。很明顯，在軟骨魚類（Cartilaginous Fish）分化之前，適應性免疫最早出現于有腭脊椎動物（Jawed Vertebrates）。然而，這樣一個復雜系統起源的來源還不清楚。T細胞受體結構域（Receptor Domain）和B細胞受體結構域之間的相似性、RAG1和RAG2分子（RAG1和RAG2可起到隨機連接基因的作用，又稱重組激活基因）在重排過程中的關鍵作用及其物理性相鄰（Physical Proximity），使許多研究者認為，淋巴細胞受體重排的起源是轉座子（Transposon）橫向轉移到原始免疫受體（Primeval Immune Receptor）中。這個領域中使用的主要工具是系統發育分析（Phylogeny Analysis）及其相關的所有數學模型[56]。

另一個系統發育概念和方法的應用是B細胞的體超變異[57]（Somatic Hyper Mutations，SHM）分析。在生發中心反應過程中，通過活化誘導胞嘧啶脫氨酶（Activation-Induced Cytidine Deaminase，AID），B細胞的受體基因發生超變異。隨著克隆性增殖，B細胞受體基因平均每分裂一次就發生一次超變異，導致突變克隆的產生。這些克隆表現為微進化（Micro-Evolution），可以很容易地在實驗室中研究。對B細胞系統發育樹（Phylogenetic）以及它們與其它因素關系的分析，比如老化和自身免疫疾病，也已開始研究[58]。

2.5分子生物信息學和表遺傳學

在分子生物信息學（Molecular Bioinformatics）和表遺傳學（Epigenetics）的研究過程中[59]，隨著分子信息研究水平不斷提高，在免疫學中應用模型水平的精細程度也不斷提高。免疫學的一個特殊方面是需要將信號轉導（Signal Transduction）與基因重排結合起來建模。現已建立了不同條件下的B和T細胞內的基因重排過程和淋巴細胞信息轉導的模型[60-61]。從分子角度來講，另一個重要的分子建模是在抗原提呈給T細胞之前，對抗原處理過程的分析。

2.6高通量研究方法

免疫學是典型的、以免疫假說和免疫原理為基礎的研究領域。免疫學是最晚轉向以數據為基礎的、目前已在其它生物學領域中應用的高通量方法。近5年，在這一領域已取得了很大的進展。這些進展是依靠來自生物學其它領域的經典基因表達的自適應和定位技術[62][63]，以及針對免疫學的新技術的發展取得的。免疫學領域主要依靠實驗手段，但實驗所取得的結果卻是應當屬于理論免疫學的范疇，并且與復雜科學密切相關。

在基因重排過程中應用熒光原位雜交技術[64]（FISH techniques）來定位基因是一個令人興奮的、對免疫學來說更具有針對性的研究進展。這些測量手段使我們在研究基因重排過程中，能夠確定受體不同部分之間的相互作用。

另一個對免疫系統來說具有針對性的工具是抗原芯片（Antigen Chips）的發展。這些芯片可同時測量B細胞對成百上千種抗原的應答，并提供整個免疫系統的系統表達[65]。在這類分析中使用的主要數學工具是聚類方法（Clustering Methods）。

2.7 免疫組學

目前，在理論免疫學中，最璀璨的研究領域可能就是新產生的免疫組學。這個年輕的學科已經擁有了自己的雜志《immunomic research》(省略)。免疫組學的主要目標是全方位地研究免疫系統[66][67]。這個領域采用實驗與理論相結合的工具。免疫組學目前正在研究的項目有：全部T細胞抗原決定基檢測；全B細胞抗體庫的定義及其在不同情況下的變化方式；自身免疫性疾病相關的所有基因位點的檢測。這個新生領域的成果還有限，但是在不到10年內，免疫學建模將會從基于預定假設（Predefined Hypotheses）的理論問題研究轉向對免疫系統受體和靶目標充分認識的、具有針對性的建模。

當前，理論免疫尚處于探索和發展階段，許多方法和理論還很不完善，它的應用雖然取得某些成功，但仍是低水平、粗略，甚至是勉強的。許多更復雜的免疫學問題至今未能找到相應的數學方法進行研究，還有一些免疫核心問題還存在爭議。這就需要未來的醫學工作者具備更多的數學知識，對免疫學和數學都有更深入的了解，這樣才有可能讓免疫學研究更多地借助數學的威力，進入更高的境界。

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篇2

【關鍵詞】復發性口腔潰瘍；免疫紊亂；固有免疫；體液免疫

【中圖分類號】R78【文獻標識碼】A

【文章編號】2095-6851（2014）05-0047-02

復發性阿弗他潰瘍（ Recurrent Aphthous Ulcer， RAU）， 又稱復發性口腔潰瘍、復發性口瘡（ Recurrent Oral Ulcer， ROU ） 或復發性阿弗他口炎（ Recurrent Aphthous Stomatitis， RAS） ，是一種常見的炎癥性口腔粘膜病。其主要發生于唇、頰和舌緣黏膜，在角化完全的附著齦和硬腭中很少發生[1，2]。RAU的發生較為常見，病因十分復雜，但其發病原因不詳，致病機制不明確，是多因素綜合作用的結果，且病情嚴重程度、間歇期和持續時間存在明顯的個體差異。目前關于ROU病因方面的研究，主要集中在免疫、遺傳因素、細菌、病毒、基因、食物過敏、胃腸道疾病等。近些年來，許多學者的研究結果表明免疫功能紊亂在RAU病因中起著重要的作用，下面對其免疫學方面的病因的研究進展進行綜述。

1免疫學病因的首次提出

1969年，Lehner首次發現RAU前驅期病損即有大量T淋巴細胞浸潤， 其中潰瘍前期是T輔助細胞（CD4，Th）占多數，潰瘍期則T毒性細胞（CD8， Ts/c）為主，愈合期又回到T輔助細胞（CD4）為主，提示T淋巴細胞在RAU 的發病中起重要的作用[3]。近年來，有學者認為RAU是由于機體免疫活性細胞亞群失衡所導致的疾病[4]。機體中免疫功能的正常運行，依賴于各免疫細胞系及各細胞亞群之間相互協調，維持免疫狀態的平衡，一旦平衡被破壞，則導致免疫調節紊亂而發生疾病。如果針對性地使用免疫調節藥物，可能對于臨床上治療復發性口腔潰瘍具有較好的療效[5]。

2RAU與固有免疫

雖然T細胞是參與口腔潰瘍的初始細胞，但并不是口腔局部組織損傷的唯一細胞類，尤其是中性粒細胞在自身免疫性疾病中也能夠介導組織損傷。已有報道證實免疫復合性脈管炎是RAU的發病機制之一。在口腔黏膜局部堆積的免疫復合物通過招募中性粒細胞釋放組織降解酶，從而損傷粘膜，產生潰瘍[6，7]。還有研究表明，病毒感染可能在RAU的發病中起著重要的作用。正常人體中的NK細胞能夠殺傷被這些病毒感染的細胞，而在RAU患者的急性期和后期，NK細胞的活性明顯低于正常水平，從而誘發機體發生RAU[8]。在RAU患者中存在中性粒細胞的遷移和NK細胞活性的下調，說明固有免疫功能的紊亂是RAU發病機制之一。

3RAU與體液免疫

口腔免疫狀態受局部及全身免疫狀態的影響。唾液免疫球蛋白是全身體液免疫球蛋白的組成部分。口腔免疫防御體系中，分泌型免疫球蛋白（ SIgA ）在口腔免疫防御中起重要作用，它參與機體的局部免疫， 被認為是機體抗感染、抗過敏的重要免疫屏障。因此，口腔的免疫狀態主要取決于SIgA的含量。吳慧華等研究發現RAU患者唾液S IgA檢測結果較正常對照組低， 一方面免疫力降低使之受到病原體的侵襲與感染，導致RAU的發生， 另一方面在免疫反應的過程中消耗了SIgA。此外，炎性刺激可以加強唾液腺體的分泌，由于唾液量的增加使SIgA的含量受到了稀釋， 因此RAU患者唾液SIgA的含量低于正常水平。RAU患者唾液IgG含量與正常對照組無明顯變化，說明IgG在口腔潰瘍中，不具有特異性。在實驗家兔的血清中檢測到了抗口腔黏膜抗體， 抗體的效價隨著免疫次數增加而升高，且實驗家兔口腔黏膜潰瘍發生的頻率亦隨之增加，之間呈正相關關系。免疫熒光抗體檢測發現，試驗家兔的口腔黏膜潰瘍處、黏膜棘層、基底層及基底膜有IgG沉積。所有這些檢查，與人類RAU的研究結果基本相同。

4RAU與細胞免疫

許多研究證實，多種細胞因子分泌紊亂在RAU的發病中起著重要的作用。研究發現，RAU患者唾液和血清中TNF-α水平明顯高于正常人群，在發病的急性期尤為顯著。用TNF-α抑制劑能夠有效抑制RAU的發生與發展，說明TNF-@在RAU發病中有著重要作用[16]。TNF-α刺激上皮胞質細胞中主要組織相容性復合物1型和2型抗原的表達，T細胞識別這些細胞抗原以后觸發細胞毒性反應，并導致口腔黏膜形成潰瘍[17]。TNF-α還可上調黏附分子和趨化因子的表達、趨化并促進T細胞復制，對上皮細胞產生直接的細胞毒作用。而且，TNF-α能夠誘導其它細胞分泌IL-6、IL-8等。IL-6既促進輔T細胞生長和分化，也可促進細胞毒性T細胞的分化；IL-8則能通過招募更多的細胞毒性T細胞至潰瘍損傷處進一步發揮破壞作用。因此，RAU患者體內TNF-α上調與RAU患者體內TNF-α上調與RAU密切相關。

5RAU與粘膜抗體

部分RAU患者外周血中可檢測到循環免疫復合物和自身口腔粘膜抗體，同時在口腔中可檢測到幽門螺旋菌（Helicobacter pylori，Hp），因此很多學者認為RAU的發病與Hp感染及交叉抗原有關。王淑麗等發現口腔中的Hp感染不但與RAU的發生相關，而且在血液中，由Hp與人上皮細胞表面抗原等結構類似的多糖抗原誘導的自身免疫反應可能是復發性口腔潰瘍發生機制中的重要因素。這些均表明RAU與Hp和上消化道疾患關系十分密切。其實口腔粘膜與胃腸粘膜同屬消化系統，均來自外胚層，其結構、功能、生理、病理必然有許多相似之處，彼此有著共同的抗原成分，有類似的發病機制。其發病機制可能是口腔粘膜自身抗原致敏淋巴細胞產生抗粘膜抗體，形成免疫復合物，激活局部的補體，導致多形核細胞浸潤和炎癥反應，導致組織細胞溶解，最終導致灶狀粘膜損害和潰瘍形成。誘發胃腸粘膜病損的抗胃壁細胞抗體與誘發口腔粘膜病損的抗口腔粘膜抗體相互作用并形成交叉自身免疫。

作為自身抗體的粘膜抗體被認為在RAU發病過程中發揮重要作用，但作為自身免疫性疾病中普遍存在的抗核抗體尚未在RAU患者的血清中找到。

6結語

綜上所述，RAU患者免疫學方面改變的各項證據均說明免疫因素在RAU發病中起重要的作用，其中T淋巴細胞亞群分析以及功能測定在RAU發病機制中占有重要地位，可以作為臨床檢測的參考指標。但這些細胞免疫及體液免疫在RAU中的作用及機制目前尚處在探索階段，相信隨著近一步的深入研究，人們將揭開RAU的發病機理并找到其防治的有效方法。

參考文獻

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篇3

【關鍵詞】 化學發光免疫分析技術;基本原理;分類;應用

近10多年來,當代生物技術的研究和應用取得高速發展的同時,也大大推動了化學發光免疫分析方法(CLIA))的更新換代速度。化學發光免疫分析法(CLIA)是建立在放射免疫分析技術(RIA)理論的基礎上,以標記發光劑為示蹤物信號建立起來的一種非放射標記免疫分析法,具有靈敏度高、線性范圍寬、儀器設備簡單、操作方便、分析速度快和容易實現自動化和不污染環境等優點,特別是能在較短的時間內得到實驗結果,因此深受檢驗醫學工作者和臨床醫師的好評。

1 化學發光免疫分析的原理

化學發光免疫分析技術的基本原理,化學發光免疫分析含有免疫分析和化學發光分析兩個系統[1]。免疫分析系統是將化學發光物質或酶作為標記物,直接標記在抗原或抗體上,經過抗原與抗體反應形成抗原-抗體免疫復合物。化學發光分析系統是在免疫反應結束后,加入氧化劑或酶的發光底物,化學發光物質經氧化劑的氧化后,形成一個處于激發態的中間體,會發射光子釋放能量以回到穩定的基態,發光強度可以利用發光信號測量儀器進行檢測[2]。根據化學發光標記物與發光強度的關系,可利用標準曲線計算出被測物的含量。

2 化學發光免疫分析的分類

化學發光免疫分析根據應用發光體系應用于免疫分析中的方式不同可分為直接標記發光物質的免疫分析,酶催化化學發光免疫分析,電化學發光免疫分析(ECLIA)。直接標記發光物質的免疫分析,目前常見的標記物主要為魯米諾類和吖啶酯類化學發光劑。

3 化學發光免疫分析的臨床應用

CLIA已廣泛應用于基礎和臨床醫學的各個領域,成為替代RIA的首選技術。Amersham公司針對AmerliteTM發光增強酶免疫分析系統研制出的試劑盒項目有甲狀腺功能檢測的促甲狀腺素、三碘甲腺原氨酸、甲狀腺素、甲狀腺素結合球蛋白、游離甲狀腺素,與性激素有關的有促黃體激素、促卵泡激素、人絨毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、雌二醇、睪酮,以及其他方面的如癌胚抗原、鐵蛋白、地高辛等。Amersham公司雖然研制出這10余種試劑盒,但因操作不夠簡便,檢測項目僅限于蛋白質類大分子化合物,未能廣泛應用于臨床醫學檢測。

美國Ciba Corning公司研制的ACS:180自動CLIA系統能非常精確測量閃光。經過不斷的改進,實現了ACS:180CLIA系統的全自動化,推出全新產品"ADVIA系列"。現有檢測項目47項,更多的項目還在開發之中。主要有甲狀腺系統、性腺系統、血液系統、腫瘤標記物、心血管系統、血藥濃度及其他一些檢測項目。

經過改良后,金剛烷衍生物在堿性磷酸酶作用下可發出高強度的輝光,光信號可持續1～2 h。隨后國外生產廠家研制出以堿性磷酸酶為標記物的試劑盒,與之相匹配的有DPC的IMMULITE全自動CLIA系統和Beckman的ACCESS全自動微粒子CLIA系統。IMMULITE全自動CLIA系統可檢測項目有心臟病、甲狀腺功能、性腺激素、傳染病、藥物、血清學、血液病、成癮藥物、糖尿病、過敏檢測和腫瘤標志物。ACCESS全自動微粒子CLIA系統主要可檢測甲狀腺功能、血液系統、內分泌激素、藥物、腫瘤因子、心血管系統和糖尿病等項目。

目前商品化的ECLIA分析系統只有Roche公司的ECLIA全自動分析系統。主要特點是本底信號極微,特異性更高,最小檢出值可達1 pmol以下,操作十分簡便快速,是CLIA優點較為集中的完美分析技術。已提供試劑盒的項目有腫瘤標志物、甲狀腺功能、內分泌、傳染病、心肌標志物和維生素類等項目。

王陽[3]運用了電化學免疫分析技術,檢測了3種腫瘤標志物癌胚抗原(Carcinoem-bryonic Antigen,CEA)、細胞角蛋白l9片段(Cytokeratin 19fragments,CYFRA21,1)和神經元特異性烯醇化酶(Neuron-specific enolase,NSE)水平,對肺癌診斷有實際應用價值。張忠英[4]等利用電化學發光免疫分析技術檢測尿CK19片段,結果顯示尿CK19檢測對膀胱癌等泌尿系統腫瘤診斷和復發監測具有敏感性高、無創傷性的優點,優于血清CK19和尿細胞學檢查。動態觀察尿CK19片段含量的變化可降低急性尿感患者的假陽性率。王利娜[5]等應用ECLIA測定和酶免疫測定(EIA)檢測乙肝標志物。結果:應用ECLIA方法檢測HBsAg精密度,最大批內變異≤8.30%,最大日間變異≤15.33%,HBsAg靈敏度0.05 ng/ml,HBeAg靈敏度0.03NCU/ml。HBsAg檢測范圍0.01～7 000 COI。顯示ECLIA檢測HBsAg靈敏度高,重復性好,檢測范圍寬。檢測HBeAg靈敏度可能更高。李錦洲[6]等采用ECLIA法對卵巢癌、良性卵巢腫瘤及健康婦女血清CA125分別進行測定,ECLIA用于第二代CA125(CA125-Ⅱ)測定,使CA125測定更加敏感恒定,每日之間差異較小。黃琛,湯漢紅等[7]在ECLIA法檢測與蛋白質芯片法多腫瘤標志物結果差異的研究中顯示:兩種方法有較好的相關性(P

化學發光免疫分析技術在醫學的臨床應用已非常成熟,有取代放射免疫分析技術和酶聯免疫分析技術而成為診斷市場上的主流產品的趨勢。國外的化學發光免疫分析檢測系統價格昂貴,普及有一定的困難;國內的化學發光免疫分析檢測系統雖然價格較國外產品便宜很多,但其檢測的靈敏度和可靠性,還有待進一提高。研究者在如何提高免疫診斷的敏感性和特異性、發展新的分析體系和檢測技術便攜化等方面仍需要不斷努力。

參 考 文 獻

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篇4

關鍵詞：前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶9抑制劑；高膽固醇血癥；低密度脂蛋白；低密度脂蛋白受體

1 高膽固醇血癥概況

高LDL在美國人群中較為常見，美國心臟協會2015年的報告顯示其比例高達人口總數的31.7%。10月24日，《中國成人血脂異常防治指南（2016年修訂版）》：中國成人血脂異常總體患病率高達40.4%；我國居民血脂異常患病率持續升高，冠心病死亡率快速增加，專家預測隨著人群血清膽固醇水平持續升高，可能導致2010～2030年我國心血管病事件增加約920萬[1]。隨著生活水平的不斷提高，當今社會人們的飲食普遍超標，并且缺乏足夠的體育鍛煉，因此導致膽固醇水平尤其是低密度脂蛋白膽固醇水平升高從而引起很多健康問題。另一方面，目前單純依靠飲食控制、有規律的體育鍛煉以及戒煙等生活方式的改變已經不足以有效控制膽固醇水平。因此，美國最新的膽固醇指南建議動脈粥樣硬化性心血管疾病（Arteriosclerotic Cardiovascular Disease，ASCVD）特定高危人群應適當服用藥物進行預防和治療[2]。

2 高膽固醇血癥的治療方法

目前用于治療高膽固醇血癥的藥物包括他汀、選擇性膽固醇吸收抑制劑、膽汁酸螯合劑、貝特類、煙堿酸、Omega-3脂肪酸等，其中他汀是世界公認的支柱藥物。根據2013年美國心臟病學會和美國心臟協會的成人降低ASCVD風險的血膽固醇治療指南，大量證據表明他汀可以預防和治療ASCVD以及除心衰患者心功能NYHAⅡ-Ⅲ級和正在接受透析治療之外的所有高風險個體。另外，這些指南建議如果他汀治療無效、有禁忌或因副作用不能耐受時前述的非他汀類降膽固醇治療藥物可以作為單藥治療或者聯合治療的選擇，這表明他汀不耐受患者及他汀治療無效患者需要合適的藥物來替代他汀。

3 PCSK-9抑制劑

3.1 PCSK-9基因及PCSK-9蛋白 PCSK-9基因是研究人員在家族性高膽固醇血癥（Familial Hypercholesterolemia，FH）的患者中發現的，該基因具有高度多態性[3]，它可以導致常染色體顯性遺傳的表型，PCSK-9的功能獲得和功能缺失型突變可以分別導致高膽固醇血癥和低膽固醇血癥的發生，突變導致FH及該人群中血脂的代謝過程陸續被發現[4]。PCSK-9是除LDLR和APOB外第三個與FH有關的基因，其位于染色體lp3.32，DN段大小為3617bp，該基因編碼的PCSK-9前蛋白共有692個氨基酸，大小為72kD，屬于不具有活性的糖蛋白，該前蛋白在內質網中可進行自身催化，并裂解產生成熟的PCSK-9蛋白（62kD）[5]、前結構域和C-末端結構域等片段。自身催化裂解過程對于PCSK-9蛋白極為重要，是其從細胞內排出并發揮正常功能的必要條件[6]。正常情況下低密度脂蛋白受體（Low Density Lipoprotein Receptor，LDL-R）與LDL顆粒可以結合并通過內吞進入肝細胞，LDL顆粒在溶酶體內降解，而LDL-R則回到細胞表面并繼續結合另外的LDL顆粒[7]，但LDL-R與PCSK-9結合后其也成了降解的目標。肝細胞表面LDL-R具有表皮生長因子樣重復結構域A（Epidermal Growth Factor Like Repeat Domain A，EGF-A），成熟的PCSK-9蛋白可以與EGF-A結合成復合體，并通過細胞胞飲作用轉運至內涵體/溶酶體，從而導致LDL-R降解[7，8]。因此，LDL-R可以避免返回細胞膜表面循環利用降解LDL，從而抑制了循環血LDL的分解代謝[4]。如果PCSK-9基因發生獲得突變，其高活性可以使LDL-R過度的降解，進而減少了LDL在血中的移動，因此增加了LDL水平[9]，這一過程受體內PH、性別、日夜、空腹飽腹等因素影響。如果突變是PCSK-9基因外顯子中的鳥苷酸變為胞苷酸P1位點處出現前PCSK-9蛋白原氨基酸，其可以抑制PCSK-9前蛋白在內質網中的自身催化裂解，因此PCSK-9成熟、分泌減少，從而導致肝細胞表面的LDL-R降解減少，LDL水平降低[10]。另外，PCSK-9蛋白與極低密度脂蛋白受體、載脂蛋白受體結合也可參與影響極低密度脂蛋白和載脂蛋白地降解[11]。LDL-R與PCSK-9的作用很弱，幾乎只發生在腎上腺和大腦區域，因此不會通過上述途徑剝奪膽固醇；目前動物實驗和體內試驗研究表明PCSK-9超表達以及敲低表達都會對膽固醇的含量產生影響[12，13]。

3.2 PCSK-9抑制劑作用機制和現狀 PCSK-9蛋白屬于肝臟內前蛋白轉換酶家族，內源性的PCSK-9原則上是在小腸和肝內合成的，其作為神經細胞凋亡調節轉化酶可以通過細胞內自催化轉化分裂，并進入血循環中與LDL-R結合，形成受體復合物進入細胞；該復合物可以在內涵體或溶酶體內被降解，因此可以直接影響血漿LDL濃度。相反，如果PCSK-9蛋白酶缺失，則受體在與血膽固醇結合后會被運回質膜，從而增加循環血LDL-R的轉運，加速LDL降解，PCSK-9表達下降會使LDL-R活性增高從而導致LDL降低。因此，PCSK-9抑制劑可以通過LDL-R分解脂蛋白來降低病人體內的LDL水平[4]，干擾PCSK-9的活性即這類新藥的關鍵作用機制。目前市面上的PCSK-9抑制劑有小干擾RNA、反義寡核苷酸和單克隆抗體三類[14]，前兩類也合稱RNA干擾技術，均是通過與PCSK-9的信使RNA結合使其沉默或者干擾其活動從而導致LDL濃度降低；目前研究比較多的 PCSK-9抑制劑是主要目標為PCSK-9基因的單克隆抗體，此類藥在不抑制肝細胞攝取循環中LDL顆粒的基礎上，主要和PCSK-9蛋白內部結構中可以與LDL-R作用的相鄰的重要區域結合，阻止與LDL-R結合，從而降低血液中PCSK-9的活性，以此來達到降脂和抗動脈粥樣硬化的作用。FDA批準的這兩種結構的藥物均是皮下注射劑型，而單克隆抗體可能引起點反應、過敏反應或關于注射執行部位的區域毒性[15]，但目前正在進行的臨床試驗表明它們均有相對良好的耐受。這類藥物啟動時的目標指向FH，不過大量臨床試驗表明PCSK-9抑制劑可以作為他汀不耐受或對他汀有不良反應的患者的替代選擇。PCSK-9抑制劑是近年FDA批準的降低血膽固醇治療藥物中極引人注目的一類，因其潛在的良好藥效極有可能超過或改變目前膽固醇的治療模式。2015年7月24日FDA批準了世界上第一個PCSK-9抑制劑，即賽諾菲公司的Alirocumab（Praluent）。Alirocumab被FDA批準表明除了飲食和最大可耐受劑量的他汀外，雜合型FH或臨床ASCVD成年患者有了降膽固醇治療的輔助治療手段。2015年8月27日FDA批準了第二個PCSK-9抑制劑Evolocumab（Repatha）。Rephtha被FDA批準用于成人雜合子FH、純合子FH或臨床ASCVD疾病除飲食及最大可耐受劑量他汀治療的聯合治療。

3.3臨床試驗 PCSK-9抑制劑正在進行很多Ⅱ期和Ⅲ期試驗，目前的試驗主要針對Evolocumab和Alirocumab，臨床試驗涉及Alirocumab的包括ODYSSEY COMBO Ⅱ、ODYSSEY FH和單藥治療Ⅲ期試驗；涉及Evolocumab的包括GAUSS-2試驗、OSLER試驗和RUTHERFORD試驗，研究已經對其在短和長期效果和安全性方面做出了評價。

3.3.1 Alirocumab

3.3.1.1 ODYSSEY COMBOⅡ COMBOⅡ是歐洲、美洲、韓國等126個中心參與的為期104 w的雙盲、雙啞、活性控制、平行組試驗，該試驗主要是比較有心血管高風險的高膽固醇血癥患者在最大可耐受劑量他汀治療仍控制不佳時Alirocumab和依折麥布作為輔助治療的效果[16]。患者被隨機分成2：1，兩組同時接受最大可耐受他汀治療的情況下每2 w皮下注射Alirocumab75 mg同時口服安慰劑或口服依折麥布同時皮下注射安慰劑。試驗的初級目標是計算從基線到第24 w低密度脂蛋白膽固醇（Low Density Lipoprotein-cholesterol，LDL-C）變化的百分比，Alirocumab組為-50.6±1.4%，依折麥布組為-20.7±1.9%，其差距達到-29.8（P

試驗結論是Alirocumab被證明比目前標準治療藥物依折麥布具有更有效的降低LDL-C效果，且Alirocumab在患者中耐受良好，因此提供了與依折麥布類似的干凈描述[16]。

3.3.1.2 Alirocumab單藥治療 這個Ⅲ期、隨機、雙盲、雙啞研究評估了對于有中等心血管風險的高膽固醇血癥患者且此前沒有接受他汀或其他降脂治療，在接受Alirocumab與依折麥布治療后的有效性和安全性的對比[17]。患者每天口服依折麥布10 mg或每2 w皮下注射Alirocumab75 mg且假設第8wLDL-C≥70 mg/dL，在第12 w時將滴定劑量增加到每2 w皮下注射Alirocumab150 mg。試驗初級終點是Alirocumab與依折麥布組從基線水平到第24 w平均LDL改變的百分比，Alirocumab在24 w時可以比依折麥布降低更多的載脂蛋白B、總膽固醇、非高密度脂蛋白膽固醇。Alirocumab組有69%的患者經歷了治療緊急不良事件而依折麥布組的比例為78%， 每組各有1例患者出現嚴重治療緊急不良事件但他們最后都康復而且完成了試驗。結果顯示在24 w時間內，Alirocumab比依折麥布有優勢。適當心血管風險患者中，每2 w皮下注射Alirocumab75 mg對于超過50%患者在降低LDL水平方面都是有效的。Alirocumab表現了與依折麥布相當的可耐受性和安全性，因此可以替代依折麥布成為他汀不能耐受患者的備選藥物[17]。

3.3.1.3 ODYSSEY FH STUDIES ODYSSEY研究是一個由三個試驗（FH1、FH2、HIGH FH）組成的匯編，該研究是隨機、雙盲、安慰劑控制的，目的是評估Alirocumab治療FH的效果，試驗對象選取在最大可耐受劑量他汀穩定治療≥4 w仍不能控制血脂水平伴或者不伴其他降脂治療的患者[18]， 患者被隨機分成2：1皮下注射Alirocumab或安慰劑。初級效果終點為從基線到第24 w計算得出的LDL百分比改變，這些研究目前仍在進行，將會評估Alirocumab在治療FH方面的有效性和長期有效性[18]。

3.3.2 Evolocumab

3.3.2.1 GAUSS-2試驗 該試驗為隨機并通過安慰劑控制的Ⅲ期臨床試驗，在不能耐受他汀治療的高膽固醇血癥患者身上比較了皮下注射Evolocumab和口服依折麥布的效果。GAUSS-2表明elovocumab在10～12 w和12 w時有LDL水平突出的降低，即使用Evolocumab治療的患者較依折麥布更容易達到LDL-C目標水平。肌痛作為治療過程的主要副作用在約8%的患者中發生，但同時肌痛普遍發生在服用低劑量他汀的患者身上（他汀和非他汀比例為17%與6%）。最后數據分析表明Evolocumab在他汀不耐受患者中可以明顯降低LDL的水平，且在高風險患者中經Evolocumab治療的患者超過75%可以達到低于100 mg/dL的水平，依折麥布組則低于10%。

Evolocumab試驗證明大約96%的患者可以耐受該藥。另外，Evolocumab治療收益可以作為LDL水平明顯上升而他汀不耐受的患者潛在的替代治療手段，同時也許會在膽固醇管理方面替代依折麥布等藥物[19]。

3.3.2.2 OSLER 該試驗比較了Evolocumab與標準治療（Standard Of Care，SOC）在降LDL水平方面的長期效果。參與者被隨機以2：1樣式分成兩個治療組，并接受每四周注射一次Evolocumab420 mg和SOC（736例）或單獨接受SOC（368例），接受Evolocumab治療較基線水平相比LDL-C有持久穩固的降低。試驗結果表明肌氨酸激酶和轉移酶升高并不明顯，患者多出現頭痛、頭暈、失眠、背痛等癥狀，并且有一例患者在Evolocumab及SOC組試驗期間死亡，但是這位患者有明確的冠心病病史；另外，在持續5個月的OSLER試驗中發現一例心室動脈瘤患者[20]。總之，該試驗表明持續52周的試驗可以觀察到LDL水平明顯降低，Evolocumab和SOC配合使用治療高膽固醇血癥比單獨使用SOC更有效。

3.3.2.3 RUTHERFORD 試驗屬于多中心的Ⅱ期臨床試驗，其屬于雙盲、安慰劑控制，涉及全世界20多個血脂診所，試驗主要比較患者接受每4 w一次皮下注射Evolocumab350mg或420 mg或者安慰劑總共觀察12 w時間。研究結果表明兩種Evolocumab劑量都比安慰劑在降低LDL-C方面有效，每4 w一次Evolocumab 350 mg和420 mg降低LDL-C的百分比分別為43%和55%，而安慰劑只降低LDL-C水平3%（P

總之，Evolocumab治療組較安慰劑可以更有效的降低LDL-C水平[21]。這個研究表明在伴他汀治療，伴或不伴依折麥布條件下，Evolocumab均可成為降低雜合子FH患者LDL-C水平的有效輔助手段。

4 結論

高膽固醇血癥影響廣泛，目前多使用他汀進行治療，但是仍有很高比例的患者因為他汀不耐受等沒有接受合適的膽固醇管理。新批準的PCSK-9抑制劑已經被許多試驗證明其有效性和安全性，這類藥的臨床研究目前多在臨床Ⅲ期，其中Alirocumab和Evolocumab最近已經被FDA批準，這也意味著其他PCSK-9抑制劑在膽固醇治療方面具有很大的潛力。PCSK-9抑制劑將為目前不適合他汀治療的高膽固醇血癥患者提供有效的治療手段。另外，有研究表明小鼠肝細胞內PCSK-9誘發的LDL-R退化與MMP-2相關[22]，還有待進一步臨床前試驗深入研究。

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篇5

117自身抗體誘導的血管性疾病動物模型 許倬，管劍龍，韓星海

118 細胞表面硫酸肝素蛋白多糖在信號傳導中的作用 任天華，劉文勵，孫漢英

119 HBV前C/C基因變異與宿主T細胞免疫的關系 朱傳武，羅端德

120抗血管生成因子的抗腫瘤作用及其機制 劉樑英，輝

121粘膜免疫 楊淑靜，馬清鈞

122抗心肌球蛋白抗體研究進展 江杰，楊作成

123白介素-4受體信號轉導研究進展 徐勤枝，劉忠令

124 HLA超型與表位肽超基序及其理論與現實意義 黃健，蔡美英

125基因免疫機理及安全性研究進展 廖國陽，姜述德

126 T細胞免疫耐受研究現狀與探討 陳慧，李玉華

127 IL-10在系統性紅斑狼瘡發病機制中的角色 王慧娟，季曉輝

128甘露糖結合凝集素缺失與自身免疫病 施小明，葉冬青

129 CD40-CD40L共刺激分子與自身免疫性疾病 沈華英，張學光

130臍血移植GVHD與GVL效應的分子機制 楊會志，孫自敏，王祖貽

131 B7介導基因治療惡性腫瘤進展 秦雪梅，徐從高，張茂宏

133羊水與臍血中家庭塵螨變態反應原的檢測 魏加雨，趙惠斌

132 BACEⅠ對Alzheimer's病的治療可能有重要意義 吳軍

134 γ干擾素作為卵巢癌的一線療法:一種隨機的三期嘗試 趙一平，王育文

135馬鈴薯乙肝疫苗的研究新進展 吳軍

骨髓間質干細胞的免疫調節作用 毛飛，許文榮，MAO Fei，XU Wen-rong

RNAi DC在移植免疫耐受誘導研究中的應用進展 包杰，鄭磊，BAO Jie，ZHENG Lei

IL-21的免疫調節作用 徐林，XU Lin

γδT淋巴細胞的抗腫瘤作用 曹妍，CAO Yan

粘膜免疫相關載體和佐劑研究進展 黃相剛，HUANG Xiang-gang

IDO、樹突狀細胞與免疫耐受 張文穎，ZHANG Wen-ying

BAFF信號的免疫調節作用 李曉琳，LI Xiao-lin

FcγR Ⅲ研究進展 丁雄，DING Xiong

CD4+CD25+Tr細胞趨化性細胞因子受體表達的生物學意義研究 楊巍，于春雷，YANG Wei，YU Chun-lei

細胞黏附分子與移植免疫 張桂銘，ZHANG Gui-ming

可溶性CD83與免疫抑制 王洋，WANG Yang

Fas/FasL系統參與的幾種生物學效應 桑威，SANG Wei

RANKL/OPG系統與類風濕性關節炎 周忠啟，ZHOU Zhong-qi

樹突狀細胞與自身免疫的關系 蔣廷旺，鄧安梅，JIANG Ting-wang，DENG An-mei

樹突狀細胞在多發性骨髓瘤免疫治療中的應用進展 羅妹，LUO Shu

涎腺嗜酸性粒細胞增生性淋巴肉芽腫超聲表現4例 孫琪瑋

CD80和CD86介導的共刺激信號的比較及其生物學作用 陳潔，孫中文，邱玉華，張學光

阿爾茨海默病的免疫治療 馬春，王愛民，朱長義

懷孕對免疫機制的影響 郭慧琛，孫世琪，劉在新

負性共刺激分子與自身免疫病 孫燕，張怡，朱本章

重癥肌無力發病機理的研究進展 徐若男，黎燕

CD40L結構與功能的關系 周璇，張學光

轉錄因子Blimp-1在漿細胞發育中的作用 鄧少麗，程小星

NOD1、NOD2:兩個重要的天然免疫胞內識別受體 黃鴻眉，程茜

肝免疫耐受發生的相關因素和機制研究 袁曉園，陳隆典，侯亞儀

Toll樣受體信號傳導的負性調節 姚文琴，樓正青

白細胞介素21免疫學效應研究進展 許曉群，張建

白介素-6與心血管疾病 劉巍，李為民

細胞因子在風濕性心臟病發生發展中的作用 王萍，侯宗柳

調節性T細胞及其在自身免疫性疾病治療中的應用 胡玨，楊歡，肖波

樹突狀細胞與免疫負向調控 厲倩，曹雪濤

Th1/Th2漂移與HCV感染慢性化 陳顯兵，管小琴

華支睪吸蟲感染患者血清Th1/Th2細胞因子水平檢測及意義 高翔，劉平，李懿宏，洪曉麗，任歡，李殿俊

Medline(PubMed)免疫學雜志文獻搜索引擎開發研究 魏鳳香，曲章義，羅佳濱，呂學詵

讀者·編者·作者

γ干擾素在臨床皮膚病學中的意義 范菁，王俠生

對嚙齒枸椽酸桿菌的應答:肥大細胞預防全身擴散而非結腸炎 杜兆豐，王歡

布魯氏菌DNA疫苗的發展:過去、現在和未來 曾政，鄧小紅

噬菌體抗體庫技術的發展及應用 宋文全

瘦素、白細胞介素-1與腦梗死 解建波，付偉

NK-CTL--一種新型的HLA-E限制性T細胞亞群 吳春晨

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖與細胞粘附關系的研究進展 肖暉

活性維生素D與多發性硬化 張鳳

CD40L在腫瘤治療中的作用 魏楓，任秀寶

脂多糖對抗原提呈細胞作用的影響 王健

樹突狀細胞介導的腫瘤免疫治療研究 顧克菊，張建芳

樹突狀細胞與腫瘤免疫逃逸 張晶

DcR3及其配體的研究進展 原江水

特發性血小板減少性紫癜發病機制的研究進展 伍昌林

可溶性MHCⅡ類分子四聚體的制備及其應用 龔衛娟

CD1限制性T細胞 楊春曉，吳江

熱烈祝賀中華醫學繼續教育視聽網開通

篇6

混合DNA樣品池應用的研究 童大躍，伍新堯

細胞外基質、基質金屬蛋白酶及其抑制因子的研究進展 袁發煥，李驚子

血管內皮細胞生長因子的研究進展 潘欣，戚中田

纖維蛋白原的生物化學及檢測方法進展 程烽，朱忠勇

堿性磷酸酶及其糖鏈結構的研究 傅紅梅，呂元

朊病毒的實驗室檢測 劉家云，于文彬，丁振若

乳腺癌預后標志物的研究進展 王虹，鮑依稀，康格非，羅春麗

凝血因子V突變對妊娠的影響 李東至，林其德

一氧化氮與寄生蟲感染 鄭春福，康格非，陳雅棠

固相萃取技術在藥物及毒物分析中的應用進展 朱曉東，黃繁嬙

微衛星DNA的研究概況 胡波，周新

幽門螺桿菌分子疫苗研究進展 于長青，解慶華，鄒全明

P53基因與腫瘤細胞凋亡 王志潔，范維柯

Selectins的細胞粘附與抗粘附的研究進展 邢天娥，秦冰，鐘，李世明

包涵體蛋白的復性技術 楊曉梅，陳瑞

結核桿菌及其耐藥性快速檢測的研究進展 芮勇宇，俞守義，王紅

卵巢腫瘤患者血管內皮生長因子表達及其檢測 張潤玲，趙進昌

蓖麻毒素與腫瘤治療 鄒立波，詹金彪

Invader分析--一種新的核酸檢測技術 張寧，唐軼，張黎

膽固醇和其他脂蛋白成份檢測中的幾個問題 陳姍，董燕麟

心肌損傷標志物及其聯合檢測的臨床意義 胡曉琳，王金良

HPLC技術檢測細胞核酸庫水平及其臨床意義 任銘，張亞卓

抑癌基因P53的檢測在胰腺癌診斷中的價值 劉楓，李兆申，許國銘

輸血傳播庚型肝炎的研究進展 邢顏超，程維興

前列腺特異性抗原新進展 彭濤

SLE患者性激素水平與Th1/Th2的免疫應答 盧志明，車至香，孫汶生，李桂琴

非甾體類抗炎藥物抗癌作用的研究進展 羅云，唐宗山

血小板活化因子與急性胰腺炎的研究進展 趙曉晏，夏時海

人抗動物抗體對免疫學檢驗的干擾 王景陽，朱毅堂，孫艷，王慶敏，王秀文

MBL及其補體激活的LECTIN途徑 賈天軍，李萍，劉士先

膀胱腫瘤的耐多藥機制及逆轉 鄒琳，羅春麗

缺血性心肌損傷生化標志物檢測的標準化 王玻，韓靖云

網織紅細胞四項檢測指標的正常參考值調查 陳則清

低溫對ABX-MICROS 60血球分析儀測定白細胞的影響及糾正 丁海峰，周劍濤，萬利強

硒、GSH-PX、SOD、MDA測定在探測肝臟疾病過氧化脂質損傷中的臨床應用 彭慶遠，鐘輝秀，尹朝倫

小兒腎病綜合征尿中五種蛋白質檢測及分析 李敬霄，趙玉春，陳艷霞，趙志健

甘膽酸與谷丙氨酸氨基轉移酶測定用于乙肝病毒攜帶者的臨床意義 龍澤榮，騰國召，秦德英

自身免疫病研究:挑戰與機遇并存 仲人前

趨化因子在系統性紅斑狼瘡發病中的作用 劉中娟，林嘉友

胰島素抵抗中游離脂肪酸的作用 陳輝，涂植光

葡萄糖激酶與2型糖尿病的研究進展 馬春宇，段勇

2型糖尿病與HLA關系的流行病學研究進展 任春鋒，黃清水，楊紅英

系統性紅斑狼瘡遺傳易感性研究進展 周亞莉，涂植光，楊明清，黃文芳

糖尿病與HCV感染 李紅梅，董解菊，姚磊

抗環瓜氨酸肽與類風濕性關節炎 張淑蘭，馮忠軍

實時熒光定量PCR的研究進展及其應用 張蓓，沈立松

實時定量PCR應用中的問題及優化方案 蔡剛，李聞捷，沈茜

Th1/Th2細胞的免疫功能變化及其意義 顧國浩，彭群新

免疫PCR的研究進展 王麗娜，葛凌云

小凹-小凹蛋白的生物學特性 武明花，蘇琦

生物信息學在基因組研究中的應用 陳力學，曾照芳，康格非

抗氧化物新概念與微營養分析 蔡愛玲，高良俊，唐愛華

腎上腺-腦白質營養不良的實驗室診斷進展 黃梁滸，蘭風華

促紅細胞生成素的實驗室檢測研究進展 馬紅雨，王艷華

白細胞介素-1基因多態性的研究進展 徐樸，李艷

21三體綜合征產前篩查新進展 尹向東，陳新黔，廖琳，丁顯平，魏霞，康格非

肝纖維化的臨床生化指標研究 高耀華，廖小林，范維珂

781份尿液標本細菌培養結果分析及病原菌的耐藥性檢測 趙雅，李秀娥

腫瘤和高血壓患者外周血單個核細胞端粒酶表達及臨床意義初探 顏永乾

端粒酶檢測在婦科惡性腫瘤診療中的應用 侯振江，張風巧

細胞低溫損傷機理與血小板冰凍保存 余福橋

心肌標志物的研究進展及臨床應用 吳慶

肌鈣蛋白I與C-反應蛋白在急性冠狀動脈綜合征研究中的應用 江華，曹紅，程正江，孫伯良

末梢全血的放置時間對白細胞及血小板計數的影響 倪琛，成玲

血清總補體(CH50)活性自動分析與臨床應用 戴婉如，李寧，伍嚴安，王欽利，陳慧丹，張友華

蘭州地區不同人群HBsAg陽性調查分析 蘇娜

商丘地區對氨基糖甙類呈高耐藥性腸球菌的藥敏試驗分析 高宗玲

關于CD34-造血干細胞的新觀點 葉建新，繆競誠

生長抑素及其受體的研究與臨床應用現狀 立彥，夏偉，瞿衛，王自正

食管癌腫瘤標志物的研究進展 黃國福，李迅，郭建琳，諶宏鳴

銅綠假單胞菌耐藥機制研究進展 阮衛，楊祚升

IκB激酶的研究進展 高小玲，黃愛龍

鈣結合蛋白S100A6基因的研究進展 張麗君，劉銀坤，朱運松

兒童多動癥分子遺傳學研究進展 仲愛芳，趙漢清

高遷移率族蛋白-1在急性肺損傷發病中的作用 馮英凱，楊慶華，徐劍鋮，錢桂生

免疫比濁法中鉤狀效應的防范 康紅，王蘭蘭

篇7

【關鍵詞】 乙型肝炎病毒； 檢測方法

中圖分類號 R512.6 文獻標識碼 A 文章編號 1674-6805（2016）8-0159-02

doi：10.14033/ki.cfmr.2016.8.091

濃度通過測定熒光強度來檢測，極微的熒光就能被特別的感光結構感應到，使其檢測靈敏度更高。ELISA和MEIA對HBV血清標志物的檢測均有較高的特異性，但ELISA的敏感性低于MEIA[12]。

化學發光微粒免疫檢測法（CMIA）是目前應用較多的化學發光法。譚璐[13]報道ELISA和CMIA靈敏度差別不大，但從自動化程度和方法學角度看CMIA法優于ELISA法。

3 分子生物學法

3.1 HBV DNA檢測技術

HBV DNA是HBV具有傳染性和復制的標志，是判斷抗HBV藥物療效的重要指標[14-15]。檢測方法有PCR、支鏈DNA（bDNA）、核酸雜交、雜交捕獲系統、基因芯片技術。熒光定量聚合酶鏈反應（FQ-PCR）采用熒光技術和閉管檢測，完全克服了常規PCR方法操作繁雜，不能準確定量、產物間的交叉污染、重復性差和強致癌物溴化乙啶的使用造成的環境污染[16-18]。目前的試劑盒多采用FQ-PCR進行HBV DNA的定量檢測。bDNA技術的缺點是放大倍數少、檢測范圍窄、敏感性低，不適用于低水平檢測。袁靜等[19]報道FQ-PCR用于HBV DNA含量的檢測靈敏度明顯高于bDNA法。核酸雜交包括斑點雜交和液相雜交。基因芯片技術為近幾年發展的新技術，根據HBV高度保守的特異性基因序列設計寡核苷酸探針制備基因芯片，將待測患者的樣本進行PCR擴增，PCR擴增的同時進行產物熒光標記，標記產物與基因芯片進行雜交，雜交結果經掃描儀讀數并輸出圖像，然后通過計算機分析，從而檢測樣本是否存在病毒感染[20]。由于基因芯片可以一次性對大量序列進行檢測分析，具有快速、高通量、并行等特點，解決了傳統核酸印跡雜交技術自動化程度低、檢測序列少、操作繁雜、效率低的缺點[21]。

3.2 HBV耐藥性檢測技術

目前臨床上應用的HBV耐藥性檢測主要是針對HBV DNA聚合酶P基因的檢測，鑒別野生型（YMDD）及耐藥突變型（YVDD、YIDD），檢測結果可為抗病毒藥物治療中HBV耐藥性的產生提供依據，以指導臨床用藥和監測病情。常用的檢測方法有FQ-PCR、核酸雜交和基因芯片技術等。

3.3 HBV基因分型

常用FQ-PCR、PCR-反向點雜交法（PCR-RDB）、聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性分析（PCR-RFLP）、DNA測序和基因芯片技術進行HBV基因分型。上述方法各有優缺點。基因測序除能準確確定病毒株基因型、亞型外，還能發現其他方法很難鑒別的重組病毒株，是檢測病毒基因變異公認的金標準，但是技術要求高，價格昂貴，操作復雜，很難常規開展。實時熒光PCR、多位點基因芯片技術等只能檢測單一突變位點[22]。劉蒙等[23]用PCR-RFLP技術檢測維生素D受體（VDR）Fok I基因的多態性在慢性乙肝患者的分布，并進行基因型分析，認為VDR Fok I基因的多態性與慢性乙肝患者的不同臨床表型存在一定的關系。等[24]用PCR-RFLP技術檢測高遷移率族蛋白B1（HMGB1）第4內含子1176G/C多態性，認為HMGB1基因多態性與HBV感染后原發性肝癌的發生有關聯。

綜上所述，由于HBV是一種變異較高的病毒，免疫學方法檢測的是表型指標，而且免疫學指標的出現晚于HBV DNA的出現。隨著對HBV的不斷深入研究，PCR技術和分子生物學技術的應用，大大提高了HBV檢測的準確度，實現了對HBV DNA的定量檢測，能夠準確地判斷HBV在體內的復制情況。但是這些檢測技術的成本相對較高，在國內的普及有一定難度。因各種檢測方法的靈敏度和特異性均不同，在臨床中，醫生可結合患者的具體情況進行選擇，為提高臨床確診率，必要時采用多種方法聯合檢測。

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篇8

醫學科學部

2011年度醫學科學部重點項目包含按立項領域申請的重點項目和“非領域申請”的重點項目。醫學科學部根據優先資助領域，經專家研討確定重點項目立項領域。“非領域申請”的重點項目主要鼓勵已取得重要創新性研究進展而當年的重點項目立項領域未能覆蓋其研究領域或方向的醫學科技工作者，圍繞醫學科學前沿開展的基礎研究，這類申請可不受重點項目立項領域的限制，申請人可結合自己的工作基礎和學科前沿，直接申請重點項目。

有關申請書的撰寫、要求和注意事項請參看本《指南》中重點項目總論部分及醫學科學部面上項目部分。特別要求申請人在提交的紙質申請書后附5篇代表性論著的首頁復印件。對于按立項領域申請的重點項目，申請人根據下列重點項目立項領域，自主確定項目名稱、研究內容和研究方案。準確填寫立項領域后面所標出的申請代碼；附注說明應寫明項目申請所屬的重點項目立項領域名稱。

對于“非立項領域”申請的重點項目，申請人可自主確定項目名稱、研究內容和研究方案，自主選擇與研究內容相對應的申請代碼；基本信息表附注說明欄應選擇“非領域申請”字樣。此外，“非領域申請”的重點項目除了按常規要求撰寫申請書外，還需要在申請書正文部分的最后增加一項800字左右的“關于已取得重要創新性研究進展的情況說明”，在此說明中著重闡述與本次申請密切相關的重要創新性進展的實質性內容、相關研究結果以及在國際重要學術期刊情況等。對于本次申請所依據的“已取得重要創新性研究進展”的代表性論文，要求必須是申請人近期發表的第一作者或責任作者論文。

未按照上述要求撰寫重點項目申請書的項目申請，本科學部將不予受理。

醫學科學部2011年度計劃資助重點項目80項，其中按立項領域申請的重點項目擬占資助計劃的80%，“非領域申請”的重點項目擬占資助計劃的20%。資助強度約為200萬～400萬元/項（如特別需要增加資助強度應加以說明，但最高不超過500萬元/項，平均約300萬元/項）,研究期限為5年。請申請人根據工作實際需要合理申請項目經費，除了填寫經費預算表之外，還需要寫出盡可能詳細的預算說明。

2011年醫學科學部重點項目立項領域

1．氣道慢性炎癥性疾病的分子機制（H01呼吸系統）

2．出凝血調控異常及血栓形成的機制及干預（H08血液系統）

3．血管損傷、修復的機制及干預的基礎研究（H02循環系統）

4．胃腸道粘膜損傷相關性疾病的機制研究（H03消化系統）

5．腎臟進行性纖維化的發生機制（H05泌尿系統）

6．宮內微環境改變與子代重要疾病發生的關聯機制（H04生殖系統）

7．胰島細胞功能與糖尿病的發生發展（H07內分泌系統）

8．重要致盲眼病的發病機制及眼損傷修復與視功能重建的基礎研究（H12眼科學）

9．精神疾病遺傳易感性及發病機理研究（H09神經系統和精神疾病）

10．神經電活動異常與發作類疾病的致病機制研究（H09神經系統和精神疾病）

11．多功能造影劑與分子探針的基礎研究（H18影像醫學與生物醫學工程）

12．小動物活體成像的理論方法及基礎研究（H18影像醫學與生物醫學工程）

13．重要人體寄生蟲病原學及致病機理研究（H19醫學病原微生物與感染）

14．炎癥性及免疫性皮膚病的病因及發病機制研究（H11皮膚及其附屬器）

15．骨關節退行性疾病發生發展的分子機理（H06運動系統）

16．膿毒癥致多臟器損傷的病理生理機制及干預措施研究（H15急重癥醫學/創傷/燒傷/整形）

17．蛋白質修飾在腫瘤發生發展中的作用（H16腫瘤學）

18．細胞自噬與腫瘤發生發展（H16腫瘤學）

19．腫瘤分子靶向治療的耐藥機制（H16腫瘤學）

20．性激素與腫瘤發生發展（H16腫瘤學）

21．營養素及食物中生物活性物質與慢性病防治的基礎研究（H26預防醫學）

22．環境與職業暴露人群早期健康損害防治的基礎研究（H26預防醫學）

23．免疫生物治療的細胞與分子機制（H10醫學免疫學）

24．同種異體移植免疫排異及免疫耐受的基礎研究（H24醫學免疫學）

25．藥物高效傳遞系統基礎研究（H30藥物學）

26．胰島素抵抗與藥物干預新靶點研究（H31藥理學）

27．重大疑難疾病中醫治則治法的基礎研究（H27中醫學）

28．穴位效應與穴位配伍的生物學基礎（H27中醫學）

篇9

通訊作者：喬清

【摘要】 視神經脊髓炎是一種視神經和脊髓受累的自身免疫性脫髓鞘疾病。該病與多發性硬化的關系一直存在爭議，隨著水通道蛋白4的發現，它們屬于兩個獨立疾病的觀點，已漸被國內外學者認同。文章從病因、機制、病理學、免疫學、臨床表現、診斷及治療方面，對視神經脊髓炎近年來的相關研究做了一個簡單的概述；并將其與多發性硬化進行鑒別，二者在免疫學、病理學、病程發展、臨床表現、治療、預后、流行病學等諸多方面存在差異。文章還重點介紹了水通道蛋白及其特異性抗體的發現、生物學作用，及其在疾病的早期診斷、鑒別診斷中的重要意義，對于上述大分子的研究不僅利于人們對視神經脊髓炎發病機制的理解，更為今后治療方案的制定提供了新的方向。

【關鍵詞】 視神經脊髓炎； 多發性硬化； 水通道蛋白

視神經脊髓炎（neuromyelitis optica, NMO），又稱Devic綜合征、Devic病，是視神經和脊髓先后或同時受累的急性或亞急性脫髓鞘病變。本病屬于自身免疫病，具有選擇性、侵襲性損傷視神經和脊髓的特點，呈單相或“復發-緩解”多相病程，亞洲人居多。NMO與多發性硬化（multiple sclerosis，MS）的關系一直存在爭議，隨著水通道蛋白4（aquaporin-4，AQP4）的發現，NMO被認為是一種離子通道病［1］，區別于MS。

1 病理學研究

NMO的典型病理學改變：脊髓中央壞死病灶，累及大部分灰質和部分白質，病灶以血管為中心，同時存在血管纖維變性，最終形成空洞［2］。病灶中少突膠質細胞丟失明顯，廣泛的巨噬細胞、小膠質細胞、B細胞浸潤，管周有大量的免疫球蛋白（以IgM為主）的沉積和補體的活化。病灶內極少有髓鞘再生，病灶周圍是髓鞘保留區［3］。

2 免疫學研究

腦脊液（cerebrospinal fluid, CSF）寡克隆帶（oligoclonal bands, OBs）陽性率低且容易消失（轉陰）；急性期、復發期腦脊液細胞數常≥50×106/L，蛋白增高，病情好轉后細胞數、蛋白量很快減少［4］。Nakamura等在其研究的23例NMO中僅發現2例IgG寡克隆帶（+），且這2例NMO-IgG（+）；他們的共同點是病程較長，合并自身免疫病（MG重癥肌無力、Sicca syndrome干燥綜合征）――提示當長期處于自身免疫狀態時可出現OBs（+），但這與NMO無直接關系。

Lennon等［4］在NMO患者的血清中發現了一種稱為NMO-IgG的自身抗體，作為NMO特異性的標志，其診斷美國人的NMO和日本人的視神經脊髓型MS（OSMS）的特異性分別達91%和100%（目前有學者認為西方的NMO就是東方的OSMS［4］）。NMO-IgG分布在病變的微血管和Virchow-Robin間隙以及軟腦膜和軟腦膜下。隨后的研究［1,5,6］發現NMO-IgG能與構成血腦屏障的星形膠質細胞的一種蛋白質復合物――水通道蛋白4（AQP4）結合，即NMO-IgG是抗水通道蛋白的自身抗體，從而提示NMO是一種自身免疫性通道病，并由此解釋了NMO發生腦水腫的機制。越來越多的研究證實，NMO-IgG/AQP4-Ab在NMO的發病機制中發揮了重要作用；該抗體在NMO復發期的水平明顯高于緩解期。近年來研究發現CD19+細胞的數量與AQP4-Ab相關，特別是在應用利妥昔單抗（Rituximab）的治療過程中，二者平行變化［7］。

3 病因與機制

如前所述，在本病的發生發展中，免疫學因素（，如B細胞免疫缺陷、Th17細胞異常，起著至關重要的作用［8］；此外，尚與感染、遺傳等因素相關。可能的誘因包括外傷、接種疫苗、藥物反應、過勞或緊張、蟲咬傷等。曾有學者懷疑NMO與線粒體DNA的多樣性有關，但經研究沒有支持性證據［9］。

目前比較公認的發病機制是，由于某種原因導致機體免疫異常，血清中出現循環AQP4-Ab，該抗體沉積于星形膠質細胞，并與其表面的AQP4蛋白結合，激發免疫復合物介導的自身免疫反應，引起星形膠質細胞足突的崩解，從而破壞血腦屏障；同時，由于AQP4蛋白缺失，使得血管源性水腫的吸收延遲，壓迫神經組織，產生缺血性損傷，這種病變極易累及視神經和胸段脊髓（特別是中央灰質）等對缺血敏感的組織［3］。

4 臨床表現

4.1 發病 發病年齡5～60歲，多見于青壯年。約1/3患者有發熱、頭痛、肌肉痛、上呼吸道或胃腸道感染等前驅癥狀。

4.2 視神經炎 急性或亞急性，多為單側（65%～85%），可伴有眼痛，約40%病例進展為完全失明。有證據顯示，對于僅有亞臨床視覺障礙的脊髓炎病例（無癥狀，但有引起視覺異常的潛在因素），脊髓和視交叉均有病理學改變，故應歸為NMO［10］。

4.3 脊髓炎 急性或亞急性，約50%可致嚴重的偏癱或全癱。運動、感覺、括約肌癥狀較MS更為常見，且有明確的彌漫性脊髓病變表現，如部分/完全性脊髓炎、Brown-Sequard綜合征、脊髓空洞癥樣綜合征。Lhermitte征、強直痛性發作很常見，需要抗癲癇藥物對癥治療。最終的頸髓病變可引起呼吸麻痹，導致死亡［10］。

4.4 病程 NMO單相型可在數小時至數天內急速相繼發生視神經炎和脊髓炎。復發型更常見，常在反復發作中視覺和肢體功能障礙累積加重。

5 診斷

2006年，Wingerchunk在1999年版NMO診斷標準的基礎上，重新做了修訂：（1）必要條件：視神經炎和急性脊髓炎；（2）支持條件（以下3項至少滿足2項）：①脊髓MRI病灶長于3個椎體節段；②頭顱MRI不符合MS的診斷標準；③NMO-IgG血清學陽性。與舊版標準的85%敏感性和48%特異性相比，新版診斷標準的敏感性（94%）、特異性（96%）都大大提高。2007年，Wingerchunk再次提出了NMO的早期診斷標準：（1）脊髓MRI的縱軸上有超過3個節段的彌漫的脊髓灰質和白質病灶，而腦MRI正常；（2）CSF中OB（-），但多形核細胞增多；（3）NMO-IgG血清學陽性。

近年提出的NMO-IgG――抗水通道蛋白4抗體［8，11］，對診斷本病有70%敏感性，而對NMO和NMO相關疾病（如復發性橫斷性脊髓炎和復發性視神經炎）幾乎有100%特異性，廣泛開展該項指標檢測并長期隨訪有助于證實其應用價值。鑒于相似的臨床或血清學（NMO-IgG均陽性）特點，近年來提出NMO譜群疾病（Neuromyelitis optica spectrum disorders, NMOSDs）的概念［12,13］，包括NMO、復發性縱向彌漫性橫貫性脊髓炎（longitudinally extensive transverse myelitis, r-LETM）、復發性視神經炎，將其作為一類疾病進行研究。

6 與MS的鑒別診斷

NMO和MS的比較，具體見表1［1, 3,14,15］。

表1 NMO和MS的比較

7 治療

7.1 常規治療 國內外臨床上一般使用的常規治療，包括急性期的激素沖擊或免疫球蛋白沖擊治療，或血漿置換療法（plasma exchange, PE）；緩解期予小劑量激素配合硫唑嘌呤口服維持。由于干擾素（IFN）-β有使復發增多的風險，目前不主張用于NMO治療。

7.1.1 激素 甲基強的松龍，每日0.5～1 g靜脈滴注，連續5～10 d，繼之足量強的松口服并逐漸減量。研究證明，皮質類固醇在NMO急性期的有效率為80%；但有些患者可出現激素依賴，即停用或減量后復發。

7.1.2 免疫球蛋白 2004年Bakker等報道2例長期用傳統的類固醇激素加免疫抑制劑硫唑嘌呤治療無效，仍反復發作并惡化的NMO患者，改用大劑量免疫球蛋白先沖擊治療5天，0.4 g/（d?kg），再每月一次0.4 g/（次?kg），2例患者無復發，且視神經和脊髓功能明顯改善。

7.1.3 PE 利用NMO的自身免疫特性，主要用于對激素治療無反應的病例［10］。有研究稱，應用PE、淋巴細胞去除法治療對激素、免疫球蛋白沖擊無效的病例，可顯著改善臨床癥狀，甚至MRI病灶可以基本消失［16］。

7.1.4 硫唑嘌呤 開始每日50 mg，此后每周增加50 mg直至2.5～3.0 mg/（kg?d）。分量或（和）食物一起服藥，能增強其耐受性。若WBC

7.2 研究進展

7.2.1 米托蒽醌（Mix）: 是人工合成的蒽二酮（anthracenedione）類物質，主要通過抑制B細胞、T細胞、巨噬細胞增生，減少抗原傳遞，來治療復發型或急進型MS。研究顯示其在減少復發、改善MRI表現方面有積極作用［17］。本藥多用于復發型病例，靜脈給藥，每月12 mg/mm3，連續6個月；此后每三個月給藥一次，連續三次［10］。

7.2.2 促紅細胞生長素（EPO） 近年來Diem等利用少突膠質細胞糖蛋白（MOG）誘導的自身免疫性腦脊髓炎（EAE）模型研究發現，甲基潑尼松龍可以通過抑制激活有絲分裂的蛋白激酶（MAPK）的磷酸化，來誘發神經細胞的凋亡，不利于視神經節細胞的存活［4］。2005年，他們進一步研究了甲基潑尼松龍加神經保護劑――EPO干預作用，發現可以減少視網膜神經節細胞的凋亡，促進神經細胞的再生和功能恢復。

7.2.3 利妥昔單抗（rituximab） 是B細胞抗體CD20的單克隆抗體，屬抗腫瘤藥物。Cree應用其抑制B細胞的機制來治療惡化型（worsening）NMO；經治療復發率明顯下降，神經功能得到部分改善，擴展的殘疾功能狀態量表（Expanded Disability Status Scale，EDSS）評分也有所降低。Jacob等［18］總結了兩種用藥方案，375 mg/m2，每周一次，共4周；1000 mg×2次，間隔2周。可以與之聯合應用的藥物，包括硫唑嘌呤+潑尼松、潑尼松、IFN-β。療程結束后再次應用的指征：（1）間隔6～12個月；（2）復發；（3）CD19+B細胞（+）。研究證明，利妥昔單抗可以減低NMO的發作頻率，使病情平穩或改善神經功能。

7.2.4 抗血小板、抗凝集類藥物 應用于抗心磷脂抗體（+）的病例，可能為血管作用機制。但也有學者提出疑問：該抗體是否參與NMO的發病？是否需要人為干涉？或者該抗體只不過是多克隆B細胞激活后的產物，并不具有組織特異性？［15］這些都還需要進一步的研究。

7.2.5 其它 霉酚酸酯、格拉默等，還都缺乏更多的臨床應用經驗［16］。

7.3 中醫

我國傳統醫學認為，NMO屬暴盲、青盲、痿證、不仁等。本病主要累及腎、腦中目系，且與肝脾有關。發病多因外感邪熱或勞傷過度，先天稟賦不足等。綜合上述理論，臨床辨證施治可分為熱毒內蘊、肝郁血虛、腎陰虧損、腎陽不足四型，分別給予清熱解毒、舒肝養血、滋陰補腎、溫補腎陽治療。此外，臨床尚可見痰熱、寒凝、脾虛濕阻及血虛風亢等不同證型，可根據個人經驗組方用藥。本病后期輔助針刺療法常有助于視覺功能或肢體運動、感覺功能恢復［19］。

綜上，隨著近年來對NMO的研究，其與MS為兩個獨立疾病的觀點，已漸被國內外學者認同；而特異性免疫標志物NMO-IgG的發現，更使得NMO的早期診斷成為可能。但在治療方面，藥物研究多限于試驗模型，臨床應用樣本較小，受患者病情影響，臨床仍以聯合用藥為主，單個藥物的作用并不明確。此外，目前治療基本均從免疫學入手，尚無針對NMO變性、壞死所采取的神經保護治療。鑒于我國屬NMO好發地區，更要求醫務工作者對NMO進行更深入的研究。

參 考 文 獻

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篇10

【關鍵詞】 病毒感染免疫;檢驗;進展

隨著醫療事業的發展，傳統的常規病毒檢驗方法已漸漸難以滿足各種病毒感染的檢驗需求，免疫檢驗法應運而生。免疫檢驗法是在機體感染病毒后，通過所引起的免疫應答機理，根據免疫細胞的數量和發揮的功能來對病情進行判斷。免疫檢驗還能較快的檢測出待檢標本中的病毒，并根據抗體產生的速度、類型和濃度對患者進行早期的病毒感染診斷，其作用不容忽視。

1 病毒感染引起的免疫性損害及機制

病毒是一種比較微小的生物，主要依靠宿主細胞而生存，其對宿主細胞的功能有一定損害作用，因此，會對機體的免疫功能產生抑制作用，從而會使機體的免疫病理發生改變。免疫抑制指的是通過感染免疫細胞而使免疫分子的表達下調，從而使免疫分子在血清中的有效濃度得到一定降低，進而使機體的免疫應答反應有所減緩。免疫損害指機體因病毒感染而出現病理性免疫應答，從而使非免疫應答組織或器官出現免疫損傷，進而對組織或器官受損。

2 早期病毒感染的免疫檢驗方法

2.1 酶聯免疫吸附試驗 酶聯免疫吸附試驗又叫ELISA試驗，它能將免疫反應的特異性和催化作用相結合進行分析，并將已知的抗體或抗原吸附在反應平板上，再進行酶標抗原抗體反應的一種試驗模式[1]。在病毒檢驗方面，酶聯免疫吸附試驗是檢驗藍舌病、豬偽狂犬病等病癥的標準檢驗方法。酶聯免疫吸附試驗的常用方法是雙抗夾心法和間接吸附試驗，其中，雙抗夾心法是早期病毒感染抗原抗體檢驗中最常用的方法。酶聯免疫吸附試驗將酶的化學反應與抗原的抗體反應相關特異性結合，進而促使 ELISA試驗變成一種敏感且特異的免疫檢測方法。

2.2 免疫熒光試驗 免疫熒光試驗是一項由熒光抗原法和熒光抗體法組成的免疫標記技術。由于熒光素能與已知抗體結合形成熒光抗體，并將反應后的熒光抗體置于熒光顯微鏡下觀察，根據散發出的熒光，對待檢標本中的抗原進行鑒定和判斷[2]。還可以采用免疫熒光試驗將熒光素與蛋白質結合，對抗體進行檢測和定位。免疫熒光試驗具有特異性、高效性和靈敏性，但檢測結果不夠客觀，檢驗流程也過于復雜。

2.3 放射免疫技術 反射免疫技術又叫RIA技術，最早源自于1960年德國科學家創造的放射免疫分析技術，這種技術能讓抗體與被同位素標記和未被標記的抗原產生競爭性抑制，是一項體外微量性分析技術。放射免疫技術具有特異性、簡便性、靈敏度高、取樣數量少等特點，現階段主要用于對乙型肝炎病毒的鑒定與判斷。但由于檢測時會產生放射性物質，會對研究者身體帶來一定的影，且有可能出現假陽性的檢測結果，還容易受外界環境因素影響而使得檢測結果出現異常。

2.4 血細胞凝集試驗 血細胞凝集試驗主要針對在當機體感染病毒后，會讓病毒表面的抗原與紅細胞表面的抗原受體結合，血細胞沉降率增加，形成血細胞凝集現象。這種試驗方法能對病毒進行定性定量的檢測，如果機體內存在病毒抗體，就會抑制因病毒而引起的血細胞凝集現象[3]。這種試驗方法通常用于檢測梅毒螺旋體等病毒，這種方法目前只能確診梅毒患者，對其他病毒感染尚無法確診。此外，研究人員還根據病毒凝集紅細胞的能力和對相應抗體的抑制特性設計出了血凝抑制試驗。

2.5 中和實驗法 又稱標準試驗法，主要包括固定病毒-血清稀釋法和固定血清-稀釋病毒法兩種。這種方法主要檢測病毒的感染力，以病毒受到血清中和后的殘留感染力為依據，來對該免疫血清抑制病毒擴散的能力進行判斷。臨床上常用它來分析堅定病毒的類型和病毒的抗原性等。

3 新型病毒感染免疫檢驗方法

3.1 重組免疫試驗 重組免疫試驗主要對HIV抗體和HCV抗體進行檢測。與酶聯免疫吸附試驗方法相比，重組免疫試驗能將各種橫線式抗原結合在硝酸或纖維素膜的橫條上，并置于長條凹槽反應盤中，加底物顯色后就能顯示血清中存在的針對性抗原。同時，這種試驗方法也能用于口蹄疫病毒的臨床檢測[4]。

3.2 膠體金技術 以膠體金作為標志物，應用于抗原抗體反應中的一種新型免疫檢驗技術，具有特異性、簡便性、安全性等特點。膠體金是一種能在還原劑作用下聚集形成較小金顆粒，并能與蛋白質結的生物藥性，它還能與其他多種生物分子結合，因此多用于免疫學、組織學、病理學等領域，以及對HIV的篩查和人體血清甲胎蛋白的檢驗。

3.3 發光免疫試驗 發光免疫試驗是一種將化學發光物質與機體免疫反應相結合，并通過光反應來表示待測物質的免疫成分和濃度的新型檢驗方法。這種方法可以利用放光劑作為標記物，保證檢驗在安全可行的環境中進行，是一種無害無毒的安全檢測方法。同時，發光免疫試驗能在較短的時間內完成對病毒的檢驗，在一定程度上滿足了臨床檢測的需要，在現代化病毒檢測中有良好的發展前景。

4 結 語

隨著科技的發展，傳統的病毒感染檢驗技術正在被眾多新型檢驗技術取代，越來越多安全、高效、快捷的檢驗技術被試驗人員接受。同時，在對病毒感染進行檢驗的過程中，仍存在著如測量方法不當、試驗流程混亂、濃度超標、標本選取時間及方法不當等問題，都不同程度地增大了病毒感染檢驗的難度。因此，在病毒檢驗過程中，要采用更高效、更安全、更簡便的新興檢驗方法，以更好地促進病毒檢驗技術的發展，也能更好地為病毒感染檢驗工作服務。

參考文獻

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